甲胎蛋白与Caspases3在Huh7肝癌细胞中共表达的意义

目的:确定Caspases3与甲胎蛋白(AFP)共表达于Huh7细胞中,为肝癌的治疗提供新思路。方法:取对数期Huh7肝癌细胞,提取总RNA,经反转录成cDNA,经PCR扩增,并行琼脂糖电泳检查、照相。结果:Caspases3与AFP共表达于Huh 7肝癌细胞中。结论:其于此理论提出了治疗肝癌的新思路。     

上调miR-27b表达对人肝癌Huh7细胞系增殖的影响

目的 通过在肝癌Huh7细胞系中上调miR-27b的表达,观察miR-27b对肝癌Huh7细胞系增殖及STK3表达的影响。 方法 人工合成miR-27b过表达慢病毒,感染肝癌Huh7细胞。利用CCK-8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力。定量PCR检测STK3 mRNA表达,Western Blotting检测STK3蛋白表达。 结果 miR-27b过表达组Huh7细胞增殖活性明显高于阴性对照组和空白对照组;miR-27b过表达组STK3 mRNA表达、STK3蛋白表达低于阴性对照组和空白对照组。 结论 上调miR-27b表达可促进肝癌细胞增殖,其机制可能与抑制STK3表达相关。     

表没食子儿茶素对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对化学缺氧损伤PC12细胞的保护作用。方法建立氯化钴(Co Cl2)诱导PC12细胞化学缺氧损伤模型,实验分为对照组、EGCG组、缺氧组和联合组,通过测定细胞活力、细胞凋亡率、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)含量及Bcl-2、Akt蛋白表达,探讨EGCG对受损细胞的保护作用。结果氯化钴作用后,缺氧组细胞存活率较对照组降低(P0.05),联合组细胞存活率较缺氧组升高(P0.05);缺氧组细胞凋亡增加至34.2%,EGCG干预后,细胞凋亡率降至23.5%;缺氧组细胞SOD活性较对照组降低(P0.05),EGCG干预后可提高氯化钴诱导的细胞SOD活性降低,差异具有统计学意义(P0.05)。缺氧组细胞上清液中的LDH活力增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);EGCG处理后能降低氯化钴引起的上清液中LDH活力增加(P0.05)。缺氧组细胞Bcl-2表达降低(P0.05),EGCG处理后能抑制氯化钴诱导的Bcl-2表达降低(与缺氧组比较P0.05),并提高细胞p-Akt的表达(与缺氧组比较P0.05),各组总的Akt表达量均无改变。结论本缺氧模型可诱导PC12细胞凋亡,EGCG对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。     

WWP2干扰对Huh7肝癌细胞的增殖、凋亡及细胞周期的影响研究

目的 探讨WWP2对Huh7肝癌细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响研究。方法 通过实时定量PCR （qPCR）、RNA干扰、流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,了解WWP2在Huh7肝癌细胞周期的中作用。结果 在肝癌组织中,WWP2 mRNA水平显著性表达;敲除细胞中的WWP2会抑制细胞增殖、使细胞停滞在G₁期,并诱导细胞凋亡。结论 WWP2有可能通过调控细胞凋亡而促进肝癌细胞生长。     

利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶可调控高表达的Huh7肝癌细胞

 目的 利用Tet-Off表达系统构建鞘磷脂合酶（sphingomyelin synthase,SMS）可被Dox调控高表达的Huh7细胞,为进一步探讨SMS活性升高致动脉粥样硬化的机制打下基础（建立细胞模型）。方法 首先将Tet-Off调控质粒转染Huh7细胞构建Huh7-tTA细胞,然后再将含外源性人SMS基因（hSMS）的PTREE2hyg质粒转染Huh7-tTA细胞,经分离纯化成功构建可调控表达hSMS的Huh7单克隆细胞（命名为SMS细胞,SMS1和SMS2）。为了便于检测外源性hSMS,利用FLAG标记hSMS（SMS-FLAG）。结果 SMS细胞表达SMS-FLAG受不同剂量Dox调控,SMS mRNA测定结果显示: 0 ng/mL Dox剂量组较0.01 ng/mL和100 ng/mL Dox组均有显著升高（P<0.05和P<0.001）;0.01 ng/mL Dox组较100 ng/mL Dox组也有显著升高（P<0.05）。SMS蛋白测定结果相似于SMS mRNA结果。SMS酶活性测定结果显示0 ng/mL Dox组显著高于100 ng/mL Dx组（P<0.001）,而对照组（Huh7-tTA）、100 ng/mL Dox组和野生型Huh7细胞组之间差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 利用Tet-Off体系成功构建SMS高表达可调控Huh7细胞,SMS细胞SMS高表达受Dox剂量调控。     

高表达CD81的Huh7细胞株对提高HCV病毒感染效率的研究

目的建立具有高感染性的丙型肝炎病毒（HCV）的体外细胞株。方法构建高表达CD81的Huh7细胞株。将HCV质粒（JFH-1,2a）体外转录成RNA,电转染到Huh7和CD81-Huh7细胞中,实时定量PCR法检测两组细胞和培养上清液中病毒载量,间接免疫荧光法检测细胞中HCV核心蛋白表达。收集电转后细胞上清液重新感染两组细胞,检测细胞中病毒RNA表达。结果 CD81-Huh7电转后,细胞和上清液中病毒RNA水平均明显高于Huh71-2log。其被感染的效率也高于Huh7。结论成功建立一株能够高表达感染性HCV病毒颗粒的细胞株CD81-Huh7。     

SOD与ROS在As2O3作用于S180肉瘤细胞中的作用研究

目的：初步探讨超氧化物歧化酶(SOD)、细胞内活性氧(ROS)在三氧化二砷(As2O3)抗肿瘤中的作用。方法：对小鼠S180肉瘤细胞采用细胞培养，并建立S180移植瘤动物模型，体内体外观察As2O3对S180肉瘤的抑制作用，同时检测S180肉瘤细胞及S180移植瘤肿瘤组织内的总超氧化物歧化酶(TSOD)，含锰超氧化物歧化酶(MnSOD)，含铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)以及ROS的改变。结果：As2O3可以抑制小鼠S100肉瘤细胞生长并具有浓度依赖性，在一定浓度下其作用强于化疗药物阿霉素(ADM)；肿瘤细胞内及肿瘤组织内的TSOD以及MnSOD均表现出下降的趋势，ROS则表现出上升趋势。TS0D和ROS呈负相关。结论：As2O3是通过降低细胞内SOD值，使细胞内超氧阴离子(O2^*-)更多的积累以杀伤肿瘤细胞，这可能是As2O3，抗肿瘤作用机制之一。     

木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的作用及其机制。方法:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷预作用12 h后,采用H2O2诱导培养乳鼠心肌细胞氧化损伤模型,测定细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞内钙(Ca2+)超载的变化。结果:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷能明显提高H2O2损伤细胞存活率,提高细胞内SOD活性,降低胞内MDA和ROS生成量,同时使细胞内钙含量降低。结论:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H2O2氧化损伤心肌细胞具有明显的保护作用,机制可能与其抑制脂质过氧化、抑制细胞内钙超载有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯增强低剂量顺铂对小细胞肺癌H446细胞株的细胞毒作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]联合顺铂(Cisplatin,DDP)对小细胞肺癌细胞株H446的细胞毒作用及其机制.方法 采用MTT法检测EGCG及DDP影响H446细胞增殖的量效和时效关系.采用流式细胞仪检测不同浓度EGCG、DDP及二者联合作用于H446细胞对细胞周期及凋亡的影响.结果 EGCG和DDP均可抑制H446细胞增殖,该增殖抑制作用呈浓度及时间依赖模式.不同浓度的EGCG(80、160 μmol/L)与DDP(1.0μg/nl)联合应用时,可使H446细胞阻滞于G2/M期.EGCG可诱导H446细胞凋亡,并能增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用.结论 EGCG能够抑制H446细胞增殖,诱导H446细胞凋亡,增强DDP诱导H446细胞凋亡的作用,其机制可能与G2/M期阻滞有关.     

pSG5/TRIF质粒的构建及在Huh7细胞中的表达

目的 构建pSG5/Myc-TRIF质粒,并检验其在Huh7细胞巾的瞬时表达.方法 首先用Not Ⅰ酶切既往构建的DCX4pur/Myc-TRIF质粒,平末端化,然后用EcoR Ⅰ酶切,获得TRIF片断.用Sma Ⅰ和EcoR Ⅰ先后酶切空载体pSG5.各酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析.与预期吻合后,电泳回收靶片段.行连接反应.经筛选阳性克隆,扩大培养、提取、纯化重组质粒.BamH Ⅰ酶切鉴定重组质粒pSG5/Myc-TRIF.分别用FuGene 6转染试剂和重组牛痘病毒(rVW)预感染后用Lipofectin转染重组质粒入Huh7细胞.用免疫荧光染色、Western blot检测pSG5/Myc-TRIF的表达.结果 经限制性内切酶BamH Ⅰ酶切后,琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小与预期一致.转染后,荧光显微镜下可见Huh-7细胞表达Myc-TRIF蛋白,而且用rVV预感染后Lipofectin转染较用FuGene6转染表达率大大提高.Western blot结果显示在转染pSG5/Myc-TRIF的Huh7细胞中,均出现了大小约100 ku的条带.rVV预感染后用Lipofectin转染较FuGene6转染表达量高,与免疫荧光染色结果一致.结论 成功构建了pSG5/Myc-TRIF质粒.用rVV预感染Huh7细胞后再用Lipofectin转染重组质粒可以提高表达效率.     

表没食子儿茶素没食子酸脂对前列腺癌PC-3细胞体外生长的抑制作用

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对人前列腺癌细胞体外生长的抑制作用,以及其对细胞增殖周期的影响。方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的前列腺癌PC-3细胞,通过对细胞形态的对比观察和MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,通过流式细胞术检测其对细胞周期的影响。结果:与对照组相比,EGCG处理组可使细胞明显变圆,体积增大,细胞内颗粒及脱壁细胞增多;MTT法显示,EGCG能明显抑制前列腺癌PC-3细胞生长,并呈时间、剂量依赖性(P<0.05);流式细胞术显示,EGCG处理的PC-3细胞被阻止在G0/G1期,并有凋亡峰出现。结论:EGCG通过阻滞细胞的增殖周期对前列腺癌PC-3细胞体外生长有明显的抑制作用。     

儿茶素类对前列腺癌作用的研究进展

前列腺癌是中老年男性最多见的恶性肿瘤之一。儿茶素在防治前列腺癌中已经表现出令人兴奋的结果,可以抑制前列腺癌细胞增殖,诱导前列腺癌细胞凋亡,对前列腺癌形成中的关键酶进行调控。就儿茶素对前列腺癌的作用机制进行综述,并对前景提出了展望。     

芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨芍药苷对脂多糖（1ipopolyrsaccharides,LPS）诱导H9C2细胞氧化应激损伤的作用。方法采用LPS刺激H9C2细胞来检测相应的氧化应激指标从而间接反映细胞损伤程度,通过检测细胞内活性氧团基（reactiveoxygenspecies,ROS）水平的变化来观察芍药苷对其作用。本实验将细胞分为正常对照组、LPS氧化损伤组、LPS加芍药苷组（低、中、高剂量）,按实验设计因素处理后,用荧光酶标仪及流式细胞仪检测细胞内ROS水平。结果芍药苷对H9C2细胞具有低毒性,它可以降低胞内ROS的水平,且在本实验使用浓度范围内,芍药苷使细胞内ROS降低呈浓度依赖性;在本实验设计的时问范围内,芍药苷使细胞内ROS下降呈时间依赖性。结论芍药苷对LPS诱导H9C2细胞氧化应激损伤具有明显的改善作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对 IL-1β诱导 MIN6细胞凋亡的保护作用?

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对胰岛细胞的保护作用及机制。方法实验分为正常对照组,IL-1β组,IL-1β+EGCG1组(低浓度),IL-1β+ EGCG2组(高浓度)。CCK8检测细胞活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测MIN6细胞基础胰岛素和葡萄糖刺激的胰岛素分泌量,Hochest 染色及流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1流式细胞术检测线粒体膜电位,比色法测定细胞腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量,化学荧光法检测细胞活性氧簇(ROS)活性。结果与正常对照组相比,IL-1β组细胞活性降低,基础和葡糖糖刺激胰岛素分泌量显著减少,细胞凋亡明显增加,同时测得细胞线粒体膜电位降低,ATP 含量减少,提示细胞线粒体功能损伤,并且 ROS 活性增加。给予低浓度和高浓度 EGCG 作用后,与 IL-1β组相比,细胞活性明显提高,基础和葡糖糖刺激胰岛素分泌量增加,细胞凋亡率显著减少,线粒体膜电位增加,ATP 含量增加,同时 ROS 活性降低。且 IL-1β+EGCG2组作用更强。结论EGCC 可减轻 IL-1β诱导的 MIN6细胞细胞凋亡率,其机制可能与提高细胞 ATP 的含量,线粒体膜电位及降低 ROS 活性有关。     

表儿茶素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用

目的 研究表儿茶素对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的保护作用。方法 将80只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组（0.1 mg/kg）、表儿茶素高剂量组（100 mg/kg）、表儿茶素低剂量组（25 mg/kg）。除正常对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组均腹腔注射四氯化碳（CCl4） 建立肝纤维化模型。复制模型的同时开始给药,各给药组大鼠灌胃相应药物,正常对照组和模型组大鼠灌胃等容积生理盐水,每日1次,连续6周。末次给药后,称取肝湿质量,计算肝脏指数;采用微板法检测大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT)水平;苏木精-伊红染色和Masson胶原染色观察肝脏病理学变化;Western blot法检测肝脏中平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,collα1)蛋白的表达水平。结果 与模型组相比,表儿茶素能显著降低大鼠的肝脏指数和血清ALT、AST的含量;显著降低肝组织中α-SMA、collα1蛋白的表达;肝组织病理学指标明显改善。结论 表儿茶素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化有一定的保护作用,其机制可能与抑制α-SMA、collα1的表达有关。     

EGCG对H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达的影响

目的：探讨表没食子儿茶素没食子酸盐（EGCG）在双氧水（H2O2）诱导耳蜗螺旋神经节细胞（SGCs）氧化损伤中对线粒体抗氧化酶基因-MnSOD基因表达的影响。方法：培养离体SGCs,采用半定量RT-PCR方法检测加入不同浓度H2O2和/或EGCG后螺旋神经元MnSOD基因的表达情况。以经典抗氧化剂维生素C作对照。结果：随着H2O2浓度提高,MnSOD基因的表达亦随之升高;在H2O2浓度大于100 μmol/L时MnSOD基因表达明显上调(P<0.05),100 μg/ml EGCG能明显抑制H2O2诱导的MnSOD基因表达(P<0.05)。 结论：EGCG可能通过清除氧自由基,提高MnSOD酶活性,抑制H2O2诱导的螺旋神经节细胞MnSOD基因表达。     

微胶囊化儿茶素拮抗H2O2诱导的大鼠GMCs DNA损伤

目的:研究微胶囊化儿茶素对过氧化氢(H2O2)诱导的肾小球系膜细胞(glumreular mesangial cells,GMCs)DNA损伤修复作用及可能机制.方法:按H2O2终浓度分为0(对照组)、50 μmol/L组、100 μmol/L组、150 μmol/L组、200 μmol/L组、250 μmol/L组,每个处理组又分6,12,24 h 3个小组,筛选过氧化氢对GMCs DNA损伤研究的最适剂量与最佳时点.然后将培养细胞分生理盐水对照组、H2O2组、不同浓度儿茶素组(按终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组)与不同浓度微胶囊化儿茶素组(按胶囊中儿茶素含量终浓度又分为10.0,15.0,20.0 mg/L 3个组),共8组进行培养.利用生物化学法检测各组大鼠GMCs培养上清中羟自由基(hydroxy radical,·OH-)、丙二醛(malonydialdehyde,MDA)与总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,tSOD)含量,利用单细胞凝胶电泳技术检测大鼠GMCs DNA损伤修复.结果:(1)6 h时,100 μmoL/L过氧化氢剂量组即可引起GMCs DNA损伤,150μmoL/L组则可检测到DNA出现明显损伤;(2)微胶囊化儿茶素组GMCs慧星全长在不同剂量时与儿茶素组差异无统计学意义,微胶囊化儿茶素组GMCs慧星尾长与尾部荧光强度在不同剂量时均低于儿茶素组,差异有统计学意义(均P＜0.05,0.01);(3)10.0 mg/L时,儿茶素组与微胶囊化儿茶素两组之间相比,两组·OH-,MDA与tSOD含量差异无统计学意义;15.0 mg/L与20.0 mg/L剂量时,微胶囊化儿茶素组·OH-和MDA含量较儿茶素组降低,tSOD含量较儿茶素组增高,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论:微胶囊化儿茶素可能是通过提高其抗氧化能力而提高其对DNA损伤保护及损伤修复能力.     

过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响

目的：探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法：构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白免疫印迹法（western blotting）检测过表达效率,细胞增殖实验（CCK-8）检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达LRRFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测与上皮间质转化（EMT）相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达;免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联（CoIP-MS）法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白。结果：过表达LRRFIP1促进了Huh7细胞的增殖（P<0.001）和克隆形成能力（P<0.001）,抑制了细胞凋亡（P<0.01）;过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少,S期增加（P<0.001,P&l...     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法 采用线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型,检测缺血2 h再灌注24 h后脑梗死体积、脑组织含水量、神经细胞凋亡及相关基因Bcl-2与Bax的表达,脑组织SOD、MDA和GSH-Px水平,以及对缺血再灌注后神经功能进行评分等评价EGCG的作用.实验分假手术组、脑缺血/再灌注组、EGCG(高、低剂量)治疗组、尼莫地平对照组.结果 模型组大鼠的神经功能缺陷症状、脑梗塞体积和脑组织水肿表现明显;脑组织SOD、GSH-px活性显著降低,MDA含量显著增高;神经细胞凋亡、Bcl-2与Bax表达明显增加,但Bcl-2/Bax显著降低(与假手术组比较,P<0.01).而上述这些指标在EGCG和尼莫地平组均得到明显改善(与模型组比较,P<0.05或P<0.01).结论 EGCG通过提高清除自由基能力以及上调Bcl-2表达和下调Bax的表达抑制神经细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用.