针刺对背根节神经元GDNF表达的影响

目的 研究部分去背根及针刺对背根神经节神经元胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）表达的影响。方法 制作猫备用背根模型并针刺备用根支配区的两组穴位，足三里和悬钟，伏兔和三阴交。针刺7d后取备用背根节用GDNF抗血清（1：1000）行免疫组织化学染色。分别计数各组大，中，小阳性神经元的数值。结果 非手术组GDNF阳性神经元数量为55％。其中大神经元为25％，中神经元为14％，小神经元为16％，术后非针刺组，阳性神经元总数为35％，较非手术组明显下降（P＜0．05），主要为大神经元（5％）减少，而阳性少（13％），小神经元（17％）数量变化不明显，但染色明显加深。针刺组GDNF阳性神经元数量又明显增加至90％，其中阳性大神经元28％，中神经元17％，小神经元45％。结论 背根节GDNF阳性大神经元数量在去部分背根术后7d显著下降，而针刺可逆转这种变化。GDNF阳性中，小神经元数量在术后7d并无明显变化，但针刺后表达显著增加。     

针刺对备用背根节神经元TrkC表达的影响

目的：探讨针刺对备用背根节（DRG）TrkC表达的影响。方法：将成年雄猫分为三组，即假手术组、单侧部分背根切除术组、单侧部分背根切除术并针刺组。通过免疫组化ABC法，观察各组L6DRG中TrkC免疫反应（TrkC-IR)神经元数量。结果：在假手术组TrkC-IR主要定位于L6DRG的大神经元及少数中小神经元胞浆内：部分背根切断后，TrkC-IR大神经元数量明显减少，而中小神经元数量则明显增多（P＜0．05）；针刺后，TrkC-IR大神经元数量较手术组又明显增多，且反应强度明显增加（P＜0．05），而对中小神经元TrkC阳性细胞数无明显影响。结论：针刺促进TrkC在大神经元的表达上调，提示TrkC可能与脊髓可塑性有关。     

部分背根切断对备用背根节神经元Bax、Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的　研究部分去背根对备用背根节 (DRG)神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达的影响。方法　制作单侧备用背根模型 ,3d、7d和 14 d后取备用背根节分别用兔抗 Bax、Bcl- 2及 Caspase- 3行免疫组化 ABC法染色 ,同时另设一正常对照组。分别计数单位面积内各组大、中小阳性神经元的数量。结果　正常组 Bax、Bcl- 2、Caspase-3阳性反应物主要分布于背根节的中小神经元和少数大神经元。术后 3d,Bax总阳性神经元数较正常组明显增加(P<0 .0 5 ) ,至术后 14 d Bax总阳性神经元数下降并恢复到正常水平。各时间段 Bcl- 2总阳性神经元数无显著性差异。3d组 Caspase- 3总阳性神经元数与正常组比较显著增加 (P<0 .0 5 ) ;7d组、14 d组与 3d组无显著差异。 Bax、Bcl- 2和 Caspase- 3阳性大神经元数在各时间段均无显著性差异 ,阳性中小神经元数的变化规律与总阳性神经元数的变化规律相同。结论　部分去背根主要对备用 DRG中小神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达有影响 ,三因子表达高峰可能在术后 3～ 7d。     

针刺对备用背根节神经元NP-1表达的影响

目的探讨针刺对备用背根节（dorsal root ganglion,DRG）NP-1表达的影响。方法将25只成年雄猫分为5组,即假手术组、单侧备用背根手术7d组、单侧备用背根手术并针刺7d组、单侧备用背根手术14d组和单侧备用背根手术并针刺14d组。通过免疫组化ABC法,观察各组备用DRG中NP-1的免疫反应神经元数目。结果在假手术组,NP-1阳性神经元主要定位于部分中小神经元及少数大神经元胞浆中;部分背根切断7d后NP-1阳性中小神经元数较假手术组明显减少（P〈0．05）,NP-1阳性大神经元数与假手术组者差异无统计学意义（P〉0．05）;而术后14d,NP-1阳性中小神经元数较7d组明显增多（P〈0．05）,且回升至假手术组水平,NP-1阳性大神经元数与手术7d组差异无统计学意义（P〉0．05）;针刺7d组较手术7d组NP-1阳性中小神经元数增多（P〈0．05）,但尚未回升至假手术组水平,NP—1阳性大神经元数减少（P〈0．05）;针刺14d组各类阳性神经元数目与手术14d组及针刺7d组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论针刺可上调NP-1在备用DRG中小神经元的表达。     

部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF—I表达的影响

目的探讨IGF—I在正常猫和部分去背根猫的L6双侧背根节和脊髓Ⅱ板层(L3、L6、L5)与背核(L3)表达及变化，以了解IGF—I与脊髓可塑性的关系。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组与14d组，每组5只。用兔抗IGF—I(1：200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧I板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中IGF—I的分布、含量。结果①IGF—I在去部分背根后7d，术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少(P＜0．05)，与非术侧比无差异(P＞0．05)；术后14d，术侧背根节IGF—I阳性神经元数比正常组亦显著减少(P＜0．05)，与术后7d组比无差异(P＞0．05)，较非术侧者明显减少(P＜0．01)。②各组L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层内IGF—I阳性神经元数均无明显差异(P＞0．05)。L。背核IGF—I阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加(P＜0．05)，且在术后14d时恢复至正常水平(P＞0．05)。结论部分背根切断导致双侧背根节IGF—I表达改变和脊髓背核IGF—I表达改变，提示IGF—I与脊髓可塑性有关。     

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的探讨NT-4在正常猫和部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层与背核表达的变化。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组和14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根),采用免疫组化ABC法,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果①去部分背根后7d,备用背根节(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少（P＜0．05),但较非术侧明显增多(P＜0．05);至术后14d,术侧备用背根节NT-4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少(P＜0．05)。②正常组、术后两时相L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层和L3背核内NT-4阳性神经元数均无明显变化。结论去部分背根主要导致备用背根节NT-4的表达发生变化。     

部分背根切断对备用背根节神经元CNTF、PDGF表达的影响

目的　研究部分去背根对备用背根节神经元睫状神经营养因子 (CNTF)和血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法　制作猫备用背根模型 ,分别在 3d、7d及 14 d时取备用背根节用 CNTF抗血清、PDGF抗血清行免疫组织化学 ABC法染色。分别计数各组阳性神经元总数以及大、中小阳性神经元的数量。结果　两因子在备用背根节的大、中小神经元均有表达。 CNTF阳性神经元总数及中小阳性神经元数均在 3d时明显减少 (P<0 .0 5 ) ,7d、14 d时与正常比较无差异 ,大阳性神经元在各个时间段与正常相比无差异。PDGF阳性神经元总数及中小阳性神经元数在 3d、7d时均较正常显著减少 (P<0 .0 5 ) ,14 d时与正常无差异 ,大阳性神经元数各个时间段均无差异。结论　部分背根切断对备用背根节内不同神经元表达 CNTF、PDGF有不同的影响。     

部分背根切断对备用背根节GDNF、FGF-2表达的影响

目的 探讨部分背根切断后不同时相备用背根节(DRG)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞神经生长因子(FGF-2)的表达变化。方法 15只猫分正常组、单侧部分背根切断7d及14d组,每组5只。分别于术后7d、14d处死动物,取正常组一侧、模型组手术侧L6DRG,用兔抗GDNF、FGF-2抗体行免疫组化ABC法染色,计数DRG内两因子阳性总细胞及阳性大、中小细胞的数量。结果 GDNF在正常猫DRG大、中小细胞均有分布;去部分背根后,两时相备用DRG GDNF阳性神经元总数均有下降且呈进行性递减。DRG阳性中小细胞数亦为术后两时相进行性下降,DRG阳性大神经元术后两时相均较正常组显著减少,但术后14d与术后7d组无显著性差异。FGF-2在脊髓DRG大、中小细胞亦有分布;去部分背根后7d,FGF-2阳性神经元总数下降,14d时又恢复至正常,中小细胞亦表现为先减少后上升的趋势,而大细胞则术后两时相与正常组间无显著差异。结论 去部分背根手术可致备用DRG中GDNF阳性神经元总数进行性下降,FGF-2表现为术后7d下降,14d时恢复。     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

部分背根切断及针刺促进备用背根节c-jun的表达

目的 探讨部分背根切断术及针刺对背根节（DRG）c-jun表达的影响。方法 针成年雄猫15只，分假手术组，手术组和术后针刺组，每组5只。手术组动物行单侧备用根术，术后针刺组动物经单侧备用根术后，针刺后肢手术侧L6脊神经分布区中的两组穴位，足三里和悬中：伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d，通过免疫组化ABC法，用c-jun特异抗体（1:1000,Santa Cruz)对切片进行染色，DAB呈色。观察并测量DRG中c-jun阳性神经元的分布，数量及反应强度。结果 在假手术组DRG中，只有部分神经元染色。手术组c-jun阳性神经元的数值较假手术组显著增多（P＜0．05），其免疫反应水平较假手术组，显著上升（P＜0．05）。术后针刺组较手术组的c-jun免疫反应强度增强，而阳性神经元的数量没有显著差异。结论 部分背根切断后备用DRG神经元中c-jun的表达增加，针刺促使c-jun的表达进一步上调。     

部分去背根猫Sema3A及其受体NP-1在脊髓和背根节的表达

目的研究部分去背根对神经生长抑制因子Sema3A在脊髓及其受体NP-1在备用背根节内表达的影响。方法建立猫的单侧备用背根模型,分别在术后7d、14d取L3、L5、L6脊髓节段及手术侧L6背根节进行免疫组织化学ABC法染色,同时设置正常对照组。脊髓背角内检测Sema3A免疫阳性产物的平均光密度值(OD值),背根节内计数NP-1阳性中小神经元数。结果在L3脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.25±0.14)、14d(0.27±0.09)较正常对照组(0.37±0.87)减弱(P<0.05);在L5脊髓节段,Sema3A的表达术后7d(0.26±0.11)较正常组减弱(P<0.05),术后14d(0.33±0.09)时有所恢复;L6脊髓节段各组Sema3A的表达无明显变化。背根节内,术后7dNP-1阳性中小神经元数(30.85±10.26)较正常组(45.06±12.47)减少(P<0.05),14d时阳性中小神经元数(40.73±12.25)较7d时有所增加(P<0.05)。结论脊髓部分去背根后,Sema3A及其受体NP-1表达的时空变化可能与脊髓损伤后可塑性有关。     

针刺对备用根猫背根节神经元IGF-Ⅰ表达的影响

目的观察胰岛素样生长因子-I（IGF—I）在正常猫、部分去背根猫及针刺部分去背根猫的L6手术侧背根节（DRG）表达的时空变化，以了解IGF—I与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组、备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根手术，即切除一侧L1～L5、L7～S2背根节，保留L6为备用根）、针刺备用根术后7d组与14d组（动物行单侧部分去背根术后针刺L6脊神经外周支配区内的两组穴位）。动物于术后7d、14d分别处死，取各组（手术侧）L。背根节，-20℃恒冷箱切片，片厚20μm，用兔抗IGF—I（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节IGF—I阳性神经元的分布、含量及时空变化。结果针刺备用根7d组，DRGIGF—I阳性神经元数较术后7d组明显增加（P〈0．05），但仍低于正常水平；针刺14d，DRG阳性神经元比术后14d亦增多（P〈0．01），且恢复至正常水平。与针刺7d组比较，DRGIGF—I阳性神经元在针刺14d时明显增多（P〈0．05）。结论针刺可增加针刺侧DRG内IGF—I阳性中小神经元数。提示针刺后IGF—I在背根节的表达变化可能与针刺促进脊髓可塑性有关。     

外周支及中枢支切断对背根节BDNF和NT—3表达的影响

OBJECTIVE: To explore the expression of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and neurotrophin-3(NT-3) in dorsal root ganglion (DRG) following peripheral and central axotomy. METHODS: Fifteen male adult cats were divided into intact group, peripheral axotomy group and central axotomy group. The ten cats of the latter two groups were subjected to unilateral peripheral cut and central processes cut respectively. The animals were allowed to survive 4 days long; L5 DRG was taken from each animal and made into frozen sections 20 microns thick. The sections were stained using antisera of BDNF and NT-3 respectively by immunohistchemical ABC method. The neuronal numbers of BDNF and NT-3 of the three groups were counted and compared. RESULTS: The positive products of BDNF were mainly distributed in small to medium sized neurons (13-57 microns) while those of NT-3 were mainly in large sized neurons (57-100 microns). The neuronal numbers of BDNF and NT-3 in peripheral and central axotomy groups (24.1 +/- 3.5, 29.4 +/- 5.2; 19.4 +/- 2.4, 20.2 +/- 1.9) increased significantly than those of intact group (12.1 +/- 2.2, 13.3 +/- 2.9), P < 0.01. And the neuronal numbers of BDNF and NT-3 in peripheral axotomy groups were more than those of central axotomy group(P < 0.05). CONCLUSION: The results indicate that peripheral axotomy and central axotomy lead to the increase of the expression of BDNF and NT-3 in DRG neurons. And the effect of peripheral axotomy is greater than that of central axotomy.     

部分去背根促进神经营养因子在初级感觉神经元顺行转运的研究

目的探讨部分去背根是否促进BDNF、NT-3和GDNF在初级感觉神经元顺行转运。方法将5只成年猫行单侧部分背根切断术,切除一侧的L1～L5,L7～S2背根神经节(DRG),保留同侧L6DRG为备用根,在L6背根距DRG1cm处捆绑双侧背根。术后3d取两侧L6背根制作20μm厚冰冻切片,分别用BDNF、NT-3、GDNF抗血清按免疫组织化学ABC法染色。观察实验侧和对照侧捆绑背根部位的近DRG端和近脊髓端各因子的免疫反应强度。结果对照侧捆绑处两端NT-3、GDNF的免疫反应强度均为弱阳性反应,BDNF捆绑处近DRG端的免疫反应( )较近脊髓端者强( )。实验侧捆绑处近DRG端。BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应( )较捆绑处近脊髓端强,且较对照组近DRG强。结论部分去背根动物背根近DRG端BDNF、NT-3和GDNF的免疫反应强度增加可能提示部分去背根可促进BDNF、NT-3、GDNF从备用背根节神经元顺行转运进入脊髓。     

脑源性神经营养因子在猫备用背根节的表达变化

为探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）在备用背根节（ＤＲＧ）的表达变化情况,对２０只成年雄性家猫（其中１５只行单侧Ｌ６备用根手术后分别存活３、６、１２天）Ｌ６ＤＲＧ行ＢＤＮＦ免疫组化染色。结果：①正常猫Ｌ６ＤＲＧ神经元以胞体直径３２μｍ和４４μｍ为分界划分出大中小三类;②正常Ｌ６ＤＲＧ内有５０．８７％的神经元呈ＢＤＮＦ阳性反应,备用根手术侧其ＢＤＮＦ阳性神经元数量增多,反应增强,以术后６天变化最显著     

针刺对神经营养素3在脊髓可塑性中表达的影响

目的：探讨针刺对神经营养素3（NT3）在脊髓可塑性中表达的影响。方法：用NT3抗血清和NT3 cRNA探针，以免疫组化和原位杂交技术观察针刺前后备用背根节及脊髓Ⅱ板层中NT3表达的变化。结果：针刺侧备用背根节（DRG）NT3及其mRNA阳性大神经元（＞57um)和小神经元（P＜42um)百分数均较非针刺侧者明显增多（P＜0．05），此外，脊髓针刺侧Ⅱ板层NT3阳性神经元及胶质细胞百分数针刺侧亦较非针刺侧明显增多（P＜0．05），但两侧均未见NT3 mRNA的杂交信号。结论：针刺促进脊髓可塑性可能与DRG大，小神经元表达NT3和脊髓Ⅱ板层NT3阳性神经元和胶质细胞百分数的增多有关。     

猫部分背根切断后背根节一氧化氮合酶的表达变化

目的 了解一氧化氮合酶(NOS)在背根损伤的背根节及邻近未受损之背根节中表达的变化。方法 采用部分去背根传入动物模型,通过免疫组织化学ABC法,观察猫背根节中nNOS及eNOS同工酶阳性免疫产物的分布、阳性神经元的数量及变化。结果 猫背根节中nNOS阳性反应物主要分布于小神经元中;背根被切断的L。背根节及邻近完好的L。备用背根节中nNOS阳性小神经元数量较非术侧均有增加;eNOS在成年猫背根节神经元中未见表达。结论 在背根节神经元中表达的nNOS及由nNOS催化产生的NO可能与神经损伤和修复的生理病理过程有关。     

眼镜蛇毒NGF对去部分背根后备用背根节内GAP-43表达的影响

目的 探讨从眼镜蛇毒分离纯化出的神经生长因子(NGF)对去部分背根猫备用背根节(DRG)内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 对45只成年雄性家猫切除一侧L1～L5、L7～S2 DRG,保留L6 DRG及背根,随机分为小剂量蛇毒NGF组(1 μg/kg)、大剂量蛇毒NGF组(2 μg/kg)、生理盐水对照组(0.1 mL/kg),每组15只.术后损伤背髓局部即刻给予蛇毒NGF或生理盐水,分别于术后3、6、12d(存活12d的动物术后第6d再从椎间隙内注射上述剂量蛇毒NGF或生理盐水1次)处死动物.对L6备用DRG作GAP-43免疫组织化学检测,计数各组术侧GAP-43阳性大、中小神经元数量.结果 GAP-43表达主要分布于DRG大神经元的胞核和中小神经元的胞浆.治疗组和对照组术后3d在术侧即可见到GAP-43阳性反应的大、中小神经元,6d达高峰,第12d有所下降;其中,中小神经元的变化尤为明显.治疗组术侧GAP-43阳性中小神经元数量多,反应强,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中大剂量蛇毒NGF组在各时间点阳性中小神经元的数量增多更为明显,与小剂量蛇毒NGF组相比差异有统计学意义(P＜0.01); 而不同时相各组术侧GAP-43阳性大神经元数量变化不明显.结论 外源蛇毒NGF可能通过上调备用根DRG内中小神经元GAP-43的表达而发挥促进备用根轴突再生出芽的作用; 其再生的强弱与蛇毒NGF的治疗剂量有关.     

封闭内源性NT-3在脊髓损伤后期神经元有髓神经纤维出芽中的作用

目的 探讨成年猫脊髓损伤后期内源性Neurotrophin-3 (NT-3) 对脊髓背根节(DRG)大型感觉神经元功能修复的作用。方法 切除猫L₁-L₅、L₇-S₂ DRG,术后随机行NT-3抗体封闭处理,2个月后行形态学示踪和免疫组化、酶组化等比较分析。结果 NT-3阳性神经元在DRG和脊髓的分布和损伤后变化与既往研究一致,霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶复合物(CB-HRP)示踪显示,手术组DRG感觉性大神经元中枢投射轴突终末集中分布在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ 板层内侧,其有髓神经纤维终末再生出芽点密度高于对照组,NT-3抗体封闭组轴突再生较手术组显著降低。结论 脊髓损伤后期修复中,内源性NT-3能促进损伤脊髓和感觉神经元的形态和功能修复,有利于脊髓后角Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ板层有髓神经纤维轴突终末的再生、出芽生长,其机制可能在于上调DRG大型神经元NT-3的表达,进而参与脊髓可塑性修复。     

神经营养因子3在电刺激治疗脊髓损伤中的作用

目的 探讨神经营养因子-3（NT-3）在成年猫脊髓损伤后电刺激治疗中的作用.方法 成年猫25只,雌雄不拘,随机分为左侧脊神经根去传入手术组（手术组,保留L6脊神经节）、手术＋电刺激组（电刺激组）、手术＋电刺激＋NT-3抗体封闭组（抗体封闭组）,2个月后对相应脊髓节段和保留脊神经节进行霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶复合物形态学示踪及免疫组化、酶组化染色观察并进行组间比较.结果 各组脊神经节感觉性神经元中枢投射轴突终末集中分布在脊髓后角Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ板层内侧,但电刺激组终末出芽标记点密度高于手术组,而抗体封闭组终末再生出芽能力相比电刺激组显著降低.结论 电刺激可能通过上调NT-3的表达促进损伤脊髓和感觉神经元的形态和功能修复,来参与脊髓可塑性过程.