细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1靶向微小 RNA-339-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨长链非编码 RNA细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1(lncRNA CDKN2B-AS1)对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法收集南阳市中心医院 2017年 1月 2019年 1月收治的 37例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织。将 MDA-MB-453细胞分为 CDKN2B-AS1阴性对照( si-NC组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA(si-CDKN2B-AS1组)、 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+miR-339-5p阴性对照( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组)以及 CDKN2B-AS1小分子干扰 RNA+ miR-339-5p特异性寡核苷酸抑制剂( si-CDKN2B-AS1+anti-miR-339-5p组)。采用 RT-qPCR法对 CDKN2B-AS1及微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)表达水平进行检测;细胞周期及增殖活性检测分别采用流式细胞术及 MTT实验;采用 Transwell小室技术对细胞迁移和侵袭进行检测;采用 Western blotting法对增殖标记蛋白细胞增殖核抗原 -67(Ki67)、细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子 1A(P21)、上皮型钙黏蛋白( E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达进行检测;荧光素酶报告实验检测 CDKN2B-AS1对 miR-339-5p的靶向调控。结果在乳腺癌组织中 CDKN2B-AS1表达水平上调［( 2.23±0.08)比( 1.00±0.06)］(P<0.05)。抑制 CDKN2B-AS1可增加 G0期细胞比例［(43.29±3.76)%比( 30.25±3.01)%］、 P21表达水平升高, S期细胞比例［(21.91±3.10)%比( 34.19±3.32)%］、细胞存活率［( 53.02±5.38)%比( 100.00±7.12)%］、迁移、侵袭数以及 Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平降低( P<0.05)。 CDKN2B-AS1靶向调控 miR-339-5p,抑制 miR-339-5p逆转抑制 CDKN2B-AS1对 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭的作用。结论抑制 CDKN2B-AS可抑制乳腺癌 MDA-MB-453细胞增殖、迁移、侵袭,且靶向调控 miR-339-5p表达。关键词:乳腺肿瘤;细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2B反义 RNA1;微小 RNA-339-5p(miR-339-5p);增殖;迁移;侵袭     

微小RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5...     

微小 RNA-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 探讨微小RNA(miR)-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2014年1月至2017年1月菏泽市牡丹人民医院52例口腔鳞癌组织中miR-590的表达.将口腔鳞癌细胞Tca-8113分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-590抑制物(anti-miR-590)组、空载体(pcDNA3.1)组、大肿瘤抑制基因1(LATS1)过表达载体(pcDNA3.1-LATS1)组、anti-miR-590+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-590+LATS1小干扰RNA组(si-LATS1).四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭数.双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法检测验证miR-590和LATS1的靶向调控关系.结果 与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中miR-590的表达水平显著升高[(0.73±0.07)比(0.30±0.03),P<0.05].与anti-miR-NC组比较,anti-miR-590组细胞活力[(0.40±0.04)比(0.78±0.08)]、迁移[(46±5)个比(136±13)个]和侵袭数[(42±4)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05);与pcD-NA3.1组比较,pcDNA3.1-LATS1组细胞活力[(0.49±0.05)比(0.78±0.08)]、迁移数[(56±6)个比(136±13)个]和侵袭数[(50±5)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05).LATS1靶向负调控LATS1表达.与anti-miR-590+si-NC组比较,anti-miR-590+si-LATS1组细胞活力(0.61±0.06)比(0.40±0.04)、迁移数[(94±9)个比(45±4)个]和侵袭数[(87±9)个比(40±4)个]显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-590通过靶向调控LATS1表达从而抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

环状 RNA肌球蛋白轻链激酶靶向微小 RNA-497-5p调控结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨环状 RNA肌球蛋白轻链激酶( circMYLK)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和可能机制。方法本研究 2019年 3月至 2020年 1月进行。实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测检测正常结肠上皮细胞( NCM460)和结肠癌细胞(SW480、SW620、Caco-2)中 circMYLK和微小 RNA-497-5p(miR-497-5p)表达水平。将 circMYLK小干扰 RNA(si-circMYLK)、 miR-497-5p模拟物分别转染 SW480细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、 Transwell实验分别检测干扰 circMYLK或过表达 miR-497-5p对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和 RT-qPCR确定 circMYLK对 miR-497-5p的调控作用。结果与 NCM460细胞比较,结肠癌细胞中 circMYLK表达( 1.00±0.06比 3.39±0.23、2.31±0.24、2.98±0.18)显著升高, miR-497-5p表达( 1.00±0.08比 0.36±0.04、0.63±0.05、0.54±0.05)显著降低( P<0.05)。干扰 circMYLK表达后 SW480、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。过表达 miR-497-5p后 SW480细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低( P<0.05)。 circMYLK靶向负性调控 miR-497-5p表达。抑制 miR-497-5p表达能够逆转干扰 circMYLK对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭的影响,恢复细胞活力、迁移和侵袭能力( P<0.05)。结论结肠癌细胞中 circMYLK呈高表达,干扰 circMYLK通过靶向 miR-497-5p能够抑制结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-5586-5p在肝细胞癌中的表达及其对肝细胞癌侵袭、迁移的影响

目的检测肝细胞癌中miRNA-5586-5p的表达情况,探究其与肝细胞癌临床病理特征和肝细胞癌病人预后的相关性,进而探究其对肝细胞癌细胞侵袭和迁移的影响。方法选取2010年1月—2013年6月西安交通大学第一附属医院进行根治性肝癌切除术的肝细胞癌患者100例。采用Real-time PCR法检测肝细胞癌组织和癌旁组织中miRNA-5586-5p的表达水平;采用合理统计学方法进行miRNA-5586-5p的表达水平与肝细胞癌临床病理特征的相关性分析及对肝细胞癌患者预后的影响。采用Real-time PCR法检测肝细胞癌细胞系中miRNA-5586-5p的表达水平,继而通过Transwell小室实验研究miRNA-5586-5p对肝细胞癌细胞侵袭和迁移能力的影响。采用Real-time PCR、Western blotting以及免疫组织化学检测miRNA-5586-5p下游潜在靶点肝细胞癌水通道蛋白9(AQP9)的m RNA和蛋白表达水平,利用Western blotting证实miR-5586-5p下调AQP9并通过miRNA-5586-5p-AQP9-AKT通路发挥促癌作用。结果 miR-5586-5p在肝细胞癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调(P0.01)。miRNA-5586-5p的高表达与肿瘤数量、血管侵犯、Edmondson分级和TNM分期显著相关(P0.05、0.01)。与mi RNA-5586-5p高表达者比较,miR-5586-5p低表达者的生存时间更长(P0.01)。miR-5586-5p在肝细胞癌细胞系中的表达均明显高于正常肝细胞(P0.05),经Transwell小室实验证实miR-5586-5p具有增强肝细胞癌细胞的侵袭、迁移的作用。miR-5586-5p可下调AQP9的蛋白表达量;且miR-5586-5p与AQP9蛋白表达呈负相关。结论 miR-5586-5p在肝细胞癌中为高表达,并显著促进肝细胞癌的侵袭、迁移能力,miR-5586-5p与AQP9的蛋白水平呈负相关,并且能够抑制AQP9表达和通过miR-5586-5p-AQP9-AKT通路促进肝细胞癌细胞的侵袭与迁移能力。     

长链非编码RNA赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)赖氨酰氧化酶样蛋白1反义RNA(LOXL1-AS1)在结直肠癌中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响和可能的作用机制。方法 选取2016年1月至2018年12月在河南省人民医院行结直肠癌根治术的56例病人新鲜癌组织,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织样本及结直肠癌细胞系SW480、SW620、HCT116和Lovo细胞中lncRNA LOXL1-AS1的表达水平,以配对癌旁组织及人正常结直肠黏膜细胞FHC作正常对照;构建靶向LOXL1-AS1序列的小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)并转染SW480和Lovo细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验、划痕实验和Transwell小室法检测沉默lncRNA LOXL1-AS1表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测沉默LOXL1-AS1表达后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果 LOXL1-AS1在结直肠癌...     

微小 RNA?671?5p对人结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨 miR?671?5p对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法培养人正常结肠上皮细胞 NCM460和结肠癌细胞 SW480、SW620、HT29和 LOVO,实时荧光定量 PCR(RT?qPCR)检测 miR?671?5p和染色盒同源物 4(CBX4)mRNA水平。转染 miR?671?5p mimics(miR?671?5p组)、阴性对照( miR?NC组)至 SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法( MTT)检测细胞增殖,克隆实验检测细胞克隆形成能力, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法( Western Blot)检测 CBX4、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、 p21、基质金属蛋白酶 9(MMP?9)、基质金属蛋白酶 14(MMP?14)及酪氨酸激酶 1/信号转导子与转录激活子 3(JAK1/STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证 miR?671?5p和 CBX4之间靶向关系。结果与 NCM460细胞比,结肠癌细胞 SW480、SW620、HT29和 LOVO中 miR?671?5p水平显著降低( P＜0.05),CBX4 mRNA水平显著升高( P＜0.05)。与 miR?NC组比, miR?671?5p组 SW480细胞培养 24、48、72 h后的 OD值、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数及 CyclinD1、MMP?9、MMP?14、p?JAK1和 p?STAT3蛋白水平显著降低( P＜0.05),p21蛋白水平显著升高( P＜0.05)。 miR?671?5p负调控 CBX4表达,过表达 CBX4降低了 miR?671?5p过表达对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭及 JAK1/STAT3信号通路的影响。结论 miR?671?5p过表达可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制与下调 CBX4表达、抑制 JAK1/STAT3信号通路的激活有关。     

LncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-515-5p调控胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA ZFPM2反义RNA1(ZFPM2-AS1)对miR-515-5p的靶向调控作用以及对胆管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人肝内胆管上皮细胞HIBEpic和3种胆管癌细胞(RBE、HuCCT1、TFK1)中ZFPM2-AS1和miR-515-5p的...     

miR-641对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究微小RNA641(miR-641)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制.方法 实验分为miR-NC组、miR-641组、si-NC组、si-S100A7组、miR-641+pcDNA组、miR-641+pcDNA-S100A7组.以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测牛皮癣素(S100...     

微小 RNA-425-5p靶向调控 PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-425-5p对宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年10月,利用Lipofectamine TM 2000将miR-425-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照转染至海拉细胞中,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-425-5p的表达情况,MTT法检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.采用生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和PTEN的靶向关系.将PTEN过表达质粒pcDNA3.1-PTEN和PTEN干扰序列siRNA-PTEN转染至海拉细胞后,观察PTEN对海拉细胞增殖活力、克隆形成能力、侵袭能力和迁移能力的影响.结果 与各自阴性对照比较,miR-425-5p过表达可促进海拉细胞增殖[(142.25±11.32)％比(100.00±6.67)％]、克隆形成、侵袭[(133.28±9.86)个比(77.46±5.32)个]和迁移[(187.56±15.12)个比(115.35±10.26)个]并下调PTEN蛋白表达,而miR-425-5p低表达则抑制海拉细胞增殖[(58.38±3.45)比(100.00±5.74)]、克隆形成、侵袭[(43.32±3.62)个比(75.65±6.15)个]和迁移[(62.28±4.05)个比(109.72±9.84)个]并上调PTEN蛋白表达(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实,PTEN是miR-425-5p的靶基因;PTEN过表达可促进海拉细胞增殖[(66.52±4.36)％比(100.00±6.18)％]、克隆形成、侵袭[(46.23±3.13)个比(71.65±5.24)个]和迁移[(62.65±4.26)个比(108.42±8.57)个],而PTEN低表达则抑制海拉细胞增殖[(136.52±9.85)个比(100.00±7.05)个]、克隆形成、侵袭[(110.27±9.85)个比(70.52±6.18)个]和迁移[(168.78±16.96)个比(113.26±10.13)个].结论 miR-425-5p可通过靶向调控PTEN表达促进宫颈癌海拉细胞增殖、侵袭和迁移.     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-145-5p调控结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)核受体亚族2F组成员1反义RNA(NR2F1-AS1)对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 收集2015年3月至2017年5月青海省第五人民医院外科手术切除并经病理证实为原发性结肠腺癌组织25例,另留取距肿瘤边缘3 cm的癌旁组织(正常结肠组织).实时荧光定量P...     

长链非编码RNA TPT1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)TPT1-AS1在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 收集2014年7月至2016年9月陕西省核工业二一五医院非小细胞肺癌标本及癌旁组织各100例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌标本、癌旁组织中lncRNA TPT1-AS1表达情况,分...     

锚蛋白B在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨锚蛋白B(ANK2)基因在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 选取2015年10月至2018年10月南阳市中心医院存档的鼻咽癌组织67例,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测人组织中ANK2 mRNA表达,以50例鼻咽部炎症组织作为对照组,分析鼻咽癌组织中ANK...     

长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1靶向调控微RNA-128-3p对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的 探究长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5反向转录序列1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌中的表达情况及靶向调控微RNA-128-3p(miR-128-3p)对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)定量分析2017年1月至2018年12月在郑州大学人民医院住院并进行手术治疗的38例结直肠癌病人癌组织及相应癌旁组织、结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA OIP5-AS1和miR-128-3p的表达。将SW620细胞设为si-OIP5-AS1组、si-NC组、miR-128-3p mimic组、mimic-NC组、miR-128-3p inhibitor+si-OIP5-AS1组和inhibitor-NC+siOIP5-AS1组,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力,采用蛋白质印迹法检测E2F1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏蛋白（N...     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR-512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、Ecadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克...