正交实验建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法

目的:建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法。方法:用正交实验确定实验条件,求细胞5 0 %死亡时的样品浓度,即IC50 值。结果:此法使细胞死亡率与样品的Log浓度具有良好的线性关系(r =0 .95 15 ,P <0 .0 1) ,重复性实验结果:板内RSD值为12 .3% ,板间RSD值为16 .6 % ;不同实验次数RSD值为17.8% ,灵敏度为36 μg·L- 1,并能反应出蛇毒抗瘤蛋白的抗肿瘤特异性。结论:此方法特异,简便且具有良好的重复性,可以作为蛇毒抗瘤蛋白生物活性的测定方法。     

白细胞黏附抑制实验在核糖核酸药物免疫活力测定中的应用研究

摘 要 目的： 建立核糖核酸类药物免疫活力测定方法。方法: 选用小鼠白细胞黏附抑制试验,对实验重要参数,如小鼠品系、药物作用浓度,黏附时间,缓冲液成分和细胞密度等进行探讨研究,初步建立了该类药物的免疫活力测定方法。并用该方法对核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ和核糖核酸Ⅲ各2批样品进行了免疫活力测定。结果: 确定了适合该类产品免疫活力测定方法的实验参数：小鼠品系对实验结果无影响,药物作用浓度为10 mg·ml^-1,黏附时间为2 h,缓冲液中必须含钙镁离子,细胞密度约为4×10⁷个/ml。用该方法对该类产品进行免疫活力测定,3次重复实验,结果均合格,RSD均低于20%。结论:白细胞黏附抑制试验可作为评价核糖核酸类药物免疫活力的方法。     

双氯芬酸胆碱滴眼液的制备和含量测定

目的 :制备双氯芬酸胆碱滴眼液并测定其含量。方法 :利用双氯芬酸胆碱水溶液在 2 76nm波长处有最大吸收 ,用紫外分光光度法测定其含量。观察了该滴眼液的稳定性和刺激性。结果 :双氯芬酸胆碱在 5 .0× 10 -6 ～3 .5× 10 5mol·L-1浓度范围内呈良好的线性关系 ,平均回收率为 99.8% ,RSD =1.3 7% (n =5 ) ;且稳定性良好。结论 :该滴眼液疗效明显 ,无刺激性 ,测定方法简便、快速、准确     

HPLC法测定茵栀黄软胶囊中黄芩苷、栀子苷和绿原酸的含量

目的测定茵栀黄软胶囊中的 3种有效成分 ,黄芩苷、栀子苷、绿原酸的含量。方法HPLC法 ,Irregular HC18(2 5 0 . 0mm× 4 6mm ,10 μm)色谱柱。黄芩苷流动相 :甲醇 水 磷酸 (V∶V∶V =4 7. 0∶5 .3 0∶0. 2 ) ,流速 :1 0mL·min-1,检测波长 :2 80nm ;栀子苷流动相 :乙睛 水 (V∶V =15∶85 ) ,流速 :1 0mL·min-1,检测波长 :2 38nm ;绿原酸流动相 :乙睛 磷酸溶液 (w =0 . 4 % )(V∶V =13∶87) ,流速 :1 0mL·min-1,检测波长 :32 7nm。结果黄芩苷在 2 7 5～ 137 5mg·L-1内质量浓度与峰面积具有良好的线性关系 ,线性回归方程为A =6 4. 83× 10 4ρ - 1 6. 96× 10 .5 ,r =0 . 9998,平均回收率为 99 4 6 % (RSD =1 0 1% ) ;栀子苷在 16 .5～ 82 . 5mg·L-1内质量浓度与峰面积具有良好的线性关系 ,线性回归方程为A =8 794× 10 .5ρ - 4 . 116× 10 2 ,r =0 . 9999,平均回收率为 10 0 . 37% (RSD =1 4 .0 % ) ;绿原酸在 2 4～ 12 0mg·L-1内质量浓度与峰面积具有良好的线性关系 ,线性回归方程为A =2 4 88× 10 4ρ - 9 2 4 4× 10 4,r =0 9999,平均回收率为 99 38%(RSD =1. 89% )。结论测定方法可用于茵栀黄软胶囊的质量控制。     

高效液相色谱法测定逍遥丸中芍药苷的含量

目的　建立逍遥丸 (浓缩丸 )中芍药苷的含量测定方法。 方法 　高效液相色谱法 Kromasil KR10 0 5 C1 8色谱柱 ( 2 5 0× 4.6mm)流动相 :乙腈 -水 ( 2 0∶ 80 ) :流速 :1.0 m L· min- 1 ;检测波长 :2 3 0 nm。结果 　芍药苷进样量在 0 .2 2 2～ 1.77μg范围内呈良好的线性关系。 ( r=0 .99997,n=6) ,重复性良好 ,RSD=1.3 %( n=6) ,平均回收率 97.9%,RSD=0 .8%( n=6)。 结论　本法快速、简便、准确、重复性好。     

高效液相色谱法测定齐多夫定胶囊中AZT的含量

目的 　建立齐多夫定胶囊中 AZT的含量测定方法。方法 　高效液相色谱法 ,Nova-Pak○RC1 8色谱柱 ( 60 A0 4μm,3 .9× 15 0 mm) ;流动相 :甲醇 -水 ( 2 0∶ 80 ) ;流速 :1.0 m L· min- 1 ;检测波长 :2 65 nm。 结果　齐多夫定进样量在 0 .2～ 2 .0 μg范围内呈良好的线性关系 ( r=1.0 0 0 0 ,n=5 ) ,重复性良好 ,RSD=0 .96% ( n=6) ,平均回收率 10 0 .1% ,RSD=1.49% ( n=9)。 结论　本法快速、简便、准确、重复性好     

涂碳型PVC膜依诺沙星选择电极的研制与应用

目的　建立盐酸依诺沙星药片的测定方法。方法　以依诺沙星与溴汞酸盐生成缔合物为电活性物 ,制作涂碳PVC膜依诺沙星电极。结果　在 pH 1.5～ 4 .5内 ,电极的Nernst响应范围为 1.0× 10 -2 ～ 5 .0× 10 -5mol/L ,斜率为 31.0mV/ pC ,检测限为 4 .2× 10 -6mol/L。平均回收值为 98.0 % ,RSD为 1.0 %。结论　用于该药片的含量测定 ,与紫外分光光度法基本一致     

电感耦合等离子体质谱法测定注射液中铝离子浓度

目的建立注射液中铝含量的测定方法。方法采用电感耦合等离子体质谱法检测注射液中铝离子浓度。结果线性方程为A=5.946×103C+2044,溶液浓度在0～25μl/L范围呈良好线性关系(r=0.9976),平均回收率为100.9%,RSD=1.0%(n=15),重复性RSD为2.2%(n=5),精密度RSD为2.1%(n=6)。结论采用电感耦合等离子体质谱法测定注射液中铝离子浓度,方法准确、可靠、快速,适用于注射液中痕量铝元素的浓度分析。     

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性测定方法研究

目的用世界卫生组织国际标准品粒细胞集落刺激因子 (G CSF)生物学活性标准品研究NFS 6 0细胞测定重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性的方法。方法采用溴化四唑蓝 (MTT)染色法。结果NFS 6 0细胞染色体为 39条 ;细胞数在 1× 10 5～ 1× 10 7个 /ml间MTT染色显示梯度 ;将 (4 ,4)法引入rhG CSF生物学活性的测定 ,单次实验结果的平均可信限率为 13.5 6 0 % ,(4 ,4)法测定rhG CSF生物学活性的批内CV <10 % ,批间CV为 10 .10 9%。结论 (4 ,4)法可用于rhG CSF生物学活性的测定 ,对测定方法标准化后 ,测定结果可准确、有效地指导rhG CSF的生产和研究。     

高效液相色谱法测定异烟肼片的含量

目的 　建立 HPL C测定异烟肼片含量的方法。方法 　色谱柱 Kromasil KR10 0 -5 C1 8色谱柱 (2 5 0× 4.6mm) ;流动相 :甲醇 -水 (3 0∶ 70 ) ;流速 :0 .8ml·min- 1 ;紫外检测波长 :2 63 nm。结果 　异烟肼在 0 .2 5～ 2 μg·m L- 1浓度范围内呈线性关系良好。 (r=0 .99999,n=6) ,重复性良好 ,RSD=0 .7% (n=6) ,平均回收率 99.3 3 % ,RSD=0 .64 % (n=6)。 结论 　本法快速、简便、准确、重复性好。     

尼莫地平对体外培养成骨细胞的影响

目的 :观察尼莫地平对体外培养成骨细胞的影响。方法 :在新生SD大鼠头颅骨第 2继代成骨细胞 (OB2 )培养液中分别加入不同浓度 (10 - 1～10 - 9g·L- 1)尼莫地平 ,分别观察OB2 的增殖功能(用波长 5 70nm处OD值表示 ) ,分化功能 [用碱性磷酸酶 (ALP)活性表示 ]和矿化功能 (用每视野矿化结节数量表示 )。结果 :增殖功能OD值为 0 .12 1±s 0 .0 0 9～ 0 .41±s 0 .0 4(P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;ALP活性为 (0 .0 92± 0 .0 0 8)U·mg- 1Pro(P <0 .0 5 ) ;每视野矿化结节数量为 (1.3± 0 .9)个 (P <0 .0 1)。结论 :尼莫地平不同浓度对OB2 的增殖、分化和矿化功能作用各异 ,当尼莫地平浓度为 10 - 6 g·L- 1时 ,对OB2 的增殖和分化功能具有刺激作用 ,对OB2 的矿化功能具有显著的抑制作用。     

IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺的初探

本文对IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺进行了研究.结果表明在发酵过程中pH的稳定(7.0)、糖的补充(3%)、O_2的及时供给(<10PSIG持续泵入)和发酵密度的控制(OD_(550)=1.9),对提高发酵产量至关重要(12g/L).在包含体制备及溶解工艺中,以4mol/L脲去除脂质及杂蛋白,1%SDS溶解包含体,可获最大IL_2活性单位(2.35×10~7u/ml,即相当于5L发酵可获3.53×10~9u).     

RP-HPLC法同时测定鸡冠花中槲皮素、木犀草素和山柰酚的含量

目的建立鸡冠花中槲皮素、木犀草素和山柰酚的含量测定方法。方法反相高效液相色谱法,色谱柱ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm);检测波长360nm;甲醇-0.2%磷酸(45∶55)为流动相;柱温30℃;流速1.0mL·min-1。结果槲皮素、木犀草素和山柰酚的回归曲线分别为:Y=1504.412X+9.9756,Y=1991.745X+8.6051,Y=567.591X+2.5397,它们分别在5.5×10-2～19.3×10-2mg·L-1,4.6×10-2～16.1×10-2mg·L-1,12.6×10-2～43.9×10-2mg·L-1范围内线性关系良好,相关系数r=0.99992～0.99998,加样回收率分别为94.68%,91.03%和103.08%,RSD分别为0.35%,1.01%和0.55%。样品分别含槲皮素、木犀草素和山柰酚0.176,0.262和0.105mg.g-1。结论方法简便可行,重复性好,数据及结果可靠。     

糖基化白蛋白液中糖含量的不同定量方法比较

目的探讨测定糖基化白蛋白反应液中葡萄糖含量的适宜方法。方法对3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法和苯酚-硫酸法三种不同测定糖含量方法进行研究比较。结果3熏5-二硝基水杨酸法、邻甲苯胺法、苯酚-硫酸法测定糖的线性范围分别为:2.5×10-5～3.0×10-4mol/L,3.0×10-5～3.0×10-4mol/L,2.5×10-5～2.5×10-4mol/L;直线回归方程为:y=0.01780x-0.05400穴r=0.9991雪,y=0.006029x+0.004286穴r=0.9988雪,y=0.01554x-0.001905穴r=0.9994雪;摩尔吸光系数为:6.5×103L/mol·cm,2.4×102L/mol·cm,2.4×104L/mol·cm;回收率分别为:101.9%～108.0%,92.3%～109.1%,94.3%～104.5%。结论苯酚-硫酸法具有操作简便、准确、灵敏、快速、显色后颜色稳定等优点,适用于测定糖基化白蛋白样品中的糖含量。     

17β-雌二醇对人成骨细胞株HOS TE85细胞增殖及胞内cAMP,cGMP,iNOS影响

目的观察１７β－雌二醇（Ｅ２）对ＨＯＳＴＥ８５细胞增殖及胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，ｉＮＯＳ影响。方法［３Ｈ］－ＴｄＲ参入，放射免疫及Ｌ－３Ｈ－精氨酸转化法。结果Ｅ２１．０ｍｍｏｌ·Ｌ－１处理４８ｈ，细胞计数为（９４．３×１０７±７．５×１０７）个·Ｌ－１，对照组为（６５．０×１０７±５．９×１０７）个·Ｌ－１，［３Ｈ］－ＴｄＲ参入量增加４５．０％；细胞ｉＮＯＳ活性为（７３．０±６．６）ｐｍｏｌ·Ｌ－１·ｇ－１·ｍｉｎ－１（比对照组增加４６１．５％），ｃＧＭＰ为（０．６９±０．０３）ｐｍｏｌ·Ｌ－１·１０－８ｃｅｌ（比对照组增加３０５．９％）；抑制ｈＰＴＨ诱导胞内ｃＡＭＰ升高。结论Ｅ２能刺激成骨细胞增殖。Ｅ２可能通过影响胞内ｃＡＭＰ，ｃＧＭＰ，ｉＮＯＳ含量和活性而发挥作用。     

薄层扫描法同时测定Vc银翘片中的3组分含量

目的建立Vc银翘片中扑热息痛、扑尔敏、Vc 3种成分同时定量的分析方法。方法用超声提取 ,以乙酸乙酯∶冰醋酸∶水 (7∶2∶3,V∶V∶V)为展开剂 ,通过双薄层扫描法对Vc银翘片中扑热息痛、扑尔敏和Vc进行同时定量。结果扑热息痛点样量在 10～ 30 μg,扑尔敏在 1～ 3μg,Vc在2 5～ 75 μg呈现良好的线性关系。在此线性范围内它们的回归方程分别是 :y =5 6 0 6× 10 3 x +1 92 9× 10 3 ,r =0 995 8;y =8 0 5 2× 10 3 x - 2 4 76× 10 3 ,r =0 9985 ;y =9 773× 10 3 x +7 6 79×10 2 ,r =0 9992。扑热息痛、扑尔敏、Vc 3种成分的含量分别为 :99 4 % ,10 0 2 % ,98 7%。RSD分别为 4 0 % ,2 4 % ,3 8% ,回收率分别为 99 4 % ,99 1% ,98 4 % ,RSD值分别为 2 8% ,3 2 % ,1 6 %。结论本方法用于Vc银翘片中扑热息痛、扑尔敏、Vc 3种成分的含量测定     

蛇床子素对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM-F12培养液中,3d后首次换液,9d后传代培养。培养基中蛇床子素终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养d4、8、12、16测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量,d15进行钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RTReal-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix与Runx-2的基因表达情况。结果蛇床子素剂量依赖性抑制BMSCs增殖,但能明显促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进骨钙素分泌、钙盐沉积量、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA表达水平。结论终浓度为1×10-5mol·L-1蛇床子素能明显促进BMSCs的成骨性分化,证明蛇床子素是中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。     

低浓度毒毛旋花子苷原对离体豚鼠衰竭心脏的影响

目的　研究低浓度毒毛旋花子苷原 (strophanthidin ,Str)对离体衰竭心脏心功能及心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性的影响。方法　Langendorff离体心脏灌流装置制备戊巴比妥钠心衰模型 ,八道生理记录仪测定不同浓度Str对心功能的影响 ,无机磷法测定各组心肌细胞膜Na+,K+ ATP酶活性。结果　Str 1× 10 -9～ 1× 10 -7mol·L-1均能不同程度地持续增加衰竭心脏的心率、左室收缩压及左室收缩的最大速率 ,但 1× 10 -7mol·L-1对Na+,K+ ATP酶活性无明显抑制 ,1× 10 -10 ～ 1× 10 -8mol·L-1则可升高Na+,K+ ATP酶的活性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。 1× 10 -6 ～ 1× 10 -4 mol·L-1可使心功能指标先升高、后降低 ,且伴有心脏收缩不规则和心律失常 ,也可剂量依赖性地抑制Na+,K+ ATP酶活性 (P <0 0 1)。结论　高浓度Str的正性肌力及伴有的心脏毒性作用是通过抑制Na+,K+ ATP酶实现的 ;而低浓度的正性肌力作用则和Na+,K+ ATP酶抑制无关     

压电振荡频移法测定微量有机碘药物

研究了用镀金石英压电晶体测定微量有机碘药物与碘化物的条件与方法。在CCl₄中,晶体电极的振荡频率随吸附碘量的增加而降低。在被萃取水相碘化物浓度为1×10^-7～3×10^-6M范围内,振荡频移值与浓度成正比;AF(Hz)=22.2×10⁷C(M)。除溴以外,其它物质无显著干扰。振荡频率可用氨水回复。研究了影响因素与吸附机理。方法可用于有机碘化合物中含碘量,水溶液、尿液及血液中微量有机碘药物等的测定。     

环丙沙星注射液与甲硝唑葡萄糖注射液配伍的稳定性探讨

目的 :探讨在高温 (50℃～70℃ )和室温 ((20±1)℃ )下乳酸环丙沙星注射液与甲硝唑葡萄糖注射液 (甲硝唑G)配伍的稳定性。方法 :采用紫外分光光度法测定环丙沙星和甲硝唑的含量 ;用经典恒温法、留样观察法考察环丙沙星与甲硝唑G配伍液的含量、pH值及外观变化。结果:环丙沙星、甲硝唑的线性范围分别为1 00～10 02μg/ml、2 01～20 08μg/ml ;平均回收率分别为(101 30±4 28) %、(99 58±1 63) % ;70℃、8h内的热分解产物不干扰测定。高温、8h内的恒温加速试验以及室温、0～120h内的留样观察结果表明 ,环丙沙星与甲硝唑在配伍前、后药物残存率均大于95 % ;pH值、外观均无明显变化。结论 :环丙沙星与甲硝唑以5 %葡萄糖为溶媒 ,在高温、8h内和室温、120h内均稳定 ,可以配伍应用。