210株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究

目的了解结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286bp的片段进行PCR-SSCP分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌的rpoB基因此扩增区域进行序列测定。结果共对210株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了研究,其中利福平耐药株110株,非利福平耐药株40株,敏感株60株。PCR-SSCP检测显示110株利福平耐药株中有75株有突变存在,经测序分析,77.3%(58/75)的菌株发生rpoB基因的单位点突变,主要集中在456位60.3%(35/58)和451位25.9%(15/58);22.7%(25/110)的菌株发生了联合突变。此外,经PCR-SSCP检测,40株非利福平耐药株中有3株发生突变,60株敏感株中有2株发生突变。经直接测序分析突变涉及位点为436位、451位和460位。结论结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因是rpoB基因耐药决定区发生突变,其中456位丝氨酸和451位组氨酸是最常见的突变位点。     

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点.方法 本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本.采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变.结果 135株结核菌中, 60株为利福平耐药菌株,其中 55株（91.7%）rpoB基因的利福平耐药决定区（RRDR）有突变.突变频率依次为密码子531（60.0%）,526（29.1%）和516 （7.3%）.1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子（511,515,518）的多核苷酸突变.75株敏感菌株中, 仅3株（4.0%）有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG（Leu）→ATG（Met）.结论 来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低.     

利用DNA芯片技术检测新疆结核分枝杆菌rpoB基因与对利福平耐药水平的关系

目的研究新疆地区结核分枝杆菌rpoB基因的突变与对利福平耐药水平的关系。方法采用DNA芯片技术对耐利福平菌株rpoB基因进行检测。结果 46株结核分枝杆菌利福平初始耐药分离株,对利福平高耐药株30株,低耐药株13株。DNA芯片检测显示43株发生基因突变,低耐药株突变主要在526位点,少数在531位点;高耐药株主要在526位点及531位点上,其中3株为526和516位点同时发生联合突变,其余3株未见突变。结论以结核分枝杆菌标准株H37Rv为对照,新疆结核分枝杆菌对利福平耐药表现为结核分枝杆菌RNA聚合酶的β亚基的编码基因rpoB基因的点突变,而高耐药则表现为rpoB基因的526位和531位点突变及联合突变特征。     

rpoB基因点突变与结核分枝杆菌对利福平耐药相关性的研究

目的了解浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株对利福平（RFP）的耐药率及该菌rpoB基因点突变与RFP耐药性的关系。方法从浙江地区肺结核病人的痰液或咽拭子标本中分离并鉴定结核分枝杆菌72株。采用K-B纸片法和E-试验法检测上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP的耐药性。采用PCR检测上述结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因携带率。通过对RFP敏感或耐药各10株结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因T-A克隆后测序，了解该基因氨基酸序列第516、526和531位点突变情况及其与RFP耐药性的关系。结果38．9％（28／72）结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药。所有结核分枝杆菌临床菌株均携带rpoB基因。1株RFP敏感的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变。5株RFP耐药的结核分枝杆菌临床菌株rpoB基因氨基酸序列中出现S526L点突变，另5株发生H531D点突变，但均未发现516位氨基酸突变或526和531位氨基酸联合突变。结论浙江地区分离的结核分枝杆菌临床菌株有较高的RFP耐药频率。上述结核分枝杆菌临床菌株对RFP耐药性与rpoB基因氨基酸序列526或531位点突变密切相关。     

对利福平耐药的结核分枝杆菌rpoB基因突变与耐药程度关系的探讨

目的　探讨对利福平耐药结核分枝杆菌的rpoB基因的突变位置与耐药程度的关系。方法　 32株对5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R5 0 )、2 2株对 2 5 0 μg·mL-1的利福平耐药 (R2 5 0 )、10株对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株 (R0 )和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株包括核心区域在内的rpoB基因片段进行了DNA序列分析。结果　 (1) 10株 (R0 )对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素敏感的结核分枝杆菌株和 1株H3 7Rv结核分枝杆菌株未检测到rpoB基因易突变区的改变 ;(2 )耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变 2 5株 (78 1% ) ;耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变 2 1株 (95 5 % ) ,两者差异无显著性 (P =0 170 ) ;(3)耐利福平的低耐药 (R5 0 )结核分枝杆菌突变点呈散在分布 ;(4 )耐利福平的高耐药 (R2 5 0 )结核分枝杆菌突变以 5 31位氨基酸突变为主 (5 7 1% )以及联合突变较多见 (2 3 8% ) ,与R5 0相比两者差异有显著性。结论　大部分对利福平耐药的结核分枝杆菌均有rpoB基因突变。在对利福平低耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,其突变位置呈散在分布。在对利福平高耐药结核分枝杆菌的rpoB基因中 ,5 31位密码子突变及多个密码子联合突变是其主要突变特征。     

对利福平敏感的多耐药结核分枝杆菌rpoB基因突变一例

2011年10月11日,世界卫生组织《2011年全球结核病（TB）控制报告》显示,2010年全球结核病新发患者880万例,死亡145万例。虽较前有所下降,但下降过于缓慢,提醒我们结核病防治的工作仍任重道远。利福平是目前广泛使用的杀菌作用最强的抗结核药物之一,其通过结合依赖DNA的RNA多聚酶β亚单位抑制细菌RNA转录。但利福平自1966年开始应用于结核相关疾病的治疗至今,已有近50年的历史,出现了很多利福平耐药现象,情况已不容忽视。我国2000年全国流行病学抽样调查（简称“流调”）显示,利福平的耐药率达16.6%;2012年3月21日卫生部公布的全国第五次结核病流调结果显示,利福平的耐药率仍不乐观。Mtb对利福平的耐药主要机制为rpoB基因突变导致利福平无法与其结合。目前,国内外已有越来越多的研究者致力于利福平耐药机制的研究,并企图通过检测rpoB基因突变快速鉴定Mtb对利福平的耐药情况。笔者研究中发现了1例结核病病史长达10余年的肺结核患者,其对多种一线及二线药物都产生了耐药,但对利福平仍然敏感,进一步提取菌株DNA并进行基因测序,发现rpoB基因存在突变。目前关于利福平敏感的菌株发现rpoB基因突变的研究较少,故现将该患者临床与实验室资料报告如下。     

山东省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的　分析山东省利福平耐药结核菌株rpoB基因突变特点。方法 本研究为回顾性调查,135株样本分别取自1997、2000及2003年的流行病学调查和医院的临床样本。采用PCR直接基因测序法分析rpoB基因突变。结果 135株结核菌中,60株为利福平耐药菌株,其中55株(91.7%)rpoB基因的利福平耐药决定区(RRDR)有突变。突变频率依次为密码子531(60.0%),526(29.1%)和516(7.3%)。1株耐药菌同时发生了少见的3个密码子(511,515,518)的多核苷酸突变。75株敏感菌株中,仅3株(4.0%)有突变,均发生在密码子533,包括一个新发现的突变基因型CTG(Leu)→ATG(Met)。结论 来自山东省结核菌中,利福平耐药表型与rpoB基因突变的符合率为94.1%,并提示密码子533突变与利福平耐药表型相关性较低。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的 了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征.方法 对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律.结果 耐利福平分离株96.4%（27/28）存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%（18/28）,513位突变率21.4%（6/28）,531位突变率7.1%（2/28）,529位突变率3.6%（1/28）;耐其他抗结核药18.5%（5/27）存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性.所有敏感菌株均无突变.结论 rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%（24/28）,而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感.     

六安地区结核分枝杆菌耐药基因katG 和rpoB 的突变特征

目的 分析临床分离的结核分枝杆菌katG 和rpoB 基因的突变情况与耐药之间的关系,了解六安地区耐药结核分枝杆菌的基因突变特征。方法 采用比例法对六安地区65 株结核分枝杆菌临床分离株进行药敏试验;通过特异性引物,对目的基因片段katG 和rpoB 进行扩增、测序后进行分析。结果 60 株结核分枝杆菌中分别有有9 株耐异烟肼和14 株耐利福平,其中同时耐异烟肼和利福平的6株。9 株耐异烟肼菌株中,4 株katG 在315（Ａ GC→ACC 或ACA）位点发生突变,占44.4％;14 株耐利福平菌株中,11 株rpoB 分别在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC 或TAC)和531(TCG→TTG)位点发生突变,占总耐药菌株的78.6％;6 株同时对利福平和异烟肼耐药,其中5 株katG 或rpoB 基因发生突变,占83.3％。结论 六安地区结核分枝杆菌耐异烟肼和耐利福平分别主要是由katG 和rpoB 基因突变引起,其中耐异烟肼主要在315（AGC→ACC 或ACA）位,而耐利福平在516（GAC→GTC）、526(CAC→CGC或TAC)和531(TCG→TTG)位,都发生了突变。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变特征的初步探讨

目的了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征。方法对65株临床分离菌株rpoB基因509-631位点分别进行PCR-SSCP检测和DNA序列测定,观察不同耐药株rpoB基因突变的规律。结果耐利福平分离株96.4%(27/28)存在rpoB基因突变,其中526位突变率64.3%(18/28),513位突变率21.4%(6/28),531位突变率7.1%(2/28),529位突变率3.6%(1/28);耐其他抗结核药18.5%(5/27)存在rpoB基因突变,突变位点具有随机性。所有敏感菌株均无突变。结论rpoB基因突变与利福平耐药密切相关,浙江省rpoB基因突变主要以526位突变为主,其次为513位,两者占总数的86%(24/28),而耐其他抗结核药菌株也存在rpoB基因的突变,但没有明显规律,且均对利福平敏感。     

Xpert MTB/RIF对结核菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点的分析

目的分析Xpert MTB/RIF检测对结核分枝杆菌利福平耐药的诊断价值及rpoB基因突变特点。方法回顾分析2016年1月至2020年6月期间来院就诊患者相同标本,同时进行了结核分枝杆菌培养及药敏试验和Xpert MTB/RIF检测,且任一种方法检出MTB。结果用Xpert MTB/RIF及培养药敏两种方法检测标本共7659例,Xpert MTB/RIF对MTB的检出率高,且有统计学意义(P<0.05)。两种方法同时检出MTB 3621例,Xpert MTB/RIF检出利福平耐药262例,培养药敏检出利福平耐药238例;两种方法检测利福平耐药的一致率为99.01%;采用Kappa检验,两种方法的检测结果完全符合。RR-TB探针突变的频率为E探针63.37%、D探针20.16%、B探针8.23%、A探针4.53%、C探针0.82%、联合探针突变2.88%;以培养药敏结果为利福平耐药的金标准,Xpert无探针突变组利福平耐药的准确性要明显低于有探针突变组;初治和复治病例探针突变频率差异有统计学意义。结论Xpert MTB/RIF检测可以快速有效的诊断利福平耐药结核,有助于早发现、早治疗。利福平耐药结核探针突变主要发生在E探针和D探针,C探针突变最少。     

结核分支杆菌rpoB基因克隆与酶谱分析

目的克隆结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因。方法以结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因保守区的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增片段为探针从已建立的结核分支杆菌基因文库中筛选ｒｐｏＢ基因。结果引物ＴＲ１、ＴＲ２ｂ扩增Ｈ３７ＲａＤＮＡ获１约４１１ｂｐ片段。经克隆及序列分析表明该片段与结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因中央区域的序列同源。对约１２０００个克隆进行筛选，共获７个可疑阳性克隆，经过再次杂交证实其中３个克隆为阳性。其中１个克隆携带约３．８ｋｂ插入片段。一系列内切酶酶切分析后得出该３．８ｋｂ克隆片段的部分限制性内切酶酶谱。进一步分析表明所用４１１ｂｐ探针同源序列距两端分别为１ｋｂ和２．８ｋｂ。结论与报道的结核分支杆菌ｒｐｏＢ基因开放阅读框架比较，我们克隆的３．８ｋｂ片段包含结核分支杆菌ｒｐｏＢ完整基因的大部分，为进一步研究利福平及其它利福霉素类药物抗结核作用方式及耐药机制奠定了基础     

RPA-LFD技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性的应用

目的 基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值.方法 采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测.建立RPA-LFD技术,检测182株菌株中利福平耐药决定区(RRDR)常见突变位点rpoB 531、...     

广东地区结核分枝杆菌利福布丁耐药株rpoB全基因序列突变特征

目的分析广东地区结核分枝杆菌利福布丁耐药株rpoB全基因序列突变特征。方法常规比例法检出100株结核分枝杆菌利福布丁（rifabutin,RBU）耐药株,30株敏感株,扩增rpoB全基因序列并进行序列测定,Clustal×软件比对所测序列突变情况。结果利福布丁敏感株rpoB基因无突变;利福布丁耐药株有24种突变类型,121个突变位点,其中106个在利福平耐药决定区（rifampin resistance determining region,RRDR）之内,15个在RRDR之外,包括3个是单点突变（V176F,P206R,H323Y）和12个联合突变;常见突变位点分别是531（70%）和526（20%）;两位点联合突变率21%,单点突变率79%。结论广东结核分枝杆菌敏感株rpoB基因不发生突变,利福布丁耐药株rpoB基因突变率100%,最常见突变位点分别是531和526。516、526和531之间不发生联合突变。RRDR之内鉴定出9种突变位点,RRDR之外鉴定出15个新突变位点,包括3个单点突变V176F,P206R和H323Y,位于rpoB基因起始端。     

Progressive rise of Mycobacterium tuberculosis resistance to rifampicin and streptomycin in Riyadh, Saudi Arabia

OBJECTIVE: The aim of this study was to investigate, for the first time, the factors associated with resistance to antituberculous drugs in Saudi Arabia, and to follow the long-term trends in drug resistance. METHODOLOGY: A retrospective study of patients with positive Mycobacterium tuberculosis recorded at the Riyadh Tuberculosis Center in 1990 was undertaken. The resistance figures from the same centre for the period July 1996 to June 1997 were reviewed for comparison. RESULTS: Resistance was significantly higher in those previously treated (71%) than in those who denied previous treatment (34%). There was a trend towards association of resistance with cavitatory, multilobar, and acid fast bacilli-positive cases. Nationality (Saudis, Yemenis, others) had no significant effect on resistance. The Riyadh Region now has the same high prevalence of rifampicin resistance as previously reported in the Western Region of the Kingdom. The figures on resistance for the years 1986-88, 1990, and 1996-97 were: isoniazid 19.5/13.8/11.1%, rifampicin 10/20.7/24.6%, streptomycin 5/22/27.4%, ethambutol 3.7/3.9/1.8%, respectively. The reduction in isoniazid and ethambutol resistance coincided with a rise in resistance to rifampicin and streptomycin. We speculate that this resulted from the fact that isoniazid and ethambutol are restricted only to the treatment of tuberculosis and cannot, by law, be dispensed by general practitioners or private pharmacies. Rifampicin and streptomycin, however, are widely used for brucellosis; an endemic disease in Saudi Arabia where up to 12 weeks of rifampicin therapy is recommended. CONCLUSIONS: There has been a significant increase in rifampicin and streptomycin resistance in Saudi Arabia over the last 10 years. Possible causes include poor compliance and wide use of these two drugs for non-tuberculosis conditions. These findings could jeopardize the benefits of the directly observed therapy short course policy which is being implemented in Saudi Arabia. Consideration should be given to prohibiting the routine use of rifampicin for the treatment of brucellosis.     

序列分析重庆地区耐利福平结核分支杆菌的rpoB基因突变

目的　研究重庆地区结核分支杆菌对利福平 (R)的耐受与rpoB基因突变的关系。方法　PCR扩增 6 7株分离自重庆地区肺结核患者的耐R结核分支杆菌的rpoB基因片段 (319bp) ;测定扩增片段的序列 ,并与野型株序列作对比分析。 结果　 6 7株临床分离的耐R株中 ,8株 (12 % )无变异 ,5 9株 (88% )有突变 ,突变涉及 8个氨基酸位点。突变有 14种类型 ,4 9株(83% )的突变为单个密码子取代 ,9株为双密码子取代 ,1株为 3个碱基 (一个密码子 )插入 ,未检出碱基缺失。突变高发位点为 5 31位 (37/ 5 9)密码子 ,其次为 5 16位 (13/ 5 9)和 5 2 6位 (7/ 5 9)。 3株菌在 4 77位的谷氨酸 (Glu) ,天冬氨酸 (Asp)突变为首次发现。结论　重庆地区结核分支杆菌耐利福平的发生与rpoB基因的突变密切相关 ,突变的类型与国外的报告基本相似。PCR扩增和产物测序将是临床检测结核分支杆菌耐利福平和耐多药的一种迅速、准确的方法     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的价值北大核心CSCD

目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法对鉴定为MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以绝对浓度法药物敏感性试验结果为标准,分析熔解曲线法检测RFP和INH的灵敏度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度分别为98.18%和85.85%,特异度分别为95.28%和97.39%,符合率分别为95.90%和94.36%,Kappa值分别为0.88和0.85。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG 315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论南京市结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。