鲨鱼软骨制剂通过下调Bcl-2诱导K562细胞凋亡

目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人红白血病细胞系(K562)凋亡的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的K562细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果SCP明显抑制K562细胞生长,IC50值为1mg/ml以下;荧光显微镜下可见50%以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;免疫细胞化学检测显示SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论SCP诱导K562细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达有关。     

探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制

目的 研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC)诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制.方法 不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞.通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC时HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响.结果 SPC可抑制HepG2细胞的增殖.其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为(17.22±3.45)%和(25.50±5.72)%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2+浓度显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2+浓度有关.     

抗人DR5单克隆抗体对人肝癌细胞系HepG2的凋亡作用

探讨抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对人肝癌细胞系HepG2致凋亡的作用。常规培养人肝癌细胞系HepG2,流式细胞术定量分析检测HepG2细胞表面DR5的表达。MTT法检测mDRA-6的细胞毒性作用;Annexin V-FITC/PI双色标记HepG2细胞,流式细胞术定量分析检测细胞凋亡率;在荧光显微镜下观察mDRA-6对HepG2细胞形态变化的影响。结果显示,HepG2细胞表面有DR5表达,其平均表达百分率为40%。MTT法检测显示在40 mg/L mDRA-6浓度下可杀伤42%的细胞;Hoechst33258染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的经流式细胞术检测显示,3 mg/L的mDRA-6作用HepG2细胞6 h导致24.61%的细胞发生凋亡;在荧光显微镜下可观察到mDRA-6诱导导致HepG2细胞呈现典型细胞凋亡的形态特征。上述结果表明,mDRA-6能够诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡。     

探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物（Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞,通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC对HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响。结果 SPC可抑制HepG2细胞的增殖。其GI50为46.8μg/ml;50μg/ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg/ml、100μg/ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为（17.22&#177;3.45）%和（25.50&#177;5.72）%;50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca2＋浓度显著升高（P〈0.05,P〈0.01）。结论 SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca2＋浓度有关。     

鲨鱼软骨制剂对胃癌细胞生长及Bcl-2表达的调控

目的通过研究鲨鱼软骨制剂(SCP)对人胃癌MGC-803细胞Bcl-2的影响,探讨其对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的MGC-803细胞中,MTT法检测SCP对细胞生长抑制作用;Hoechst33342/PI荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞仪测定细胞凋亡水平;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果 SCP明显抑制MGC-803细胞生长,且抑制作用呈浓度和时间依赖性(P0.05),其24、48和72h的IC 50值分别为1.61,1.04和0.54mg/ml。1mg/ml SCP处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,细胞凋亡比例增大呈时间依赖性(P0.05)。SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论 SCP抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖及诱导细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白表达。     

环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。     

抗人死亡受体5单链抗体特性分析

目的探究抗人死亡受体5(DR5)单链抗体(aDR5ScFv)的特异性。方法 ELISA检测aDR5ScFv的效价、亲和力和表位分析。Western blotting检测单链抗体的特异性。MTT检测aDR5ScFv对结肠癌细胞SW480的生长抑制。结果 ELISA显示抗人死亡受体5单链抗体抗体效价为1.2×104。通过间接ELISA证实aDR5ScFv与aDR5mAb识别DR5胞外段(eDR5,系本实验室自己构建)的同一个位点。aDR5ScFv的亲和力常数为2.12×10-2。eDR5与aDR5ScFv能够特异结合。MTT检测结果显示,aDR5ScFv抑制SW480细胞生长呈剂量依赖性,aDR5ScFv终质量浓度分别为0.225 mg/ml、0.45 mg/ml、0.9 mg/ml、1.2 mg/ml。200μl时,SW480细胞的存活率分别为97.7%,70.9%、70.1%、23.6%。结论 aDR5ScFv能与eDR5特异性结合,并有较强的活性。     

外源性层黏连蛋白在姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长抑制作用中的影响

目的 探讨在外源性层黏连蛋白（LN）与其受体结合下,姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长、凋亡的影响。 方法 实验分为对照组、LN组（20μg/L LN）、姜黄素组（40μmol/L 姜黄素）、联合组（20μg/L LN+40μmol/L姜黄素）。采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术（FCM）和Western blotting 法等探讨在外源性LN与其受体结合下,姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长、细胞凋亡率、线粒体膜电位、细胞增殖相关蛋白α-蛋白激酶（α-PKC）及细胞凋亡相关蛋白人多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Caspase-3、Bcl-2和p53表达的影响。 结果 LN组与对照组相比,细胞存活率增加。姜黄素组与联合组能显著抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,并呈时间依赖性。姜黄素组与联合组作用48h时,倒置显微镜下,细胞数量明显减少,皱缩变圆,大部分细胞悬浮;中晚期凋亡和坏死细胞比率（%）分别为97.04±1.50,98.02±1.35;细胞内钙离子浓度升高;线粒体膜电位下降;增殖相关蛋白α-PKC含量减少;凋亡相关蛋白PARP出现剪切带,Caspase-3表达下调,p53表达上调,Bcl-2表达无明显变化。 结论 在外源性层黏连蛋白与其受体结合下,姜黄素与人肝癌HepG-2细胞作用后抑制生长并诱导细胞发生凋亡;显示出姜黄素抗肿瘤作用稳定,其机制可能与上调p53,下调α-PKC有关。     

AZD5363诱导肝癌细胞凋亡与自噬的实验研究

目的:研究新型Akt抑制剂AZD5363对人肝癌HepG2和Huh7细胞活力、凋亡和自噬的影响,并探讨其抗肿瘤活性的分子机制。方法:采用不同浓度AZD5363作用于体外培养的HepG2和Huh7细胞,MTT法检测细胞活力;TUNEL标记法检测肝癌细胞凋亡的变化;Western blot实验分析细胞凋亡相关蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]及自噬标志蛋白LC3-II的表达水平;细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白融合表达质粒检测细胞自噬。结果:AZD5363能够剂量依赖性地抑制HepG2和Huh7细胞活力,并通过促进PARP的切割而诱导肝癌细胞发生凋亡;肝癌细胞给予AZD5363后,细胞内GFP-LC3融合蛋白斑点增多,同时LC3-II的表达水平增加(P 0.05);当用氯喹阻断自噬后,AZD5363对肝癌细胞凋亡的诱导作用明显增强。结论:AZD5363可促进HepG2和Huh7细胞发生凋亡和保护性自噬。抑制自噬促进了AZD5363诱导的肝癌细胞凋亡。     

rBTI蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及ROS产生的影响

目的:研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及胞内活性氧(ROS)的影响。方法:以不同浓度的rBTI蛋白(1.25 10μmol/L)作用肝癌HepG2细胞,通过MTT比色法检测rBTI蛋白对HepG2细胞增殖抑制作用;DAPI荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧变化、划痕擦伤实验检测rBTI蛋白对HepG2细胞迁移的影响。结果:rBTI蛋白对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖效应,但对正常细胞HL-7702影响很小;DAPI染色发现细胞产生凋亡小体;细胞内活性氧水平检测结果表明rBTI可以诱导HepG2细胞内ROS水平显著升高;划痕擦伤实验显示rBTI在一定浓度范围内可以抑制HepG2细胞迁移。结论:rBTI蛋白能够诱导HepG2细胞发生凋亡并抑制细胞增殖和迁移。     

SC58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。方法：应用细胞培养、MTT、TUNEL、流式细胞光度术、琼脂糖凝胶电泳及Western blot等方法研究SC-58125对HepG-2细胞增殖和凋亡的作用及其分子机理。结果：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖、诱导其凋亡及引起G₀/G₁期阻滞，S期抑制。并使P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平下降。结论：SC58125抑制HepG-2细胞的增殖及诱导其凋亡，可能与P33^cdk2、P34^cdc2、cyclinB₁、cyclinE、Mpm-2、Rb、PCNA 7种蛋白水平的下降有关。     

Ad-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24双基因共表达载体构建及表达

目的 构建poly(A)-Promoter介导的携带人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白细胞介素-24(IL-24)双基因的重组腺病毒共表达载体Ad-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24(简称Ad-ING4-IL-24),研究Ad-ING4-IL-24对HepG-2人肝癌细胞生长的影响.方法 以含有poly(A)和Promoter (hEF1-eIF4g)基因片段的pORF-mbcl-2α质粒为模板,PCR扩增poly(A)-Promoter目的 片段(含Sal Ⅰ,Not Ⅰ),亚克隆至pAdTrack-CMV载体中以构建pAdTrack-CMV-poly(A)-Promoter空载体,再分别以pcDNA3.0-ING4和pcDNA3.0-IL-24重组质粒为模板,PCR扩增ING4(含BglⅡ,Sal Ⅰ)和IL-24(含XhoⅠ,XbaⅠ)目的 基因片段,并依次插入pAdTrack-CMV-poly(A)-Promoter载体中构建pAdTrackCMV-ING4-Poly(A)-Promoter-IL-24双基因共表达重组转移载体,测序正确后用Pme Ⅰ酶线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1构建同源重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-ING4-poly(A)-Promoter-IL-24,再经Pac Ⅰ酶线性化后用脂质体转染QBI-293A包装细胞,经多轮扩增后收获Ad-ING4-IL-24重组腺病毒子,其效价可达3.5×109PFU/ml,用RT-PCR和Western blot法分别鉴定ING,4和IL-24基因在HepG-2人肝癌细胞中的转录和表达,MTT法和流式细胞仪检测Ad-ING4-IL-24对HepG-2人肝癌细胞生长抑制和诱导细胞凋亡的功能及其增效作用.结果 DNA测序结果显示pAdTrack-CMV转移载体中插入的ING4、poly(A)-Promoter和IL-24序列与GenBank报道的完全一致,RT-PCR和Western blot检测结果显示Ad-ING4-IL-24能成功介导ING4和IL-24基因在HepG-2人肝癌细胞中表达;并能明显抑制HepG-2人肝癌细胞的生长和诱导其凋亡,其中Ad-ING4-IL-24双基因组更优于相应各单基因组.结论 成功构建了poly(A)-Promoter介导的Ad-ING4-IL-24双基因共表达重组腺病毒载体,Ad-ING4-IL-24不仅能明显抑制HepG-2人肝癌细胞生长和诱导其凋亡,而且与Ad-ING4和AdIL-24单基因组相比具有抑癌增效作用.     

鲨鱼软骨制剂对人不同细胞生长抑制作用及其机制的探讨

目的　研究鲨鱼软骨制剂 (SCP)对人胃癌细胞 (MGC80 3)、红白血病细胞 (K5 6 2 )、人结肠高分化腺癌细胞 (THC 890 8)、人乳腺癌细胞 (MCF 7)和人脐静脉血管内皮细胞 (VEC340 )的生长抑制作用 ,探讨其作用机制。方法　采用盐酸胍抽提 ,丙酮分级沉淀 ,烘干 ,微孔滤膜过滤等步骤从鲨鱼软骨粉中提取鲨鱼软骨制剂 (SCP) ;MTT法检测不同浓度的SCP对体外培养的MGC80 3细胞系、K5 6 2细胞系、THC 890 8细胞系、MCF 7细胞系和VEC340细胞系的生长抑制作用 ;Hoechst33342 /PI荧光双染法检测细胞凋亡。结果　SCP明显抑制MGC80 3、K5 6 2、THC 890 8、MCF 7和VEC340五种细胞系的生长 ,其IC50 值分别为 0 5mg/ml、0 7mg/ml、1mg/ml、1 5mg/ml和 2mg/ml。凋亡细胞比例在用药后 4 8h分别达 79 9%、4 4 6 %、78 9%、6 3 3%和 4 4 8%。结论　SCP能直接抑制不同肿瘤细胞生长 ,又能抑制血管内皮细胞的生长 ,其作用机制与细胞凋亡有关。     

鼠尾胶原及C-erbB-2蛋白抗体对肝癌（HepG-2）细胞粘连和增殖的影响

目的：揭示胶原及C-erbB-2蛋白抗体对肝癌细胞粘连和增殖的影响，提供抗癌治疗的线索。方法：以人肝癌细胞细胞系（HepG-2）为靶子，利用C-erbB-2抗体及鼠尾胶原体外作用于靶细胞，观察C-erbB-2抗体及鼠尾胶原对肝癌细胞粘连和增殖的影响。结果：鼠尾胶原有加强肝癌细胞粘附作用而对其增殖作用无显著影响；C-erbB-2抗体能明显抑制其细胞的增殖和粘连，也明显拮抗鼠尾胶原对其细胞粘连性的加强作用。结论：人肝癌细胞HepG-2的粘连和增殖与胶原的作用存在与否有关，这与C-erbB-2蛋白介导的信号传递作用存在着密切的关联，阻断C-erbB-2的信号传递作用对肝癌治疗是一个有前景的战略性靶点。     

转染肿瘤总RNA的DC疫苗诱导抗肝癌特异性免疫

目的：探讨转染人肝癌总RNA的树突状细胞(DC) 疫苗体外诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用。 方法： 采用原发性肝癌（HCC）病人外周血单核细胞（PBMC），在粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4) 刺激下增殖分化为DC细胞；从人肝癌细胞中体外扩增肝癌RNA。以HCCRNA转染DC细胞，并与PBMC混合培养诱导扩增CTL。MTT法测定CTL的杀瘤活性。 结果： 转染HCCRNA 48 h后， DC表面分子CD83、CD86和HLA-DR表达明显增高。转染HepG-2细胞HCCRNA的DC和病人HCCRNA诱导的CTL对HepG-2细胞和病人HCC细胞的杀瘤活性均明显高于正常肝细胞RNA+DC、脂质体+DC、Opti-MEM+DC以及空白对照组；而对胃癌SGC-7901细胞无杀伤活性。 结论： 以肝癌RNA为肿瘤抗原，DC作为疫苗的抗原提呈细胞，体外冲击致敏DCs，能诱导肝癌特异性CTL。本研究为HCC术后复发和转移的防治提供一种可能有效的疫苗治疗方法。     

双特异性抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用影响的体外研究

将抗ＣＤ３与抗ＨＢｓ的单克隆抗体经化学偶联得到双特异性抗体，观察该双特异性抗体对ＬＡＫ细胞增殖和增强细胞毒性的作用。结果显示双特异性抗体显著提高ＬＡＫ细胞与２．２．１５细胞结合率；促进淋巴细胞增殖。１２５Ｉ－ＵｄＲ释放试验检测发现双特异性抗体增强ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞的细胞毒性且与抗体浓度呈正相关。进一步对抗体的特异性研究表明，加入双特异性抗体后ＬＡＫ细胞对２．２．１５细胞毒性作用显著高于对照组。     

外源性P53基因转染的人肝癌细胞化疗药物敏感性的研究

目的探讨外源性P53基因转染对人肝癌细胞系HepG-2化疗敏感性的影响。方法将人野生型P53基因表达载体导入HepG-2细胞中，经筛选和鉴定后，采用MIT法观察其对甲氨蝶呤(MTX)和足叶乙甙(VP16)作用后的HepG-2细胞生长抑制及凋亡的影响。结果外源性P53基因在转染细胞中有效表达。增强了MTX和VP16对HepG-2细胞生长抑制并促进了药物诱导的细胞凋亡。结论外源性P53基因能增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。     

载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒抑制人肝癌细胞HepG2的作用

背景：临床上应用的紫杉醇注射剂毒性大,过敏反应发生率高。 目的：研制载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒,观察其对人肝癌细胞HepG2的抑制及诱导细胞凋亡的作用。 方法：采用MTT法检测0,3.125,6.25,12.5,25,50,100 mg/L载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子或紫杉醇作用后人肝癌细胞HepG2的生长;观察25 mg/L载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子或紫杉醇作用后人肝癌细胞HepG2的形态变化,并观察0,12.5,25,50 mg/L载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子作用后细胞的凋亡情况。 结果与结论：在3.125-100 mg/L质量浓度范围内,载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子与紫杉醇均能明显抑制HepG2细胞的生长,且载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子显示出明显的缓释作用,随着作用时间的增加其抑制率显著增加,72 h时抑制效果最好,但紫杉醇此现象不明显。载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子或紫杉醇作用后,细胞出现典型的凋亡形态,且随着载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子作用时间的增加这一现象更加典型;12.5,25,50 mg/L载紫杉醇聚乳酸聚乙醇酸共聚物纳米粒子可明显诱导细胞凋亡,且有明显的量效和时效关系,质量浓度越高、时间越长效果越明显。