MTT法测定乳腺癌对化疗药物敏感性的实验研究

目的探讨肿瘤药敏试验在乳腺癌化疗选药中的作用。方法将19例患者的浸润性乳腺导管癌组织进行体外培养,以临床常用的6种化疗药物加以干预,MTT法检测化疗药物对癌细胞的抑制率。结果浸润性乳腺导管癌细胞对顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、甲氨喋呤、多西紫杉醇中度敏感,6种化疗药物对乳腺癌细胞的抑制率无显著性差异(P=0.934)。结论初次化疗的浸润性乳腺导管癌患者对多种化疗药物均较为敏感。     

Sox2和ABCC5在乳腺癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的探讨Sox2和ABCC5在乳腺癌中表达及与化疗敏感性的关系。方法选择乳腺癌患者136例,实时荧光逆转录法、免疫组织化学法、酶联免疫吸附法测定Sox2和ABCC5在乳腺癌组织(乳腺癌组)及癌旁组织(癌旁组)的表达水平,并探讨Sox2、ABCC5表达与乳腺癌化疗敏感性的关系。结果乳腺癌组Sox2 mRNA、ABCC5 mRNA表达水平高于癌旁组(P<0.05);乳腺癌组Sox2、ABCC5阳性率高于癌旁组(P<0.05);乳腺癌组Sox2、ABCC5蛋白表达评分高于癌旁组(P<0.05);乳腺癌组Sox2、ABCC5蛋白表达水平高于癌旁组(P<0.05);Sox2、ABCC5蛋白表达与年龄相关性不明显(P>0.05);与肿瘤最大径、病理学分级、TNM分期、浸润深度、淋巴血管间隙浸润、淋巴结转移、复发相关性明显,且肿瘤最大径≥5 cm、病理学分期越高、TNM分期越高、浸润深度越深、有淋巴血管间隙浸润、有淋巴结转移、有复发,Sox2、ABCC5蛋白阳性表达率越高(P<0.05)。Sox2、ABCC5蛋白表达与化疗敏感性相关性明显,且化疗敏感性越低,Sox...     

miRNA-1246通过NF-κB介导乳腺癌细胞紫杉醇耐药的机制研究

目的探讨微小RNA-1246(miR-1246)在乳腺癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用及相关机制。方法以SK-BR-3细胞构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX作为SK-BR-3/PTX组,以正常SK-BR-3细胞作为SK-BR-3组;CCK-8实验检测两组细胞活力并计算凋亡指数;RTFQ-PCR检测miR-1246表达水平;免疫荧光实验和Western blot法检测P-gp蛋白表达。SK-BR-3/PTX细胞转染miR-1246 inhibitor和阴性对照(NC)inhibitor,分别设为miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组;Western blot法检测p-NF-κB p65、IκBα和P-gp蛋白表达。PTX处理miR-1246 inhibitor组和NC inhibitor组,流式细胞术检测细胞凋亡。结果成功构建PTX耐药乳腺癌细胞SK-BR-3/PTX,耐药指数为51.3。与SK-BR-3细胞相比,SK-BR-3/PTX细胞miR-1246表达水平显著升高(P<0.01),P-gp和p-NF-κB p65蛋白显著上调,IκBα蛋白明显下调(P<0.01),细胞核中NF-κB p65蛋白显著上调(P<0.01)。转染miR-1246 inhibitor可逆转SK-BR-3/PTX细胞上述蛋白表达变化(P<0.01)。miR-1246 inhibitor还可显著增强PTX诱导的SK-BR-3/PTX细胞凋亡(P<0.01)。结论miR-1246可能通过NF-κB信号通路诱导P-gp蛋白表达上调,从而诱导乳腺癌SK-BR-3细胞PTX耐药。     

乳腺癌化疗敏感性与药物遗传学分子标志物相关性研究

目的:综述乳腺癌化疗敏感性与药物遗传学分子标志物相关性的研究进展。方法:以药物遗传学、分子标志物、乳腺癌等为关键词检索Medline收录的相关文献,并对其进行整理和分析。结果:乳腺癌化疗敏感性相关药物遗传学分子标志物包括胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)、胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)、人表皮生长因子受体2(human epidermalgrowth factor receptor2,Her-2/neu)、谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione S-transferase,GSTs)等。结论:乳腺癌化疗相关药物遗传学分子标志物研究的广泛深入为基于药物遗传学的乳腺癌个体化治疗提供了可能。     

HER-2癌基因反义寡核苷酸对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的研究HER-2癌基因反义寡脱氧核苷酸联合叶酸对乳腺癌细胞SK-Br-3化疗敏感性的影响。方法通过叶酸受体将HER-2反义寡脱氧核苷酸导入乳腺癌细胞,给予不同剂量的阿霉素和顺铂,用四氮唑盐(MTT)方法检测细胞存活率。结果反义寡脱氧核苷酸-叶酸(ASODN-FA)显著增加SK-Br-3细胞对阿霉素和顺铂的敏感性,使细胞存活率明显降低。结论HER-2反义寡脱氧核苷酸能增加乳腺癌细胞对阿霉素和顺铂的化疗敏感性。     

miR-199a通过NF-κB通路抑制子宫内膜干细胞黏附和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-199a对子宫内膜干细胞(endometrial stem cells,EnSCs)黏附和侵袭的影响及机制.方法 通过miR-199a抑制剂或阴性对照抑制EnSCs miR-199a表达后观察IKKβ、IκB-α、pIκB-α、NF-κBp65的表达水平;分别用NF-κBp65特异性siRNA(si-...     

BRCA-1在三阴性乳腺癌中的表达与含铂方案化疗敏感性的临床研究

目的根据BRCA-1在三阴性乳腺癌(TNBC,triple negative breast cancer)中的表达情况,分析其与含铂化疗方案的敏感性。方法通过临床随访分析探讨BRCA-1蛋白在三阴性乳腺癌的不同表达与含铂药物化疗后生存期(中位OS,中位PFS)的关系。结果BRCA-1蛋白阴性表达组应用含铂药物化疗后中位OS、中位PFS较阳性表达组明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌中BRCA-1蛋白阴性成为潜在三阴性乳腺癌应用含铂化疗敏感性的预测因子。     

乳腺癌干细胞VEGF表达的实验研究

目的探讨乳腺癌干细胞血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达及意义。方法应用流式细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7细胞分离乳腺癌干细胞和非干细胞,采用Northern blot技术测定干细胞与非干细胞VEGF表达情况。结果与乳腺癌非干细胞相比,乳腺癌干细胞VEGF表达水平明显增强。结论乳腺癌干细胞可通过高表达VEGF增强转移能力,是乳腺癌转移的关键因素之一。     

瑞香素调节Shh/Gli1信号通路对乳腺癌增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的 探究瑞香素调节音猬因子(Shh)/胶质细胞瘤转录因子1(Gli1)信号通路对乳腺癌增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法 将人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞分为对照组、瑞香素组(40μmol/L瑞香素)、GANT61组(10μmol/L GANT61)、瑞香素+GANT61组(40μmol/L瑞香素和10μmol/L GANT61);CCK-8实验检测MDA-MB-231细胞增殖;划痕试验检测MDA-MB-231细胞迁移情况;在上述各分组细胞中加入1 mg/L阿霉素(Dox)处理48 h后CCK-8实验检测细胞化疗敏感性;流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞Shh/Gli1通路及凋亡相关蛋白表达水平。结果 与0μmol/L比较,随着瑞香素的剂量增加MDA-MB-231细胞存活率显著降低(P<0.05),而与40μmol/L比较,50μmol/L瑞香素处理MDA-MB-231细胞存活率无差异(P>0.05),因此选择40μmol/L瑞香素作为后续实验的干预条件;与对照组比较,瑞香素组和GANT61组OD4...     

雷公藤红素升高ROS和抑制NF-κB通路抑制肺癌H460细胞生长

摘要：目的:探究雷公藤红素对人肺癌H460细胞的体外抑制作用。方法:使用MTT法检测雷公藤红素对H460细胞生长的影响;使用细胞集落实验检测雷公藤红素对H460细胞集落形成的影响;采用细胞流式仪检测雷公藤红素及雷公藤红素联用N-乙酰半胱氨酸（NAC）对活性氧（ROS）水平的影响;采用MTT法检测雷公藤红素联用NAC对H460细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测雷公藤红素及联用NAC后对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平影响。同时,进一步使用蛋白质印迹法检测雷公藤红素对核因子κB（NF-κB）通路中IκBα表达水平的影响。结果:雷公藤红素浓度依赖性的抑制H460细胞的生长和集落形成（P<0.05或P<0.01）,浓度依赖性的促进细胞内ROS水平（P<0.01）,同时能够通过升高ROS水平诱导H460细胞死亡（P<0.01）,升高Bax蛋白及抑制Bcl-2蛋白的表达（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,促进IκBα的表达（P<0.05或P<0.01）。结论:雷公藤红素表现出高效抗肺癌作用,能升高ROS水平介导凋亡相关蛋白的表达以及抑制NF-κB通路来抑制人肺癌H460细胞的生长。     

对肿瘤干细胞的认识和可调控的意义

恶性肿瘤严重地威胁着人类的健康，是危害人类生命的重要原因之一。尽管有关研究报告很多，遗憾的是其机制尚不清楚，至今尚无确切有效的抗癌、控癌措施。局部复发和远处转移一直是导致最终治疗失败的主要问题。WHO提出的新目标和理念——肿瘤属于可调控的慢性疾病。新的研究发现在肿瘤组织中有一类具有自我更新及分化潜能的细胞亚群，而且是肿瘤复发及转移的根源。这部分细胞被称马肿瘤干细胞。国内外相继从血液系统肿瘤及多种实体瘤中分离、鉴定了肿瘤干细胞。随着肿瘤干细胞学说的提出及确认，人们对肿瘤复发、转移机制和对策有了新的认识和期望，从而为恶性肿瘤治疗後的复发转移的预防提供了一个全新的途径。现综述如下。     

乳腺癌干细胞富集方法的初步研究

目的通过培养和富集乳腺癌细胞系及其干细胞,探讨不同乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例,并分离鉴定乳腺癌干细胞。方法培养两种乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231,利用流式细胞仪检测两种乳腺癌细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例;通过无血清悬浮培养,观察其是否形成细胞球,再联合化疗筛选,富集乳腺癌干细胞。结果无血清悬浮培养,MDA-MB-231细胞未发现明显细胞球,MCF-7培养约6d出现细胞球;加入化疗药后,MCF-7细胞成球周期短至4d。流式细胞仪检测,MCF-7、MDA-MB-231两种细胞系中CD44+CD24-/low细胞比例分别2.07%和0.20%。结论利用CD44+CD24-/low标记流式细胞仪检测乳腺癌干细胞,简单有效;无血清悬浮培养,能富集乳腺癌干细胞,联合化疗双重筛选,能提高富集效率。     

五味子乙素通过ROS介导内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 研究五味子乙素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 用细胞计数试剂(CCK-8)检测不同浓度五味子乙素对MDA-MB-231细胞存活率的影响;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）作用 MDA-MB-231 细胞 24 h,分别用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡情况;用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平;用Western blot法检测细胞凋亡及内质网应激相关蛋白（Bcl-2、Bax、CHOP、GPR78、PERK、p-PERK、p-eIF2α、eIF2）的表达。结果 与空白组比较,随着五味子乙素浓度增大,细胞存活率明显降低,其IC₅₀为19.16 μmol/L;与对照组比较,五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均能抑制细胞克隆形成(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）均可诱导细胞凋亡（P<0.05）,使抗凋亡蛋白BCL-2的表达显著降低,促凋亡蛋白Bax的表达显著升高(P<0.05);五味子乙素（10、20、40 μmol/L）显著升高细胞内ROS水平(P<0.05),且呈剂量依赖;五味子乙素（10、20、40 μmol/L）能够激发内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP、GPR78、p-eIF2α表达增多(P<0.05),且呈剂量依赖。结论 五味子乙素可能通过ROS介导内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

摘要：目的:本研究旨在评价熊竹素（JAR）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制。方法:体外培养人主动脉平滑肌细胞株（HA-SMCs）,10-6?mol·L-1的AngⅡ诱导HA-SMCs增殖并使用梯度稀释的JAR进行干预,检测HA-SMCs活性、培养基中过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。使用2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针和流式细胞仪检测HA-SMCs中ROS水平。利用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测HA-SMCs中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX） 4、NOX2及核因子κB（NF-κB）的表达水平。结果:JAR对AngⅡ诱导的HA-SMCs活性增加具有显著抑制作用（P＜0.01）。AngⅡ诱导组HA-SMCs中荧光强度较对照组细胞显著增加（P＜0.05或P＜0.01）,说明细胞中ROS水平较对照组显著增加,而JAR干预能够显著地降低AngⅡ诱导的ROS生成（P＜0.05）。AngⅡ诱导组HA-SMCs培养基中CAT、SOD及GSH-Px活力较对照组显著降低（P＜0.01）,而JAR干预组上述酶活力显著增加（P＜0.05或P＜0.01）。RT-PCR检测结果显示,AngⅡ组NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达较对照组显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制AngⅡ诱导的NOX4和NOX2在HA-SMCs中的表达（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,AngⅡ诱导HA-SMCs 48 h后,NOX4、NOX2及p-NF-κB在HA-SMCs中的表达水平显著增加（P＜0.01）,而JAR干预能够显著抑制上述蛋白的表达（P＜0.05）。结论:黄芪熊竹素通过NOX4/ROS/NF-κB通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

阿霉素对乳腺癌干细胞的体外作用研究

目的通过实验观察研究阿霉素对于乳腺癌干细胞的病理药理的作用,从而来研究乳腺癌细胞系MCF-7干细胞通过使用了药物阿霉素在其体外所产生的变化,来选择乳腺癌干细胞更有针对性的治疗方案和研究比较更加行之有效的药物。方法使用流式细胞仪器,在乳腺癌细胞系(MCF-7),剥离乳腺癌干细胞CD24(-/low)、CD44(+)、ESA(+)。在浓度不同的阿霉素培养液中放置乳腺癌干细胞与没有进行分拣的细胞,测得阿霉素对不同干细胞的抑制生长生,进行细胞凋亡及克隆形成能力的分析。结果 MTT表明乳腺癌干细胞具有耐药性。药物阿霉素呈浓度依赖型抑制了乳腺癌未分类细胞及干细胞:未分类细胞IC50为5.5μmol/L;而分选出的干细胞IC50为29.1μmol/L(P<0.001)。乳腺癌干细胞在使用药物阿霉素可加速病变的恢复,随着用药时间的增加其效果愈加明显。研究中还发现,乳腺癌干细胞在阿霉素的作用下可减少其形成和扩散。结论乳腺癌干细胞在使用了药物阿霉素成瘤性有所降低,对于其克隆能力具有抑制作用,其变化呈时间依赖型与浓度依赖型。     

HIF-1α、VEGF在乳腺癌中的表达及其与化疗敏感性的关系

目的 探讨HIF-1α、VEGF在乳腺癌中的表达及其与新辅助化疗敏感性的关系.方法 应用免疫组织化学S-P法检测52例乳腺癌患者新辅助化疗前、后瘤体组织HIF-1α、VEGF的表达,评估其与化疗疗效的关系.结果 化疗前乳腺癌HIF-1α阳性表达为46.15％,化疗后降到21.15％,差异有统计学意义（P＜0.05）;VEGF的表达化疗前为55.77％,化疗后降到30.77％,差异有统计学意义（P＜0.05）.化疗前后HIF-1α的表达与VEGF正相关,P＜0.05.新辅助化疗前HIF-1α和VEGF表达阳性者均较阴性者化疗敏感性差,P＜0.05.结论 HIF-1α和VEGF可作为乳腺癌化疗敏感性的预测因子,有助于制定个体化化疗方案.     

乳腺癌化疗前后的观察和护理

目的：总结乳腺癌术后给予化疗前后的护理,提高乳腺癌的治愈率,延长患者的生存期。方法对临床81例乳腺癌改良根治术后化疗的病人给予心理护理、正确的药物配置、静脉血管的护理、不良反应的护理、化疗后的护理及出院健康宣教。结果通过对患者进行有效的护理,全部患者均顺利完成化疗,未出现明显不良反应。结论经过精心护理,可以让患者生活质量有了明显的提高,近期疗效满意。     

新辅助化疗对乳腺癌患者肿瘤标志物和白细胞介素的影响研究

目的研究及观察新辅助化疗对乳腺癌患者肿瘤标志物和白细胞介素的影响程度。方法选取2013年12月至2014年12月于本院进行新辅助化疗治疗的30例乳腺癌患者为观察组,同时期同龄的30名体检健康妇女为对照组,然后将观察组治疗前1 d和治疗后1个周期、2个周期时的肿瘤标志物和白细胞介素血清表达情况进行比较。结果观察组治疗前1 d和治疗后1个周期、2个周期时的血清肿瘤标志物和白细胞介素表达水平均高于对照组,并且观察组治疗前1 d的血清表达水平高于本组治疗后1个周期和2个周期的表达水平,P均<0.05,均有显著性差异。结论新辅助化疗可有效降低乳腺癌患者肿瘤标志物和白细胞介素水平,对于改善患者的疾病状态和免疫调节有积极的影响作用。     

乳腺癌实施新辅助化疗的护理研究

目的 探讨乳腺癌患者实施新辅助化疗的护理措施.方法 选取2010年12月-2012年12月我院收治的乳腺癌患者71例,对患者采取化疗毒副作用的针对护理、静脉穿刺护理以及心理护理措施,观察临床疗效.结果 实施新辅助化疗的乳腺癌患者共有71例,其中显效42例,有效21例,无效8例,总有效率为88.7%.结论 加强乳腺癌患者实施新辅助化疗的护理措施,对改善患者的生活质量和降低并发症的发生率具有重要作用.