苦参碱联合顺铂对SH-SY5Y细胞药物敏感性及TrkB表达的影响

目的探讨不同浓度苦参碱对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞存活及凋亡的影响,及苦参碱降低顺铂化疗耐药性的作用及可能机制。方法分别以全反式维甲酸(ATRA)、脑源性神经生长因子(BDNF)、顺铂、苦参碱处理SH-SY5Y细胞,实验分对照组、ATRA诱导的顺铂干预组、顺铂干预组、苦参碱干预组、苦参碱联合顺铂干预组。应用四甲基偶氮蓝比色法检测苦参碱与顺铂对SH-SY5Y细胞存活率的影响,流式细胞仪检测苦参碱与顺铂对SH-SY5Y细胞凋亡率的影响,Western-blot方法检测SH-SY5Y细胞的p-TrkB表达。结果除ATRA诱导的顺铂干预组外,其余各组SH-SY5Y细胞的存活率及凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);顺铂干预组与ATRA诱导的顺铂干预组比较,SH-SY5Y细胞的存活率及凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);相同浓度的苦参碱干预组与苦参碱联合顺铂干预组比较,SH-SY5Y细胞的存活率及凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱联合顺铂组与顺铂干预组比较,SH-SY5Y细胞的存活率及凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。苦参碱0.5 mg/ml组与顺铂干预组比较,SH-SY5Y细胞的存活率及凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。各组SH-SY5Y细胞间,p-TrkB的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论苦参碱可以抑制SH-SY5Y细胞的增殖并诱导凋亡,从而提高顺铂化疗的敏感性,该作用与TrkB/BDNF信号通路(间)无相关性。     

苦参碱对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞趋化因子受体4表达的影响

目的探讨苦参碱对体外培养人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法体外培养人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞分对照组,0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、1.5 mg/ml苦参碱干预组,应用四甲基偶氮蓝比色法、流式细胞术检测苦参碱对SK-NEP-1细胞抑制率、凋亡率的影响,逆转录聚合酶链反应检测SK-NEP-1细胞的趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达。结果不同浓度苦参碱干预组及对照组SK-NEP-1细胞的抑制率、凋亡率以及CXCR4 mRNA表达差异均有统计学意义(P0.01);随苦参碱浓度增加,SK-NEP-1细胞的抑制率和凋亡率呈上升趋势,而CXCR4 mRNA表达呈下降趋势,差异均有统计学意义(P0.01)。结论苦参碱可以抑制SK-NEP-1细胞增殖并诱导凋亡,该作用可能与下调CXCR4的表达有关。     

小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤耐药的影响

目的探讨小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤(NB)化疗耐药的影响。方法选择人NB细胞株SH SY5Y,用RT PCR方法检测小剂量全反式维甲酸(ATRA)作用下TrkB mRNA水平;通过四甲基偶氮蓝比色(MTT)法及流式细胞仪(FCM)检测ATRA诱导前后顺铂对人NB细胞株SH SY5Y的生长及凋亡的影响。结果SH SY5Y中未检测到TrkB mRNA表达,用1、10、100nM/LATRA诱导5d后可检测到TrkB mRNA表达,且随ATRA浓度增加TrkB mRNA水平逐渐升高。100nM/LATRA诱导7d,TrkB mRNA的相对比值与诱导5d比差异无显著性意义(P>0.05);MTT分析显示:BDNF+顺铂组(无TrkB表达)、ATRA+顺铂组(无BDNF刺激)细胞存活率同单用顺铂组比较无显著性差异(P>0.05);10nM/LATRA+BDNF+顺铂组NB细胞存活率明显高于单用顺铂组(P<0.01);FCM分析显示:ATRA+BDNF+顺铂组NB细胞凋亡率明显低于单用顺铂组(P<0.01)。结论存在BDNF的条件下,小剂量ATRA能阻断顺铂对SH SY5Y的细胞毒性作用,从而使SY5Y细胞对化疗耐药。     

外源性分泌性卷曲相关蛋白干预对肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞增殖的影响

目的 检测肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞中Wnt通路分泌性卷曲相关蛋白(sFRP-1)基因及相关基因的表达;探讨不同浓度sFRP-1蛋白对细胞增殖的影响及可能的机制.方法 RT-PCR方法检测肾母细胞瘤细胞株SK-NEP-1细胞及肾胚胎细胞293细胞中Wnt通路相关分子sFRP-1、WNT4及β-catenin基因的表达;SK-NEP-1细胞中加入不同浓度的sFRP-1蛋白干预,观察细胞增殖变化,实验分为4组,无干预(对照组);低剂量组:sFRP-1(500 ng/ml);高剂量组:sFRP.1(10μg/ml);高剂量抗体组:sFRP-1抗体(10 μg/ml),分别在干预后0、24、48、72 h用CCK-8试剂检测比较各组细胞的光吸收度值(AV)以评估细胞活力.结果 SK-NEP-1细胞与胚胎293细胞均有sFRP1基因表达,而WNT4基因表达不明显.sFRP-1蛋白干预实验显示,低剂量组及高剂量抗体组干预前后与对照组比较,AV值无明显变化,而高剂量组的AV值在干预24、48 h均较其他组明显降低,分别为对照组的0.82倍和0.79倍,表明细胞增殖受抑制.结论 肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞中有sFRP1基因表达;外源性加入低浓度的sFRP-1蛋白并不能对Wnt/β-catenin通路产生影响,只有在加入高浓度的sFRP-1蛋白时才能对SK-NEP-1细胞增殖产生抑制作用.     

PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的表达及意义

目的研究促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁及胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达规律,探讨促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁发病机制中的作用。方法分别取18例胆道闭锁（Biliary Atresia,BA）和11例胆总管囊肿（Choledochal cyst,CC）患儿的胆管组织,应用蛋白质印迹（westong blot）与荧光实时定量（quantitative real—time PCR,qRT-PCR）的方法分别检测PDCD5在胆道闭锁与胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达,并进行定位和定量分析与比较。结果PDCD5在CC组胆管组织中的CT值为（6．7292±1．169）,高于BA组的相应CT值（4．0125±1．0735）,P〈0．05。应用2-△△CT计算出CC与BA中PDCD5基因表达量的比值为1：6．57。PDCD5在BA组胆管组织中mRNA转录水平明显高于对照组;Western blot结果显示,PDCD5在BA组胆管组织中蛋白表达量明显高于CC组。结论PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的蛋白和基因表达水平均增强。PDCD5可能参与胆道闭锁胆管上皮细胞凋亡,从而参与胆道闭锁的炎性反应,在胆道闭锁的发病机制中发挥重要作用。     

缺氧缺血I生脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡及脑组织中Rho GDP解离抑制因子和Bcl-2表达的变化

目的研究RhoGDP解离抑制因子（Rho GDP dissociation inhibitor 2,RhoGDI2）mRNA及Bcl-2mRNA的表达在缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）中的作用和机制。方法30只新生7日龄SD大鼠按照完全随机化方法分为假手术组及HIBD6h和48h组,每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用Real—timeRT—PCR方法测定脑组织中RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平。结果（1）新生大鼠HIBD后48h结扎侧大脑半球脑水肿明显。（2）HIBD6h出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为（1．40±0．12）％。HIBD48h凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到（15．86±0．98）％。缺氧缺血后与假手术组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）假手术组大鼠RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平较高（4．12±0．74、2．55±0．65）,在HIBD6h后二者表达开始下降（3．19±0．77、1．96±0．36）,48h降低更加明显（1．04±0．18、1．06±0．17）,与假手术组比较,HIBD各时间点RhoGDI2和Bcl-2mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义（P〈0．01）。（4）缺氧缺血后各时间点RhoGDI2mRNA的表达和Bcl-2mRNA的表达呈正相关（r=0．831,P〈0．05）。结论脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,RhoGDI2和Bcl-2mRNA表达水平降低,提示RhoGDI2表达失衡可能通过Bcl-2参与新生大鼠HIBD中凋亡的发生。     

酪氨酸激酶受体B及其配体脑源性神经营养因子水平对神经母细胞瘤耐药的影响

目的 研究酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor,TrkB）及其配体脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）的表达水平对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞化疗敏感性的影响。方法 Western-blot技术检测不同纳摩尔浓度全反式维甲酸（all trans-retinoic acid,ATRA）诱导后TrkB蛋白水平变化;四甲基偶氮蓝比色（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞仪（flow cytometer,FCM）检测细胞凋亡率;透射电镜检测凋亡细胞的形态。结果 （1）不同浓度ATRA（1、10、100nmol／L）处理神经母细胞瘤细胞SY5Y5d,TrkB蛋白水平随ATRA浓度增加而增加;（2）BDNF10ng／ml＋ATRA 10nmol／L＋顺铂（Cisplatin,CP）5μg／ml作用组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较均无显著差异,BDNF（50、100ng／m1）加相同浓度ATRA及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,BDNF 100ng／ml组存活率高于BDNF 50ng／ml组,凋亡率低于BDNF 50ng／ml组。ATRA 1nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞存活率、凋亡率同单用CP组比较无显著差异,ATRA 10、100 nmol／L加相同浓度BDNF及CP组细胞存活率均明显高于单用CP组,凋亡率均明显低于单用CP组,ATRA 100 1nmol／L组细胞存活率高于ATRA 10nmol／L组,凋亡率低于ATRA 10nmol／L组。（3）透射电镜技术观察到CP作用组可见到较多细胞呈凋亡改变,而ATRA 10nmol／L＋BDNF 50ng／ml＋CP 5μg／ml组细胞形态多数正常。结论 SY5Y对化疗药顺铂的敏感性受TrkB及BDNF水平的影响,二者水平越高越容易产生化疗耐药。     

TRAIL蛋白联合顺铂抑制裸鼠横纹肌肉瘤生长的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白及联合顺铂对RD人横纹肌肉瘤裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的作用机制.方法 将RD人横纹肌肉瘤细胞制成细胞悬液后接种于裸鼠皮下,成瘤后将裸鼠随机分4组:生理盐水组、TRAIL组、顺铂组及两药联合组.检测裸鼠的重量和体积;测定裸鼠肝功能、尿素氮及肌酐;另取肝肾组织进行切片,HE染色观察;用FCM方法检测肿瘤组织Fas表达;用RT-PCR检测DR4和DR5mRNA的表达.结果 各组裸鼠实验前后的体重变化无明显差异;DDP组和TRAIL+DDP组裸鼠的血清丙氨酸转氨酶高于生理盐水组,DDP组与TRAIL+DDP组裸鼠尿素氮和肌酐值比较,无明显差异;TRAIL组、DDP组和TRAIL+DDP组移植瘤的重量均明显降低;各组肝肾组织切片观察未见明显改变;TRAIL+DDP组Fas表达水平高于DDP组和TRAIL组;DDP组和TRAIL+DDP组裸鼠移植瘤细胞的DR5mRNA、DR4mRNA表达水平明显升高,而TRAIL组没有明显改变.结论 TRAIL和顺铂对裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,联用有协同作用.     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体联合顺铂对人横纹肌肉瘤细胞株凋亡的影响

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）蛋白及TRAIL基因和顺铂联合应用对人横纹肌肉瘤细胞生长抑制和诱导凋亡作用，并分析细胞线粒体膜电位和细胞内cFLIPmRNA表达的改变对凋亡的的影响。方法将TRAIL蛋白、TRAIL基因和顺铂作用于培养的人横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡和线粒体跨膜电位的改变、RT-PCR检测cFLIPmRNA表达，观察和分析TRAIL蛋白及TRAIL基因单独对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂联合作用的效果和机制。结果TRAIL基因和100μg／L的TRAIL蛋白对横纹肌肉瘤细胞的生长抑制率分别为52．5％和43．5％，凋亡诱导率为12．95％和10．26％，联合应用顺铂，生长抑制率和凋亡诱导率均显著高于单独应用，FCM分析显示联合应用降低了线粒体跨膜电位，RT—PCR显示cFLIPmRNA表达下降，与联合应用细胞凋亡率增加相一致。结论TRAIL蛋白和TRAIL基因能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长，联合应用顺铂可显著提高疗效。     

胰岛素样生长因子-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响

目的：胰岛素样生长因子-1(IGF-1）具有促进细胞分化、抑制细胞凋亡等多种生物学活性。该研究旨在探讨IGF-1对高氧诱导的A549细胞凋亡的影响及其抗凋亡机制。方法：将传代培养的A549细胞暴露于高氧环境,并以不同浓度IGF-1（1、10、100 ng/mL）干预48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡变化,同时用流式细胞仪检测凋亡调控相关蛋白（Bax、Bcl-2）表达水平的变化。结果：高氧组细胞存活率为（51±3）%,IGF-1干预组细胞存活率随着IGF-1药物浓度的递增逐渐升高,中、高剂量IGF-1干预组细胞存活率分别为（64±3）%和（88±4）%,与高氧组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。高氧组A549细胞凋亡率为(38.3±5.4)%,较空气组（2.4±0.9）%明显增多;高氧组Bcl-2的蛋白表达水平为（72±5）%,较空气组（91±4）%明显下降;高氧组Bax的表达水平为（54±6）%,较空气组（3±2）%明显升高,差异均有统计学意义（P<0.05)。与高氧组比较,IGF-1干预组细胞凋亡率随着药物浓度的增加逐渐下降,分别为（16.1±4.7）%、（9.2±2.8）%和（6.9±2.5）%,差异有统计学意义（P<0.05)。与高氧组比较,IGF-1干预组细胞Bcl-2的表达逐渐增高,分别为（79±4）%、（94±4）%和（100±5）%,而Bax的表达逐渐下降,分别为（26±4）%、（5±2）%和（4±2）%,差异均有统计学意义（P<0.05)。结论：高氧明显抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡;IGF-1具有促进A549细胞增殖,通过调节凋亡调控蛋白Bcl 2和Bax表达,抑制高氧诱导的A549细胞凋亡的作用。     

苦参碱对人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨苦参碱（matrine, Mat）对体外人横纹肌肉瘤RD细胞增殖和凋亡的影响,以及Mat诱导RD细胞凋亡的相关机制。方法：采用MTT比色法检测终浓度为0.5、1.0、1.5和2.0 mg/mL Mat对RD细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测上述4种不同浓度Mat对RD细胞的凋亡作用;RT-PCR法检测终浓度为0.5、1.0和1.5 mg/mL Mat对RD细胞Cyclin D1及Survivin mRNA表达的影响。结果：各浓度实验组RD细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于未经Mat处理的对照组（均P<0.01）,且随着药物浓度增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,呈剂量依赖性。RT-PCR检测Cyclin D1 及Survivin mRNA在各组RD细胞中均有表达,两者的表达水平在各浓度处理组中与对照组相比均有明显下降（P＜0.01）。其中Cyclin D1在各浓度组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,而Survivin仅在0.5 mg/mL 和1.5 mg/mL组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Mat能明显抑制RD细胞的增殖,并诱导其凋亡;其抗肿瘤机制可能与下调Survivin和Cyclin D1 mRNA的表达有关。     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用及机制

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB) SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞无Ma)及4个浓度组（Ma的作用浓度）分别为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和3.0mg/ml,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测凋亡率;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达。最后采用SPSS 16.(0统计软件进行单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 MTT比色法检测对照组及各浓度组增殖抑制率分别为(7.25±1.55)％、(12.56±1.94)％、(17.22±0.90)％、(22.39±0.78)％和(25.35±1.38)％;流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(5.30±0.60)％、(10.04±1.18)％、(14.34±1.79)％、(21.36±0.96)％和(24.80±1.53)％;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达,对照组及各浓度组的灰度值分别为：0.502±0.043、0.584±0.032、0.644±0.052、0.836±0.056和0.948±0.030。以上检测各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 苦参碱在体外环境下作用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、诱导调亡并促进TrkA mRNA的表达,这为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

缺氧诱导因子-1α及下游因子在缺氧性肺动脉高压新生大鼠肺内的表达研究

目的 通过了解缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、内皮素-1（ET-1）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA及蛋白质在缺氧性肺动脉高压（HPH）新生大鼠肺组织中的表达以及和肺动脉压力的关系,探讨三种因子在HPH发病机制中的作用.方法 建立HPH新生大鼠模型;分别在缺氧3、5、7、10、14、21天检测平均肺动脉压力（mPAP）;通过RT-PCR、免疫组织化学和Western blot方法分别对肺组织中上述三种因子的mRNA、蛋白质表达强度及蛋白质表达量进行分析;进行三因子和肺动脉压力的相关性分析.结果 缺氧3、5、7、10天HIF-1 αmRNA及蛋白质表达强度均明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧5、7天其蛋白质表达量明显高于对照组（P＜0.05）.缺氧3天ET-1mRNA表达明显高于对照组（P＜0.05）;缺氧3、5、7天ET-1蛋白质表达强度及蛋白质表达量均高于对照组（P＜0.05）,缺氧10天其蛋白质表达量仍高于对照组（P＜0.05）.缺氧3、5、7天iNOSmRNA及蛋白质表达均高于对照组（P＜0.05）.缺氧组在缺氧21天内HIF-1α表达总体与mPAP变化呈正相关（P ＜0.001）;缺氧7天内ET-1、iNOS表达总体与mPAP变化呈正相关（P＜0.05）.结论 HIF-1α、ET-1和iNOS在HPH新生大鼠肺组织中表达增加,与肺动脉压力呈正相关,三种因子在该病发病机制中可能具有重要作用.     

缺氧诱导因子-1α在小儿肾母细胞瘤中的表达E

目的研究缺氧诱导因子-1α（hypoxia—induciblefactor-1α,HIF一1et）在小儿肾母细胞瘤（wilmstumor,wT）中的表达及其与临床病理学参数、微血管密度（microvesseldensity,MVD）和预后的关系。方法选取本院2008年1月至2012年1月经手术切除的WT肿瘤标本45例,分别根据年龄、性别、病理分型、临床分期、NWTS-5高低危因素进行分组,采用免疫组织化学方法测定WT组织和瘤旁组织中HIF-1α和CD34的表达,通过CD34标记血管内皮细胞并计算MVD,结合临床资料和随访结果对实验数据进行统计学分析。结果wT组H1F-1α的阳性率高于瘤旁组（95．6％傩40％,P〈0．05）,HIF-1α在WT中的表达与与临床分期相关,P〈0．05;WT组MVD高于瘤旁组（58．22±10．009绑（49．43±8．114）,P〈0．05,HIF-1α的表达与MVD的相关系数为r=0．402,P〈0．05;HIF-1α表达阳性程度高危组高于低危组,P〈0．05,HIF．1et低表达组术后累计生存率显著高于高表达组,P〈0．05。结论HIF-1α的高表达与WT的生长有关,可促进肿瘤新生血管的生成,并提示小儿WT的预后不良。     

苦参碱和川芎嗪抑制白血病细胞侵袭转移作用的实验研究

目的探讨苦参碱及川芎嗪对低氧(3%O2)培养条件下人B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞、人慢性髓系白血病细胞株K562细胞侵袭转移的抑制作用及机制。方法体外常规培养细胞,低氧环境下继续培养24 h后,分别加入终浓度为0、0.15、0.2、0.25 g/L苦参碱或0、0.1、0.15、0.2 g/L川芎嗪处理,以常氧培养不加药物的细胞为对照组,分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力,并以RT-PCR方法检测HIF-1α、VEGF mRNA的表达。结果低氧环境下Raji细胞和K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力,以及HIF-1α、VEGF mRNA的表达均较常氧对照组显著增强(P<0.01)。0.15、0.2、0.25 g/L苦参碱均有效抑制低氧环境下Raji细胞的黏附、迁移和侵袭能力,并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05)。0.2、0.25 g/L苦参碱均有效抑制低氧环境下K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05)。0.1、0.15、0.2 g/L川芎嗪均有效抑制Raji细胞、K562细胞的黏附、迁移和侵袭能力,并下调HIF-1α、VEGF mRNA的表达(P<0.05),均呈剂量依赖性。结论苦参碱和川芎嗪能有效抑制低氧环境下Raji细胞和K562细胞黏附、迁移和侵袭能力,其作用机制可能通过下调细胞内HIF-1αmRNA的表达,从而减少VEGF mRNA的生成来实现。     

苦参碱对大鼠肾小球硬化早期防护作用的实验研究

目的　探讨苦参碱对大鼠肾小球硬化的早期防护作用。方法　用单侧肾切除加 1周后尾静脉注射阿霉素 (5mg/kg)的方法建立肾小球硬化大鼠模型 ,分模型对照组、苯那普利治疗组、苦参碱 10 0mg/kg治疗组和苦参碱 5 0mg/kg治疗组 ,设假手术组为正常对照组。检测各组术后第 2、4、6周的尿蛋白及第 6周的血清尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白及肾组织病理改变 ,并应用免疫组织化学方法检测肾组织内纤维连接蛋白 (FN)、层黏蛋白 (LN)在肾小球的沉积和转化生长因子 β1(TGF β1)、结缔组织生长因子 (CTGF)蛋白质的表达。结果　苦参碱 5 0mg/kg治疗组、苦参碱 10 0mg/kg治疗组和苯那普利治疗组的尿蛋白排泄量、血肌酐和尿素氮水平均低于模型对照组 ,肾小球增生、硬化程度轻于模型对照组 (P <0 0 5 ) ,肾小球内FN和LN沉积、肾皮质TGF β1蛋白表达也轻于模型对照组(P <0 0 5 ) ,CTGF仅模型对照组有少量表达 ,正常对照组和各治疗组均无表达 (P <0 0 1)。苯那普利治疗组、苦参碱 10 0mg/kg治疗组以上作用均优于苦参碱 5 0mg/kg治疗组 (P <0 0 5 ) ,但二者间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论　苦参碱对肾小球硬化大鼠模型肾脏病变有部分防护作用。     

狼疮性肾炎患儿肾组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白PDCD5、Caspase-3的表达

目的探讨狼疮性肾炎(LN)肾脏细胞凋亡与细胞增殖的关系,加强LN发病机制的认识。方法用原位末端标记法(TUNEL)检测31例LN患儿及9例对照的肾组织细胞凋亡,用免疫组化及图像分析的方法检测PCNA(增殖细胞核抗原)及PDCD5、Caspase3的表达。结果(1)LN患儿肾组织中肾小球和肾小管的凋亡细胞、增殖细胞数、增殖细胞数/凋亡细胞数(P/A值)均明显高于对照组(LN组及对照组凋亡细胞、增殖细胞数、P/A值在肾小球分别为0.86±0.26比0.14±0.09,8.45±2.83比0.47±0.25,10.01±2.96比3.37±1.93,均P<0.01;在肾小管分别为1.16±0.42比0.16±0.07,13.73±3.54比1.32±0.15,12.81±3.91比8.94±1.79,均P<0.05)。(2)PDCD5在LN患儿肾小球的表达强度与对照组相比差异无统计学意义(0.09±0.05比0.08±0.02,P>0.05),在肾小管的表达强度明显低于对照组(0.13±0.05比0.21±0.07,P<0.01)。(3)Caspase3在LN患儿肾小球、肾小管的表达强度明显高于对照组(肾小球0.22±0.07比0.05±0.02,肾小管0.08±0.03比0.05±0.01,均P<0.01)。(4)直线相关分析显示:全部观察标本中肾小球凋亡细胞数与Caspase3的表达强度呈正相关(r=0.718,P<0.01),与PDCD5的表达强度无显著相关性(r=0.054,P>0.05);全部观察标本中肾小球、肾小管PDCD5的表达强度均与肾小球、肾小管Caspase3的表达强度无明显相关性(r=0.061,P>0.05,r=0.049,P>0.05)。多元逐步回归分析显示:在α=0.15水平上,全部观察标本中肾小管凋亡细胞数与PDCD5的表达强度呈负相关(回归系数为-3.686,t=-2.875,P=0.007),与Caspase3的表达强度呈正相关(回归系数为4.761,t=1.772,P=0.085)。结论(1)LN患儿肾组织细胞凋亡虽然比对照组增加,但相对细胞增殖来说表现为不足;(2)Caspase3参与了LN患儿肾组织肾小球、肾小管的细胞凋亡;(3)尚不能证实PDCD5参与了LN患儿肾小球细胞凋亡;但可能参与了肾小管的细胞凋亡。