厚朴酚影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学功能的实验研究

目的 探讨厚朴酚对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的调节作用。方法 自2020年9月至2021年9月,北部战区总医院烧伤整形科将增生性瘢痕成纤维细胞分为4组,分别使用0、10、20和40μmol/L的厚朴酚处理。于作用后0、1、2、3和4 d使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖。作用后1 d使用细胞周期试剂盒检测细胞周期情况,细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平,台盼蓝染色法检测细胞迁移水平,Western blot实验检测细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结果 细胞增殖实验检测结果显示,与0μmol/L的厚朴酚作用相比,10、20和40μmol/L的厚朴酚作用增生性瘢痕成纤维细胞1～4 d后,能够显著抑制细胞的增殖能力。10、20和40μmol/L的厚朴酚均能够促进G0-G1期细胞的表达,下调S期细胞百分比,抑制细胞周期的进程;促进早期和晚期凋亡细胞的百分比;明显下调增生性瘢痕成纤维细胞的迁移水平。Western blot实验结果显示,厚朴酚可以显著下调细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结论 厚朴酚能够通过抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增...     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

17—β雌二醇对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的：研究雌激素对增生性瘢痕形成的影响。方法：对增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）进行体外培养,通过^3H-脯氨酸掺入法及人PCⅢ（hPCⅢ）放免试剂盒测定HSFB胶原合成含量。结果：17-β雌二醇（17-βE2）对HSFB胶原合成呈明显剂量依赖性促进（P＜0．01）;17-βE2对HSFB胶原合成的影响无明显性别差异（P＞0．05）。结论：雌激素可以促进增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成,而且无性别差异。     

丹参对增生性瘢痕成纤维细胞形态的影响及增殖抑制初探

目的探索丹参治疗增生性瘢痕的机理。方法将培养的增生性瘢痕成纤维细胞加入含丹参的培养液中培养２４ｈ,与未加药者对照比较。结果①含丹参组成纤维细胞由长梭形变为圆形,而培养上清中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及ＭＴＴ（四甲基偶氮唑）比色法结果,用药组与对照组均无显著差异（Ｐ＞０．０５）;②流式细胞仪检测各时相细胞ＤＮＡ水平：用药组Ｇ０＋Ｇ１期细胞的百分比明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）,而Ｇ２＋Ｍ期百分比则显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论丹参能改变增生性瘢痕成纤维细胞形态,而不影响其活力并抑制其增殖。     

维拉帕米对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原合成的影响

目的 探讨钙通道阻滞剂维拉帕米治疗增生瘢痕的作用机理及进一步应用于临床的可能性。方法 采用组织块法进行增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）的体外培养;MTT比色法检测维拉帕米对HSFB生长增殖的 影响;^3H－脯氨酸掺入法及羟脯氨酸比色法测定维拉帕米对细胞胶原合成的影响;Northern Blot检测维拉帕米对HSFBⅠ、Ⅲ型前胶原基因表达的影响。结果 维拉帕米对HSFB的增殖、胶原合成及Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达均呈剂量依赖性抑制,以100μmol/L浓度组作用最为显著。结论 维拉帕米可以通过减少Ⅰ、Ⅲ型前胶原的基因表达等途径抑制瘢痕增生。     

17—β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子—β1合成的影响

目的 研究雌激素、孕激素对增生性瘢痕形成的影响。方法 体外培养增生性瘢痕成纤维细胞（HSFB）,利用免疫组化及计算机图像分析系统测定转化生长因子（TGF－β1）含量。结果 较对照组,17－β雌二醇（17－βE2）各组的HSFB胞浆内阳性信号明显加强（P＜0．05）;而孕酮（P）各组均不明显（P＞0．05）。结论 在体外,17－βE2可以明显促进增生性瘢痕成纤维细胞的TGF－β1合成,而P的作用不明显。     

17-β雌二醇、孕酮对增生性瘢痕成纤维细胞转化生长因子-β_1合成的影响

目的　研究雌激素、孕激素对增生性瘢痕形成的影响。方法　体外培养增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB) ,利用免疫组化及计算机图像分析系统测定转化生长因子 (TGF β1)含量。结果　较对照组 ,17 β雌二醇(17 βE2 )各组的HSFB胞浆内阳性信号明显加强 (P <0 .0 5 ) ;而孕酮 (P)各组均不明显 (P >0 .0 5 )。结论　在体外 ,17 βE2 可以明显促进增生性瘢痕成纤维细胞的TGF β1合成 ,而P的作用不明显。     

厚朴酚通过抑制TGF-β1抑制增生性瘢痕成纤维细胞中的炎症因子

目的 探讨厚朴酚是否能够通过影响TGF-β1影响增生性瘢痕成纤维细胞的炎症反应。方法 自2019年9月至2020年9月,铁岭市第二人民医院外科从10例增生性瘢痕患者身上采集了10份增生性瘢痕组织样本,10例皮瓣移植患者术后采集10份正常皮肤组织样本。通过ELISA检测增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中白细胞介素（interleukin, IL）-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达情况。获取增生性瘢痕成纤维细胞后,分别采用0、10、20和40μmol/L厚朴酚处理增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞,在处理后24 h,采用ELISA和实时定量PCR检测检测细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、IL-1β和TNF-α的表达情况,Western blot实验检测TGF-β1的表达情况。分别在细胞中转染对照和TGF-β1后,采用0μmol/L和40μmol/L厚朴酚处理细胞,在处理后24 h时,采用ELISA和实时定量PCR检测细胞中IL-1β、TNF-α和TGF-β1的表达...     

增生性瘢痕形成和成熟过程中三种成纤维细胞生长因子及其受体基因表达的变化

目的探讨成纤维细胞生长因子-7(FGF-7)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体(FGFR1和FGFR2)在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因表达变化规律及其可能的生物学意义.方法用病理学技术检测增生性瘢痕和正常皮肤的结构特征后,提取16例不同发生时期的增生性瘢痕(4个月～11年)和8例正常皮肤组织的总RNA后,分离mRNA,用RT-PCR方法检测这5种基因在不同组织中的表达.结果在正常皮肤组织中,FGF-7,bFGF,FGFR1和FGFR2基因表达较低,而在增殖期的增生性瘢痕组织中,这4种基因转录本的灰密度值分别为正常皮肤的2.1、2.1、3.6和2.8倍,基因表达显著增强(P<.05);在成熟期的增生性瘢痕中,FGF-7,bFGFR1和bFGFR2基因的表达量都低于增殖期的增生性瘢痕组织,而bFGF仍保持高水平的基因表达.在正常皮肤和增殖期的增生性瘢痕中,aFGF基因呈低水平表达,而在成熟期的增生性瘢痕中aFGF基因表达明显增强.结论FGF-7、bFGF及其受体基因表达升高可能是增生性瘢痕形成的机制之一,而FGF-7、FGFR1和FGFR2基因表达降低,aFGF表达增强可能与增生性瘢痕达到相对稳定的动态平衡状态有关.     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕的作用

目的：探讨碱性成纤维性细胞生长因子（bFGF)对移植至裸鼠皮下的人增生性瘢痕的作用。方法：将烧伤患者手术切除的增生性瘢痕移植到裸鼠背部皮下，动物随机分为5组：对照组，bFGF组，胶原酶组， FGF 胶原酶组和玻璃酸钠组，瘢痕块移植后2周分别用上述不同药物局部注射至瘢痕内共3次，每次间隔3d，后观察疤痕大小的1／2－1／3且软，能使粗大密集的胶原束变松散成团，其结构大部分消失，bFGF 胶原酶组所移植的瘢痕组织块有2／3消失，结论：增生性瘢痕局部应用bFGF可以降低瘢痕胶原，瘢痕中粗大的胶原束结构大部分消失。     

增生性瘢痕增生过程中转化生长因子β表达的动态研究

通过对３４例不同时期增生性瘢痕组织标本进行ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交检测，结果发现：随着增生性瘢痕的发生、发展成熟，ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ的总表达量明显呈由强至弱的变化，在１至６个月瘢痕组织内表达丰富，９个月时明显减弱，１２个月以后的瘢痕组织及正常皮肤对照标本中含量很少；ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ表达的定位检测显示：除真皮层组织细胞有部分表达外，许多瘢痕表皮基底细胞内有较强表达。由此可见：①ＴＧＦβ表达与瘢痕增生发展有着密切联系；②ＴＧＦβ在瘢痕表皮组织中的表达对其自身增殖起抑制作用，导致表皮萎缩。     

三苯氧胺对兔耳增生性瘢痕形成的影响

目的:观察三苯氧胺在体内环境中对瘢痕形成的影响,为其抑制瘢痕增生提供动物实验依据。方法:新西兰长耳兔共30只,建立兔耳增生性瘢痕模型,对照组以正常饲料喂养,实验组加服三苯氧胺溶液。在不同时间点对比创面愈合程度、组织形态学变化、瘢痕组织的厚度、纤维细胞密度及TGF-β2含量的差异。结果:创面愈合时间实验组(12·3±0·6d)较对照组(11·0±0·4d)延长(P<0·05);实验组与对照组瘢痕厚度第30d(153·7±17·1μm,162·1±51·14μm)差异无统计学意义(P<0·05);第60d(173·2±11·97μm,211·2±22·14μm)、第90d(121·1±7·912μm,231·0±32·52μm)差异有统计学意义,实验组与对照组纤维细胞密度第30d(3679·4±506·2,4749·4±697·56)、60d(3788·4±627·91,4553·0±578·84)、90d实验组(3589·5±554·29,4431·7±632·52)差异均有统计学意义(P<0·05);实验组与对照组瘢痕中TGF-β2含量第30d(37·47±7·5,45·25±3·9)差异无统计学意义(P<0·05),第60天(40·69±3·1,56·97±5·02)、第90d实验组(37·76±6·3,54·69±6·9)差异有统计学意义。结论:在体内环境中,三苯氧胺可抑制瘢痕的增生,其具体机制尚待进一步研究。     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响

目的 探讨水蛭素对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期的影响,为临床应用水蛭素治疗增生性瘢痕提供理论基础.方法 用消化法进行人增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的体外培养,用流式细胞仪检测不同浓度水蛭素对不同来源的成纤维细胞细胞周期的影响,用Western印迹法检测部分与细胞周期相关的蛋白（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27及细胞周期蛋白E（cyclin-E）的表达.结果 随着水蛭素浓度的增加,人体正常皮肤及增生性瘢痕组织成纤维细胞G1期细胞增加而S期细胞则减少,周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p27的表达上调,细胞周期蛋白E的表达下调.结论 水蛭素通过影响细胞周期调控蛋白的表达,使正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的周期分布发生改变,导致细胞周期G1期阻滞（G1 phase arrest）,从而抑制成纤维细胞增生,因此水蛭素对于瘢痕的防治有一定的作用.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的作用

目的 观察三七总甙（PNS）对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）向肌成纤维细胞转分化的作用，探讨PNS抗瘢痕纤维化的机制。方法 体外培养HSF，采用不同浓度的PNS进行干预，根据细胞培养所加PNS浓度分为400μg／ml组、800μg／ml组及空白对照组（不加PNS）。采用细胞三维培养法检测HSF凝胶收缩情况，计算其收缩指数；免疫细胞化学染色法检测HSF中“平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达；流式细胞仪检测HSF中α-SMA阳性细胞率。结果 400μg／ml、800μg／ml组各时相点的胶原凝胶块收缩程度明显减轻，其收缩指数均小于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。HSF中α-SMA阳性表达颗粒在细胞质内呈弥漫性分布；空白对照组HSF中α-SMA的阳性表达明显强于400μg／ml、800μg／ml组。400μg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞率（31．52％、24．28％）均明显低于空白对照组（45．74％，P〈0．05）。400l,Lg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞染色强度积分均明显低于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论 PNS能够抑制HSF向肌成纤维细胞的转分化，具有体外抗瘢痕纤维化的作用。     

维芎瘢痕霜对增生性瘢痕影响的临床研究

目的为了解维芎瘢痕霜对增生性瘢痕内bFGF和FN的影响，探讨维芎瘢痕霜防治增生性瘢痕的作用机理。方法应用免疫组织化学方法，对维芎瘢痕霜治疗的32例患者增生性瘢痕内的bFGF和FN的变化进行观察。结果32例增生性瘢痕患者连续应用维芎瘢痕霜30天和60天时，瘢痕内的bFGF和FN较未用药对照部位瘢痕内的bFGF和FN表达明显减少。结论维芎瘢痕霜可以明显抑制瘢痕内bFGF和FN的表达。对增生性瘢痕有防治作用。     

The therapeutic effect of Interleukin-18 on hypertrophic scar through inducing Fas ligand expression

ObjectiveAmong downstream interleukin-18 (IL-18) targets, Fas ligand (FasL) in particular, has been strongly implicated in many conditions. Our study aims to explore the role of IL-18 in hypertrophic scar through enhancing FasL expression.MethodsIL-18 expression in hypertrophic scar tissues and normal tissues were explored by immunohistochemistry, qRT-PCR and Western blotting, and the expression of IL-18 in normal skin fibroblasts and hypertrophic scar fibroblasts by immunofluorescence. Hypertrophic scar fibroblasts treated with recombinant human IL-18 (rhIL-18) were assessed with MTT, Annexin V-FITC/PI, qRT-PCR, ELISA and western blotting. In the hypertrophic scar of rabbit ears, rhIL-18 was injected to determine histological changes with HE and Masson staining. Additionally, the scars were rated based on contour and overall severity using a visual analog scale scores (VAS).ResultsIL-18 was decreased in hypertrophic scar tissues and fibroblasts compared to normal skin tissues and fibroblasts, respectively. Decreased proliferation and increased apoptosis of hypertrophic scar fibroblasts were found after rhIL-18 treatment with enhanced expression of FasL, sFasL FADD, Caspase-8, Caspase-9 and Caspase-3 in a dose-dependent manner. The VAS and thickness of scars in rabbit ears was decreased as time went on after rhIL-18 treatment, with decreases in scar elevation index (SEI) and the increases in FasL expression.ConclusionIL-18 curbs proliferation and promotes apoptosis of hypertrophic scar fibroblasts by enhancing FasL expression. IL-18is a potential target for treatment of hypertrophic scar.     

5,7,4′-三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期的影响

目的 观察5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞周期的影响,探讨5,7,4′-三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的机制.方法 分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入25、50、100 μmol/L浓度的5,7,4′-三羟基异黄酮共培养48 h,免疫细胞化学法观察成纤维细胞PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 各组5,7,4′-三羟基异黄酮作用后细胞PCNA的表达均降低(P＜0.05),50 μmol/L及100 μmol/L浓度组的抑制作用最为显著(P＜0.01);随药物浓度的增加,G0～G1期细胞比例逐渐下降,G2～M期细胞比例增加,表明细胞分裂受到抑制;100 μmol/L组的S期细胞数量比例也有增加,并于G1期前出现亚二倍体凋亡峰.结论 5,7,4′-三羟基异黄酮可通过影响细胞分裂与DNA合成抑制瘢痕增生.     

PPAR-γ激动剂抑制血管紧张素Ⅱ在增生性瘢痕成纤维细胞中的作用

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,Ros)抑制血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖、细胞外基质合成,并探讨其抗瘢痕的潜在作用.方法 体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,在一定浓度的AngⅡ、Ros、GW9662作用下,采用CCK-8法、实时荧光定量RT-PCR和Western blot印迹法分别检测各组成纤维细胞增殖和细胞外基质(ECM)表达的情况.结果 CCK-8法吸光度A值、Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、纤维粘连蛋白(fibronectin,FN) mRNA以及蛋白表达,AngⅡ组分别为1.082 5±0.007、6.45±0.97、4.92±0.86、2.92 +0.41、2.78±1.04；Ros+AngⅡ组为:0.722 4±0.012、1.82±0.34、1.78±0.27、1.57±0.46、t.68 +0.39. Ros组为:0.554 7±0.012、0.97±0.12、1.07±1.08、1.05±0.43、1.14±0.36;GW9662+ Ros+ AngⅡ组为:1.0560±0.005、5.83±0.24、4.47±0.32、2.69±0.35、2.62±0.27.CCK-8法吸光度,Col-Ⅰ和FN mRNA以及蛋白表达量,AngⅡ组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而Ros+AngⅡ组则使这种效应明显降低(P＜0.05).Ros组和对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),GW9662+Ros+AngⅡ组与Ros+AngⅡ组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PPAR-γ激动剂可有效抑制AngⅡ诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及Col-Ⅰ和FN合成增多的效应,可能具有体外抗瘢痕纤维化的作用.