快速检测内脏利什曼病特异抗体胶体金免疫层析试条方法的建立与效果评价

目的 建立快速、简便地检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果. 方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用以标记链球菌G蛋白（streptococcal protein G,SPG）,并将其吸附于交联释放垫上;将杜氏利什曼原虫前鞭毛体粗抗原作为包被抗原,包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条.用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病（129例）、疟疾（20例）、细粒棘球蚴病（10例）、日本血吸虫病（10例）、并殖吸虫病（5例）、华支睾吸虫病（5例）等患者血清,以及健康者（40例）血清,评价其敏感性和特异性.同时用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行平行检测. 结果 试条法检测129份黑热病患者血清,124份为阳性,敏感性为96.1％;与疟疾患者血清存在10.0％ （2/20）的交叉反应;与日本血吸虫病患者血清存在10.0％ （1/10）的交叉反应;与健康者血清存在2.5％ （1/40）的假阳性反应;与10份细粒棘球蚴病患者血清,5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,总特异性为95.6％ （86/90）.该方法与ELISA法的符合率为99.2％,二者阳性检出率之间的差异无统计学意义（x2=0.12,P＞0.05）,二者特异性之间的差异也无统计学意义（x2=0.42,P＞0.05）. 结论 成功建立快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条,该试条敏感性、特异性均较高.     

rK39免疫层析试条诊断人体内脏利什曼病和感染犬

目的 评价rk39免疫层析试条对内脏利什曼病诊断和流行病学调查中的应用价值.方法 用rk39试条检测就诊者或临床医生考虑为黑热病的患者或进行过病原学检查的患者,并在黑热病疫区现场检测家犬.结果 用rk39试条检测具有流行病学史就诊者358人,黑热病抗体阳性244例,阳性检出率68.16％.接受rk39试条与病原学2种方法检查的207人中,均为阳性者131例,2者阳性符合率为100％;对单-显示rk39试条阳性71例,用锑剂治疗均治愈,证实均为黑热病.rk39试条检查疫区家犬443只,检出阳性犬43只,阳性率为9.71％,阳性犬以5岁以下犬龄多见.结论 与传统诊断内脏利什曼病方法相比较,rK39试条具有更快速、操作简便、敏感和特异性高以及低损伤性,可用于流行区的内脏利什曼病的诊断和筛选;rK39试条可在潜伏期中发现黑热病患者和无症状感染犬,对黑热病患者的诊断和感染犬的检出具有很高的价值.     

基于利什曼原虫K26重组抗原检测黑热病特异抗体的免疫层析试条方法的建立与效果评价

目的 建立基于利什曼原虫K26重组抗原(Recombinant K26, rK26)检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果。方法 用胶体金标记链球菌G蛋白(Streptococcal Protein G, SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将利什曼原虫K26重组抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条。用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病、其它寄生虫病以及健康者血清,以评价其检测的敏感性和特异性。同时用rK39(Recombinant K39, rK39)试条进行平行检测。结果 rK26试条法和rK39试条法检测内脏利什曼病患者血清的敏感性分别为91.82%(101/110)和93.64%(103/110);与10份疟疾患者血清、10份日本血吸虫病患者血清、10份细粒棘球蚴病患者血清、5份弓形虫病患者血清、5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,40份健康者血清也均为阴性,rK26试条法和rK39试条法的总特异性均为100.00%。rK26试条法和rK39试条法阳性检出率之间的差异无统计学意义(χ^...     

rK39免疫层析试纸条用于诊断甘肃省内脏利什曼病人和病犬

1997年 6月 ,美国芝加哥大学张光朴教授和中国预防医学科学院寄生虫病研究所瞿靖琦研究员来本省武都县考察内脏利什曼病 (黑热病 ,VL ) ,并用诊断VL的 r K3 9免疫层析试纸条 (dipstick)检测了该县的一些 VL 病例 ,证实该法具有快速、正确诊断 VL 的效果。之后 ,我们又用张光朴教授提供的 dipstick于 1997～ 1999年在更大范围内对 VL患者和疫区内家犬进行了检测 ,结果如下。1　病例选择被测试者来自本省 VL流行区的武都、迭部、舟曲和静宁 4县共 6 0例患者。凡患者具有下列三项之一者 ,即为 VL病例。(1)骨髓穿刺涂片 (BMP)镜检查见利…     

胶体金免疫层析试条法检测囊型棘球蚴病患者血清特异性抗体效果评价

目的 建它一种快速、简便诊断囊型棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法 ,并对其进行评价.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IsG4单克隆抗体,并将其吸附于样品垫上;将羊肝棘球蚴包囊液抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条.用该试条检测确诊的囊型棘球蚴病患者血清155份,以评价其敏感性,检测健康者血清50份和其他寄生虫病患者血清50份(其中囊尾蚴病患者血清30份,血吸虫病、弓形虫病、并殖吸虫病、肝吸虫病患者血清各5份)以评价其特异性.均用单盲法检测,同时用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)进行平行检测.结果试条法检测155份囊型棘球蚴病患者血清,133份为阳性,灵敏度为85.8%;其他寄生虫病患者血清50份,44份为阴性;50份健康者血清全部为阴性,总特异度为94.0%.该方法 与ELISA的符合率为97.1%,二者阳性检出率之间的差异无统计学意义(r=0.25,P>0.05).结论 快速诊断囊型棘球蚴病的胶体金免疫层析试条法灵敏度、特异度均较高.     

快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的 建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法，并对其进行评价。 方法 筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对，采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7，并将其吸附于样品垫；将单克隆抗体B2G10（针对恶性疟原虫与间日疟原虫）和D6A7（只针对恶性疟原虫）分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置，制成免疫层析检测试条。用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样（107份）和内脏利什曼病患者血样（17份）以评价其特异性，检测确诊的疟疾患者血样（间日疟110份， 恶性疟54份）以评价其敏感性。均用单盲法检测。 结果 检测107份疫区非疟疾发热病人血样和17份内脏利什曼病患者血样，有119份显示为阴性，特异性约为96.0%；其中17份内脏利什曼病患者血样全部为阴性。检测164份疟疾患者血样，阳性153份，敏感性为93.3%，其中间日疟检出率为92.7%（102/110），恶性疟检出率为94.4%（51/54）。 结论 研制出的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高。     

rK39抗原试条法检测家犬内脏利什曼病

在中国西部 6省 /自治区 (包括 :新疆 ,甘肃 ,四川 ,陕西 ,山西和内蒙古 )的一些山区和荒漠 ,目前黑热病(内脏利什曼病 )呈散发状态[1 ] ,其病原体为婴儿利什曼原虫 (Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｉｎｆａｎｔｕｍ) [2 ] 。患内脏利什曼病的家犬为山丘地带黑热病的主要动物宿主 ,而在新疆和内蒙古的荒漠地带 ,在黑热病的疫区内却未查见病犬 ,动物宿主不明[3 ] 。近期来的研究表明 ,在各种能引起黑热病的利什曼原虫的无鞭毛体中 ,均存在编码 39氨基酸的基因片段 (Ｋ39) ,以该基因片段或其重组抗原 (ｒＫ39)制成的ｄｉｐｓｔｉｃｋ试条 ,检测针对利什…     

快速诊断包虫病免疫层析试条

包虫病 (Hydatid disease或 Hydatidosis)是一种人畜共患的寄生虫病 ,流行于欧、亚、非和地中海区域沿岸国家 ,以及澳洲和南美。包虫病在我国 2 3个省、自治区、直辖市都有病例报告 ,新、青、甘、宁、藏五省区流行严重。我国政府对包虫病严重威胁我国西部人民健康的问题早就密切关注 ,已采取了各种防治措施并设立了‘九五’攻关项目 (专题合同编号 :96 - 90 6 - 0 4 -0 8)。其中 ,快速筛查包虫病免疫层析试条的研制现已如期完成 ,并在实验室小试成功时就联合了上海正源生命技术有限公司和上海保康生物高科技有限公司 ,实现了该试条的批量生…     

疟疾胶体金免疫层析试条在间日疟流行区的诊断评价

目的 在现场评价疟疾胶体金免疫层析试条 （简称试条） 的诊断性能。 方法 2008年9～10月采集安徽省间日疟流行区蒙城县5个乡镇医院门诊部所有就诊的发热病人血样,用双盲法比较镜检法和试条测试的结果。 结果 共采集发热病人血样292份,镜检法检出疟原虫阳性181份,均为间日疟;试条检出疟原虫阳性163份,亦均为间日疟。两法检测结果一致的血样占92.8%（271/292）,其中均为阳性的163份,均为阴性的108份。两法检测结果不一致的21份血样中,镜检阳性的、试条检测阴性的有18份,镜检阴性的、试条检测阳性的有3份。原虫密度在＞1 000 个/μl、100～1 000 个/μl和＜100 个/μl时,试条检测阳性率分别为93.5%（115/123）、86.0%（43/50）和62.5%（5/8）。 结论 该快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条在疟疾流行区对间日疟有一定的诊断价值。     

rK39免疫层析试条在新疆黑热病诊断和流行病学调查中的应用

目的观察rK39免疫层析试条对新疆不同类型黑热病的诊断及流行病学调查中的应用价值。方法用rK39试条检查不同地区确诊的黑热病患者;用rK39-ELISA和rK39免疫层析试条检查不同流行地区居民血清标本与利什曼素皮内反应结果进行比较分析。结果对来自新疆不同地区的黑热病患者共1204例,用rK39试条检测抗体阳性者1169例,阳性率97.09%。其中人源型黑热病患者1052例中1031例阳性,阳性率98.0%;荒漠型黑热病患者158例中阳性143例,阳性率90.5%。二者之间差异显著(P<0.001),荒漠型患者阳性率较低。人源型黑热病流行区居民中rK39抗体阳性率在既往有黑热病史者中为42.7%～59.3%,在无既往史的居民中仅为2.2%～5.8%。在随访的rK39阳性,皮内反应阴性的18人中有4人在4和6个月后出现症状,确诊为黑热病。在黑热病治愈后2年内94.6%的患者rK39抗体仍为阳性。9年后仍有82.5%保持阳性。结论rK39层析试条对新疆黑热病患者有很高的诊断价值。其保存、携带方便,操作简单适于在基层现场使用。由于其可在潜伏期中发现黑热病患者。故可用于在流行地区皮内反应阴性的居民中进行免疫学检测,早期发现病人。由于黑热病患者治愈后血清中rK39抗体长期存在,故不适用于预后判定和疗效评价。     

快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价

目的建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体;将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条。用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能。结果以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9%(52/56)。与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2%(8/87)和3.3%(1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0%(4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0%(174/187)。ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6%(54/56)和92%(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P>0.05)。kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98)。结论以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高。     

两种鉴别诊断恶性疟和间日疟免疫层析试条检测效果评价

目的 对两种快速、简便能区分诊断恶性疟和间日疟的胶体金免疫层析试条的检测效果进行评价. 方法 筛选基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体C6E9和G4C9,并将其同时吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和C6H.(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条.用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(120份)和内脏利什曼病患者血样(20份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟105份,恶性疟95份)以评价其敏感性.均用单盲法检测,同时用基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条进行平行检测. 结果 检测120份疫区非疟疾发热病人血样和20份内脏利什曼病患者血样,有138份显示为阴性,特异性为98.6％,其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测200份疟疾患者血样,阳性190份,敏感性为95.0％,其中间日疟检出率为93.3％ (98/105),恶性疟检出率为96.8％ (92/95).基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条检测的敏感性和特异性分别为93.5％ (187/200)和95.7％ (134/140),与本研究制备的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的试条比较两者敏感性(x2=0.42,P＞0.05)和特异性(x2=1.09,P＞0.05)的差异均无统计学意义. 结论 研制出的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高.     

巨片形吸虫病快速诊断胶体金免疫层析试条的研制与评价

目的建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法。方法提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(r FgCL1-YN);将r FgCL1-YN和羊抗鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜的适宜位置作为检测带和质控带,以胶体金标记抗人IgG4抗体的鼠单抗作为检测试剂,制备检测特异性IgG4型抗体的免疫层析试条。用该试条检测巨片形吸虫病患者(30份)、日本血吸虫病患者(15份)以及健康人(32份)血清,评价其诊断价值,同时用ELISA法进行平行检测作为对照。结果试条检测法的敏感性为100%(30/30),特异性为97.9%(46/47),总体符合率为98.7%(76/77)。ELISA法检测的敏感性、特异性和总体符合率分别100%(30/30)、100%(47/47)和100%(77/77)。试条法与ELISA法的敏感性、特异性和总体符合率,经四格表确切概率法检验,P值分别为1、0.5和0.5,全部大于0.05。显示,试条法与ELISA法检测巨片形吸虫病患者血清的结果高度一致。另外,试条法的检测时间为10min,血清用量低于10μL,且具较高的敏感度。结论以r FgCL1-YN建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测巨片形吸虫病具有较高的诊断价值。     

布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析法快速检测技术的建立

目的建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的新方法。方法利用胶体金免疫层析技术,以大肠埃希菌表达、纯化的OMP31与BP26重组蛋白作为检测抗原,以金黄葡萄球菌A蛋白(SPA)作为胶体金标记物,制备胶体金免疫层析试纸条,用于检测布鲁氏菌抗体,并分析方法的敏感性和特异性。结果以粒径为40nm胶体金制备的试纸条检测布鲁氏菌抗体的敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.2,SPA蛋白最适标记量为6μg/ml。交叉试验证明试纸条不与其他非相关疾病感染血清反应,特异性高。试纸条检测结果与琥红平板试验方法的符合率为92%。结论制备的布鲁氏菌抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,可用于鉴别布鲁氏菌自然感染和人工免疫,并可区分牛、羊种布鲁氏菌感染,可在基层推广使用。     

Diagnosing visceral leishmaniasis with the recombinant K39 strip test: experience from the Sudan

We compared a strip test employing recombinant K39 (rK39) antigen and protein A/colloidal gold as read-out agents with the rK39 ELISA for IgM and IgG antibodies and the direct agglutination test (DAT) using 55 sera from patients with parasitologically confirmed visceral leishmaniasis (VL). The rK39 strip test was positive in 37/55 (67%), the DAT in 50/55 (91%) at > or = 1 : 1600 cut-off value and in 47/55 (85%) at > or = 1 : 6400 cut-off value. The rK39-ELISA gave positive IgG results for all sera; those who had a positive strip test had significantly higher IgG levels than those with a negative strip test (31.1 (SD=3.6) and 17.7 U/ml (SD=9.8), respectively, P < 0.0001). A total of 31/55 (56%) sera showed a positive IgM result; of these 27 (49%) had a positive strip test. We tested 115 apparently cured VL patients with the strip test during follow-up; 68 were also tested with DAT. In the strip test, 25-43% of patients had a positive result at time points 3, 6, 9 and 12 months after treatment; for DAT (cut-off > or = 1 : 1600) these results were 67-83%. In neither test did a significant decrease in positivity rates occur over time (P=0.37 for the strip test, P=0.17 for the DAT). No correlation (P=0.33) was found between a positive strip test and a positive DAT result (cut-off > or = 1: 1600), indicating that the strip test and DAT are complementary rather than interchangeable. Of 61 endemic controls two (3%) had a positive strip test result; both had a positive leishmanin skin test. The rK39 strip test has the ideal format for use in the field, but its sensitivity is limited; like DAT, but to a lesser extent, it remains positive after treatment.     

胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫应用研究

目的观察胶体金免疫层析测试条快速诊断鼠疫的效果。方法用胶体金免疫层析抗体(抗原)测试条与鼠疫间接血凝试验(IHA)/反向间接血凝试验(RIHA)两种方法平行检测鼠疫的抗体(或抗原)。结果通过对实验感染动物、青海鼠疫疫源地内鼠疫患者(尸体)及染疫动物等396份样品的检测,两种方法符合率为100%。结论胶体金免疫层析法操作简单、方便、快速,适用于现场应用和鼠疫的快速诊断。     

猪带绦虫六钩蚴TSOL18重组蛋白快速诊断试纸条研制

目的以猪带绦虫六钩蚴重组蛋白(TSOL18)为抗原,建立一种简便快速的猪囊虫抗体检测方法,评价其血清学诊断的价值。方法用胶体金颗粒标记纯化的TSOL18重组蛋白,将兔抗TSOL18-GST-IgG和TSOL18重组抗原分别喷涂于硝酸纤维素膜的质控线和检测线上,与PVC垫板等部件按顺序装配成猪囊虫抗体快速检测试纸条;用该试纸条检测猪血清样品测定敏感性和特异性。结果该试纸条与全囊虫抗原ELISA的相对敏感性和特异性分别为75.0%(12/16)和95.2%(40/42),与剖检计数法的相对敏感性达80.0%(12/15)。试纸条在4℃存放12个月,检测结果稳定,重复性好。结论基于TSOL18建立的胶体金免疫层析试纸条操作简单、快速敏感、稳定性好,可用于猪囊虫病感染的诊断和筛查。