高血压大鼠脑白质病变中髓鞘和轴索改变

目的探究高血压大鼠脑白质病变中轴索微结构的变化。方法 18只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分为假手术组(n=9)与手术组(n=9),手术组先行双肾双夹术制作易卒中型肾血管性高血压大鼠模型,12周后间隔1 d先后夹闭双侧颈总动脉。颈总动脉夹闭术后12周对大鼠进行水迷宫试验评价大鼠是否存在认知功能受损,组织病理学评价小血管病理学改变、脑白质病变、胶质细胞改变及轴索微结构的变化。结果水迷宫实验:手术组的逃避潜伏期较假手术组明显升高,穿越平台次数较假手术组明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。手术组大鼠存在小动脉内膜增厚、管腔狭窄;手术组较假手术组有明显的脑白质病变,且伴有少突胶质细胞减少;手术组病变部位Caspr表达明显减少,病变周围髓鞘正常区域出现郎飞结长度增加、结侧区长度增加及直径增粗。结论脑白质病变过程同时存在轴索和髓鞘的损伤。     

瑞舒伐他汀钙对慢性高血压大鼠脑白质病变及空间认知功能的影响

目的探讨瑞舒伐他汀钙对慢性高血压大鼠的脑白质病变及其空间认知功能障碍的影响。方法雄性Sprague-Daw Iey大鼠49只,随机分为假手术组、高血压组和瑞舒伐他汀钙治疗组(10 mg/kg)。高血压组和瑞舒伐他汀钙治疗组采用双肾双夹法制作易卒中型肾血管性高血压大鼠(stroke-prone renovascular hypertensive rat,RHRSP)模型,定期监测血压。水迷宫实验检测空间记忆功能;Luxol fast blue染色观察脑白质疏松程度;免疫荧光法观察额叶皮层β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)在大脑皮层的沉积分布;原位末端转移酶标记染色法(Td T-mediated d UTP-biotin nick end labeling,TUNEL)观察额叶皮层细胞凋亡水平。结果 RHRSP大鼠造模后血压逐渐升高,明显高于假手术组(P<0.01);瑞舒伐他汀钙较高血压组逃避潜伏期时间明显缩短(P<0.01),3组大鼠跨越平台次数分别为(4.55±1.23)、(1.00±0.80)、(3.79±0.95),差异有统计学意义(P<0.01)。与高血压组相比,瑞舒伐他汀钙可改善脑白质疏松程度(P<0.01),减少额叶皮层区Aβ沉积(17.47±3.59 vs.4.42±1.57,P<0.01)及细胞凋亡(37.84±4.73 vs.14.42±2.43,P<0.01)。结论瑞舒伐他汀钙可改善慢性高血压大鼠的脑白质病变,减少额叶皮层区Aβ沉积以及细胞凋亡从而保护大鼠的空间记忆功能。     

糖尿病合并慢性脑低灌注小鼠认知功能改变及星形胶质细胞变化的研究

目的观察2型糖尿病合并慢性脑低灌注的小鼠认知功能及脑白质星形胶质细胞的变化。方法采用2型糖尿病动物模型db/db小鼠,双侧颈总动脉狭窄(BCAS)建立慢性脑低灌注模型。实验小鼠分为4组:对照假手术组、对照BCAS组、db/db假手术组、db/db BCAS组。利用激光散斑脑血流仪检测小鼠脑血流改变,Y迷宫检测小鼠认知功能,卢卡斯快蓝染色检测小鼠脑白质病理改变,免疫荧光检测小鼠脑白质星形胶质细胞改变。结果对照假手术组和db/db假手术组在建立BCAS模型后均出现明显脑血流下降。与对照假手术组比较,对照BCAS组工作记忆显著下降(P0.05),脑白质区出现明显损伤(P0.001),脑白质区星形胶质细胞明显激活(P0.01);与db/db假手术组比较db/db BCAS组工作记忆无明显损害、脑白质损伤不显著、星形胶质细胞数差异无统计学意义。结论 2型糖尿病可减弱其合并的慢性脑低灌注对认知功能的影响,可能与减弱星形胶质细胞的激活有关。     

石榴多酚对慢性脑低灌注大鼠认知功能损害的影响

目的 探讨石榴汁中多酚类的抗氧化作用对由慢性脑低灌注引起的认知功能损害的影响. 方法 健康雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、双侧颈总动脉结扎组(2VO对照组)、双侧颈总动脉结扎+石榴汁组(2VO+PJ组).采用永久性双侧颈总动脉结扎法制备慢性脑低灌注大鼠模型,术后1周起假手术组、2VO对照组糖水灌胃,2VO+PJ组石榴汁灌胃,均2 mL/d,共7周.给药结束后应用Moms水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力,新鲜组织取材检测皮层、海马组织MDA含量与SOD活力,Western blotting检测4-羟基壬烯醛(4-HNE)蛋白表达水平. 结果 与假手术组对比,2VO对照组大鼠的逃离潜伏期明显延长,目标象限探索时间明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05);2VO+PJ组目标象限探索时间[(6.18±1.32)s]与2VO对照组[(3.96±1.65)s]比较明显延长,逃离潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P＜0.05).与假手术组对比,2VO对照组SOD活力明显降低,MDA含量、4-HNE蛋白表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05);2VO+PJ组SOD活力[皮层(19.79±3.34) U/mg prot,海马(20.87±0.77) U/mg prot]比2VO对照组[皮层(15.79±0.39)U/mg prot,海马(18.90±0.81) U/mg prot]明显增加,2VO+PJ组MDA含量[皮层(1.21±0.29) nmol/mg prot,海马(2.31±0.35) nmol/mg prot]比2VO对照组(皮层(1.74±0.42) nmol/mg prot,海马(2.86±0.51)nmol/mg prot]明显降低,2VO+PJ组4-HNE蛋白表达水平比2VO对照组显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 石榴多酚抗氧化作用可减轻慢性脑低灌注引发的氧化应激所导致的认知功能损害.     

易卒中型肾血管性高血压大鼠凝血和纤溶活性的动态观察

目的　动态观察易卒中型肾血管性高血压大鼠 (RHRSP)血液中凝血系统和纤溶系统的活性改变。方法　双肾双夹法制作RHRSP模型 ,分别于术后 2、4、6、8、1 0、1 2、1 4周取血 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测凝血酶原片段 1 2 (F1 2 )和D 二聚体 (D dimer)含量。结果　 8周始RHRSP血浆中F1 2和D dimer含量逐渐增高 ,明显高于正常对照组 ,且F1 2与D dimer呈正相关 ,F1 2和D dimer均与大鼠收缩压密切相关。结论　血液中凝血系统和纤溶系统活性增高可能是RHRSP出现脑梗死或脑出血 ,甚至是混合性中风的原因之一     

麝香酮对易卒中型肾血管性高血压大鼠血浆内皮素和脑血管重塑的影响

目的观察麝香酮对易卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)血浆内皮素(ET)和脑动脉结构改变的影响。方法雄性RHRSP自术后第9周始分成两组:高血压组(n=12)和麝香酮治疗组(n=12),并以年龄、性别、数量相同的正常假手术组作对照,测量收缩压(SBP)和血浆ET含量,显微镜下观察血管形态改变,计算机图像分析血管外径、中膜厚度、管腔内径、中膜面积和壁腔比。结果12周时麝香酮组的SBP、ET水平比高血压组低(P<0.05)。镜下观察发现麝香酮组血管形态损害比高血压组轻。麝香酮组血管外径、血管内径、管壁厚度均大于高血压组(P<0.05),壁腔比则小于高血压组(P<0.05)。大脑中动脉平滑肌细胞面积较高血压组大,但两者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论麝香酮治疗可轻度降低RHRSP的SBP和血浆ET水平,并能一定程度上改善其血管重塑。     

丁苯酞对高血压性脑卒中预防作用的实验研究

目的观察丁苯酞对高血压性脑卒中的预防作用,为临床应用提供依据。方法SD大鼠共250只,分为3组,其中假手术组30只,实验对照组100只,消旋丁苯酞治疗组90只,所有大鼠均按已定型的双肾双夹法建立易卒中型肾血管性高血压大鼠模型(RHRSP),假手术组不上银夹,12周后应用人工寒潮引发脑卒中。预防组给予消旋丁苯酞,假手术组和实验对照组用等剂量植物油,连续7d后,置于人工寒潮箱3d。处死前1min静脉注射异硫氰酸荧光黄FITC标记的右旋糖苷,取脑氯化三苯基四氮唑TTC染色、常规病理HE染色,统计卒中灶数目;石蜡切片后荧光显微镜下统计大脑微血管数量,并行血管特异性的标志物vwf免疫组化,经图像分析测定卒中灶体积和统计阳性血管个数。结果人工寒潮后各组卒中率由高到低依次为实验对照组(32.99%)、消旋丁苯酞组(23.53%)和假手术组(0)。在脑梗死中消旋丁苯酞组的发生率要低于实验组(P<0.05),脑出血及混合性卒中均无统计学差异(P>0.05)。脑出血及混合性卒中各组间均无统计学差异。微循环病理结构改变为,实验对照组的微血管形态结构受损最严重,血管明显狭窄、变细及管腔内较多沉淀物,血管内皮细胞受损严重;而消旋丁苯酞治疗组的微血管结构基本完整,管腔内有少量红细胞。FITC标记的脑血管数目由多到少依次为假手术组(411.48±96.53)、消旋丁苯酞组(399.87±165.64)及实验对照组(296.47±112.29)。结论丁苯酞可能通过改善脑微循环而起到减少脑卒中及降低脑损伤的作用。     

当归注射液抗慢性脑缺血大鼠认知功能损害的实验研究

目的 观察当归注射液对慢性脑缺血后认知功能改变及氧化应激损伤和胆碱能系统的影响,探讨当归注射液改善慢性脑缺血认知功能的作用及机制. 方法 50只Wistar大鼠采用随机数字表法分为假手术组(n=16)、生理盐水组(n=18)及当归治疗组(n=16),后两组大鼠制成双侧颈动脉结扎慢性脑缺血模型(即2VO模型),缺血4周、干预4周后水迷宫检测3组大鼠认知功能,并取脑皮质测定氧化产物及胆碱酯酶含量. 结果 慢性脑缺血后大鼠的空间记忆能力受损,定位航行实验中第4、5天当归治疗组的隐匿平台逃避潜伏期较假手术组有所增加,但较生理盐水组明显缩短(分别为22.53±1.27、27.67±1.34),3组之间差异有统计学意义(P<0.05);当归治疗组在空间探索试验中穿越平台的次数较生理盐水组增多(分别为1.25±0.78、0.56±0.63),在平台区的停留时间延长(分别为21.99±4.97、12.80±2.88),3组之间差异有统计学意义(P<0.05);当归治疗组AchE含量有所下降,但与假手术组比较差异仍有统计学意义(P<0.05),同时,MDA含量增高,SOD活力、抑制羟自由基能力及总抗氧化能力降低,与假手术组比较差异没有统计学意义(P>0.05). 结论 当归注射液能改善慢性脑缺血的认知功能损害,其作用可能与抑制氧化应激反应有关.     

D半乳糖诱导结合双血管结扎建立脑缺血大鼠模型及其评价

目的通过D半乳糖(D-gal)诱导结合双血管结扎的方法建立一种能较好地模拟人类脑缺血的动物模型,并对该模型进行评价。方法以3月龄青年SD大鼠为实验对象,采用D-gal连续皮下注射6周结合双血管结扎的方法制备脑缺血动物模型。以Garcia量表评价大鼠的神经功能损伤的严重程度;血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)水平评价机体氧自由基代谢情况;TTC染色评价大鼠脑梗死体积;HE染色评价缺血区脑组织损伤的严重程度。结果模型组(10.375±1.188)和半乳糖模型组Garcia评分(7.167±4.714)均低于空白组(20±0;均P0.01),半乳糖模型组Garcia评分低于模型组(P0.05)。与模型组比较,半乳糖模型组大鼠SOD〔(393.60±19.02)U/mL vs.(469.37±22.63)U/mL〕和GSHPx(1116.38±76.88 vs.1413.22±102.74)活性降低(均P0.05),MDA〔(17.58±0.84)mmol/mL vs.(10.89±1.08)mmol/mL〕水平升高(P0.05)。与模型组比较,半乳糖模型组梗死体积分数(35.75±2.38 vs.24.23±1.92)明显增大(P0.01)。模型组大鼠缺血区表现为神经元细胞肿胀变性溶解,白质疏松等异常病理变化,半乳糖模型组较模型组更为严重。结论该模型能够较好地模拟人类脑缺血。     

Egb761对脑慢性低灌注老龄大鼠海马β-分泌酶活性的影响

目的:探讨脑慢性低灌注老龄大鼠海马β-分泌酶活性的改变及银杏叶制剂(Egb761)对其的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、低灌注组和Egb761组,后两组永久性阻断双侧颈总动脉(2VO),Egb761组术后用Egb761灌胃。采用荧光法于术后1、2、4和16周检测双侧海马β-分泌酶的活性。结果:和假手术组相比,2VO组术后各时间点β-分泌酶活性均上调(P<0.05);Egb761组的β-分泌酶活性在用药期间低于2VO组(P<0.05)。结论:脑慢性低灌注可致β-分泌酶活性升高,Egb761可以抑制这种变化。     

Dendritic morphology of neurons in medial prefrontal cortex and hippocampus in 2VO rats

Cerebral ischemia is the main cause of cognitive impairment. Changes in dendritic morphology and spines have been shown to occur with synaptic plasticity and cognitive function. Bilateral occlusion of the common carotid arteries (2VO) in rats was an effective model of chronic cerebral ischemia. In this experiment, SD rats were divided into model group (2VO) and sham-operated group. At 2, 4, 8 and 16?weeks, rats were tested in Morris water maze to observe learning and memory abilities, and then the brain tissue was stained by Golgi method to investigate the morphology of dendrites of pyramidal neurons under light microscope. Dendritic length and arborization and spine density of pyramidal neurons in medial prefrontal cortex (mPFC) and hippocampal CA1 were analyzed by ImageJ. Progressive learning and memory deficits appeared since 2?weeks. Compared to the sham-operated group, the dendritic length and arborization significantly decreased in the model group at 4, 8 and 16?weeks after 2VO in CA1, while there was no significant difference in mPFC. Dendritic spine density in hippocampal CA1 of the model group significantly decreased after 2?weeks, and it was decreased after 8?weeks in mPFC. The results suggest that under the condition of chronic cerebral ischemia, the alteration of dendritic morphology and spine density underlay cognitive impairment.     

激肽释放酶促进实验性大鼠大脑皮质梗死后内源性神经干细胞的增殖、迁移和分化

目的 观察外源性激肽释放酶对大鼠皮质梗死后内源性神经再生的影响.方法 用易卒中型肾血管性高血压大鼠,随机分为局灶性大脑皮质梗死+激肽释放酶治疗组、大脑皮质梗死+溶剂对照组和假手术对照组,所有大鼠均腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)用以标记新增殖细胞.分别在不同时间点行神经功能评分后处死大鼠,测脑梗死灶体积,并观察梗死侧侧脑室下区(SVZ)BrdU+、BrdU+/DCX+表达以及梗死灶周BrdU+、BrdU+/NeuN+表达.结果 与溶剂对照组及假手术对照组相比,激肽释放酶治疗促进了术后不同时间点梗死侧SVZ BrdU+、BrdU+/DCX+和梗死灶周BrdU+、BrdU+/NeuN+表达(术后7 d SVZ BrdU+分别为304.0±73.9、167.0±32.2和56.0±12.2,分别q=7.165、12.916、5.751,均P<0.05;SVZ BrdU+/DCX+分别为225.0±13.6、98.0±9.6和23.0±5.6,分别q=30.731、48.735和18.004,均P<0.01;梗死灶周BrdU+为490.0±82.0、308.0±51.5和49.0±9.5,分别q=7.920、19.184、11.264,均P<0.01;术后14 d梗死灶周BrdU+/NeuN+为21.0±3.4和13.0±2.6,t=4.568,P=0.001),并促进了神经功能恢复.结论 外源性激肽释放酶可促进大鼠皮质梗死后内源性神经干细胞活化,并改善神经功能.     

慢性脑低灌注大鼠海马缝隙连接蛋白32和36的表达变化

目的：观察慢性脑低灌注大鼠海马组织中缝隙连接蛋白（Cx）32和Cx36的变化,探讨其在慢性脑低灌注认知功能损害中的作用。方法：双侧颈总动脉永久性结扎（2VO）制作慢性脑低灌注模型,Morris水迷宫检测2VO大鼠空间学习记忆能力变化,免疫组化检测2VO大鼠海马各区Cx32和Cx36的表达水平。结果：慢性脑低灌注大鼠的空间学习记忆能力较假手术对照组显著下降,海马Cx32和Cx36的表达也有降低。结论：Cx32和Cx36可能参与了慢性脑低灌注导致的认知功能损害。     

阿魏酸钠对慢性脑缺血大鼠的神经保护作用机制研究

目的探讨阿魏酸钠对慢性脑缺血大鼠的神经保护作用及其机制。方法以双侧颈总动脉结扎(2-VO)法制备慢性脑缺血模型,于术后6周分别给予阿魏酸钠和PBS干预,分为阿魏酸钠干预组和模型对照组。另设假手术组(仅分离双侧颈总动脉,但不结扎)作为空白对照。术后8周行Morris水迷宫实验,评价大鼠的空间学习记忆功能,同时观察双侧颞叶内侧缺血区脑组织血管密度、激光共聚焦法检测毛细血管内径、缺血边界地区的毛细血管分支点数目和微血管总面积等指标、海马细胞增殖情况(免疫组化法)和血浆血管内皮生长因子(VEGF)水平(ELISA法检测),以探讨其可能的机制。结果 Morris水迷宫结果显示,阿魏酸钠干预组第2、3、4、5天逃避潜伏期[分别为(43.55±6.34)s、(38.11±1.20)s、(34.75±5.30)s、(24.39±3.93)s]明显短于模型对照组[分别为(50.89±6.31)s、(43.72±8.21)s、(50.79±9.36)s、(44.39±3.93)s,均P0.01];阿魏酸钠干预组第一象限游泳时间明显长于模型对照组[分别为(27.36±3.89)s、(14.68±2.36)s,P=0.002]。阿魏酸钠干预组毛细血管内径与模型对照组比较变短[分别为(3.02±0.21)μm、(3.35±0.18)μm,P=0.003],阿魏酸钠干预组缺血边界地区的毛细血管分支点数目与模型对照组同源组织区比较显著增加(分别为205.80±12.70、158.42±10.92,P=0.001),0.002mm3体积内阿魏酸钠干预组微血管总面积与模型对照组比较明显增加[分别(83389±4026)μm2、(73349±3986)μm2,P=0.004]。阿魏酸钠干预组缺血脑组织内的BrdU阳性细胞数明显高于模型对照组(分别为23.82±3.05、10.26±2.89,t=18.26,P=0.004)。阿魏酸钠干预组VEGF水平明显高于模型对照组[分别为(67.58±9.61)pg/mL、(21.90±5.16)pg/mL,P=0.008]。结论阿魏酸钠可以显著改善慢性脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,其机制可能与VEGF介导的血管密度增加有关。     

脑低灌注对大鼠海马胆碱能神经功能指标的变化

目的探讨脑低灌注大鼠海马胆碱能神经功能状态及细胞凋亡的变化。方法SD大鼠40只,随机分为2VO模型组和假手术组,每组20只;永久性阻断双侧颈总动脉制作2VO模型,造成脑部持续性低灌注状态。观察大鼠术后学习记忆能力的改变、胆碱乙酰转移酶(ChAT)和促凋亡指标Bax在海马的表达,以及海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的变化。结果大鼠2VO术后14d和21d表现出学习记忆障碍,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);2VO模型组海马ChAT表达和海马AChE活性均较假手术组明显降低(P<0.01),而海马Bax的阳性细胞数较假手术组明显增加(P<0.01)。结论脑低灌注破坏海马胆碱能神经功能,学习记忆能力下降。细胞凋亡可能是胆碱能神经功能障碍的主要原因。     

瘦素对局灶性脑缺血后内质网应激相关蛋白的作用

目的探讨瘦素对大鼠局灶性脑缺血后内质网应激相关蛋白的影响。方法 SD大鼠40只,随机分为假手术组、脑缺血组、脑缺血瘦素预处理组,线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,在闭塞血管前3 h皮下注射瘦素,于闭塞血管6 h后采用Longa 5分制量表进行神经功能评分、称量体重及脑水肿变化,并灌注取脑,采用免疫荧光化学法检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)及C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)表达。结果脑缺血瘦素预处理组和脑缺血组体重变化未见差异(P0.05);脑缺血瘦素预处理组神经功能评分(1.90±0.31 vs.2.50±0.52,P0.05)和脑水肿程度(3.60±0.52 vs.7.70±0.94,P0.001)明显轻于脑缺血组,同时脑缺血瘦素预处理组GRP78表达明显高于脑缺血组(48.69±5.06 vs.35.78±4.35,P0.01),CHOP表达明显低于脑缺血组(38.81±5.34 vs.60.24±4.11,P0.01)。结论瘦素可减少神经功能缺损并可能与其上调GRP78蛋白,下调CHOP蛋白来减弱脑缺血导致的内质网应激有关。     

PKA-CREB信号转导通路在大鼠慢性脑缺血所致认知功能障碍中的作用

目的:观察PKA-CREB信号转导通路在慢性脑缺血所致大鼠认知功能损害中的作用。方法:结扎大鼠双侧颈总动脉,制成慢性脑缺血模型,分缺血8周组和假手术对照组,术后第8周时用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力。用Westernbloting检测大鼠海马胞核内PKAca及pCREB的表达。结果:缺血组与假手术组相比学习记忆能力明显下降(P<0.05),缺血组大鼠海马中PKAca及pCREB的表达与假手术组相比也下降(P<0.05),且两者之间的下降存在正相关关系。结论:PKA-CREB信号转导通路可能参与了慢性脑缺血所致大鼠认知功能的损害。     

慢性脑低灌注大鼠海马Arc低表达与其认知功能障碍的相关性研究

目的 探讨慢性脑低灌注大鼠海马活性调节的细胞骨架相关蛋白(activity-regulated cytoskeletal-associated protein,Arc)的低表达与其认知功能障碍的相关性。方法 大鼠慢性脑低灌注模型使用持久性双颈总动脉结扎术(2-vessel occlusion,2-VO); 大鼠随机分成假手术组和2-VO组,每组各6只。术后第8周行Morris水迷宫评价其认知功能; 实时定量聚合酶链式反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及蛋白免疫印迹法检测大鼠海马Arc mRNA及蛋白表达水平。结果(1)2-VO组大鼠第2～5 d的逃逸潜伏期比假手术组明显延长(P<0.01)及其在原平台区域游泳时间明显比假手术组短(P<0.01);(2)2-VO组大鼠海马Arc mRNA水平及免疫反应条带相对灰度值分别比假手术组明显降低(P均<0.01);(3)空间探索实验中2-VO大鼠在原平台区域游泳时间与海马Arc免疫反应条带相对灰度值呈正相关(r=0.7085,P<0.05)。结论 慢性脑低灌注大鼠的认知功能障碍可能与海马Arc的低表达相关。