中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响

目的:观察中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞凋亡的影响. 方法:采用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP )建立PC12细胞凋亡模型,应用血清药理学方法,结合光镜荧光染色核形分析、透射电镜、流式细胞仪等检测,研究中药兔血清对PC12,细胞凋亡的保护作用. 结果:含1/2和2倍等效剂量组中药兔血清(ig剂量为肉苁蓉生药1.6, 3.2和6.4 g/kg)处理的PC12细胞经MPP 作用后,凋亡率分别为16.0%, 10.2%和2.8%,与空白组(18.6%)相比差异显著(P<0.05). 结论:肉苁蓉具有拮抗MPP 导致的细胞凋亡作用.     

人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinum,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡是否具有保护作用。方法采用MPP+诱导的具有多巴胺能神经元特性的PC12细胞凋亡作为帕金森病(Parkinson disease,PD)的体外模型。实验分正常对照组、MPP+损伤组、人参皂苷Rg1(10、20、50μmol/L)3个浓度预处理组。用MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段,蛋白质印迹法分析细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白含量。结果 10、20、50μmol/L人参皂苷Rg1对MPP+诱导的PC12细胞具有一定的保护作用。与MPP+损伤组[(52±4.7)%]相比,10、20、50μmol/L人参皂苷Rg1预处理细胞活力分别上升为(64±3.4)%、(72±5.2)%、(83±6.2)%(P<0.05或P<0.01)。经流式细胞术检测,正常组、MPP+损伤组、人参皂苷Rg1预处理组(10、20、50μmol/L)细胞凋亡率分别为1.8%、44.5%、32.9%、21.1%和14.2%。人参皂苷Rg1预处理后,细胞断裂的DNA片段明显减少。另外,蛋白质印迹分析也显示人参皂苷Rg1可抑制MPP+诱导的Cyt C的过表达。结论人参皂苷Rg1对MPP+诱导的细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用,其保护机制可能与下调线粒体内Cyt C的过表达有关。     

多巴胺诱发PC12细胞凋亡的研究

研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制 。方法：用脱氧核糖核酸标记法，借助荧光显微镜观察多巴胺对ＰＣ１２细胞凋亡的影响。     

川芎嗪对PC12细胞抗凋亡作用的实验研究

目的　探讨川芎嗪对多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法　用多巴胺 (DA)刺激PC12细胞使其发生细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测PC12细胞二倍体比率表征细胞凋亡率 ,用MTT法测定细胞活性 ,用Griess法间接测定NO的浓度 ,比较分析加入不同剂量的川芎嗪后对上述指标的影响。结果　加入 0 .3 0、0 .60mmol L的DA两组的PC12细胞的凋亡率、培养上清NO含量均显著高于无DA组 (P <0 .0 5 ) ,细胞活性显著低于无DA组 (P <0 .0 5 )。加入川芎嗪后 ,细胞凋亡率、NO含量均显著低于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )、细胞活性显著高于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )。结论　川芎嗪可抑制DA引起的PC12细胞凋亡 ,此作用可能与降低NO生成有关。     

Eldepryl prevents 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-induced nigral neuronal apoptosis in mice

Objective To study the apoptotic effects of 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydrop yridine (MPTP) on the nigral dopaminergic neurons of mice and 1-methyl-4-phen ylpyridium ion (MPP(＋)) on pheochromocytoma (PC12) cells, as well as the antagon ism of Eldepryl against MPTP’s apoptotic effect.Methods Three groups of C(57)BL mice were treated with MPTP, Eldepryl plus MPTP and normal saline, respectively, for 7 days before performing TUNEL (terminal deoxyn eucleotidyl transferase-mediated dUTP-x nick end labeling) and FACS (fluoresce nce activated cell sorting) analyses of neuronal apoptosis in the substantia nig ra. The same tests were employed in cell culture to examine apoptosis in PC12 c ells treated with MPP(＋), MPTP or PBS. Results Intraperitoneal administration of MPTP 30 mg/kg could induce nigral apoptos is, and oral use of Eldepryl prior to MPTP treatment could completely prevent the ni gral apoptosis caused by MPTP. MPP(＋), an intermediate metabolite of MPTP, coul d lead to the apoptosis of PC12 cells, whereas MPTP itself had no such effect on PC12 cells. Conclusions The experiment indicated that the neurotoxin, MPTP, might cause the death of nig ral neurons through a mechanism of apoptosis and this effect might be mediated b y its bioactive intermediate metabolite MPP(＋). Eldepryl could protect the neurotoxicity from MPTP.     

EGb对MPP^＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的 观察EGb对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的细胞。方法 MPP^ 诱导PC12细胞凋亡,AO／EB染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞。结果 EGb50、100μg/ml在6h、12h、24h可抑制细胞凋亡,而EGb25μg/ml则无效。结论 EGb在6h、12h、24h时呈剂量依赖性降低细胞凋亡率,提示EGb有可能通过抑制DA能神经元凋亡而相对增加DA含量。     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察姜黄素(Curcumin,Cur)对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机理。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),与单纯MPP+处理组比较,20μmol/L Cur和不同浓度的MPP+同时处理PC12细胞24h后,细胞存活率显著升高(P<0.01);一定浓度的Cur对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可使MPP+处理组细胞凋亡率下降(P<0.01);20μmol/L Cur可抑制MPP+引起的PC12细胞△Ψm降低及细胞内ROS含量增多。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除ROS有关。     

鱼藤酮致PC12细胞凋亡中Par-4蛋白的表达

 目的   探讨鱼藤酮致大鼠多巴胺能嗜铬细胞瘤（PC12）细胞凋亡中前列腺凋亡反应蛋白（Par-4）表达变化,为帕金森病（PD）的基因治疗提供新的靶点 方法 以1、5、10 μmol/L的鱼藤酮分别作用于PC12细胞6、24 h,采用MTT比色法检测细胞存活率;采用Western blot法筛选出Par-4表达改变明显的鱼藤酮浓度和作用时间,给予信号转导抑制剂,检测Par-4表达量的变化。  结果 1、5、10 μmol/L鱼藤酮干预后,PC12细胞出现同程度的受毒形态改变,6h后,10μmol/L组光密度比值显著升高（P＝0.029?646）;20μmol/L c jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制剂Ginestin预处理1h,光密度比值与单纯鱼藤酮作用组比较显著降低（P=0.0131）;24h后,PC12细胞的存活率降低显著,1、5μmol/L 2组光密度值均升高,与对照组差异有统计学意义(P=0.018461, P=0.043?415)。 结论〓〖HTK〗 鱼藤酮可诱导PC12细胞Par-4凋亡蛋白表达升高,具有时间和浓度依赖性,JNK通路参与其信号转导途径。     

铁皮石斛多糖对MPP+诱导的PC12

目的 观察铁皮石斛多糖对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）所致PC12细胞损伤的抑制作用及可能机制。 方法 实验分为对照组、MPP⁺损伤模型组、铁皮石斛多糖组（50、100、200和400 μg/mL）。MPP⁺损伤模型组细胞用含10 μmol/L MPP⁺的培养基处理细胞24 h;铁皮石斛多糖组细胞用含50、100、200和400 μg/mL铁皮石斛多糖的培养基预处理2 h后,再加入MPP⁺（10 μmol/L）处理细胞24 h;对照组细胞给予等量生理盐水处理。MTT比色法检测细胞存活率,检测细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结果 与对照组比较,MPP⁺处理显著降低了PC12细胞的存活率,显著升高了细胞培养液中LDH的水平和细胞中MDA的含量,显著降低了细胞中SOD的活性（均P<0.05）;与损伤模型组比较,200和400 μg/mL铁皮石斛多糖组PC12细胞的存活率显著升高,细胞培养液中LDH的活性和细胞中MDA的含量显著升高,细胞中SOD的活性显著降低（均P<0.05）。 结论 铁皮石斛多糖抑制了MPP⁺诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与铁皮石斛多糖抑制氧化应激有关。     

红景天苷对NaCN及缺糖诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究红景天苷对PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法:以NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞技术,考察红景天苷对细胞凋亡的保护作用;采用比色法测定Caspase活性、Western-blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,考察红景天苷抗凋亡的机制。结果:红景天苷可以有效地改善NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡,抑制Caspase活性,降低胞浆中细胞色素C的水平。结论:红景天苷可能通过线粒体途径抑制NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡的免疫组织化学及超微结构分析

目的 研究帕金森病（PD）多巴胺能神经元的死亡机制,方法在免疫组织化学基础上,采用流式细胞仪,电泳及电镜技术观察不同浓度多巴胺（DA）诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的超微结构及生化改变。结果 适当浓度DA可诱导PC12细胞凋亡,早期表现为线粒体结构及功能的改变并有抗凋亡蛋白bcl-2的达,后期电镜下可见亡特征性核结构改变及典型的DNA阶梯状电泳带,结论 细胞凋亡参与了PD的病变过程,线粒体在早期细胞凋亡中起着重要的调节作用。     

灵孢多糖对MPP+损伤PC12细胞的保护作用

[目的]观察灵孢多糖(GLPS)对甲基-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.[方法]将MPP+或GLPS加入体外培养的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元损伤模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力的变化;以乳酸脱氢酶(LDH)检测法检测培养上清液中LDH水平的改变;通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学法检测TH阳性细胞数及蛋白的表达.[结果]MPP+处理48 h后,细胞活力降至对照组的52%,经GLPS(100、200、300 μg/mL)预处理后,细胞活力明显提高,分别为65%,75%,79%(P＜0.05).MPP+处理48 h后,上清液中LDH水平较对照组明显提高,经不同浓度的GLPS预处理后,上清中LDH水平有所下降(P＜0.05),且TH阳性细胞数及表达强度明显高于MPP+组.[结论]灵孢多糖对MPP+诱导损伤的PC12细胞具有保护作用.     

多巴胺和谷胱甘肽对PC12细胞凋亡的影响

目的研究帕金森病（PD）黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法用脱氧核糖核酸（DNA）标记法,借助荧光显微镜观察多巴胺（DA）和还原型谷胱甘肽（GSH）对PC12细胞凋亡的影响。结果发现DA可诱发PC12细胞凋亡,适中浓度时（0．45mmol／L）PC12细胞凋亡数最多（凋亡率为48．7％±6．3％）;抗氧化剂还原型合胱甘肽（GSH）可部分阻止DA诱发的PC12细胞凋亡（P＜0．01）。结论凋亡参与了PD的病变过程,采用适当的抗氧化剂对于PD治疗具有积极的意义。     

银杏叶提取物对鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba leaves,EGB)对PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用细胞培养的方法,建立PC12细胞的鱼藤酮和1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP )损伤的模型.用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测胞外多巴胺(DA)水平.结果:同毒物组比较,EGB在0.35、0.70、1.40 mg/ml浓度下能减轻MPP 引起的PC12细胞损伤,在1.40 mg/ml浓度下能减轻鱼藤酮引起的损伤,明显提高细胞的存活率, 增高胞外DA水平:2 mmol/L MPP 和10 μmol/L鱼藤酮作用下胞外DA分别为(6.875±0.201)和(5.321±0.167) ng/ml,而1.40 mg/ml EGB分别与2 mmol/L MPP 或10 μmol/L鱼藤酮共同作用,DA升高至(7.595±0.139) ng/ml(P<0.05)和(6.917±0.201) ng/ml(P<0.01).结论:EGB对鱼藤酮和MPP 体外诱导PC12 细胞的损伤具有明显的保护作用.     

黄芪对锰致PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的:研究黄芪对锰致多巴胺能神经元PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法:体外染锰培养多巴胺能神经元PC12细胞,MTT比色法观察染锰PC12细胞的增殖情况;流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况及黄芪的拮抗作用。结果:锰对PC12细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量-反应关系;FMC和TUNEL检测结果均显示锰能诱导PC12细胞凋亡,并呈浓度依赖性,而加入黄芪后,各组凋亡率明显降低。结论:锰能够诱导PC12细胞凋亡,黄芪对锰诱导PC12细胞的凋亡有一定的拮抗作用。     

蒺藜总皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的: 探讨蒺藜总皂苷(GSTT)对过氧化氢(H₂O₂) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12) 凋亡的保护作用及其机制。方法：PC12细胞分为对照组、模型组及蒺藜总皂苷高（GSTT₁）、低（GSTT₂）剂量组。用H₂O₂刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测PC12细胞亚二倍体峰比率及线粒体膜电位的变化,免疫组织化学方法检测与凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax。结果：与模型组比较,蒺藜总皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高（P<0.001),凋亡比率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论：蒺藜总皂苷可抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。     

氯通道阻断剂DIDS对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法:取处于对数生长期的PC12细胞,随机分为对照组、模型组(用400 nmol/L H2O2诱导细胞凋亡)和DIDS组(H2O2+DIDS),培养12 h后,用MTT法测定各组细胞的存活率,Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:400 nmol/L H2O2可以明显诱导PC12细胞损伤,细胞存活率为(35.07±1.23)%;DIDS组细胞存活率明显高于模型组,且具有一定浓度依赖性(F=640.420,P<0.001)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,DIDS组Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:DIDS可能通过抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。     

高热预处理对大鼠嗜铬细胞瘤株细胞高温损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理(HPC)对大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞高温损伤的影响.方法 体外培养PC12细胞,分为四组,每组6株.正常对照组常规(37 ℃)培养;单纯高热预处理组(HPC组)将细胞置于42 ℃培养箱中1 h后常规培养;严重高温损伤组(LH组)将细胞置于46 ℃培养箱中2 h后常规培养2 h;高热预处理 严重高温损伤组(HPC LH组),细胞置于42 ℃培养箱1 h,恢复常规培养18 h,再于46 ℃下作用2 h后常规培养2 h.处理完毕后观察细胞形态学变化,MTT法测定细胞活力,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,了解细胞损伤.结果 HPC LH组形态明显优于LH组,MTT值极显著高于LH组(P＜0.01),LDH释放量极显著少于LH组(P＜0.01).结论 高热预处理对PC12细胞高温损伤产生保护作用.     

硒对微波辐照致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨硒对微波致神经细胞损伤的保护作用.方法以离体培养的PC12细胞为研究对象,采用65 mW/cm2的微波照射20 min进行致伤,以细胞存活率、MDA含量、SOD和GSH-Px活性为实验指标反映Na2SeO3预处理对微波辐照致PC12细胞损伤的影响.结果微波辐照后PC12细胞存活率明显降低,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性降低,而经过Na2SeO3预处理后再接受微波辐照,以上指标的变化明显减轻,并且高剂量Na2SeO3预处理作用更明显.结论硒可以提高PC12细胞的抗氧化能力,保护神经细胞对抗微波辐射导致的细胞损伤.