纳米材料细菌纤维素对大鼠皮肤创伤的促愈作用

目的:通过动物实验观察细菌纤维素作为创伤敷料的可能性,提高其应用价值。方法:实验于2002-06/12在解放军第二军医大学动物实验中心完成。①成年健康SD大鼠30只,用自制创伤仪于大鼠背部脊柱两侧各制造2.0cm×2.0cm大小的皮肤伤口,深及真皮层,造成皮肤缺损,两个创面之间间隔1cm。以细菌纤维素膜治疗(治疗组),油纱布为对照(对照组)。②观察M12菌体及液体培养特征;扫描电镜观察细菌纤维素膜表面孔径。③于手术后4,7,14,21,28d观察创面愈合情况;并于各时间点随机抽取6只大鼠过量麻药处死进行光镜组织学观察。④伤口愈合率(%)=犤(原有创面总面积-观察时创面面积)/原有创面总面积犦×100。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①M12菌体及液体培养特征:透射电镜下可清楚地看到M12菌细胞的形状为椭圆至杆状,挺直或稍弯曲,无鞭毛,不运动。M12静态培养,在液面产生纤维素液膜,经预处理后呈乳白色半透明胶状液膜,外表均匀光滑,质地柔韧。②细菌纤维素膜表面孔径:该膜表面孔径为20～50μm。③两组大鼠不同时间点宏观观察结果:所有实验动物无死亡。觅食饮水等活动正常,两组均未出现创面感染。④两组大鼠伤后不同时间伤口愈合率:治疗组7,14,21,28d伤口创面愈合率较对照组显著提高犤(16.17±2.14)%比(11.83±1.94)%,P<0.05;(70.54±6.35)%比(55.28±6.63)%,(92.60±5.62)%比(78.73±6.24)%,(100.00±0.00)%比(93.67±6.33)%,P<0.01犦。⑤组织学观察结果:治疗组肉芽组织层形成较厚,成纤维细胞和血管内皮细胞增生活跃,胶原纤维束增多,真皮层内小血管增生明显。对照组肉芽组织层较薄,成纤维细胞和血管内皮细胞增生不活跃,胶原纤维含量较治疗组少,小血管数量少。结论:①细菌纤维素膜对皮肤创伤性损伤具有促进愈合和抗感染的作用。②为新生的毛细血管和成纤维细胞提供了合适的三维支架,可允许成纤维细胞和毛细血管逐渐长入。③有可能成为一种临时皮肤代用品和有应用潜力的生物敷料。     

鸸鹋油对大鼠浅Ⅱ度烧伤创面愈合中组织修复的影响

目的：应用聚维酮碘和鹂鹋油治疗大鼠浅吱烧伤，并比较两种药物对创面愈合过程中组织修复的影响。方法：实验于2003—01／04在南方医科大学南方医院完成。108只Wistar大鼠随机分为单纯烧伤组、聚维酮碘治疗组和鸸鹋油治疗组，每组36只。实验时将脱毛区置于70℃恒温水浴中15s，制成10％体表面积浅Ⅱ度烫伤模型(经病理切片证实，本文统称为烧伤)。各组创面分别用生理盐水纱布、聚维酮碘纱布、鸸鹋油纱布覆盖，无菌纱布包扎固定后放回笼中分笼饲养，换药1次／d。观察创面愈合率及愈合时间。各组动物分别于伤后1，3，5，10，14d取创面组织，常规苏木精-伊红染色，观察病理组织学变化；免疫组织化学链霉素-卵白素-生物素-过氧化物酶复合物法检测创面组织增殖细胞核抗原的表达，以标记指数法测定增殖细胞核抗原阳性细胞数，以评估组织创面的修复情况。结果：108只大鼠全部进入结果分析。①创面愈合时间：鸸鹋油治疗组比单纯烧伤组、聚维酮碘治疗组明显缩短【(12．67&;#177;0．82)，(15．33&;#177;0．82)，(14．00&;#177;0．89)d，F=15．00，P&;lt;0．01】。②创面愈合率：鸸鹋油治疗组比单纯烧伤组、聚维酮碘治疗组明显升高【第7天：(73．94&;#177;4．46)％，(20．30&;#177;3．85)％，(30．71&;#177;4．90)％；第10天：(88．45&;#177;4．13)％，(40．10&;#177;3．14)％．(63．45&;#177;4．21)％；第14天：(98．93&;#177;1．68)％，(78．67&;#177;3．99)％，(90．41&;#177;3．09)％；F=443．96，P&;lt;0．01】。③病理切片显示鸸鹋油能减轻烧伤创面早期的炎症反应，组织学分析显示鸸鹋油可促进创面的再上皮化和表皮各层的分化。④增殖细胞核抗原在创面组织标本中的表达量：鸸鹋油治疗组比单纯烧伤组、聚维酮碘治疗组明显升高【第5天：(81．83&;#177;4．57)％，(32．50&;#177;3．08)％，(34．33&;#177;2．58)％；第10天：(78．00&;#177;3．00)％，(19．16&;#177;3．71)％，(21．83&;#177;4．53)％；第14天：(65．00&;#177;8．29)％，(11．16&;#177;2．63)％，(15．00&;#177;2．78)％；F=962．40，P&;lt;0．01】。随时间推移明显下降(F=95．63，P&;lt;0．01)。结论：鸸鹋油能加速大鼠烧伤创面组织修复细胞的增殖，加快创面再上皮化，促进创面愈合。     

复方壳多糖人工皮肤促进创面愈合的作用

目的：证明复方壳多糖人工皮肤在体促进创面愈合能力，为该人工皮肤应用于临床尤其是覆盖感染创面提供实验依据。方法：健康雄性大鼠24只，每只背部做全层皮肤缺损创面2个，每个创面涂1&;#215;10^5克隆形成单位(colony foming unit，CFU)金黄色葡萄球菌，建立金黄色葡萄球菌污染创面大鼠模型，随机数字法分成实验组、对照组和空白对照组，每组16个创面，将复方壳多糖人工皮肤和复方胶原凝胶人工皮肤分别覆盖于实验组和对照组创面上，空白对照组无覆盖，通过细菌学、病理、免疫组化检查，了解两组之间的差别。结果：实验组和对照组的一般情况好，空白对照组差，实验组创面感染轻、创面收缩好，24h痂下细菌计量实验组为(8．09&;#177;2．51)&;#215;10^4CFU／g，明显少于对照组(5．91&;#177;2．51)&;#215;10^5CFU／g和空白对照组(5．55&;#177;2.18)&;#215;10^7CFU／g，差异有显著性意义；创周组织病理切片观察，实验组炎性细胞浸润少，愈合最快最好，对照组有炎性细胞浸润，空白对照组可见大量炎性细胞和渗出、出血、坏死；肌动蛋白免疫组化表明，实验组增生的纤维母细胞染色强阳性，对照组散在阳性，空白对照组染色阴性。结论：复方壳多糖人工皮肤有抗菌、抗感染和促进创面愈合作用，其作用优于复方胶原凝胶人工皮肤，是理想的创面覆盖物。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用，为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法：实验皮肤标本来源于2002—07／2003—07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者，取冗余全层皮肤组织，患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞，实验分为异搏定组：包括1&;#215;10^-3, 1&;#215;10^-4, 1&;#215;10^-5, 1&;#215;10^-6, 1&;#215;10^-7, 1&;#215;10^-8,1&;#215;10^-9,1&;#215;10^-10mol／L组，分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液；氢化可的松组：在细胞培养孔中加入2mL浓度为1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松的培养液；对照组：在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0．005的新生牛血清的Dulbecco＇s改良的Eade＇s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色；细胞增殖状况测定应用^3氚标记的胸腺嘧啶掺入法；观察细胞增殖抑制率[抑制率（1％）=（阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值）／阴性对照每分钟脉冲数值]，取各例样本的平均值。结果：①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果：对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖，24h达到高峰，48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应：各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用，其中1&;#215;10^-6mol／L异搏定与1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异（t=0．135,P=0．896〉0．05）。③浓度为1&;#215;10^-6mol/异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应：氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12,48h时[（60．67&;#177;18．94）％比（-19．69&;#177;21．26）％，（10．89&;#177;11．61）％，（37．03&;#177;12．17）％，q=10．867．6．732，3．197；P〈0．051；异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12，48h时[（51．42&;#177;15．30）％比（-16．83&;#177;16．90）％．（1．09&;#177;11．62）％，（17．41&;#177;13．41）％，q=10．566，7．791，5．265，〈0．051；在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松（t=2．423,P=0．042〈0．05）。结论：不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用，异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

深Ⅱ度烫伤创面愈合过程中转化生长因子β表达及微血管生成和胶原合成与解毒烧伤膏的干预作用

目的：观察有一定促进浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面愈合作用的解毒烧伤膏在烫伤创面愈合过程中对转化生长因子β、微血管生成和胶原合成的影响。探讨其可能的作用途径。 方法：实验于2004-09／2004-12在中山大学动物中心和中山大学附属第一医院外科实验室完成。取10只小香猪，制作深Ⅱ度烫伤创面模型，随机分为解毒烧伤膏观察组和空白对照组，记录创面愈合时间；分别在伤后第3、5、7、9天取材，采用免疫组织化学链菌素生物素一过氧化物酶标记物法法检测转化生长因子13的表达，在400倍光镜下随机选取5个视野，每个视野观察100个细胞，以胞浆或（和）胞核着棕色者为阳性染色，计数阳性细胞数。以CD34-抗免疫组织化学标记血管内皮细胞，先后在低倍镜（10&;#215;10）下全面观察切片，以确定组织血管密度最高处，再在高倍镜（10&;#215;40）下计数并记录5个视野的微血管数，取其平均值。记数微血管密度。羟脯氨酸法检测每克组织胶原含量。比较实验组与对照组创面愈合时间，转化生长因子β的阳性表达率，创面微血管密度计数及胶原含量测定。结果：纳入动物10其，全部进入结果分析，无脱失值。①观察组烫伤愈合时间明显早于对照组[（11．0&;#177;1．5），（14．0&;#177;2．5）d，t=4．08，P〈0．001]。②转化生长因子β表达主要在炎症细胞和毛囊上皮细胞，伤后第3、5天，观察组转化生长因子β的阳性表达率明显高于对照组[（25．0&;#177;7．5）％，（11．0&;#177;4．6）％；（45．7&;#177;8．3）％，（24．6&;#177;7．4）％，t=3．61，6．34，P〈0．01]；观察组转化生长因子β表达的高峰早于且强于对．照组。④第5天微血管密度记数观察组显著高于对照组[（40．6&;#177;2．4），（32．6&;#177;2．4）个，t=2．69，P（0．05]。④观察组第7、9天胶原含量明显高于对照组[（24.5&;#177;0．72），（1．97&;#177;0．15）g／mg；（3．51&;#177;0．46），（2．85&;#177;0.13）g/mg；t=3．61,6．79，P〈0．01]; 结论：解毒烧伤膏能促进烫伤刨面的愈合，可能与早期提高组织中转化生长因子β的表达、促进血管增生和后期胶原的合成有关。     

膳食纤维与肌醇六磷酸对1，2-二甲肼诱导大鼠大肠癌发生的作用

背景：随着国内人民生活水平的不断提高，大肠癌的发生率不断提高。大量的流行病学调查表明，膳食因素与大肠癌的高发有着密切的相关性。 目的：通过建立大鼠大肠癌的动物模型，观察膳食纤维与肌醇六磷酸（植酸）对大肠癌发生的作用。 设计：随机区组设计。 单位：青岛大学医学院营养学研究所。 材料：实验于2004-03／12在青岛大学医学院营养学研究所进行。将86只4周龄雄性Wistar大鼠按体质量随机区组分为纤维素组（14只）、果胶组（14只）、植酸组（15只）、纤维素＋植酸组（14只）、果胶＋植酸组（14只）和对照组（15只）6组。 方法：对照组：无膳食纤维的基础饲料；果胶组：添加10％的果胶；纤维素组：添加10％的纤维素；植酸组：添加2％的植酸钠饮水；果胶＋植酸组：添加10％的果胶和2％的植酸钠饮水；纤维素＋植酸组：添加10％的纤维素和2％的植酸钠饮水。对86只大鼠用1，2-二甲肼皮下注射诱发大肠癌，观察大鼠大肠肿瘤的发生率、肿瘤的数量及体积；测定大鼠大肠粘膜细胞的增殖活性（增殖细胞核抗原阳性细胞数／计数的细胞核总数）。 主要观察指标：①各组大鼠大肠肿瘤的发生率，平均每只鼠的肿瘤个数和肿瘤体积变化。②大鼠大肠黏膜细胞的增殖活性。 结果：①各组大鼠多死于喂养20周前。果胶组、果胶＋植酸组及对照组各有1只大鼠死于喂养20周后。②各组大鼠大肠肿瘤的发生率与对照组相比差异无显著性（P〉0．05），但植酸组平均每只鼠的肿瘤个数和肿瘤体积显著低于对照组[数量：（1．1&;#177;0．2），（4．1&;#177;1．2）个／只，P〈0．01；体积：（176．1&;#177;65．5），（1046．7&;#177;469．0）mm^3，P〈0．05]，果胶组、果胶＋植酸组平均每只鼠的肿瘤个数显著高于对照组[（7．5&;#177;1．9），（7．2&;#177;1．0）个／只，P〈0．05]。③植酸组大鼠大肠黏膜细胞的增殖活性比对照组显著降低，果胶组大鼠大肠黏膜细胞的增殖活性比对照组升高[（41．8&;#177;4．7）％，（83．6&;#177;2．9）％，（66．7&;#177;7．8）％，P〈0．01和0．05]。 结论：膳食中添加果胶能增加诱癌大鼠患大肠肿瘤的危险，而饮水中添加2％的植酸可降低诱癌大鼠患大肠肿瘤的危险。     

兔耳增生性瘢痕形成与外科常见致病真菌感染的关系

目的：分析外科感染常见致病真菌对兔耳创面增生性瘢痕组织块形成的影响。 方法：实验于2004-02／07在新疆医科大学动物实验室和新疆医科大学病理科完成。选取新西兰大耳白兔12只，随机分为白色念珠球菌污染组、金黄色葡萄球菌污染组、空白对照组，4只／组。在各组兔耳腹侧制作直径为1cm全层皮肤缺损创面，创面形成时及术后第1天白色念珠球菌污染组分别于创面放置微量白色念珠球菌，金黄色葡萄球菌污染组于创面放置微量金黄色葡萄球菌，空白对照组不予任何干扰因素。观察各组创面愈合及增生性组织块发生情况，测定各组术后不同时间点成纤维细胞数及转化生长因子β1和胶原Ⅰ的表达。 结果：实验纳人12只兔，兔耳创面制作时因麻醉药物过量4只死亡，予以补充。①白色念珠球菌污染组和金黄色葡萄球菌污染组兔耳腹侧创面愈合后可出现类似人增生性瘢痕的增生组织块，愈合时间均长于空白对照组[（14．7&;#177;1．0），（15．3&;#177;1．1），（11．2&;#177;1．3）d，P〈0．01]；增生组织块出现率均高于空白对照组（85．4％，91．6％，62．5％，P〈0．05）；术后28，49，60d增生组织块成纤维细胞含量均明显高于空白对照组（P〈0．01）。②各组成纤维细胞中转化生长因子β1及胶原Ⅰ在术后28，49d均为强阳性表达，白色念珠球菌污染组最为显著，随时间的推移各组表达逐渐减弱直至消失。 结论：白色念珠球菌和金黄色葡萄球菌污染创面均易出现增生性组织块，其形成与创面愈合过程关系密切，创面愈合时间越长增生组织块的出现率越高，符合人增生性瘢痕变化规律，验证转化生长因子、成纤维细胞及胶原之间的密切关系构成了增生性瘢痕的生物学基础。     

干细胞培养物表面滴注对豚鼠皮肤重度缺损的修复作用

背景：干细胞是动物和人的一种特殊功能的细胞，存在于多种组织之中，其大部分分化成各种特定组织器官，一部分保持干细胞状态，以备组织修复之用。有研究将间充质干细胞移植于烧伤创面，用以诱导皮肤干细胞的增生和活化，以达到治疗烧伤的目的。目的：观察采用体外培养干细胞培养液滴注于豚鼠皮肤重度缺损局部对创面愈合时间及愈合情况的影响。设计：随机分组，空白对照实验。单位：吉林大学公共卫生学院毒理学教研室。材料：成年健康豚鼠14只，体质量300～350g，雌雄不限。方法：实验于2003-03／09在吉林大学公共卫生学院毒理学教研室实验室完成。取10豚鼠，经颈部放血处死，提取骨髓，经过培养制成单细胞悬液备用。将14只豚鼠制成两侧重度皮肤损伤模型。随机选取10只豚鼠，其中一侧滴加干细胞培养物（干细胞组），而另一侧滴加培养液（培养液组）；剩余4只动物不做任何治疗，作为空白对照组。3d后，每两天用透明有机玻璃置创面上方，描画其形状，观察创面情况，并将其图形复制到透明玻璃纸上，在直角坐标纸上精确查出创面面积，计算创面愈合速度。主要观察指标：大体观察各组豚鼠创面愈合情况及平均愈合时间和速度。结果：14只豚鼠均进入结果分析。①各组豚鼠创面愈合情况：3d时，干细胞组创面干燥，无明显渗出，在创面底部有一层膜状物质，与纱布粘贴比较牢固，敷料不易脱离；培养液组创面情况与干细胞组基本一致，但无膜状物质形成，敷料易脱离；空白对照组动物创面炎症明显。②各组豚鼠创面愈合时间：干细胞组明显少于培养液组和空白对照组[（12．45&;#177;2．18）d比（26．29&;#177;1．38）d和〉30d，P〈0．05]。③各组豚鼠创面愈合速度：干细胞组明显快于培养液组和空白对照组[（40．42&;#177;2．14）mm^2／d比（15．53&;#177;5．22）mm^2／d和（10．27&;#177;4．57）mm^2／d．P〈0．051。结论：利用同种异体动物干细胞培养物进行皮肤表面滴注修复其损伤创面，干细胞能够在创面上生长，并向皮肤细胞转化，促进创面皮肤修复，用于皮肤重度缺损治疗是可行的。     

异丁基壳聚糖多功能创面敷料的生物学效应

目的：观察以壳聚糖衍生物-异丁基壳聚糖为基质材料的多功能创面敷料的局部止血、镇痛、抗感染和促愈合作用。方法：实验于2003-03／2004-06在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。新西兰大白兔54只，Wistar大白鼠6只，昆明种小白鼠14只。采用：①兔肝叶剪损法观察该敷料的止血效果即平均止血时问。②热板法检测该敷料对小鼠的镇痛效果即涂药前、后平均舔足时间。③用家兔伤口污染模型，观察该敷料对伤口局部及全身情况的影响，以观察其局部抗菌消炎效应。④用大鼠背部切割伤模型，观察该敷料对伤口闭合指数和组织羟脯氨酸含量的影响，从而考查其对伤口愈合的作用。结果：局部止血试验：新西兰兔6只，用药组实验数据为11个，对照组实验数据为13个；局部镇痛试验：昆明种小白鼠14只，所得数据两组均为14个；局部促愈合试验：用大白鼠6只，得用药组和对照组1周的伤口闭合指数各6个，局部组织羟脯氨酸含量数据各6个；局部抗菌消炎试验：新西兰兔48只。①用药组平均止血时间咀显较对照组短[（55．6 &;#177;7．4），（147．9&;#177;49．9）s]。②涂药前小白鼠平均舔足的时间明显较涂药后短[（19．57&;#177;3．63），（39．50&;#177;7．98）s]。③兔污染伤口实验结果显示：伤后24h，对照组体温明显高于用药组，两组白细胞变化没有明显差异：伤口局部细菌培养显示对照组菌落数明显多于用药组；用药组伤口情况明显好于对照组，在72h，7d时，用药组痂下无脓，有肉芽生长，而对照组痂下有大量脓，无肉芽生长出来；两组各时相点血浆肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和局部肌肉组织肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、丙二醛、髓过氧化物酶、超氧化物歧化酶含量无明显差异。④用药组1周的伤口闭合指数为（60．5&;#177;12.8）％，而对照组为（39．1&;#177;11.3）％；用药组局部组织羟脯氨酸含量为（60．5&;#177;5．4）mg／g，对照组为（17．7&;#177;4．9）mg／g。结论：异丁基壳聚糖多功能创面敷料具有明显的局部止血、镇痛、抗菌消炎和促愈合作用。     

加速器照射大鼠伤口愈合过程中血小板源性生长因子及其受体表达与胶原形成的关系

目的：探讨加速器照射后大鼠皮肤伤口愈合过程中血小板源性生长因子及其受体表达与胶原形成的规律。方法：实验于2002—05／2003—06在解放军军事医学科学院附属医院放疗科及解放军军事医学科学院放射医学研究所病理室完成。清洁级雄性Wistar大鼠36只，体质量（200&;#177;20）g，随机数字法分为4组，每组9只，1组作为空白对照组，3组作为照射组。在每只大鼠背部脊柱两侧切2个圆形创面，创面直径1．5cm，深达皮下组织全层，2个创面间隔1．5cm。处理完毕后以无菌纱布包扎伤口，动物置于单笼饲养。术后48h，照射组大鼠背部创口以直线加速器6MeV电子线照射，分组300cGy组（300cGy／（次&;#183;d），连续照射5次）、400cGy组（400cGy／（次&;#183;d），连续照射5次）和500cGy组（500cGy／（次&;#183;d），隔日1次，连续照射3次），照射剂量率为240cGy／min。观察创面愈合及渗出情况。对照组分别于致伤后2，5，7，10，14，21d麻醉后取材，照射组均在伤后7，10，14，17，21，28d取材。常规苏木精-伊红染色病理组织学观察、天狼猩红染色后偏光镜观察胶原纤维含量变化、免疫组化方法和图象分析定性和定量检测各组伤口愈合过程中胶原纤维和血小板源性生长因子及其受体表达的动态变化。结果：实验大鼠36只均进入结果分析。①照射组创面愈合延迟，对照组创面平均11d全部愈合，照射组平均14d愈合。②照射组肉芽组织产生和胶原纤维的合成受抑制，300cGy照射组较其他各组胶原纤维细小，排列稀疏。28d图像分析胶原积分吸光度300cGy组、400cGy组、500cGy组分别为（0．323&;#177;0．015，0．349&;#177;0．012，0．457&;#177;0．019），组间比较差异有显著性（P〈0．05）。③照射组血小板源性生长因子-A及受体表达伤后10-14d达到高峰，对照组7-10d达到高峰。各时间点300cGy组与400cGy组差异不明显（P〉0．05），500cGy组高峰出现最晚，后期较其他组显著升高（P〈0.05）。结论：直线加速器照射抑制血小板源性生长因子及其受体表达，并与胶原形成的效果与照射剂量有关，应用低剂量分次照射防治瘢痕增生是很好的选择。