内皮细胞和平滑肌细胞联合种植研究

内皮细胞在人工器官表面的种植是当前组织工程学研究领域的热点课题之一。平滑肌细胞是内皮细胞的周细胞,对内皮细胞的形态结构、生理功能、再生和修复有重要影响。本文综述了进行内皮细胞和平滑肌细胞联合种植的意义、方法及联合种植后内皮细胞功能变化的研究概况,并对研究中有待解决的问题作了进一步的分析和探讨。     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学和生长增殖

目的　探讨平滑肌细胞对内皮细胞形态和增殖的影响 ,为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。　方法　模拟血管壁的内层结构及内皮细胞平滑肌细胞间的相互影响途径 ,建立内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的模型 ,应用形态学、细胞计数对内皮细胞的结构和增殖进行研究。　结果　联合培养的新内皮细胞呈伸长性生长 ,沿细胞长轴排列的微丝增多 ,增殖受抑制。　结论　内皮细胞和平滑肌细胞联合培养的新模型是目前研究这两种细胞间相互影响的最佳方式。联合培养的内皮细胞的形态结构更接近于在体生理状态 ,这一变化可能更有利于其抗应力功能的调节     

用于内皮细胞与平滑肌细胞联合培养的流动腔系统

内皮细胞与平滑肌细胞的联合培养是体外研究这两种细胞生物学特性的重要手段。静态条件下联合培养的内皮细胞的形态及功能特性与在体条件下均有差异,这可能是没有血流切应力对内皮细胞直接作用的结果。为了了解切应力对与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的生物学作用,本文建立了用于多孔ＰＥＴ膜联合培养模型的力学系统,通过本系统可以产生０～４０ｄｙｎ／ｃｍ２的稳定层流切应力,并应用本系统观察了切应力对联合培养的内皮细胞的形态学影响,结果表明,在４０ｄｙｎ／ｃｍ２切应力作用下,与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞沿流体方向发生了重排。这一系统的建立为研究切应力作用下与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态和功能提供了手段。     

与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血因子、粘附分子

目的 探讨平滑肌细胞对内皮细胞功能的影响。为内皮细胞种植的组织工程学提供理论基础。模拟血管壁的内层结构及内皮细胞与平滑肌细胞间的相互影响途径,建立内皮细胞与平滑肌细胞接触生长的联合培养模型,用免疫细胞化学、放射免疫学技术和图像分析等方法研究内皮细胞ｖＷＦ、ＰＧＩ２、ＣＤ２９后的合成,分泌及表达。结果 联合培养的内皮细胞的Ⅷ因子相关抗原（ｖＷＦ）的合成减弱,前列腺环素的分泌增加,整合素β１亚族的表达     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞F-肌动蛋白构筑的影响

目的　探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞抗应力和粘附能力的影响 ,为改进血管内皮细胞种植的组织工程学技术提供生物力学基础。　方法　应用荧光标记和激光共聚焦扫描显微镜技术 ,以静态条件下单独培养的内皮细胞、联合培养的内皮细胞以及切应力作用下单独培养的内皮细胞为对照组 ,研究了切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的细胞骨架F 肌动蛋白构筑的变化。　结果　静态条件下单独培养的内皮细胞的F 肌动蛋白排列松散 ,不规则 ,微丝较细 ;联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白微丝明显增多增粗。切应力作用下 ,与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的F 肌动蛋白发生重排 ,并形成大量沿切应力方向排列的应力纤维 ,且发生重排的时间明显早于单独培养的内皮细胞。　结论　在切应力作用和血管平滑肌细胞的影响下 ,内皮细胞F 肌动蛋白构筑的变化有利于增强内皮细胞的抗应力和粘附能力     

内皮细胞对血管平滑肌细胞整合素β1表达的影响

目的:探讨内皮细胞(endothelial cells,Ecs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)整合素β1(β1-integrin)表达的影响,为研究血管壁细胞功能提供理论依据.方法:应用血管ECsVSMCs联合培养系统.以Western Blot和细胞免疫荧光技术,检测与Ecs联合培养12 h后VSMCs的β1-integrin表达和分布变化.结果:与Ecs的联合培养.能明显增强VSMCs的β1-integrin蛋白表达,同时诱导VSMCs表面β1-integfin的激活.结论:Ecs可能通过调节VSMCs的β1-integrin表达,从而影响VSMCs的功能.     

血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡

一、材料与方法1.细胞培养 :采用改进的Ｊａｆｆｅ氏培养法 ,培养人脐带静脉内皮细胞。采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代。培养液均为含 2 0 %胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液。2 .内皮细胞的脂质过氧化引发实验 :将培养达融合状态的内皮细胞分组 ,分别加入含不同浓度氢过氧化枯烯的培养液孵育后 ,测定脂质过氧化物的代谢终产物丙二醛 (ＭＤＡ)的含量。3.培养液中乳酸脱氢酶 (ＬＤＨ)活性的测定 :ＬＤＨ是细胞内的可溶性酶 ,当细胞膜被破坏时可漏出细胞外 ,可作为细胞损伤的早期检测指标。采取内皮细胞培养液 ,以Ｓｉｇｍａ公司的ＬＤＨ测…     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内 …

目的：观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）于缺氧时对细胞内环核苷酸的影响。结果：ＰＡＥＣ和ＵＰＡＳＭ共培养２４ｈ，ＰＡＥＣ细胞内ｃＡＭＰ含量显著降低（Ｐ〈０．０１），而ＰＡＳＭ细胞内ｃＡＭＰ含量显著增加（Ｐ〈０．０１），二种细胞内ｃＧＭＰ含量显著增加（Ｐ〈０．０１）。缺氧对二种细胞内ｃＧＭＰ含量无显著影响，但能增加ＰＡＳＭ的ｃＧＭＰ含量（Ｐ〈０．０１），降低ＰＡ     

人造血管制作中从单根脐带获取内皮细胞和平滑肌细胞的方法

随着人造血管内皮化研究的深入 ,需要同时进行内皮细胞和平滑肌细胞的培养 ,再分层种植于人造血管内腔 ,模拟正常血管壁结构[1～ 3 ] 。我们利用单根脐带 ,同时获取内皮细胞和平滑肌细胞 ,方便有效 ,经济实用 ,以利于进一步进行相关研究。1　材料和方法1 .1　人脐静脉内皮细胞原代培养[4 ] 　取长 3 0ｃｍ脐带 ,用Ｄ Ｈａｎｋ’ｓ液冲净其内腔 ,注入混合酶 (0 .0 1 %Ｉ型胶原酶 3ｍｌ+0 .2 5 %胰蛋白酶 1 5ｍｌ) ,夹闭后放于3 7℃消化 2 0ｍｉｎ。收集消化液 ,离心 5ｍｉｎ× 2 0 0 0ｒ/ｍｉｎ ,弃上清 ,加培液打匀 ,以细胞数为 1× 1 0 5个…     

缺氧对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞5—羟色胺转载体基因表达 …

目的：探讨无氧（０％Ｏ２＋９５％Ｎ２＋５％ＣＯ２）和低氧（２．５￣３％＋９％Ｎ２＋５％ＣＯ２）对新生小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）５－羟色胺转载体基因表达的影响。方法：应用细胞培养，核到分子杂交技术。结果：无氧组和低氧组（１．５ｈ、３ｈ、６ｈ）ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮＡ表达显著同于常氧组（Ｐ〈０．０５），而无氧和低氧１２ｈ至４８ｈ对ＰＡＥＣ５－羟色胺转载体ｍＲＮ     

高糖、高脂血症大鼠血管内皮细胞及平滑肌细胞的形态和功能改变

复制高糖、是动物模型,利用血管功能测定,组织培养和放射免疫分析等方法观察长期高糖,高脂血症对血管内皮细胞和平骨肌细胞功能的影响及相互作用,结果表明,高糖、高脂对血和内皮细胞均有影响,两者有协同作用;对血管平滑肌细胞两者均可促进其增强,加速了糖尿病血管并发症的发生发展。     

剪切力条件下血管内皮细胞与平滑肌细胞的相互作用

血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)与平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)是血管壁的主要细胞,它们之间的相互作用在维持血管正常的生理功能以及心血管疾病的发生发展过程中至关重要。为真实模拟ECs与SMCs体内条件下的位置关系与生长状态,人们建立了多种共培养系统。介绍当前几种常用的能够加载流动剪切力的共培养系统,并分别比较其优势与不足;简要总结剪切力条件下ECs与SMCs相互作用对ECs与SMCs表型与分布、SMCs生长与迁移、ECs表面相关黏附分子表达的影响。研究表明,一氧化氮(NO)、细胞因子、microRNA等可以作为信号分子介导ECs与SMCs之间的相互作用。     

切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞对内皮细胞PDGF-B mRNA表达的影响

目的：探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞（VSMCs）对内皮细胞（ECs)PDGF-BmRNA表达的影响，为预防血管移植物发生再狭窄提供实验资料。方法：用原位杂交和图像分析等技术，以静态条件下单独培养的ECs和联合培养的ECs为两对照组，观察切应力作用下单独培养的ECs和与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达变化。结果：静态条件下联合培养ECs和PDGF－BmRNA表达水平比单独培养的ECs下降；切应力作用下，联合培养ECs的PDGF－BmRNA的表达在切应力作用1h左右有瞬时上升，6h后 下降至低于联合培养条件下的静态水平，且瞬时上升的时间点比单独培养的ECs提前。结论：切应力作用下，与VSMCs联合培养ECs的PDGF－BmRNA表达水平下降，这可能有利于抑制VSMCs的增生。     

内皮细胞种植的组织工程

组织工程（ｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）又称细胞工程（ｃｅｌｕｌａｒｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ），其实质是应用活的功能细胞改进人工器官的功能。本文介绍了在心血管移植物表面种植内皮细胞的研究概况，从内皮细胞的获取，移植物表面的预处理，内皮细胞的生物力学及内皮细胞的基因修饰等几个方面阐述了这一研究进展，并提出，进一步探讨在体外给培养的单层内皮细胞一个应力环境和／或与平滑肌联合培养可能有利于形成耐血流冲击的单层内皮细胞     

脱细胞血管组织基质的制备和平滑肌细胞的种植

目的组织工程血管的研制成功将为先天性心脏病外科提供一种新的理想的修补材料,本文研究血管脱细胞组织基质的制备,平滑肌细胞的体外培养和种植方法.方法取成年羊胸主动脉,用胰酶消化去除细胞成分,保存弹性蛋白和胶原蛋白,获得血管脱细胞组织基质,经点状注射法,种植体外培养的小牛平滑肌细胞.结果羊主动脉经脱细胞处理,得到的组织基质最大负载下降20%,最大伸长无显著改变;脱细胞组织基质的胶原蛋白含量与新鲜主动脉相似;基质的纤维结构完整,为网状或多孔状;种植的小牛平滑肌细胞生长良好.结论采用多步骤方法获得的血管脱细胞组织基质可用作为制备组织工程血管的支架,适宜于血管平滑肌细胞的生长.     

生物瓣材料人工种植内皮细胞的研究

牲瓣材料表面人工形成单层内皮细胞可望成为生物瓣防钙化并延长其使命寿命的最有前途的方法之一，解除戊二醛的毒性作用是种植细胞在生物瓣表面存活的前提。用Ｌ－谷氨酸处理戊二醛固定保存６个月以上的牛心包材料，成功地接种了培养的血管内皮细胞，使生物瓣内皮细胞种值的进一步研究成为可能。     

人血管平滑肌细胞种植构建工程生物血管的实验研究

了解猪血管去细胞后平滑肌细胞种植情况,为猪血管用于血管组织工程提供资料。取猪颈动脉,生物酶预处理猪血管,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中,用原代培养的人平滑肌细胞种植在去细胞血管基质材料内,HE染色及银染检测平滑肌细胞种植效果。结果表明生物酶预处理血管后,HE染色及银染检测可见血管腔平滑肌细胞形态正常,沿血管长轴分布,提示经生物酶预处理的猪血管人平滑肌细胞能成功种植,可望构建实用的组织工程血管。     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞合成胶原的影响

本实验采用胶原酶消化法分离、培养兔主动脉内皮细胞(EC)及平滑肌细胞(SMC),以[~3H]-脯氨酸掺入SMC合成的[~3H]-羟脯氨酸中的量作为测定胶原的指标,观察了兔主动脉内皮细胞条件培养液(EC-CM)对动脉SMC合成胶原的影响,结果发现融合的EC-CM能促进SMC的胶原合成,但SMC数无明显变化;1:2稀释的EC-CM促进SMC合成胶原的作用最大。可见EC通过促进SMC的胶原合成而参与了动脉粥样硬化过程。     

切应力对与内皮细胞联合培养的血管平滑肌细胞粘附的影响及其机制

目的　细胞粘附是细胞迁移的关键性起始步骤。研究切应力和内皮细胞(endothelial cells, ECs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)粘附的影响及其可能的信号通路，为探讨流体切应力诱导的血管壁细胞迁移行为的机制提供一些实验依据。方法　应用VSMCs和ECs联合培养流动腔系统，对ECs面施加1.5 Pa切应力，12 h；以静止状态下，单独培养的VSMCs以及与ECs联合培养的VSMCs 为对照，应用细胞粘附实验和Western Blot技术，观察切应力对与EC联合培养的VSMCs粘附的影响及蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化水平表达变化。结果　静态联合培养12 h，VSMCs的粘附能力明显增强，同时磷酸化Akt的表达平行增高。切应力作用下，明显抑制了联合培养的VSMCs粘附，同时磷酸化Akt的表达平行降低。结论　生理大小切应力明显抑制了ECs诱导的VSMCs粘附，其中Akt信号通路起了关键作用。