蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响

目的 研究PAR-2激动剂(tc-LIGRLO-NH2与SLIGKV-NH2)和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为100μmol／mL时,tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2可分别引起比基础分泌量多出2．5倍和2倍的组胺释放,而反PAR-2激动剂tc-OLRGIL-NH2和VKGILS-NH2在实验浓度高至300μmol／mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在1．0～100μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2的作用从加样后1min开始,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后,几乎失去了对tc-LIGRLO-NH2、SLIGKV-NH2和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR-2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂,其在人结肠炎症性疾病中起一定的作用。     

IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达

目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响.方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后, 在不同时间点, 用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM), 在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、 PAR-2、 PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况.结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达, 上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达, IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、 3、 4 mRNA的表达, 下调PAR-2 mRNA的表达.结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关.     

WWOX基因在肺腺癌中表达及对A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究WWOX基因在肺腺癌组织的表达及在肺腺癌细胞系A549细胞增殖和凋亡的作用,探讨肺腺癌与临床病理特征之间的关系。方法应用免疫组化技术检测62例肺腺癌组织WWOX蛋白的表达;将携有WWOX基因的表达载体转染肺腺癌细胞系A549细胞,用Western blot法检测A549细胞WWOX蛋白的表达情况;运用细胞计数法检测细胞的增殖情况;流式细胞仪观察其对A549细胞凋亡的影响。结果肺腺癌组中WWOX的阳性表达率为45.2%,明显低于癌旁正常组织(82.9%,=0.000)。WWOX在肺腺癌的表达与分化程度(=0.023)、TNM分期(=0.007)、远处转移有关(=0.009),与患者的性别、年龄以及肿瘤的大小无关(0.05)。A549细胞转染WWOX基因后,WWOX蛋白表达明显高于空载质粒组及未转染组(未检测到WWOX蛋白的表达);生长曲线可见pcDNA3.0-WWOX转染组的A549细胞的增殖速度比pcDNA3.0组和未转染组明显下降;流式细胞仪分析表明pcDNA3.0-WWOX转染组的凋亡率明显高于pcDNA3.0空载体组。结论 WWOX的表达能够抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。     

鞘内注射丹参酮ⅡA对CCI大鼠脊髓内TAK1及IL-1β、IL-6表达的影响

目的研究丹参酮IIA对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内TAK1及IL-1β、IL-6表达的影响,探讨丹参酮IIA的镇痛机制。方法 60只SD雄性大鼠随机分为假手术组(sham组)(n=20)和模型组(n=40)。模型组又分为生理盐水组(NS组)和处理组(TSA组)(n=20)。模型组在手术当日及术后每日在模型大鼠鞘内注射生理盐水0.1ml和丹参酮IIA 20mg/kg,连续注射10 d。检测各组大鼠在手术前及术后的机械痛阈和热痛阈;术后第10天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内TAK1的表达;采用ELISA方法测定各组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6表达。结果与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,TAK1的表达增多,脊髓组织中IL-1β、IL-6的含量均增高;与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内TAK1的表达下降,脊髓组织中IL-1β、IL-6的含量均减少,差异均有明显统计学意义。结论鞘内注射丹参酮IIA对坐骨神经慢性压迫模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内TAK1及IL-1β、IL-6的表达有关。     

肺炎支原体诱导A549细胞胞内TLR2的表达

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）是能独立存活的病原微生物,其通过黏附、定植于呼吸道上皮细胞进而引起呼吸道的炎性反应.Mp的感染存在着复杂的免疫学机制,国外近来研究显示,Toll样受体2（TLR2）在启动机体天然免疫系统并介导支原体感染所致的炎性反应中起了重要作用.     

IL-18、MMP-22及MMP-29与老年冠心病冠状动脉病变的相关性研究

目的:探讨冠心病患者血浆IL-18、MMP-22和MMP-29的表达水平与老年冠心病(CHD)冠状动脉病变的相关性.方法:选择120例行冠脉造影检查的老年患者,根据CAG检查和临床诊断结果将患者分为冠心病(CHD)组(76例)和非冠心病(NCHD)组(44例).分析血浆IL-18、MMP-22和MMP-29在CHD不同...     

激活素A对小鼠巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的：探讨激活素A对小鼠腹腔巨噬细胞活性的调节作用及其机制。方法：免疫组化观察激活素ⅡA型受体（ActRⅡA）在巨噬细胞上的表达，ELISA法检测小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中IL-1β分泌水平，采用RT-PCR检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-1βmRNA、ActRⅡA mRNA及激活素受体相互作用蛋白2（ActRIP2）mRNA的表达。结果：激活素A可以促进原代培养小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1β mRNA表达，并呈剂量依赖关系；激活素A对LPS活化的小鼠原代培养腹腔巨噬细胞分泌IL-1β及IL-1βmRNA的表达具有抑制作用，并呈剂量依赖关系。免疫组化染色证实ActRⅡA在巨噬细胞中高表达，激活素A对巨噬细胞表达ActRⅡA mRNA具有促进作用，采用抗ActRⅡA抗体可以阻断激活素A促进IL-1βmRNA表达作用，进一步检测表明激活素作用后ActRIP2 mRNA表达亦增加。结论：激活素与LPS比较可能是IL-1分泌的弱激动剂，激活素单独应用显示刺激IL-1分泌作用，而与LPS共同作用，则呈现抑制LPS强刺激作用；激活素可能通过ActRⅡA-ActRIP2受体信号传导途径，调控巨噬细胞IL-1β分泌与合成。     

BHD基因在人肺腺癌A549细胞的表达及其对A549细胞转移能力的影响

目的 了解BHD基因在肺癌细胞中的表达部位及其在影响肺癌细胞转移、运动方面的作用. 方法 制备BHD真核表达质粒,转染肺腺癌细胞,用免疫荧光法检测Folliculin蛋白在肺癌细胞中的表达位置;筛选sRNAi片段,选取有效抑制片段转入肺癌细胞,与转入BHD质粒的肺癌细胞对比,用Transwell实验了解BHD基因对肺癌细胞运动方面的影响. 结果 转入BHD质粒后,A549细胞质内出现明显的Folliculin蛋白表达,Transwell实验显示,转入BHD质粒能抑制A549细胞的侵袭能力,而转入BHD siRNA片段的A549细胞运动迁移能力升高.结论 BHD表达产物Folliculin蛋白在肺癌细胞的胞质内表达,BHD可能是肺癌转移抑制基因.     

赫赛汀对吉非替尼诱导肺癌A549细胞凋亡的影响

目的： 研究吉非替尼与赫赛汀联合应用对人肺腺癌A549 细胞凋亡的影响。方法: 应用MTT法,流式细胞仪Annexin V－PI 双标法、DAPI荧光染色等多项方法,体外研究吉非替尼与赫赛汀联合对A549 细胞的促凋亡作用。结果: 吉非替尼与赫赛汀单独应用及联合应用均可以明显抑制人肺腺癌A549细胞的生长，促进细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性,2者联合作用人肺腺癌A549 细胞24 h、48 h、72 h 的凋亡率显著高于单用吉非替尼或赫赛汀组(P<0.05),2者呈现出相加的抗瘤效果。结论: 吉非替尼与赫赛汀联合应用在体外对人肺腺癌A549 细胞有明显的促凋亡作用。     

微小RNA-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA (miRNA)-622对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法 培养A549细胞,分为miRNA-622组和miRNA-622阴性对照组 (NC组),分别转染miRNA-622模拟物及miRNA-622阴性对照。使用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miRNA-622组和NC组miRNA-622的表达水平,采用噻唑蓝实验检测两组细胞增殖能力,采用流式细胞学技术检测两组细胞凋亡率。结果 miRNA-622组和NC组细胞中miRNA-622的相对表达水平分别为0.993±0.058、0.631±0.053,OD值分别为0.631±0.049、0.922±0.058,细胞凋亡率分别为12.230%±0.176%、7.400%±0.208 %,miRNA-622组miRNA-622的相对表达水平和细胞凋亡率均高于NC组,而OD值低于NC组,差异均有统计学意义(t=23.650、17.710、3.822,P值均<0.01)。结论 miRNA-622可抑制A549细胞增殖,促进A549细胞凋亡。     

水凝胶上培养的原代人脐静脉内皮细胞感染登革病毒Ⅱ型对细胞产生 IL-29的表达影响

目的：利用水凝胶（ hydrogel ）模拟人血管内皮细胞基底膜弹性硬度,以登革病毒2型（DENV-2）NGC株感染接种于水凝胶为基底的原代人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotheli-al cells,HUVECs）,观察HUVECs在不同弹性硬度材质上培养产生IL-29的情况。方法分离培养原代HUVECs,将细胞接种于水凝胶,以MOI（multiplicity of infection）＝10的DENV-2感染原代HUVECs,流式细胞术检测48 h细胞凋亡率及病毒感染率,并送检mRNA基因表达谱芯片,通过实时荧光定量PCR及双抗体夹心ELISA法检测IL-29的表达情况。结果 DENV-2感染原代HUVECs 48 h,培养于水凝胶上的细胞的病毒感染率较低,细胞凋亡率与未感染组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）,基因芯片检测发现IL-29的产生与普通塑料培养瓶接种的脐静脉内皮细胞受到DENV-2感染后存在差异,实时荧光定量PCR和双抗体夹心ELISA法检测IL-29的表达,差异均存在统计学意义（P＜0．05）。结论水凝胶模拟人血管内皮细胞基底膜硬度,用DENV-2感染接种于水凝胶上脐静脉内皮细胞,基因芯片检测发现IL-29的产生,与体外正常培养条件下受到DENV-2感染后存在差异,水凝胶的建立可能为DENV发病机制的研究提供一个新的模型。     

IL-24基因修饰的树突状细胞促进CIK细胞对肺癌细胞的杀伤作用

Objective To study the antitumor effect and mechanism of co-cultured cytokine-induced killer(CIK) cells and autologous DC modified with IL-24 gene on A549 cells in vitro. Methods DC and CIK cells were prepared routinely from human peripheral blood mononuclear cells(PBMC). Recombinant adenovirus vector pAdEasy-1-pTrack-CMV-IL-24 was extracted from DH5α, it was lineared with Pac I and transfected into A293 cells, and then the IL-24 recombined adenovirus(Ad-IL-24) was obtained. Ad-IL-24 was used to infect DC. The cells obtained were named DC-IL-24. RT-PCR and ELISA were used to evaluate the expression of IL-24 gene in transfected DC. The phenotypes change of DC were identified by flow cytometry analysis, the concen-tration of IL-12 and TNF-α in supernatant of DC were determined by EIJSA. The ability of CIK producing per-forin was measured by homolysis method. FCM was used to determine the cytotoxicity of cocultured CIK cells and autologous DC modified with IL-24 gene to A549 cells. Results We obtained the high titre of Ad-IL-24.IL-24 gene was transfered into DC successfully via Ad-IL-24. The green fluorescence was observed on DC by fluorescence microscope. The expression rate of CD80, CD83, HI.A-DR, CD40, CXCR4 on DC-IL-24 was sig-nificantly increased compared with that of the control group. DC-IL-24 produced markedly higher levels of IL-12 and TNF-α as compared with DC. DC-IL-24 can enhance the ability of CIK cells producing perforin. On com-parison with non-transfected DC co-cultured with CIK cells, transfected DC co-cultured with CIK cells had a sig-nificantly higher lytic activity against A549 cells. Conclusion IL-24 gene modification can enhance the anti-tu-moral immunity of DC. The mechanism of which might be related to the increased secretion of IL-12 and TNF-α, up-regulation expression of co-stimulatory molecules and MHC Ⅱ class molecules on DC, promoting the acti-vation and maturation of DC, and then enhancing CIK cells to generate specific anti-tumoral immunity.     

人白细胞介素29在cos-7细胞中表达及其体外抗乙型肝炎病毒作用

目的：克隆人细胞因子IL-29全长cDNA及其在cos-7细胞中表达，并初步探讨表达产物体外抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：分离外周血单个核细胞；VSV感染后，提取总RNA，通过一步法RT-PCR获得IL-29全长cDNA。DNA测序正确后，将IL-29 cDNA的编码框序列构建到真核表达载体psectagB/His-myc中。氨苄青霉素板筛选及PCR鉴定，挑出阳性克隆进行扩增、转染cos-7细胞并经潮霉素及有限稀释法筛选稳定表达克隆。SDS-PAGE、Western blot鉴定，Ni2＋亲和层析分离纯化得到主带分子量为33000组氨酸标签重组人IL-29融合蛋白。体外以HepG2.2.2.15为靶细胞观察rhIL-29对HepG2.2.2.15培养上清液中HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）影响。结果：成功获得人IL-29全长cDNA并在cos-7细胞中稳定表达。SDS-PAGE、Western blot分析显示表达的rhIL-29融合蛋白为几个蛋白质区带，分子量在20000-33000之间纯化的rhIL-29融合蛋白，主带在33000附近。rhIL-29融合蛋白具有抑制HBsAg及HBeAg分泌作用并且具有剂量效应，抑制率分别达85%。结论：获得具有生物活性的rhIL-29融合蛋白。rhIL-29融合蛋白在体外具有抑制HepG2.2.2.15细胞分泌HBsAg及HBeAg作用。     

二氢杨梅素对肺癌A549细胞凋亡的作用

目的 探讨二氢杨梅素（DMY）对肺癌A549细胞的诱导凋亡作用。方法 以肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法研究DMY对A549细胞的抗肿瘤作用,并进一步通过流式细胞术检测DMY对A549细胞的凋亡作用,免疫印迹法（Western blotting）检测促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2表达水平,进一步探讨其机制。
结果 DMY浓度越大,对A549细胞的抑制作用越明显,48h的IC50为64.45g/L;流式细胞术显示,随着DMY浓度的增加A549细胞凋亡也逐渐增加;Western blotting结果显示,DMY可诱导A549细胞中凋亡因子Bax蛋白表达增加,同时抗凋亡因子Bcl-2蛋白表达减少,尤其高浓度组改变明显。
结论 DMY可以在体外诱导A549细胞凋亡。     

二氢杨梅素预干预对人肺癌A549细胞放射治疗的敏感性作用

目的探索二氢杨梅素(DMY)对人肺腺癌A549细胞放射治疗敏感性的调节作用,及新的肺癌放疗增敏剂。方法采用MTT法和集落形成实验分别寻找二氢杨梅素对A549细胞的短期和长期20%抑制浓度(IC20)作为放疗增敏浓度;流式细胞术周期实验检测二氢杨梅素(IC20)作用不同时间对A549细胞周期时相的改变;集落形成实验检测二氢杨梅素(IC20)预干预24h后再照射对肺癌A549细胞放疗敏感性的影响。结果 MTT和集落形成实验均显示,DMY对A549细胞以浓度依赖形式存在短期和长期的抑制作用,MTT实验时IC20为40mg/L,集落形成实验时IC20为7mg/L;流式细胞术周期实验结果显示,二氢杨梅素作用24h时G2/M期比率增高明显(P0.05);集落增敏实验结果显示,DMY预处理24h后对A549细胞的放射治疗并未见到显著增敏作用(P0.05)。结论二氢杨梅素体外存在抑制A549细胞增殖的作用,其效应与药物浓度和细胞初始接种密度有关;二氢杨梅素作用24h可以使A549细胞G2/M期比率明显增加,但是单纯通过调整放疗前细胞周期时相并未见到明显的放疗增敏作用。     

Silica nanoparticles as an enhancer in the IL-1β-induced inflammation cycle of A549 cells

Objective: The industrial production and combustion of coal can produce silica nanoparticles (nano-SiO₂). It enters the human body mainly through the respiratory tract and exerts a toxic effect. However, whether nano-SiO₂ can increase the IL-1β-induced inflammatory expression in A549 cells has not been tested. Therefore, the synergistic toxicity of nano-SiO₂ and IL-1β to A549 was observed in our study.

Materials and methods: We exposed A549 cells to nano-SiO₂ (0, 100, 500, and 1000?μg/ml) for 12 and 24?h. The effect of nano-SiO₂ on the viability of A549 cells was observed by the CCK-8 method. The A549 cells were exposed to nano-SiO₂ (1?mg/mL) and cytokine IL-1β (10?ng/mL) for 4?h, and we detected the expression of IL-1β and IL-6 cytokines by real time quantitative polymerase chain (RT-qPCR) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The expression of β-Actin, I-κB, phospho-ERK_1/2 (P-ERK_1/2), total-ERK_1/2 (T-ERK_1/2), phospho-JNK (P-JNK), total-JNK (T-JNK), phospho-P38 (P-P38), and total-P38 (T-P38) in A549 cells was detected by the Western Blot method.

Results: The nano-SiO₂ treatment resulted in a time-dependent decrease in the viability of A549 cells. The synergistic effect of nano-SiO₂ and IL-1β was observed on the new production of IL-1β and IL-6 in A549 cells. The Western blot results showed that nano-SiO₂ can increase the expression of IL-1β and IL-6 by promoting the phosphorylation of ERK_1/2 and elevating the phosphorylation of I-κB by IL-1β. IL-1β and IL-6 were induced by nano-SiO₂, and the IL-1β treatment with 20?μM of I-κBα phosphorylation inhibitor (PD98059) and 20?μM of ERK_1/2 inhibitor (BAY11-7082) for 1?h was significantly lower than that of the control group in A549 cells.

Discussion and conclusion: These results indicated that nano-SiO₂ had a toxic effect on A549 cells, and this effect could increase IL-1β on the A549 cell-induced inflammatory response. The results suggested that the release of IL-1β and IL-6 in A549 was enhanced by the synergistic IL-1β-induced phosphorylation of ERK_1/2 and I-κB. This process is similar to a snowball, and it is possible that IL-1β is continuously produced and repeatedly superimposed in A549 cells to produce an inflammatory effect; then, a vicious circle occurs, and an inflammatory storm is accelerated.     

川楝子水提物对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

目的:研究川楝子水提物对肺癌A549细胞的作用,初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测川棟子水提物对A549细胞的增殖抑制率,同时观察细胞形态变化;qPCR法检测川楝子水提物作用后p53、Bax、Bcl-2、Bad和Bcl-xl等在mRNA水平的相对变化。结果:川楝子水提物可抑制肺癌A549细胞的增殖,其抑制率与作用时间和作用浓度呈正相关;实验组较对照组p53的mRNA表达量上调,Bax和Bad的mRNA表达量上调,Bcl-2和Bcl-xl的mRNA表达量下调。结论:川楝子水提物可抑制A549细胞增殖,可能与其激活P53基因和Bcl-2家族诱导细胞凋亡有关。     

I. hepatitis E virus (87A strain) propagated in A549 cells

A strain of hepatitis E virus (HEV), the 87A strain isolated in 2BS cells from the feces of a patient with hepatitis E, has been reported previously. In this study, the 87A strain was propagated in A549 cells, and the marked cytopathic effect (CPE) appeared in the infected monolayer cells. The size of this virus is about 30 nm in diameter. Furthermore, HEV-RNAfrom the supernatants of the virus of different passages was detected by polymerase chain reaction (PCR) amplification using ET1 .1 HEV primers. A band of HEV for 239 bp from PCR products was revealed by electro-phoresis. PCR products of the fourth passage were sequenced. These results show that the 87A virus replicates in the A549 cell line. © Wiley-Liss, Inc.     

川陈皮素对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用

目的:观察川陈皮素(5,6,7,8,3′4′-hexamethoxyflavone)对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用并研究其作用机制。方法:以不同浓度的川陈皮素作用于A549细胞,分别用MTT法、细胞生长曲线研究川陈皮素对A549的增殖抑制作用,Giemsa染色观察细胞形态变化。结果:MTT提示川陈皮素浓度为4mg·L-1~128mg·L-1时,对A549的48、72小时抑制率为15%~85%,48小时IC50为25.7mg·L-1,72小时IC50为16.7mg·L-1;生长曲线提示川陈皮素对A549细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Giemsa染色后细胞出现明显的凋亡形态学变化。结论:川陈皮素对非小细胞肺癌A549细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是诱导细胞凋亡。     

二甲基亚砜通过激活caspase-3以及抑制PARP-1引起A549细胞凋亡

目的 检测肺上皮癌细胞（A549）细胞经二甲基亚砜（DMSO）诱导发生凋亡后聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（PARP-1）的活性是否受到抑制。方法 通过MTT法检测caspase-3的活性升高以及TUNEL等方法验证二甲基亚砜可引起A549细胞凋亡后,采用western blotting 验证PARP-1是否被切割成俩个片段。结果 DMSO可诱导A549细胞发生凋亡,凋亡过程中caspase-3的活性上调,其下游底物PARP-1大量被切割成小片段。结论 DMSO诱导的A549细胞凋亡受到caspase-3-PARP-1信号分子的调节。