miR-4660对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的 探讨miR-4660对肝癌细胞SK-HEP-1侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法 利用癌症数据在线分析网站UALCAN分析肿瘤基因组图谱数据库TCGA中肝细胞癌组织中半乳糖凝集素3结合蛋白(LGALS3BP)基因表达,miRNA靶基因预测网站Targetscan在线预测miR-4660与LGALS3BP基因3′非翻译区(3′UTR)的结合关系。利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-4660与LGALS3BP基因之间的调控关系。分别将miR-4660模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)及其阴性对照(miR-NC)转染至人SK-HEP-1细胞,实时定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测LGALS3BP基因及PI3K/Akt信号通路蛋白p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt的表达水平。细胞划痕及Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。结果 UALCAN分析显示,相对于正常组织,在肝细胞癌组织中LGALS3BP显著高表达(P<0.05)。Targetscan预测到,miR-4660在LGALS3BP 3′UTR区有两个结合位点。双荧光...     

马红丸对肝癌细胞粘附迁移侵袭能力的影响

目的 利用马红丸含药血清研究其对SK-hep-1细胞的粘附迁移侵袭能力的影响。方法 SK-hep-1细胞分别用10%(V/V)、20%(V/V)、30%(V/V)马红丸含药血清、阿霉素含药血清、正常对照组(10%胎牛血清)培养,并观察SK-hep-1细胞的迁移粘附侵袭能力,采用SPSS16.0软件进行数据处理及统计学分析,各组之间采用两独立样本资料的t检验。结果 10%(V/V)、20%(V/V)马红丸含药血清组细胞粘附个数均值分别为(39.00±6.51)和(38.00±2.00),与正常对照组(90.30±6.11)相比,差异有统计学意义(P0.01);10%(V/V)、20%(V/V)马红丸含药血清组迁移个数均值分别为(6.00±3.61)和(12.33±3.79),与正常对照组(57.67±5.69)相比,差异有统计学意义(P0.01);10%(V/V)、20%(V/V)马红丸含药血清组细胞侵袭个数均值分别为(70.03±9.39)、(41.77±12.04),与正常对照组(100.00±9.74)相比差异有统计学意义(P0.05或P0.01);30%(V/V)马红丸含药血清作用SK-hep-1细胞,与正常对照组相比差异无统计学意义(P0.05),20%马红丸含药血清抑制效果最好。结论 马红丸能够有效抑制肝癌细胞的细胞运动能力,从而减缓肝癌转移,本研究利用现代分子生物学技术阐明该药减缓肝癌侵袭转移的分子机制,为马红丸进一步临床应用提供良好的理论基础。     

Nrf2促进肝癌细胞的迁移与侵袭能力

目的:探讨核转录因子Nrf2对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:将Nrf2过表达质粒通过慢病毒包装后分别转染至肝癌细胞系HCC-LM3及Bel-7402中,通过划痕实验、Transwell侵袭实验观 察Nrf2对肝癌细胞迁移运动及侵袭能力的影响,使用Western印迹法检测转染后的HCC-LM3及Bel-7402肝癌细胞中基质金属蛋白酶2（MMP2）与基质金属蛋白酶9（MMP9）表达情况,通过收集网络数据库 GEPIA中相关临床资料信息分析Nrf2对肝癌患者生存时间的影响。结果:在肝癌细胞系HCC-LM3与Bel-7402中过表达Nrf2,其迁移侵袭能力均明显增强。此外发现过表达Nrf2的HCC-LM3肝癌细胞中MMP2及 MMP9表达均增加（t=2.879、5.582, 均P <0.05）;Bel-7402肝癌细胞转染Nrf2过表达质粒后,其MMP2及MMP9表达也相对增加（t=3.756、2.968, 均P <0.05）。高表达Nrf2的肝癌患者生存时间短于低表 达Nrf2的肝癌患者（Logrank P=0.042）。结论:肝癌细胞Nrf2高表达可能通过增加MMP2及MMP9的表达,进而促进肝癌细胞迁移及侵袭能力,并且Nrf2高表达与肝癌患者的不良预后有关。     

siRNA靶向沉默Rictor基因表达对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨靶向沉默Rictor表达对肝癌细胞增殖、迁移和增殖的影响。方法 采用LipofectamineTM2000向SMMC-7721和Hep3B细胞转染成功构建靶向沉默Rictor表达的siRNA载体片段（沉默组）或无义siRNA片段（对照组）,转染48 h后采用QPCR检测Rictor mRNA水平,以Western blotting检测Rictor、p-Akt、细胞周期蛋白和EMT相关蛋白的表达情况。MTT实验、EdU增殖实验、Transwell实验和Boyden实验分别检测肝癌细胞的增殖、迁移和增殖能力。结果 转染48 h后,沉默组细胞的Rictor mRNA蛋白水平大部分都低于对照组细胞;沉默组细胞的增殖、迁移、侵袭能力均低于对照组细胞,差异有统计学意义（P<0.01）。MTT实验及EdU增殖实验表明,两组肝癌细胞在沉默Rictor表达后增殖减慢、S期细胞比例明显减少（P均<0.01）;Transwell实验和Boyden实验表明,两组肝癌细胞在沉默Rictor表达后穿膜细胞数显著减少（P均<0.01）。结论 Rictor基因在肝癌细胞中起到癌基因的作用,沉默Rictor的表达抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的过程,可能与下调p-Akt、CCND1和N-cadherin、ZEB1、Vimentin蛋白表达,上调E-cadherin,P21和P27蛋白表达有关。     

JWA抑制人肝癌细胞的黏附和迁移侵袭潜能

探讨JWA蛋白在人肝癌细胞黏附和迁移侵袭过程中的作用?方法:应用小干扰RNA下调低转移潜能人肝癌细胞株MHCC97L中JWA蛋白表达水平,MTT法检测MHCC97L增殖;应用细胞小室检测MHCC97L在JWA不同蛋白水平时的迁移及侵袭潜能变化;黏附试验检测MHCC97L细胞黏附能力变化?结果:研究发现人肝癌细胞株MHCC97L中的JWA表达水平下降后,肝癌细胞迁移及侵袭能力明显增强,细胞对细胞外基质纤维连接蛋白的黏附力增加?结论:RNA干扰JWA引起肝癌细胞的JWA蛋白表达水平下降,导致肝癌细胞的黏附?迁移及侵袭能力增强,结果提示JWA可能抑制人肝癌细胞侵袭和转移?     

shRNA干扰基膜聚糖调控肝癌细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的 本研究旨在探索沉默基膜聚糖(lumican)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法 通过shRNA沉默肝癌细胞HepG2和MHCC97H中的lumican。通过实时定量PCR（qRT-PCR)检测细胞中lumican的mRNA水平,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。蛋白印记检测lumican、MMP-9、VEGF、ERK1、JNK、p-ERK1和p-JNK蛋白水平。结果 肝癌细胞HepG2和MHCC97H中lumican的mRNA水平和蛋白质水平高于正常肝细胞L02 (P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组mRNA水平和蛋白质水平低于对照组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组细胞侵袭和迁移显著降低(P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组MMP-9和VEGF表达低于scramble组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组p-ERK1和p-JNK蛋白水平下降(P<0.01)。结论 shRNA干扰lumican通过抑制ERK1/JNK通路激活减弱肝癌细胞侵袭和迁移。     

miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响

目的：研究 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移能力的影响及其可能机制。方法将 miR-98mimics、mimics-NC、miR-98inhibitor、inhibitor-NC 瞬时转入肝癌 HepG2细胞内,应用噻唑盐( MTT)法、流式细胞仪、Tr-answell 小室实验检测 miR-98对肝癌 HepG2细胞增殖、凋亡以及侵袭、迁移能力的影响,进一步用 Western blot 法检测各组 Bcl-2蛋白的表达水平。结果 MTT 实验表明 miR-98过表达后,肝癌细胞的增殖能力明显低于对照组;Annexin V-FITC / PI 凋亡实验证实上调 miR-98表达后,细胞的凋亡率较对照组升高;Transwell 小室实验表明上调 miR-98可使肝癌细胞的侵袭、迁移能力减弱。而当 miR-98被抑制后,肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭、迁移能力则明显增强,凋亡率则下降。 Western blot 实验检测发现 miR-98过表达后,Bcl-2的表达降低。结论 miR-98可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌基因的作用;miR-98可能通过下调 Bcl-2的表达,促进肝癌 HepG2细胞凋亡。     

Ln5γ2对胃癌细胞迁移、侵袭的影响

目的探讨Ln5γ2对胃癌SGC-7901细胞迁移、侵袭的影响及可能机制。方法实验分为对照组、Ln5γ2趋化组、上皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)干扰组、空载体组。以Ln5γ2诱导趋化SGC-7901,观察穿过铺和未铺Matrigl胶的Transwell小室滤膜的细胞数目。采用ELISA和免疫荧光方法检测细胞缓冲液中MMP-2和MMP-9浓度以及细胞骨架结构改变。结果 Ln5γ2诱导趋化SGC-7901,穿过铺和未铺Matrigl胶的Transwell小室滤膜的细胞数目明显高于对照组(P<0.01),EGFR干扰后数目与对照组无显著差异(P>0.05)。EGFR干扰组细胞MMP-2和MMP-9浓度下降,细胞骨架结构模糊,伪足形成减少或消失。结论 Ln5γ2可以促进胃癌SGC-7901侵袭迁移,可能机制为通过EGFR改变细胞骨架结构,影响MMPs的分泌。     

WWP2沉默对肝癌细胞系黏附、侵袭和迁移的影响

目的 探讨WWP的E3泛素连接酶2(ww domain-containing protein 2,WWP2)沉默对肝癌细胞系黏附、侵袭和迁移的影响作用。方法 通过RNA沉默技术降低肝癌细胞系的WWP2水平,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭,CCK-8法检测细胞的增殖情况,Western blot法检测caspase7、caspase8、Bcl-2、Bax、PTEN、p-Akt及Akt的蛋白水平。结果 沉默WWP2后,肝癌细胞BEL-7404和Huh7的WWP2mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P<0.001),BEL-7404细胞和Huh7细胞的凋亡相关标志物caspase7、caspase8及Bax的蛋白水平表达都显著升高(P<0.01)、PTEN的蛋白水平升高(P<0.01),Bcl-2、p-Akt的蛋白水平显著下降(P<0.01),肝癌细胞BEL-7404和Huh7的细胞活力、黏附能力、侵袭能力和迁移能力都明显减弱(P<0.001)。结论 沉默WWP2可抑制肝癌BEL-7404细胞和Huh7细胞增殖、黏附、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机...     

微小RNA-145对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 评估微小RNA-145(miR-145)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 选取上皮性卵巢癌细胞株SKOV3及3AO,过表达miR-145后,qRT-PCR检测转染前后细胞株miR-145的表达,Transwell小室实验检测转染前后细胞迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法特异预测出miR-145靶基因zeb-2后,通过双荧光素酶报告实验进行验证,再敲低zeb-2后检测细胞移动能力。 结果 过表达miR-145后,SKOV3(t=10.752,P=0.000;t=5.617,P=0.005)及3AO细胞(t=10.111,P=0.001;t=21.746,P=0.000)的迁移及增殖能力均明显下降。双荧光素酶报告实验结果显示,共转染miR-145 mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(SKOV3:t=4.572,P=0.010;3AO:t=3.528,P=0.024),共转染miR-145mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体细胞差异无统计学意义(SKOV3:t=0.227,P=0.831;3AO:t=0.040,P=0.970)。过表达miR-145 48 h后,实时定量PCR检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=1.490,P=0.211)和3AO细胞(t=0.114,P=0.914)中zeb-2 mRNA表达差异无统计学意义。过表达miR-145 72 h后,Western blot检测结果显示,与阴性对照相比,SKOV3(t=3.769,P=0.020)及3AO细胞(t=4.452,P=0.011)中zeb-2蛋白的表达水平明显下降。转染zeb-2 siRNA 72 h后,Western blot检测结果显示,SKOV3(t=4.660,P=0.010)和3AO细胞(t=4.594,P=0.010)中的zeb-2蛋白表达水平明显下调;Transwell小室实验检测结果显示,SKOV3(t=18.655,P=0.000;t=18.026,P=0.000)及3AO(t=5.500,P=0.005;t=8.780,P=0.001)细胞的迁移和侵袭能力明显下降。结论 miR-145可能是通过靶向抑制zeb-2来抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。     

ACTN4对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 研究α-辅肌动蛋白（alpha-actinin-4,ACTN4）在胃癌SGC7901细胞及正常胃黏膜上皮RGM-1细胞中的表达及对胃癌SGC7901细胞侵袭和转移的影响。方法 通过qRT-PCR技术及蛋白印迹技术检测ACTN4在胃癌SGC7901细胞及RGM-1正常胃黏膜上皮细胞中的表达;利用RNAi技术敲低SGC7901细胞中的ACTN4表达,并应用qRT-PCR及蛋白印迹技术检测SGC7901细胞中ACTN4的沉默效果;通过Transwell实验检测细胞侵袭及转移能力的变化。结果 ACTN4在胃癌SGC7901细胞中明显高表达;ACTN4-siRNA可有效敲低SGC7901细胞中ACTN4的表达,敲低ACTN4的表达可以明显降低胃癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。结论 ACTN4在胃癌细胞发生侵袭转移中发挥着重要作用。     

内质网核糖体结合蛋白1表达上调对肝癌细胞迁移与侵袭的影响

目的 探讨内质网核糖体结合蛋白1(RRBP1)在促进肝癌转移中的调控作用.方法 1)分别用生物信息学分析方法与免疫组化实验,分析RRBP1在原发性与转移性肝癌组织中的表达.2)通过转染siRNA下调RRBP1表达后,分别用划痕实验与Transwell迁移实验分析对肝癌细胞运动与迁移能力的影响.3)通过转染siRNA下调...     

健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞迁移、侵袭的影响研究

目的:研究健脾消癌方含药血清对HCT116细胞迁移、侵袭的影响,并初步探讨其机制.方法:10％、15％、20％的健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞,划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blot检测细胞内基质金属蛋白酶2( matrix metalloproteinase -2...     

shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭力的影响

目的 研究重组质粒shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭潜力的影响. 方法通过构建重组质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,运用RT-PCR,Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达;建立体外侵袭模型,测定人乳腺癌细胞株穿透Matrigel的潜力.结果 质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05);3株人乳腺癌细胞穿透Matrigel的能力明显降低(P<0.05).结论 shRNA-CXCR4后能明显降低人乳腺癌细胞的侵袭潜力.     

MDM2在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞转移和侵袭能力的影响

目的探讨MDM2（murine double minute 2,MDM2）表达与胃癌转移的关系。方法采用免疫组织化学染色方法检测94例胃腺癌组织中MDM2的表达水平,分析MDM2表达与胃癌转移间的关系;应用细胞实验进一步探讨下调MDM2表达对胃癌细胞转移和侵袭能力的影响。结果免疫组织化学染色结果显示MDM2高表达与胃癌转移有关,而利用细胞实验证实,下调MDM2表达可显著抑制胃癌细胞的转移和侵袭能力,其与胃癌细胞p53状态无关。结论 MDM2高表达可通过非p53途径促进胃癌细胞转移。     

CXCR7在胃癌细胞中的表达及对SGC-7901细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨趋化因子受体7(CXCR7)在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达以及siRNA沉默CXCR7后对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 体外培养5种人胃癌细胞系:未分化腺癌HGC-27、低分化黏液腺癌MGC-803、低分化腺癌BGC-823、中分化腺癌SGC-7901和高分化腺癌MKN-28。采用Western blot及RT-PCR法分别检测CXCR7的蛋白及mRNA表达。应用脂质体转染siRNA的方法沉默SGC-7901细胞CXCR7的表达,并采用其配体基质细胞衍生因子-1（SDF-1）干预,实验分为4组:阴性对照siRNA(NC siRNA组), NC siRNA+SDF-1组,CXCR7 siRNA组和CXCR7 siRNA+SDF-1组。应用Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力。结果 CXCR7在不同人胃癌细胞系中表达程度不一,其中高分化MKN-28几乎不表达,中分化SGC-7901细胞表达程度最高。与 NC siRNA组相比,NC siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数增加（P CXCR7 siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA抑制。     

莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:观察莪术醇对非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及潜在的作用机制。方法:细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测莪术醇对A549细胞活性的影响;EdU检测细胞增殖;体外侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白质印迹检测上皮间质转化和Wnt通路相关蛋白的表达水平,细胞免疫荧光检测vimentin光点的水平。结果:莪术醇浓度低于60μmol·L~(-1)时对A549细胞的活性无显著影响;不同浓度莪术醇作用于A549细胞后,细胞增殖倍数显著降低;侵袭细胞数目显著减少;划痕闭合率显著降低;细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达水平显著升高,而Vimentin、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、snail、β-连环蛋白(β-catenin)、T细胞因子4(T-cell factor 4,TCF4)和细胞周期蛋白1(Cyclin-D1)的表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞中vimentin光点水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术醇可抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、迁移和上皮间质转化,其作用机制与Wnt/β-catenin通路相关。     

常春藤皂苷元对结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响

目的 常春藤皂苷元体外对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.方法 采用MTT法、粘附实验、Transwell小室侵袭实验、划痕实验,观察常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo增殖、粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果 ①常春藤皂苷元有抑制人结肠癌细胞LoVo增殖的作用,与对照组比较,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大(P＜0.01),呈浓度依赖性.②常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,细胞的粘附能力明显降低(P＜0.01),随着浓度的增大和时间的推移,呈现抑制率递增的结果.③常春藤皂苷元作用人结肠癌细胞LoVo后,侵袭的细胞数较对照组明显减少(P＜0.01),浓度越高,侵袭的细胞数量越少.④常春藤皂苷元作用人肠癌LoVo细胞后,细胞愈合的程度有明显的分组差别,浓度越高,愈合度越差,表明迁移能力受到很大影响.结论 常春藤皂苷元对人结肠癌细胞LoVo的增殖具有抑制作用;常春藤皂苷元能抑制人结肠癌细胞LoVo的粘附能力、侵袭能力和迁移能力.