龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原的表达的影响,比较各药物在方中的作用。方法:取3月龄豚鼠关节软骨,建立软骨细胞体外培养体系,使用免疫组化染色观察比较Ⅱ型胶原的表达。结果:龟鹿二仙胶及其各拆方组都能促进豚鼠软骨细胞的合成,其中全方组效果最佳,龟鹿参组与龟鹿杞组促Ⅱ型胶原合成能力优于龟鹿组,龟鹿杞组较佳。结论:方中君药鹿角龟甲能够有效的促进豚鼠软骨细胞合成Ⅱ型胶原,臣药人参枸杞能够促进君药发挥药效,具有明显的协同辅助作用,其中枸杞效果更佳。     

龟鹿二仙胶汤配合针灸治疗膝关节骨性关节炎33例

膝关节骨性关节炎是老年人常见的慢性关节病,笔者近年来采用中药内服配合针灸治疗膝关节骨性关节炎,疗效满意.现介绍如下: 1 临床资料 病例选择西医诊断标准:参照美国风湿病学会关于膝关节骨性关节炎的诊断标准[1]:①1个月里大多数时间膝痛;②X线片显示关节边缘骨赘形成;     

龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白多糖合成的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对豚鼠软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖合成的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机制。方法:体外培养豚鼠膝关节软骨细胞,免疫组化染色检测龟鹿二仙胶及其拆方对软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响,Alcian Blue染色检测软骨细胞蛋白多糖合成。结果:龟鹿二仙胶促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达极显著(P<0.01),龟板和鹿角均能显著提高Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达(P<0.05),但药效显著低于龟鹿二仙胶(P<0.05);人参和枸杞对Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达均无明显促进作用。结论:龟鹿二仙胶可显著促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达,这是其保护软骨细胞,延缓软骨退变的作用机制之一。龟鹿二仙胶发挥此作用的主要药物是龟板和鹿角;人参和枸杞本身并不能促进Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达,而与龟板和鹿角配合,可明显增强龟板和鹿角的促进软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达的作用。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠膝骨关节炎的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠膝关节软骨退变的影响,探讨龟鹿二仙胶的配伍机制。方法:切除SD大鼠双侧卵巢、双膝内侧副韧带和前交叉韧带、实验跑台跑步4周,制作退化膝骨关节炎模型。中药灌胃2、4、8周后放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、免疫组化检测Bax、Bcl-2、白介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、Ⅱ型胶原(Collagen-Ⅱ)的表达。结果:8周时龟鹿参组可显著提高大鼠血清E2水平,龟鹿杞组可显著抑制Bax、促进Bcl-2表达,龟鹿参组可显著地抑制软骨细胞产生IL-1β和MMP-13、提高Collagen-Ⅱ的表达,其效果均与龟鹿二仙胶作用相同。结论:龟鹿配伍人参可提高血清E2水平、抑制关节软骨产生炎症、促进软骨细胞Collagen-Ⅱ合成;龟鹿配伍枸杞可以抑制软骨细胞凋亡。     

当归补血汤合龟鹿二仙胶治疗贫血1例

张洪义教授为原天津中医学院中医系主任,天津市名中医,从医近五十载,学验俱丰.临床治疗多种疑难杂症,每获良效.兹将其治疗慢性贫血验案一则介绍如下,以资临床参考. 顾某,女,39岁,2012年2月14日初诊.患者自诉10 a前患产后贫血,迁延至今未愈.平素纳呆食少,神疲乏力,失眠多梦,月经量少色淡.刻诊形体消瘦,面色萎黄,口唇爪甲色淡无华.舌淡,脉细弱.辨证:气血两虚,肾精不足.治宜补气养血,益肾填精.处方:全当归20 g,炙黄芪30 g,太子参30 g,枸杞子30 g,鹿角胶(烊化)10 g,龟板胶(烊化)10 g,制首乌30 g,酥鳖甲(先煎)30 g,合欢皮30 g,夜交藤30 g,酸枣仁(打碎)30 g,灵芝30 g,青龙齿(先煎)30 g,生石决(先煎)30 g,丹参30 g,檀香12 g,砂仁12 g,锦纹(后下)6 g,草决明(打碎)12 g(日1剂,水煎服).嘱其调畅情志,合理饮食,适当锻炼.     

龟鹿二仙胶临床运用举隅

龟鹿二仙胶由鹿角、龟板、枸杞子、人参组成。其性味平和,入五脏,而以肝、肾为主,又善通奇经之任、督,生精、益气、养血、阴阳并补,且补阳而无燥热之害,补阴而无凝滞之弊。临床可将此方作为治疗各科虚证的基本方,兹介绍验案数则。1 阳痿案 年某,男,43岁。夫妻久别重逢,纵行房事,1个月后渐见性欲低下,欲行房事而阴茎不举或举而不坚,滑精,其精液量少而清稀,伴眩晕耳鸣、健忘、腰膝酸痛、神疲乏力。面色黧黑而少光泽,耳轮瘦薄,舌质淡,舌苔薄白.脉弱。证属精气两虚,病位主要在肾。治宜补益精气,方用龟鹿二仙胶加味:龟板30g(击碎,先煎)、鹿茸2g(研细末冲服)、红参15g(另炖)、枸杞子30g、熟地15g、山茱萸12g、锁阳10g、黄芪30g。每日1剂,水煎     

虾青素对兔骨性关节炎软骨细胞增殖与凋亡影响的研究

目的通过观察虾青素对新西兰兔骨性关节炎模型的软骨细胞增殖与凋亡基因表达的影响,初步探索其干预软骨细胞代谢的作用机制。方法取5月龄新西兰兔骨性关节炎模型的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、TUNEL法、免疫组化法对细胞增殖、凋亡及细胞周期调控基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53 mRNA的表达进行检测。结果不同剂量组虾青素可显著促进软骨细胞体外增殖,并可通过减弱软骨细胞Bax、Caspase-3、p53 mRNA的表达,增强Bcl-2 mRNA的表达来减缓软骨细胞凋亡进程。结论虾青素可有效调控兔骨性关节炎软骨细胞代谢,增强细胞活性,延缓凋亡,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。     

鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞的影响

目的:观察鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞的影响。方法:参考Hulth法建立骨性关节炎模型,给予不同浓度的鹿茸多肽进行干预,分别进行MTT法检测、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得鹿茸多肽对软骨细胞作用。结果:鹿茸多肽对骨性关节炎软骨细胞有一定的增殖作用,骨性关节炎软骨细胞直接分泌到胞外的基质金属蛋白酶含量变化不明显,骨性关节炎软骨细胞核酸中金属蛋白酶有一定表达。结论:骨性关节炎软骨细胞在正常分化及增殖发生改变过程中,其软骨基质的降解是金属蛋白酶与其它因子协同作用的结果;鹿茸多肽有促进骨性关节炎软骨细胞增殖作用,并可抑制骨性关节炎软骨细胞中金属蛋白酶的过度表达,可能对治疗骨性关节炎有较好的作用。     

益气化瘀补肾通络中药联合抑制剂对椎间盘软骨细胞增殖率的影响

目的:观察益气、化瘀、补肾、通络中药以及联合使用抑制剂Genistein、Calyculin A、Na3Vo4干预后,对自然退变软骨细胞增殖率变化的影响。方法:建立大鼠颈椎间盘软骨细胞自然退变模型,使用益气、化瘀、补肾、通络中药血清,并进一步分别加入上述抑制剂干预后,MTT测定软骨细胞增殖率变化。结果:益气化瘀方含药血清直接作用48h后,可明显促进退变软骨细胞增殖,较模型组有显著差异(P<0.01);其它组对退变软骨细胞增殖率无明显影响;化瘀方则可抑制细胞增殖,较模型组有显著差异(P<0.05)。抑制剂作用7d后,继以含药血清作用48h,益气化瘀方血清均可明显促进退变软骨细胞增殖;益气方血清在Genistein加入组可促进退变软骨细胞增殖;化瘀方、补肾方、通络方在抑制剂加入组对退变软骨细胞增殖无明显影响(P>0.05)。析因分析结果表明,益气方与化瘀方有交互作用,在软骨细胞增殖率的调节方面,存在协同作用。结论:益气化瘀方可以促进体外自然退变椎间盘软骨终板软骨细胞增殖,有效拮抗抑制剂对软骨细胞的抑制作用;益气与化瘀二法的有机结合,才能更好发挥促进软骨细胞增殖的效应。单用补肾、通络中药难发挥促软骨细胞增殖及有效拮抗抑制剂的作用。     

Effects of Salvia Miltiorrhiza Injection on Retinoic Acid Induced Apoptosis in Chondrocyte

Apoptosis is characterized by physiologicprocess of active self- destruction form of cellthrough genic control.Osteoarthritis representsone of the most prevalent diseases in older indi-viduals.Among age- related changes in cartilageare a reduction in tissue cellularity and abnormalmatrix calcification or erystal deposition.Thepresent studies were suggested that apoptoticbodies could contribute to the abnormal calaifica-tion of articular cartilage in aging and os-teoarthritis[1] . It was also r…     

丹参注射液对维甲酸诱导的软骨细胞凋亡的影响

目的:观察中药复方丹参注射液对全反式维甲酸在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的调节作用.方法:取体外培养的兔软骨细胞,分别加入不同浓度维甲酸,维甲酸+丹参注射液,维甲酸+DEVD-FMK混合培养.并于培养后1、2、3、4天用DNA电泳,荧光显微镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡变化.结果:在体外培养兔软骨细胞加维甲酸10-4M 24小时,流式细胞仪检测发现,凋亡率26.5±3.87%,而对照组为5±2.16% (P<0.01).荧光染色可见典型凋亡细胞形态改变,DNA电泳可见典型梯状条带,同时维甲酸诱导的软骨细胞凋亡具有剂量和时间依赖性,随着维甲酸浓度升高,时间延长,诱导凋亡作用明显增加.而维甲酸+丹参注射液或+DEVD-FMK混合培养的软骨细胞,其凋亡率明显下降.结论:维甲酸在体外能诱导兔软骨细胞凋亡,丹参注射液能降低维甲酸诱导的软骨细胞凋亡活性,提示其可能是治疗骨关节炎的机制之一.     

参麦注射液对IL-1β体外诱导兔软骨细胞增殖的影响

目的：观察参麦注射液对白细胞介素-1β（IL-1β）体外诱导兔软骨细胞增殖的影响。方法：采用IL-1β体外诱导兔软骨细胞的方法,建立变性软骨细胞模型,将其分为空白组、模型组、1％参麦组、5％参麦组和10％参麦组。空白组采用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养;模型组采用含10ng／mLIL-1β的DMEM培养液培养;1％、5％、10％参麦组采用含10ng／mg/mLIL-1βDMEM培养液培养24h,再分别采用含1％、5％、10％参麦注射液的DMEM培养液培养。采用MTT比色法检测软骨细胞的增殖情况。结果：模型组吸光度值（OD值）低于空白组,2组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）,说明IL-1β可抑制软骨细胞的增殖,建立变性软骨细胞模型。模型组及不同浓度参麦组间的OD值比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）,不同浓度的参麦注射液均可明显促进变性软骨细胞的增殖,其增殖作用与参麦注射液浓度呈正相关。结论：参麦注射液能够明显促进IL-1β体外诱导兔软骨细胞的增殖,这可能是参麦注射液防治关节退变的机理之一。     

补肾活血方对大鼠软骨细胞凋亡增殖及MMP-13水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠体外培养软骨细胞凋亡增殖及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响。方法:采用SD大鼠切取关节软骨进行软骨细胞的体外培养,应用甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色进行鉴定。同步细胞后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。采用流式细胞仪进行细胞凋亡与增殖检测,采用放免法进行MMP-13水平检测。结果:成功进行了软骨细胞的培养及鉴定。流式细胞仪检测显示补肾活血方可减低软骨细胞的凋亡率,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方可促进细胞周期中G2与S期细胞比例,与空白组比较有非常显著性差异(P0.01)。补肾活血方还可以降低MMP-13水平,与空白组比较有显著性差异(P0.05)。结论:补肾活血方具有减少软骨细胞凋亡的作用,同时可以降低MMP-13水平。     

葛根素对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响

目的:探讨葛根素对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响。方法:采用血清药理学方法制备葛根素含药血清,分为葛根素组、阳性对照组和阴性对照组。从SD大鼠乳鼠颅骨获取成骨细胞,分别用含药血清培养分离得到的成骨细胞。采用CCK-8检测成骨细胞增殖、酶联免疫吸附试验检测骨形态发生蛋白2(BMP-2)的表达;采用微量酶标法检测碱性磷酸酶的活性。结果药物作用24、48和72 h后,葛根素组D值显著高于阴性对照组(P0.05),且显著低于阳性对照组(P0.05)。随着时间的增加,葛根素组和阳性对照组D值在药物作用48 h达到最高,至72 h后有下降趋势。药物作用3 d和7 d后,葛根素组BMP-2表达水平均显著高于阴性对照组(P0.05),且显著低于阳性对照组(P0.05)。药物作用3d和7 d后,葛根素组BMP-2表达水平均显著高于阴性对照组(P0.05),且显著低于阳性对照组(P0.05)。药物作用3 d和7 d后,葛根素组碱性磷酸酶活性均显著高于阴性对照组(P0.05),且显著低于阳性对照组(P0.05)。结论葛根素可能通过诱导BMP-2表达促进增殖,活化碱性磷酸酶活性促进生物矿化。     

陇中损伤散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的:研究不同浓度的陇中损伤散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法:取三月龄wistar大鼠骨髓,分离BMSCs进行原代培养,在第一次换液后分别加入2%,5%,10%的陇中损伤散含药血清,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测量骨髓间充质干细胞增殖情况;偶氮偶合法进行碱性磷酸酶阳性克隆(CFU-FALP)组织化学染色,vonKossa染色法测定钙化结节数目,免疫细胞化学技术检测Ⅰ型胶原表达;于不同时间进行ALP活性及钙盐沉积量的测定。结果:陇中损伤散含药血清对BMSCs的影响呈剂量依赖性,其中以浓度为10%时作用最强。MTT结果显示陇中损伤散含药血清能明显促进BMSCs增殖;损伤散含药血清还能显著促进其成骨性分化。结论::陇中损伤散活性代谢产物能促进BMSCs的增殖和成骨性分化;陇中损伤散对骨髓间充质干细胞的这种作用可能是其促进骨折愈合、防治骨质疏松的细胞学机制之一。