血管内皮细胞生长因子在心梗模型治疗中的形态学观察

目的:探讨VEGF在实验性心肌梗塞中促血管生成的形态学依据和作用机理。方法:结扎30只家兔左冠状动脉的前降支,造成实验性心肌梗塞。15支兔作为实验组,在梗塞区内注射VEGF;其余15只兔作为对照组,仅作前降支单纯性结扎。两组动物分别于结扎后1,2,4周处死,利用组织切片染色法,观察梗塞区血管的生成与重建及相关的病理学变化。结果:实验组梗塞区内,可见许多呈岛状存活的心肌组织,对照组则极为少见。术后2周为血管形成的高峰期,实验组梗塞区内新生血管的数量和密度明显高于对照组,两组具有极为显著性差异(血管密度实验组为24.19±0.77条/4×10倍,对照组为1.01±0.21条/4×10倍)。结论:VEGF对急性实验性心肌梗塞后的血管形成及心肌组织存活具有明显的促进作用。     

缓释VEGF的可吸收性微管在TMR中的应用研究

目的 :观察血管内皮细胞生长因子结合缓释技术 ,促机械性TMR管道内血管生成的作用。方法 :利用机械钻在家兔左室前壁进行心肌钻孔 ,形成透室壁性心肌管道 ,实验组心肌管道内放入含VEGF及肝素的可吸收性多孔缓释微管 ;对照组放入不含VEGF及肝素的可吸收性多孔缓释微管。动物于术后8周处死 ,利用组织切片染色法 ,对照观察实验组和对照组TMR管道内血管生成状况。结果 :实验组TMR管道内血管生成的密度 /数量为 9.2 4± 0 .46条 /10× 4倍 ;对照组为 1.98± 0 .87条 /10× 4倍 ,两者具有非常显著性差异 ,P <0 .0 0 1。结论 :VEGF通过可吸收性多孔微管的缓释作用 ,对管道内血管的再生与重建具有非常明显的促进作用。     

胚胎干细胞移植结合TMR及VEGF对大鼠心梗的修复作用

目的：探讨胚胎干细胞移植结合透室壁性心肌血管重建术（transmyocardial revascularization,TMR）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）对大鼠心梗的修复作用.方法：制备实验性大鼠心梗模型,1周后实施TMR,术后10min于TMR微孔道凝血块内及其周围注射重组VEGF,孔周三点注射移植由绿色荧光蛋白标记的胚胎生殖细胞.4周后测量血液动力学指标评价心功能,并测量左心室重与体重之比,梗塞面积,毛细血管密度,评价移植区的组织学和形态学变化.结果：与单独移植细胞组相比,干细胞移植联合TMR、VEGF组心室肥大减轻,梗塞面积减少（P＜0.01）,梗塞区毛细血管密度增加（P＜0.01）,心功能明显改善（P＜0.01）.结论：胚胎生殖细胞移植联合TMR、VEGF与单纯的细胞移植相比,能更有效地促进心梗区血管生成和移植细胞存活,改善梗塞心肌的心功能.     

心肌缺血犬经激光心肌血管重建后VEGF和bFGF的变化及心肌血管新生

目的：观察激光心肌血管重建术（TMLR）后血管内皮细胞生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与新生血管密度的关系。方法：北京地区杂种犬25只，以单纯缺血为对照组5只（3 d、1、2、4周和8周）5个时相检测血浆中VEGF、bFGF水平;实验组行心肌打孔后（1、2、4、8周）4个时相，每时相均为5只活杀显微镜下观察心肌血管密度的变化。结果：实验组VEGF和bFGF血浆浓度分别在术后2周和1周达高峰，心肌血管密度在术后4周达高峰（10.23‰±2.23‰）。结论：TMLR术可通过介导致血管生成的生长因子（如VEGF和bFGF）的表达来达到其部分血管新生的作用。     

长期体外反搏对冠状动脉闭塞犬的促血管新生作用研究

目的探索长期体外反搏对冠状动脉闭塞犬心肌微血管和血管新生作用的影响以及对循环和心肌局部血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法雄性Beagle犬12只,随机分为对照组(n=6)和反搏组(n=6),均用心导管法建立定向冠状动脉闭塞模型3d后,反搏组接受体外反搏处理,每日1h,持续共6周(每只犬反搏总时间28~30h)。血管细胞成分免疫标记技术比较心肌微血管的差异和血管新生作用。双抗体夹心ELISA法测定犬血清VEGF水平动态变化。免疫组化SP法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化染色超敏法)测定心肌组织局部VEGF的表达。RT-PCR检测心肌组织局部VEGFmRNA的表达。结果(1)图像分析证实,反搏组犬缺血心肌组织内的微血管的数量显著高于对照组[α-actin:(11.8±5.3)支/HP比(3.4±1.2)支/HP,P<0.05;FⅧ-r-Ag:(15·2±6.3)支/HP比(4.9±2.1)支/HP,P<0.05]。(2)冠状动脉急性闭塞后,两组犬的血清VEGF水平开始升高,在24h均达到一峰值水平,随后VEGF水平下降,约在1周时降至最低。之后两组犬的血清VEGF水平有轻微增加,但组间变化差异无统计学意义。(3)反搏组犬缺血心肌组织的VEGF表达范围较广泛,但绝大部分仍分布于心肌细胞,少数分布于血管内皮细胞和成纤维细胞。相反,在对照组,心肌VEGF阳性表达的范围和强度均不及反搏组。(4)免疫组化图像分析发现,反搏组犬心肌VEGF表达的面积[(0·0353±0.0090)mm2比(0.0036±0.0008)mm2,P<0.01]、吸光度指数[(3·0391±0.5121)比(0·3473±0.0840),P<0.01)]均高于对照组;对两组心肌组织VEGFmRNA的表达进行半定量分析,结果反搏组犬心肌VEGFmRNA的表达显著高于对照组(P<0.01),增加73·5%。结论长期体外反搏治疗促进冠状动脉侧支循环和新生血管形成,促进缺血心肌组织局部VEGF蛋白和mRNA水平的表达可能是体外反搏的治疗机制之一。     

VEGF在激光TMLR中促心肌血管生成的实验研究

目的　从形态学角度观察血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在激光透室壁性心肌血管重建术 (transmyocardiallaserrevascularization ,TMLR)中 ,促TMLR孔道内血管生成的作用 ,探讨优化TM LR的可行性方案。　方法　采用高能CO2 激光照射家兔左室前壁 ,形成透室壁性激光心肌孔道。实验组TMLR孔道内注射VEGF ;对照组TMLR孔道内注射相同剂量的生理盐水。动物于术后不同时间处死 ,利用组织切片染色法 ,对照观察实验组和对照组的TMLR孔道内血管生成状况。　结果　应用VEGF实验组和未应用VEGF对照组的TMLR孔道内血管生成的密度 /数量具有显著性差异 ,P <0 0 0 1。　结论　VEGF对TMLR孔道内血管生成具有非常明显的促进作用     

纳米转基因技术可用于大鼠心梗后血管再生

目的 探讨包载VEGF165质粒的聚乳酸-乙醇酸(PLGA)纳米粒子对大鼠心肌梗死后血管再生治疗的可行性.方法 制备大鼠心梗模型36只,实验组24只、对照组12只,术后1周在梗死区和与正常心肌交界处注射pVEGF165-PLGA纳米粒子和pVEGF165.应用RT-PCR和免疫组化检测血管内皮生长因子在不同的时间点(3、7、11、14和21 d)的表达;组织切片观察梗死区血管形成特点及其密度;以及纳米粒子对人体的毒副作用.结果 与对照组相比,实验组VEGF可在心肌组织持续稳定表达;梗死区血管内皮细胞增生活跃,再生血管数量增加.注射48 h后心肌细胞核内可见纳米粒子,8周后组织活检未见血管瘤.结论 PLGA纳米粒子有效介导pVEGF165转染心肌,并通过心肌细胞表达VEGF165,促进缺血区心肌组织的血管再生.     

碱性成纤维细胞生长因子基因修饰骨骼肌卫星细胞自体移植急性心肌梗死组织的血管新生北大核心

背景:前期研究发现,骨骼肌卫星胞移植能够诱导心肌梗死区新生血管形成,缩小梗死面积,改善其心功能,但整体效果并不太理想。目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因修饰骨骼肌卫星细胞在急性心肌梗死区的存活及对心肌梗死区血管新生的影响。方法:将18只新西兰大白兔随机分为3组,实验组、对照组结扎冠状动脉左前降支,构建急性心肌梗死动物模型;空白对照组只穿线,不结扎。造模成功即刻,实验组于局部梗死心肌内注射DAPI标记的碱性成纤维细胞生长因子基因修饰自体骨骼肌卫星细胞悬液50μL,对照组注射等量DAPI标记的自体骨骼肌卫星细胞。细胞移植4周后取标本,观察心肌梗死区骨骼肌卫星细胞存活及成纤维细胞生长因子基因表达情况,免疫组织化学染色检查心肌梗死区新生血管形成情况。结果与结论:(1)空白对照组未见DAPI标记的细胞,对照组及实验组缺血心肌区域均可见大量DAPI标记的骨骼肌卫星细胞,实验组还可见大量EGFP-碱性成纤维细胞生长因子融合蛋白绿色荧光表达;(2)实验组、对照组新生微血管密度多于空白对照组(P<0.05),实验组新生微血管密度多于对照组(P<0.05);(3)结果表明,碱性成纤维细胞生长因子修饰骨骼肌卫星细胞可在急性心肌梗死区存活,促进心肌梗死区血管新生。     

低能量氦氖激光照射增加大鼠心肌血管内皮生长因子的表达

目的　探求低能量氦氖激光照射大鼠心前区 ,对心肌血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。　方法　采用RT PCR和免疫组织化学染色图像分析的方法 ,实验动物分对照组和激光照射组 ,每组 8只 ,照射组的照射剂量为 6 0 5J cm2 。　结果　VEGF免疫组织化学染色示照射组心肌微血管内皮细胞的着色较重 ,其平均光密度值为 0 2 4 6± 0 0 15 ,明显高于对照组的 0 2 18± 0 0 12 (t=9 0 5 ,P <0 0 5 ) ;心肌组织VEGF16 5的RT PCR产物表达显示 ,激光照射组的VEGF16 5mRNA表达为对照组的 2 79倍。　结论　以剂量为 6 0 5J cm2 的He Ne激光照射大鼠心前区 ,心肌微血管及心肌组织VEGF的表达明显增强。     

VEGF在机械性TMR中促心肌血管再生与重建的实验研究

目的:从形态学角度观察血管内皮细胞生长因子（VEG）在机械性TMR（transmyocardialrevascularization）管道内促血管再生与重建的作用。方法:利用高速空心钻头在家兔左室前壁进行TMR,形成透室壁性心肌管道。实验组的TMR管道内注射VEGF;对照组仅做单纯机械性TMR。动物术后不同时间处死,利用组织切片染色法,对照观察实验组和对照组TMR管道内血管再生与重建的状况。结果:术后2周,实验组和对照组的TMR管道内新生小血管的密度/数量分别为（24.20±0.98）条/10 ×4倍和（8.41±0.59）条/10×4倍,P<0.001;术后6～8周,分别为（11.08±0.96）条/10×4倍和（3.31±0.57）条/10×4倍,P<0.001。结论:VEGF对机械性TMR管道内血管的再生与重建具有非常明显的促进作用。     

腺病毒介导的肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死***

背景：骨髓间充质干细胞可以分化为心肌细胞,促进血管再生,但在移植早期其自身分泌的细胞因子不足以维持良好的分化和再生。 目的：验证腺病毒介导的肝细胞生长因子和血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植对新西兰兔梗死心肌组织的修复重建和血管再生的影响。 方法：腺病毒介导肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染BrdU标记的新西兰兔骨髓间充质干细胞。取新西兰兔50只建立急性心肌梗死模型,4周后随机分为5组,分别于梗死心肌内注射：①骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子。②骨髓间充质干细胞/Ad. 肝细胞生长因子。③骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子。④骨髓间充质干细胞。⑤对照组注射等量无血清IMDM培养液。移植4周后观察移植细胞的分化和新生血管的形成,并通过超声多普勒检测心功能变化。 结果与结论：除对照组外,其余4组兔心功能都较移植前有明显改善(P < 0.05),其中移植双基因转染骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组兔的心功能改善程度要明显高于其他3组。部分BrdU染色阳性的细胞可以分化成为内皮细胞,参与构成了梗死区域的新生毛细血管。与对照组比较,其余4组都有明显的血管新生(P < 0.05),而以骨髓间充质干细胞/Ad.血管内皮生长因子+肝细胞生长因子组最显著。提示肝细胞生长因子/血管内皮生长因子双基因转染新西兰兔骨髓间充质干细胞移植于梗死心肌可以促进心肌再生和新生血管的形成,明显改善心功能。 关键词：基因转染;骨髓间充质干细胞;血管内皮生长因子;肝细胞生长因子;移植 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.029     

骨髓间充质干细胞膜微粒促进大鼠心肌梗死后血管新生

目的:观察骨髓间充质干细胞膜微粒(MSC-MPs)对大鼠心肌梗死后血管新生以及心功能的影响。方法:提取Sprague-Dawley大鼠MSCs并培养,在低氧低营养条件下培养72 h,以诱导细胞凋亡释放MSC-MPs。将培养上清液超速离心获取MSC-MPs,透射电镜下观察其大小及形态,并用流式细胞术分析其表型。建立SD大鼠心肌梗死模型,心肌梗死边缘区注射膜微粒及对照试剂。超声心动图检测心功能,Masson染色检测心梗面积,免疫组织化学染色技术检测梗死边缘区血管α-平滑肌肌动蛋白和von Willebrand因子以确定血管新生情况,real-time PCR检测心梗组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达变化。结果:MSCs凋亡后可以释放膜微粒,MSC-MPs来自MSCs,直径为100~1 000 nm。心肌梗死大鼠心肌内注射MSC-MPs后,第7天和第28天时心功能明显改善,第28 d时心梗面积比对照组减小,新生血管密度明显增加,第7天时心梗组织VEGF的表达增加。结论:MSC-MPs可以促进大鼠心肌梗死后的血管新生,改善心功能。     

不同孕周人脐带间充质干细胞移植改善心肌梗死模型心脏功能的比较

BACKGROUND: Stem cells have multi-directional differentiation and self-replication abilities, under certain conditions, which can differentiate into myocardial cells to repair the damaged myocardium. OBJECTIVE: To investigate the effects of transplantation of umbilical cord mesenchymal stem cells derived at different gestational weeks on infarct size and angiogenesis in the infarct region of experimental rabbits with myocardial infarction. METHODS: Ten full-term umbilical cord samples and 10 umbilical cord samples of aborted fetuses at 10-12 gestation weeks were selected to in vitro isolate umbilical cord mesenchymal stem cells that were subjected to BrdU labeling. HLA-G expression was detected in the cells. Thirty white rabbits were selected to make myocardial infarction models, and 2 weeks after modeling, the model rabbits were randomized into aborted cell transplantation group, full-term cell transplantation group and control group (n=10 per group). Then, BrdU-labeled cells were injected correspondingly into the infarct region of rabbits in the two cell transplantation groups. Rabbits in the control group were subjected to an equal volume of serum-free. Four weeks after transplantation, heart function of rabbits was monitored using electrocardiogram, and myocardial tissues were taken to measure infarct size and blood capillary density. RESULTS AND CONCLUSION: HLA-G expression was different in different sources of umbilical cord mesenchymal stem cells: high HLA-G expression was found in the aborted umbilical cord mesenchymal stem cells, and meanwhile, low HLA-G expression was found in the full-term umbilical cord mesenchymal stem cells. Compared with the control group, the left ventricular end-diastolic volume and left ventricular ejection fraction of aborted and full-term cell transplantation groups were significantly improved, especially in the aborted cell transplantation group (P < 0.05). BrdU-positive cells were found in the infarct site in both transplantation groups. Compared with the control group, the infarct size and capillary density were improved most significantly in the aborted cell transplantation group followed by the full-term cell transplantation group (P < 0.05). Electrocardiogram findings showed significant improvement in both cell transplantation groups compared with the control group (P < 0.05), especially in the aborted cell transplantation group. These findings indicate that umbilical cord mesenchymal stem cells derived at low gestational weeks improve the heart function more significantly than the full-term umbilical cord mesenchymal stem cells, which have the potential to become a better source of cardiomyocytes for transplantation.     

经bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对缺血性心功能不全兔心功能及血管新生的影响

目的:探讨经bcl-2基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性心肌梗死家兔心肌细胞凋亡、血管再生及心功能的影响。方法:体外分离、培养、纯化兔BMSCs,分别转染腺病毒及重组腺病毒-Bcl-2。结扎兔冠状动脉前降支制作心肌梗死(MI)模型,2周后于心梗边缘区分别注射等量的腺病毒-Bcl-2-BMSCs(MI+Bcl-2-BMSCs组)、腺病毒-BMSCs(MI+BMSCs组)及DMEM液(MI组)。细胞移植4周后经超声测定心功能;荧光显微镜观察BMSCs的存活及分布;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;real-time PCR检测VEGF mRNA表达;免疫组化染色法检测CD31表达,计算新生毛细血管密度。以上数据分别与心功能进行相关性分析。结果:与MI组相比,MI+Bcl-2-BMSCs组和MI+BMSCs组的心功能改善、细胞凋亡率降低、VEGF mRNA表达增多、毛细血管密度增加,其中MI+Bcl-2-BMSCs组的变化更为显著(P0.05)。相关性分析显示左室射血分数与心肌细胞凋亡率呈负相关;与VEGF mRNA的表达量及毛细血管密度呈正相关(P0.01)。结论:经bcl-2基因修饰的BMSCs移植可显著减少缺血性心功能不全兔心肌细胞凋亡、促进血管再生、改善心功能。     

参术冠心颗粒对心肌梗死大鼠冠脉微循环的影响*

 目的：探讨参术冠心颗粒（SSGX）对大鼠心肌梗死(MI)模型冠脉微循环作用。方法：健康SPF级SD大鼠50只,随机分成假手术(sham)组、MI组、SSGX高剂量、中剂量和低剂量治疗组,每组10只。后4组结扎冠状动脉建立MI大鼠模型,假手术组只穿线不进行结扎。造模3 d后超声检查淘汰不合格大鼠,药物干预4周,测定4周后各组大鼠血清心肌损伤标志物、梗死区中小血管平均血管面密度（MVC值）、梗死边缘区血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)表达。结果：MI组与sham组比较,光学显微镜见MI组死亡的心肌纤维间空隙变宽,密集的中型多形核白细胞浸润,肉芽组织增生,坏死心肌纤维被致密的胶原纤维取代。超声可见MI组左室室璧活动异常,射血分数减低。心肌钙蛋白T（cTnT）、MVC、PECAM-1和VEGF各指标与sham组比较均有显著差异（P<0.01）,证明造模成功。大鼠心肌梗死区中小血管的MVC、梗死边缘区PECAM-1及VEGF的表达,SSGX各剂量组与MI组相比表达明显增加,差异有统计学意义（P<0.01）,呈量效关系。但各SSGX组大鼠和MI组大鼠之间,心肌标志物差异无统计学意义（P>0.05）。结论:参术冠心颗粒能改善心肌梗死大鼠冠脉微循环状态,其机制可能与增加PECAM-1和VEGF表达、促进中小血管新生有关。     

卡托普利预处理对家兔实验性心肌梗塞范围及心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨卡托普利预处理对家兔实验性心肌梗塞范围及心肌细胞凋亡的影响。方法:健康家兔,分为(1)假手术对照组(sham-operated control group),(2)急性心梗组(acuteinfarct group),(3)卡托普利预处理组(captopril group,25mg·kg^-1·d^-1,喂饲1周)。结扎冠状动脉左旋支造成急性心肌梗塞模型。测结扎前、结扎后15、30、60min的心功能。结扎前及结扎后1h的全血粘度与血球压积。结扎后6h取心脏,以缺血区重/左室重比为缺血范围,梗塞区重/缺血区重比为梗塞范围。TUNEL法染色检测细胞凋亡,以心肌凋亡阳性细胞数占总心肌细胞数的百分比作为心肌细胞凋亡指数。结果:(1)卡托普利预处理组梗塞范围显著小于心梗组(16.60%±0.94%比36.24%±1.94%,P＜0.05),并改变左室功能及血粘度。(2)梗塞周围可见凋亡心肌细胞,卡托普利预处理该区心肌细胞凋亡指数明显小于急性心梗组(26.37%±0.71%比42.44%±2.32%,P＜0.05)。结论:卡托普利预处理可明显减少梗塞范围及心肌细胞凋亡程度,改善心功能。     

bFGF通过促进心脏血管新生改善心肌梗死后小鼠心脏重构

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)对心肌梗死小鼠心脏的保护作用及机制。方法:采用异氟烷麻醉C57/B6小鼠(8~12周龄)后,侧开胸结扎冠状动脉左前降支,建立小鼠心肌梗死模型;设立假手术组为对照,心肌梗死模型小鼠随机分为心梗组和bFGF给药组,其中bFGF组小鼠心梗7d后给予5μg b FGF隔天腹腔注射给药;在小鼠心梗第28天时采用心脏多普勒超声检测心功能,以左室舒张末期内径、左室收缩末期内径、左心室射血分数和左心室短轴缩短分数评价心脏功能改变;28 d后处死小鼠,行病理切片观察心肌纤维化程度和心肌梗死区内血管新生的情况;Western blot检测血管新生指标。结果:bFGF给药组小鼠心肌纤维化程度较心梗模型组明显减少;第28天行超声心动图检查结果示,心梗组小鼠心功能较假手术组差,而bFGF给药组小鼠心功能与心梗组比较有明显的改善;小鼠心肌病理切片免疫荧光观察结果发现,bFGF给药组心肌梗死区的新生血管比心梗组明显增多;Western blot实验表明,bFGF能够激活AKT/HIF-1α/VEGF通路。结论:隔天腹腔注射bFGF能够减少心肌梗死小鼠心肌纤维化,改善心功能。bFGF可能通过AKT/HIF-1α/VEGF信号通路促进血管新生,从而保护心脏。     

氟伐他汀对缺血再灌注损伤兔心肌细胞间粘附分子的影响

目的:探讨氟伐他汀短期预处理对缺血再灌注损伤兔心肌的保护作用及其机制。方法:日本大耳白兔21只随机分为3组:①假手术对照组(Sham组),②缺血再灌注组(IR组),③氟伐他汀干预组(F组)。实验中持续监测左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LWEDP)、左室内收缩压最大上升速率和下降速率(±dp/dtmax)的变化,再灌注结束后用伊文氏蓝和TTC染色法确定缺血和梗死心肌范围,用RT-PCR进行心肌局部ICAM-1 mRNA表达测定。结果:缺血再灌注后,F组上述心功能各项指标较IR组明显改善,心肌组织ICAM-1 mRNA水平较IR组显著降低;心肌梗死面积较IR组明显减小。结论:氟伐他汀短期预处理可降低心肌缺血再灌注后心肌ICAM-1 mRNA表达,降低心肌梗死程度,改善心功能,对心肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用。