幽门螺杆菌Tipα蛋白激活NLRP3炎性小体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

目的以佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞为模型,探讨NLRP3炎性小体在幽门螺杆菌Tipα蛋白诱导炎性细胞因子分泌中的作用。方法采用重组纯化Tipα蛋白刺激巨噬细胞,ELISA检测其促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-18的分泌水平。分别用NF-κB通路阻断剂PDTC和ROS清除剂NAC预处理细胞,ELISA检测预处理前后Tipα诱导细胞分泌促炎细胞因子水平差异,Western Blot检测NLRP3和Caspase-1分子的表达水平差异。结果 Tipα蛋白可显著诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β和IL-18;Tipα蛋白浓度为40μg/mL时,刺激细胞6h后,TNF-α、IL-18和IL-1β表达水平接近峰值(P0.05)。特异性阻断NF-κB信号通路后,巨噬细胞分泌的促炎细胞因子及Caspase-1和NLRP3分子的表达水平均较阻断前明显降低,ROS清除剂NAC预处理细胞后,巨噬细胞分泌的IL-18和IL-1β较处理前有明显降低(P0.05),TNF-α无明显变化;Western Blot结果显示Caspase-1和NLRP3分子的表达水平较阻断前均有明显降低。结论 Tipα能够促进巨噬细胞产生促炎细胞因子IL-1β和IL-18;NLRP3/Caspase-1途径可能参与了Tipα诱导的IL-1β和IL-18分泌。     

咖啡酸苯乙酯对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用

目的研究咖啡酸苯乙酯(CAPE)对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能机制。方法用不同浓度CAPE预处理THP-1源性巨噬细胞2 h,再用40 mg/L ox-LDL处理24 h,ELISA检测炎症因子TNF-α,IL-6以及MCP-1的分泌情况;用40 mg/L ox-LDL分别处理THP-1源性巨噬细胞不同时间,Westernblot检测细胞COX-2蛋白表达的情况;最后,采用Western blot分析CAPE对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达、IκB-α降解及其NF-κB核转位的影响。结果 40 mg/L ox-LDL可诱导THP-1源性巨噬细胞TNF-α,IL-6以及MCP-1分泌增多,而CAPE明显抑制了ox-LDL诱导的细胞炎症因子分泌,呈浓度依赖性(P<0.05);随着ox-LDL处理时间的延长,THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达逐渐增高,以24 h最为明显(P<0.05),而CAPE能抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞COX-2蛋白表达上调,并可抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞IκB-α降解及其NF-κB核转位。结论 CAPE对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌应具有抑制作用,作用机制可能与其抑制NF-κB激活,下调COX-2蛋白表达有关。     

甘草查尔酮A对THP-1巨噬细胞促炎因子表达的影响——依赖于TLR-4/NF-κB炎症信号通路

目的探讨甘草查尔酮A(Lico A)对脂多糖(LPS)诱导的人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞相关炎症因子表达的影响。方法用100μg/L佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h,使其分化为巨噬细胞后,分为空白组、LPS组和LPS+不同浓度Lico A组(20、10、5 mg/L)。用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量,实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)m NRA水平,采用Western blot检测TLR-4、NF-κB、IκB激酶(IKKα)、磷酸化IKB-α(p-IKB-α)、环氧合酶2(COX-2)和一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达水平。结果 LPS诱导THP-1巨噬细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高,Lico A可降低LPS诱导引起的IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高。LPS刺激后TLR-4 m NRA及蛋白表达增加,NF-κB活化,Lico A可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论 Lico A可通过TLR-4/NF-κB通路抑制LPS诱导的THP-1巨噬细胞炎性反应。     

肺炎支原体脂质相关膜蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制

目的研究肺炎支原体脂质相关膜蛋白对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响,初步探讨肺炎支原体引起动脉粥样硬化的机制。方法用ELISA检测肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导体外培养的巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用流式细胞术检测脂质相关膜蛋白诱导巨噬细胞的凋亡率;West-ern blot方法检测经脂质相关膜蛋白作用的巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响。结果脂质相关膜蛋白能促进巨噬细胞分泌高水平的TNF-α、IL-1β和IL-6和发生凋亡;并能使NF-κB从细胞浆中转位到细胞核内;吡咯啉烷二甲基硫脲能显著抑制巨噬细胞NF-κB的激活,且能抑制脂质相关膜蛋白诱导的巨噬细胞分泌细胞因子和发生凋亡。结论肺炎支原体脂质相关膜蛋白可通过激活NF-κB诱导巨噬细胞分泌前炎症细胞因子和促进凋亡,可能在动脉粥样硬化的发病中起重要作用。     

姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞炎症因子表达的影响及其机制

目的探讨姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞表达炎症因子的影响及其相关机制。方法用脂多糖联合干扰素γ诱导巨噬细胞构建炎症细胞模型并设立不同浓度的姜黄素干预组和对照组,通过实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附法测定不同分组中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素12B(IL-12B)三种炎症因子的表达。Western blot检测各组细胞TLR4-MAPK/NF-κB信号通路的表达。结果实时荧光定量PCR显示,与对照组相比,姜黄素对脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6及IL-12B m RNA的表达均具有明显抑制作用(P0.001),酶联免疫吸附法也证实姜黄素能抑制以上炎症因子的分泌(P0.01)。Western blot检测显示,姜黄素能明显抑制TLR4的表达及下游MAPK(p38、ERK1/2及JNK1/2)和NF-κB(IκBα及p65)通路的磷酸化(P0.05)。结论姜黄素可通过抑制TLR4-MAPK/NF-κB信号通路抑制脂多糖联合干扰素γ诱导的巨噬细胞中TNF-α、IL-6及IL-12B这三种炎症因子的表达。     

西红花酸对RAW264.7巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及机制探讨

目的探讨西红花酸对RAW264.7巨噬细胞株TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及其机制。方法常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,设计合成My D88 siRNA,用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,同时用西红花酸和My D88 siRNA进行干预。RT-PCR法测定RAW264.7巨噬细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1和IFN-β水平,Western blotting法测定NF-κB/p65和p-JNK1/2的水平,ELISA法检测IL-6和TNF-α水平。结果西红花酸可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1 mRNA的表达,下调p-JNK1/2和p65蛋白表达水平,降低IL-6、TNF-α的分泌水平;My D88 siRNA可以阻断西红花酸对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的作用,但西红花酸和My D88 siRNA对LPS刺激IFN-βmRNA表达的阻断作用不明显。结论西红花酸对RAW264.7巨噬细胞的TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用可能通过My D88信号通路实现。     

Toll样受体4和核因子-κB信号通路在溶血磷脂酸致动脉粥样硬化中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路在溶血磷脂酸(LPA)致动脉粥样硬化中的作用。方法以不同浓度LPA(0¹0μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(010μmol/L)刺激人单核细胞株THP-1细胞4h,以及LPA 1μmol/L处理THP-1细胞不同时间(0⁸h),荧光定量RT-PCR法测定TLR4mRNA表达,Western blot检测TLR4蛋白、细胞核NF-κB p65表达变化,ELISA法测定细胞因子TNF-α,随后在LPA 1μmol/L条件下,TLR4单抗干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的细胞核NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果当LPA 1μmol/L时,TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达较0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L LPA明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)。LPA 1μmol/L处理THP-1细胞4h时,THP-1细胞TLR4mRNA和蛋白及细胞核NF-κB p65表达水平明显高于0、1、2、8h(P<0.01)。与TLR4单抗干预前比较,TLR4干预后LPA诱导的THP-1细胞NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 LPA可显著上调THP-1细胞TLR4表达及促进NF-κB的活化,LPA致动脉粥样硬化作用可能部分是由TLR4/NF-κB信号途径介导的。     

TLR4/NF-κB信号通路介导肥胖症患者血清的致炎作用

目的探讨肥胖症患者血清对THP-1单核细胞分泌炎症因子的作用及探讨TLR4/NF-κB信号通路在肥胖症患者血清促炎症作用中的贡献。方法分别用15例单纯性肥胖及伴不同代谢紊乱(血脂紊乱、高血压、高血糖)患者血清孵育THP-1单核细胞株48 h后以及用TLR4单克隆抗体阻断TLR4/NF-κB信号通路后,测定THP-1细胞表面TLR4和细胞内NF-κB p65磷酸化的表达水平及其分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力。免疫印迹法检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;用RT-Q-PCR检测TLR4 mRNA的表达水平;用酶联免疫吸附法检测细胞上清液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的水平。结果与正常对照组比较,单纯性肥胖和肥胖症伴代谢紊乱患者血清干预后,THP-1细胞TLR4、NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4 mRNA表达水平以及分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力显著升高(P0.05);THP-1细胞TLR4、NF-κB p65磷酸化蛋白及TLR4mRNA表达水平以及分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力随肥胖症代谢紊乱组分的增加而增高,且当TLR4/NF-κB信号通路被阻断后,分泌白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的能力降低。结论单纯性肥胖及肥胖症伴不同代谢紊乱患者的血清可不同程度地诱导THP-1细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化,TLR4/NF-κB信号通路在肥胖症患者血清促THP-1分泌炎症因子的作用中起重要作用。     

PTEN对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎性因子的影响及机制研究

目的:分析第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞炎症因子影响及其作用机制。方法:将构建pc DNA3.1(+)-PTEN(r PTEN)重组表达载体及PTEN siRNA转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,用制备的50 mg/L的ox-LDL孵育24 h,RT-PCR及Western blot分析PTEN的mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-6的水平;同时Western blot分析对Toll样受体4(TLR4)及转录因子-κB(NF-κB)的影响及其作用机制。结果:PTEN过表达增高了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6的水平;PTEN沉默抑制了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6炎性因子水平。进一步分析表明,PTEN过表达加强了巨噬细胞中ox-LDL诱导的TLR4及其下游NF-κB通路的活化,而抑制其表达后,TLR4-NF-κB通路明显受到抑制;用TLR4特异性抗体预处理后,PTEN过表达诱导的TNF-α和IL-6的水平明显下降。进一步机制分析证实,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002(1μmol/L)预处理后,PTEN沉默抑制的TLR4-NF-κB通路的活性明显增加,且伴随有TNF-α和IL-6水平的上调。结论:PTEN有可能通过负向调节PI3K/AKT抗炎通路来影响TLR4-NF-κB炎性通路,进而参与巨噬细胞介导的炎症进程。因此,本研究将为心脑血管疾病的防治提供新的靶标。     

IL-23/IL-17炎症轴与冠心病及动脉粥样硬化的关系

目的探究白细胞介素(IL)-23/IL-17炎症轴与冠心病及动脉粥样硬化之间的关系及机制。方法行冠状动脉造影的患者56例,分为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组和对照组。收集受试者外周血,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清IL-17、IL-23、IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度。将THP-1细胞分为对照组和诱导组,分别加入0 mg/ml和50 mg/ml的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理细胞,ELISA检测培养液中IL-23与IL-17浓度,Western印迹检测细胞核转录因子(NF)-κB P65、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。结果稳定性心绞痛组和不稳定性心绞痛组血清IL-17、IL-23、IL-1β、IL-6和TNF-α浓度均显著高于对照组(P0.05)。与对照组比较,诱导组培养液IL-23和IL-17浓度均显著升高(P0.05);诱导组细胞NF-κB P65、IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论 IL-23/IL-17炎症轴可通过激活NF-κB信号通路促进冠心病及动脉粥样硬化炎症反应,是影响冠心病及动脉粥样硬化患者预后的独立因素。     

Cement and Concrete Nanoscience and Nanotechnology

Concrete science is a multidisciplinary area of research where nanotechnology potentially offers the opportunity to enhance the understanding of concrete behavior, to engineer its properties and to lower production and ecological cost of construction materials. Recent work at the National Research Council Canada in the area of concrete materials research has shown the potential of improving concrete properties by modifying the structure of cement hydrates, addition of nanoparticles and nanotubes and controlling the delivery of admixtures. This article will focus on a review of these innovative achievements.     

Medical and Psychology Students' Knowledge and Attitudes Regarding Aging and Sexuality

The current study surveys medical and doctoral psychology students (N = 100) from an urban northeastern university regarding knowledge and attitudes toward elderly sexuality and aging using the Facts on Aging Quiz, the Aging Sexuality Knowledge and Attitudes Scale, and measures of interest in gerontology, academic/clinical exposure to aging and sexuality, and contact with elders. The current study found that psychology students demonstrated greater aging knowledge than medical students; however, both groups showed gaps in knowledge about sexuality. Married students had greater academic/clinical exposure and greater knowledge about aging but less permissive attitudes toward elderly sexuality. Generally, knowledge about aging was the strongest correlate of knowledge about sexuality. Level of knowledge about sexuality was not associated with attitudes. Attitudes toward sexuality and aging may be more strongly tied to demographic variables reflective of religious beliefs or adherence to sociocultural norms.     

慢性饮酒、吸烟与骨质疏松的相关性研究

目的 探讨长期大量慢性饮酒、吸烟等不良生活方式与骨质疏松的关系.方法 以乏力、腰背痛、双下肢酸困为主诉,且有长期大量慢性饮酒史、吸烟史,无其他慢性疾病史的年轻男性患者45例为观察对象,测定其血钙(Ca)、血磷(P)和血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血糖(Glu)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸基转移酶(ALT)、血清碱性磷酸酶(ALP)、甲状腺功能、全段甲状旁腺激素(iPTH)、1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH) 2D3]、双能X线骨密度仪测定腰椎L1-4及左侧股骨近段(包括颈、股骨颈上部、大粗隆)骨密度(BMD),分析饮酒、吸烟对骨量的影响.以感冒发热就诊、年龄相当、无饮酒、吸烟史及慢性疾病史的45例男性为对照组.结果 观察组1,25(OH)2D3水平均降低,血钙水平偏低,血磷正常,碱性磷酸酶呈不同程度地升高,骨密度T值提示观察组27例骨质疏松,12例骨量减少,6例正常骨量;而对照组仅有6例为骨量减少,1例骨质疏松,38例为正常骨量,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 长期慢性大量饮酒吸烟影响骨量,甚至易导致骨质疏松.     

Leptin and cellular and innate immunity in abstinent alcoholics and controls

BACKGROUND: Basic studies indicate that in vitro and in vivo doses of leptin modulate cellular immune responses. Given evidence that concentrations of leptin are altered in alcoholics who also show immune abnormalities, this study examined the relationships between circulating levels of leptin and markers of cellular and innate immunity. METHODS: Circulating levels of leptin, natural killer cell (NK) activity, interleukin-2 (IL-2)-stimulated NK activity, and concanavalin A-stimulated production of IL-2, IL-6, IL-10, and IL-12 were compared between abstinent DSM-IV alcohol-dependent men (n = 27) and age- and gender-matched controls (n = 34). RESULTS: As compared with controls, alcoholics showed lower NK activity (p < 0.01) and a trend for lower levels of leptin (p = 0.055). In the total sample, leptin predicted NK activity (beta = 0.33; p < 0.05) after controlling for the confounding influence of body mass index, alcohol intake, and smoking. Leptin was not correlated with any of the cytokine measures. To examine whether the effects of leptin were mediated by its direct action on NK, additional studies examined in vitro effects of leptin on NK activity in healthy volunteers (n = 10); leptin doses (0.1, 1, and 10 nM) yielded levels of NK activity comparable to those with media alone. CONCLUSIONS: These data show that circulating levels of leptin are associated with NK activity in humans and suggest that abnormal in vivo concentrations of leptin may contribute to the declines of NK activity in alcoholics who are at risk for infectious diseases.     

自身免疫与动脉粥样硬化的发生发展

在动脉粥样硬化的发生发展过程中,自身免疫具有重要作用,本文就近年有关动脉粥样硬化的免疫机制的研究进展作一简要综述.     

中青年超重和肥胖与高血压及高同型半胱氨酸血症的相关性研究

目的探讨中青年超重和肥胖与高血压及高同型半胱氨酸血症的相关性。方法选取2012年1月—2013年10月在我院进行常规健康体检者750例,测量受试者血压、身高、体质量及血清同型半胱氨酸(Hcy)水平。结果男性超重、肥胖检出率分别为36.87%(198/537)和13.97%(75/537),均高于女性的16.43%(35/213)和7.50%(16/213)(P0.05)。超重者和肥胖者高血压和高同型半胱氨酸血症检出率分别为21.03%(49/233)和11.16%(26/233)、46.12%(42/91)和41.76%(38/91),均高于正常者的9.16%(37/404)和2.23%(9/404),肥胖者高于超重者(P0.01)。收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及血清Hcy与BMI呈正相关(r值分别为0.639、0.515、0.497,P0.01)。结论中青年尤其是男性超半数存在超重或肥胖,高血压及高同型半胱氨酸血症与BMI呈正相关,超重和肥胖者高血压及高同型半胱氨酸血症的发生率高,应积极防治。