应用聚合酶反应技术检测婴儿肝炎综合征巨细胞病毒和乙型肝炎病…

用聚合酶以应技术（ＰＣＲ）检测６０例婴儿肝炎综合征患儿尿人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ０ＤＮＡ在清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，同时做尿ＨＣＭＶ病毒分离。结果表明：ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性４７例，阳性率７８．３％，而ＨＣＭＶ分离阳性３０例，阳性率５０．０％。ＨＢＶ ＤＮＡ阳性１２例，阳性一率２０％。提示婴儿肝炎综合征与ＨＣＭＶ和ＨＢＶ感染有关。ＰＣＲ技术特异，敏感，快速及简便，可协助临床医生对婴儿肝炎综合征做     

尿巨细胞病毒定量检测在巨细胞病毒感染诊断中的意义

目的探讨尿巨细胞病毒(CMV)定量检测在儿科CMV感染诊断中的意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ-PCR)方法检测110例确诊或疑诊CMV感染和81例对照患儿尿CMV-DNA,并与血清抗体检测、pp65抗原检测比较,对更昔洛韦治疗的17例病人进行治疗后尿CMV-DNA;拷贝监测。结果 1．确诊或疑诊为CMV活动性感染患儿110例,其中82例尿中检测到CMV-DNA;对照11例检测到尿CMV-DNA,其中10例为正常健康儿童;且不同年龄组CMV-DNA的阳性率不同。17 例更昔洛韦治疗后,尿CMV-DNA的平均拷贝数明显下降(P<0．001)。2．FQ-PCR、pp65、IgM检测方法敏感性分别为87％、 74％、59％,特异性分别为97％、86％、69％;与其他两种方法比较,FQ-PCR方法敏感性和特异性均明显高(P均<0.001)。结论 FQ-PCR检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染有一定意义,量化结果便于治疗过程中进行连续的监测。     

用聚合酶链反应诊断巨细胞病毒感染

本文采用聚合酶链反应技束对224例可疑HCMV感染的患儿测定尿中HCMV-DNA,用于确诊巨细胞病毒感染,阳性率为44.2%。并与血清免疫学方法所测结果相比较,该方法具有高度特异性、敏感性,取材方便,操作简便,反应周期短等优点,是目前检测HCMV的最敏感的实验方法,适于临床推广应用。     

原位聚合酶链反应检测石蜡包埋肺组织中巨细胞病毒

利用生物素标记核苷酸掺入示踪，成功地建立了巨细胞病毒原位聚合酶链反应方法。在石蜡包埋肺组织中检出巨细胞病毒，证实巨细胞病毒在肺内分布广泛，可感染多种细胞。本方法将聚合酶链反应的高度特异性及敏感性与组织结构密切地结合在一起，精确地显示了巨细胞病毒在肺组织中的分布特点，为从肺活检组织或支气管肺泡灌洗液中检出巨细胞病毒，从而准确地诊断巨细胞病毒肺炎提供了最新的方法。     

聚合酶链反应诊断婴儿肝炎综合征巨细胞病毒感染

我们应用PCR检测肝炎综合征尿中巨细胞病毒DNA特异片段,以了解本地区巨细胞病毒感染现状。对象及方法一、一般资料住院肝炎综合征患者64人。新生儿7例,<3mo45例,＞3mo12例。出生体重＜2500g23例。母乳喂养31例、人工喂养23例．混合喂养10例。二、诊断标准按全国小儿巨细胞病毒感染学术会议拟定的巨细胞病毒感染诊断试行标准[1]。实验室检查检出巨细胞病毒DNA特异片段。三、方法入院后用清洁试管取患儿及母亲尿。经两次离心标本,弃上清液．加入引物（430bp）,再加人TapDNA多聚酶。经处理后开始循环。循环参数：90Clmin．65C0．5mi…     

用聚合酶链反应研究先天性畸形与巨细胞病毒感染的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测畸形和非畸形新生儿死亡病例尸检的石蜡包埋病理组织标本中的巨细胞病毒核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ）片断，研究先天性畸形与宫内ＣＭＶ感染的关系以及胎儿各脏器对ＣＭＶ的易感性。结果显示：（１）畸形组中ＣＭＶ的阳性率高达４２．１９％（２７／６４），明显高于非畸形组的４．６９％（３／６４），差异有非常显著意义（Ｘ￣２＝２５．０７８，Ｐ＜０．００１），提示宫内ＣＭＶ感染与胎儿畸形密切相关；（２）神经系统畸形病例ＣＭＶ的阳性率与循环系统畸形组比较，差异有显著意义（Ｘ￣２＝６．６２６，Ｐ＜０．０５）。提示ＣＭＶ感染可能导致小头畸形、脑积水和脊柱裂等畸形；（３）脑和肝脏是最易受ＣＭＶ感染的脏器；（４）肝胆异常与ＣＭＶ感染有关。本研究说明，先天性ＣＭＶ感染易导致胎儿神经系统崎形及肝脏损害。     

套式聚合酶链反应及限制酶分析检测新生儿肝炎巨细胞病毒感染

在人巨细胞病毒（HCMV）AD169株直接早期蛋白EcoRIJDNA片段内，自行设计二对引物，建立套式PCR检测HCMVDNA。经实验证明有高度的特异性与敏感性，对其它疙疹类病毒和正常人基因组DNA无交叉反应。一次性PCR检测HCMVAD169株基因组的最小检出量为100fg，而套式PCR可达10fg，经PStI酶切后，得到的片段与设计相符。对23例新生儿肝炎临床标本进行病毒分离，一次性PCR，套式PCR检测，结果表明套式PCR能进一步提高一次性PCR的特异性与敏感性，适用于新生儿肝炎HCMV感染的临测。     

定量检测婴儿尿液巨细胞病毒DNA的临床意义

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测尿液巨细胞病毒(CMV)在儿科CMV感染诊断治疗中的意义.方法 应用FQ-PCR方法检测婴儿尿液CMV DNA量.结果 (1)280例疑似CMV感染儿有126例尿液中CMVDNA呈阳性,阳性率是45.0%,为症状性CMV感染儿;同年龄组的70例健康儿童尿液中CMV DNA阳性5例,阳性率是7.1%,为无症状性CMV感染儿.症状性感染儿尿液中CMVDNA拷贝数对数值(4.78±0.85)与无症状性感染儿(4.45±1.02)之间差异无显著性(P＞0.05).(2)90例症状性CMV感染儿应用更昔洛韦诱导治疗结束时尿液CMV DNA拷贝数对数值(3.74±0.58)较治疗前(4.64±0.90)明显减少(P＜0.01),临床症状改善.(3)45例症状性CMV感染儿在治疗后3个月CMVDNA拷贝数对数值(4.41±0.74)较治疗结束时(3.67±0.58)升高(P＜0.01).临床症状明显改善.结论 FQPCR方法检测婴儿尿液中CMVDNA量可以诊断CMV感染,但是不能区分CMV感染是症状性感染还是无症状性感染;应避免盲目反复应用更昔洛韦治疗CMV感染.     

套式聚合酶链反应加限制酶分析检测母婴巨细胞病毒感染

为评价套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）加限制酶分析在孕妇巨细胞病毒感染及其母婴宫内传播检测中的应用，采用套式ＰＣＲ加限制酶分析，病毒分离、电镜观察和特异性抗体测定，对各孕期孕妇外周血，脐血及死胎组织进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果：３６７名孕妇ＨＣＭＶ阳性检出率为５．５％，其中，套式ＰＣＲ检出率（４．９％）高于病毒分离（３．０％，Ｐ＜０．０５）。６份ＨＣＭＶＤＮＡ阳性母血中，３份配对脐血ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母－婴宫内传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ，病毒分离及特异性ＩｇＭ、ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＡ阳性，ＩｇＭ阴性。提示：套式ＰＣＲ能提高诊断ＨＣＭＶ的特异性与敏感性，对孕妇及胎儿／新生儿ＨＣＭＶ感染的研究有重要意义。     

巨细胞病毒感染的诊断方法进展

近年来巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的诊断方法有了很快进展。目前用于ＣＭＶ感染的诊断方法为：（１）血清学检测；（２）从标本中检测ＣＭＶ，包括病毒分离，抗原及核酸检测。其中利用核酸杂交，聚合酶链反应检测ＣＭＶ ＤＮＡ的分子生物学技术具有特异性高，敏感性强和快速、简便的特点，为ＣＭＶ感染的快速诊断提供了新的途径。     

聚合酶链反应在检测脑性瘫痪患儿人巨细胞病毒感染中的应用

目的　探讨聚合酶链反应 (PCR)在检测脑性瘫痪 (CP)患儿人巨细胞病毒 (HCMV)感染中的意义。方法　对 5 6例CP患儿用PCR检测尿巨细胞病毒 (CMV)DNA ,病毒分离检测尿标本 ,观察CMV特征性致细胞病变效应 (CPE) ,ELISA检测血清CMVIgM和IgG。结果　PCR检测CMVDNA阳性率为 5 3 .6% ,9例CMV病毒分离结果阳性 ;CMVIgM、IgG阳性率分别为 12 .5 %、3 7.5 % ;病毒分离 :CMVIgM阳性与CMVDNA阳性的符合率分别为 10 0 %、10 % ,前两者与后者比较均有显著差异 (P <0 .0 1) ;CMVIgG阳性与PCR阳性符合率为 6.7% ,两者无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　PCR检测CMVDNA能够早期快速检测到CP患儿CMV感染 ,可应用于CP患儿中CMV感染的检测 ,为早期干预提供可靠依据。     

荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿尿液人巨细胞病毒DNA对人巨细胞病毒感染的诊断意义

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒（HCMV）DNA水平对婴儿HCMV感染的诊断价值。方法采用FQ-PCR检测348例临床疑似HCMV感染婴儿尿液中HCMVDNA水平。同时采用化学发光免疫分析法（CLIA）检测婴儿血清HCMV-IgM抗体。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体检测阳性与阴性患儿尿液中HCMVDNA拷贝数差异。结果FQ-PCR检测尿液HCMVDNA的阳性率为41.74%,CLIA检测婴儿血清HCMV-IgM抗体的阳性率为19.83%。2种方法对HCMV感染诊断的符合率为76.7%。前者诊断阳性率显著高于后者（χ^2=69.44P〈0.01）。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMVDNA拷贝数显著高于阴性组（P〈0.01）。结论FQ-PCR检测尿液HCMVDNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法。HCMV感染婴儿尿液中高HCMVDNA拷贝数与活动性HCMV感染密切相关;FQ-PCR方法检测尿液HCMVDNA水平对于判断是否为HCMV活动性感染具有一定意义。     

巨细胞病毒感染的诊断方法进展

近年来巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的诊断方法有了很快进展。目前用于ＣＭＶ感染的诊断方法为：（１）血清学检测；（２）从标本中检测ＣＭＶ包括病毒分离，抗原及核酸检测。其中利用核酸杂交，聚合酶链反应检测ＣＭＶＤＮＡ的分子生物学技术具有特异性高，敏感性强和快速、简便的特点，为ＣＭＶ感染的快速诊断提供了新的途径。     

应用荧光定量聚合酶链反应动态观察新生儿巨细胞病毒感染

目的：探讨新生儿先天性巨细胞病毒感染后病毒转阴的规律及抗病毒治疗的效果。方法：经外周血定量CMVPCR检测确定CMV感染的37例足月新生儿，分为阿昔洛韦组和对照组，并每4周1次进行定量CMV-PCR动态观察以确定病毒转阴时间。结果：37例CMV感染中12周内阴转25例，占 67.6%，阿昔洛韦治疗组和对照组阴转时间差异无显著性。结论：先天性CMV感染多数在4周内血中病毒转阴，阿昔洛韦治疗无明显的疗效。     

巨细胞病毒和巨细胞病毒感染的诊断

巨细胞病毒感染（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）是由人巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）引起［１］,在我国相当普遍,且大多在幼年时期发生。据我们１９９５年至１９９７年连续３年对１６７８例就诊小儿筛查结果发...     

输血、血浆与新生儿巨细胞病毒感染的临床研究

１９９２年２～８月应用ＰＣＲ法共检测血源（供体）标本７１份，ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性１９份占２８．２％，其中全血１３份，阳性４份占３０．７％；血浆５５份，阳性１４份占２５．５％；白蛋白３份，阳性１份。检测患儿（受体）血标本３０份，阳性１０份。研究对象分为４组，Ⅰ组：受体血ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性，供体血阳性，１０例。Ⅱ组：受体血与供体血皆阳性，５例。Ⅲ组：受体血阳性，供体血阴性，５例。Ⅳ组：受体与供体血皆阴性（对照组），１０例。３０例于生后３岁追踪随访，４例死亡，余２６例皆无临床症状和体征。Ⅰ组尿ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率明显高于对照组。建议：新生儿尤其是早产儿、低出生体重儿应尽量避免输血和血浆，必须输注者，以输经ＰＣＲ法筛查的ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性血源为宜。     

应用原位杂交和原位聚合酶链反应技术检测肾组织中乙型肝炎病毒DNA

为深入探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肾炎的发病机理，应用地高辛素标记ＨＢＶＤＮＡ探针原位杂交和直接原位聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５例血清ＨＢＶ标志物阳性、临床诊断为ＨＢＶ相关性肾炎患儿的肾活检石蜡包埋组织切片行ＨＢＶＤＮＡ检测，并采用免疫组化ＬＳＡＢ法做标本的ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）检测。结果显示５例中有４例标本原位杂交和直接原位ＰＣＲ检测均呈ＨＢＶＤＮＡ阳性，ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒弥漫沉积于肾小球毛细血管袢、系膜区、肾小管及肾间质，表现形式以浆核型、核型为主；此４例ＨＢｓＡｇ亦阳性，ＨＢｓＡｇ阳性颗粒的分布与ＨＢＶＤＮＡ基本一致。提示ＨＢＶ不仅可通过免疫介导引起肾脏损害，而且有可能直接侵犯肾脏导致肾脏病变。     

应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.