川陈皮素通过抑制TGF-β1抑制成纤维细胞的生长和迁移

目的探讨川陈皮素对成纤维细胞生长和迁移的调节作用。方法分别使用10、20、40、80μmol/L的川陈皮素作用于成纤维细胞,通过噻唑蓝(mcthyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞的增殖情况,Annexin V-PI实验检测细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力。利用Western blot实验检测川陈皮素对于collagenⅠ、α-SMA和TGF-β1表达的影响。沉默成纤维细胞中TGF-β1后,使用40μmol/L的川陈皮素作用于细胞,采用MTT实验检测细胞的增殖情况和Western blot检测相关蛋白的表达情况。结果与对照组比较,不同浓度的川陈皮素能够显著抑制成纤维细胞的增殖、促进细胞的凋亡并抑制细胞的迁移,其组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。川陈皮素能够抑制collagenⅠ、α-SMA和TGF-β1蛋白水平的表达。沉默成纤维细胞中TGF-β1,使川陈皮素对细胞增殖和相关蛋白的抑制作用减弱。结论川陈皮素能够通过抑制TGF-β1来抑制成纤维细胞的生长、迁移和纤维化。     

熊果酸通过抑制FAK信号通路抑制成纤维细胞的增殖和迁移

目的探讨熊果酸(ursolic acid, UA)是否能够通过影响FAK信号通路影响成纤维细胞的增殖和迁移。方法将成纤维细胞分为四组,分别为对照组(0.9%NaCl)、10μmol/L UA组、20μmol/L UA组和40μmol/L UA组,分别于0、12、24、36、48 h应用MTT法检测细胞的增殖情况。使用20μmol/L和40μmol/L UA作用成纤维细胞24 h后,Transwell实验和WB实验检测UA对细胞迁移和细胞中p-FAK和FAK的调节作用。沉默成纤维细胞中的FAK后,使用20μmol/L UA作用成纤维细胞,MTT实验检测细胞的增殖情况,WB实验检测细胞中p-FAK和FAK的表达情况。结果与对照组相比,10、20μmol/L和40μmol/L UA组均可以显著抑制细胞的增殖,其差异具有统计学意义(P0.05)。20μmol/L和40μmol/L UA能够抑制成纤维细胞的迁移能力,下调成纤维细胞中p-FAK的表达。沉默FAK后,UA对成纤维细胞中p-FAK的抑制作用减弱。结论 UA可以通过抑制FAK磷酸化水平来抑制成纤维细胞的增殖和迁移。     

厚朴酚影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学功能的实验研究

目的 探讨厚朴酚对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和迁移的调节作用。方法 自2020年9月至2021年9月,北部战区总医院烧伤整形科将增生性瘢痕成纤维细胞分为4组,分别使用0、10、20和40μmol/L的厚朴酚处理。于作用后0、1、2、3和4 d使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖。作用后1 d使用细胞周期试剂盒检测细胞周期情况,细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡水平,台盼蓝染色法检测细胞迁移水平,Western blot实验检测细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结果 细胞增殖实验检测结果显示,与0μmol/L的厚朴酚作用相比,10、20和40μmol/L的厚朴酚作用增生性瘢痕成纤维细胞1～4 d后,能够显著抑制细胞的增殖能力。10、20和40μmol/L的厚朴酚均能够促进G0-G1期细胞的表达,下调S期细胞百分比,抑制细胞周期的进程;促进早期和晚期凋亡细胞的百分比;明显下调增生性瘢痕成纤维细胞的迁移水平。Western blot实验结果显示,厚朴酚可以显著下调细胞中Cyclin D1、Bcl-2和MMP2的蛋白表达水平。结论 厚朴酚能够通过抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增...     

厚朴酚通过抑制TGF-β1抑制增生性瘢痕成纤维细胞中的炎症因子

目的 探讨厚朴酚是否能够通过影响TGF-β1影响增生性瘢痕成纤维细胞的炎症反应。方法 自2019年9月至2020年9月,铁岭市第二人民医院外科从10例增生性瘢痕患者身上采集了10份增生性瘢痕组织样本,10例皮瓣移植患者术后采集10份正常皮肤组织样本。通过ELISA检测增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中白细胞介素（interleukin, IL）-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的表达情况。获取增生性瘢痕成纤维细胞后,分别采用0、10、20和40μmol/L厚朴酚处理增生性瘢痕成纤维细胞和正常成纤维细胞,在处理后24 h,采用ELISA和实时定量PCR检测检测细胞中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)、IL-1β和TNF-α的表达情况,Western blot实验检测TGF-β1的表达情况。分别在细胞中转染对照和TGF-β1后,采用0μmol/L和40μmol/L厚朴酚处理细胞,在处理后24 h时,采用ELISA和实时定量PCR检测细胞中IL-1β、TNF-α和TGF-β1的表达...     

赛来昔布对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响

目的 探讨赛来昔布对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及β-catenin和C-myc表达的影响.方法 用不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)及不同作用时间(24、48、72h)的赛来昔布作用于人瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,QRT-PCR、Western-blot检测体外培养的人正常皮肤及瘢痕疙瘩成纤维细胞中β-catenin和C-myc 的mRNA及蛋白表达.结果 CCK-8法显示,赛来昔布可显著抑制体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖(P ＜0.05),呈剂量和时间依赖性;QRT-PCR和Western-blot显示:①与体外培养的人正常皮肤成纤维细胞相比,体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,C-myc 及β-catenin蛋白的表达明显上调(P ＜0.05),而β-catenin mRNA表达未见明显增加;②不同浓度(0、25、50、100、125μmol/L)赛来昔布作用的体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞中,随着赛来昔布浓度增高,β-catenin和C-myc的表达逐渐降低,各组之间差别明显(P ＜0.05).结论 人瘢痕疙瘩的发生与Wnt信号通路异常密切相关;赛来昔布能通过Wnt信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖,有望用于瘢痕疙瘩的临床治疗.     

丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

目的探讨丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用。方法自2018年9月至2020年6月北部战区总医院烧伤整形科提取原代增生性瘢痕成纤维细胞后,将细胞平分为4组,分别采用0μmol/L(对照组)、50μmol/L、100μmol/L的丹皮酚及10μmol/L的5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理;CCK-8实验检测细胞处理后第0、3、5、7天的增殖情况。处理3 d后通过ELISA实验检测增生性成纤维细胞中活性氧基团或分子、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量;Western blot实验检测丹皮酚对于细胞中TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达情况。结果50、100μmol/L的丹皮酚和10μmol/L的5-FU分别作用于细胞3 d后与对照组相比,对于细胞增殖的抑制率分别为(32.63±3.06)%、(46.41±4.41)%和(45.32±9.26)%,组间比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。丹皮酚能够显著下调增生性成纤维细胞中ROS和MDA的表达情况,上调SOD的含量,降低TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达。结论丹皮酚能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长、减轻氧化应激损伤,下调TGF-β1和胶原的表达。     

黄芪多糖对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的影响

目的 分析黄芪多糖（AP）对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的成骨分化作用机制。 方法 MC3T3-E1细胞经成骨诱导后分别加入浓度为0、5、10 μmol/L 的AP进行干预,持续1、3、5、7 d后使用MTT法观察AP对细胞增殖的影响;干预14 d后,通过ALP及茜素红染色观察AP的促成骨分化作用;成骨相关mRNA表达水平经实时荧光定量PCR测定,其中包括Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素（osteocalcin）、I型胶原蛋白（collagen I）;并使用Western blot法检测β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达水平,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况。 结果 加入5、10 μmol/L 的AP后可有效促进MC3T3-E1增殖,且药物浓度越高效果越明显;同时AP亦可提高ALP、茜素红染色的阳性率,以及β-catenin、osteocalcin、Runx2、collagen I mRNA的表达水平（P<0.05）;Western blot结果也显示AP可有效促进β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达（P<0.05）,以及促进β-catenin入核。 结论 AP可促进MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化,机制可能涉及促进相关成骨标志物表达以及β-catenin入核。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学功能及相关调控蛋白的影响

目的探讨中药苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物功能的影响及相关调控蛋白表达的作用,了解其对瘢痕疙瘩的相关作用机制。方法将瘢痕疙瘩行体外细胞培养后进行细胞处理。实验组加入20μmol/L和40μmol/L的苦参碱;对照组加入生理盐水。分别通过四甲基噻唑蓝(MTT)检测成纤维细胞的增殖情况;AV-PI染色检测其凋亡情况;Transwell检测其侵袭和迁移情况;Western blot检测其生物功能相关调控蛋白的表达水平。结果经苦参碱处理后,细胞增殖受到抑制,且抑制作用具有浓度、时间的依赖性;AV-PI染色发现,苦参碱能在一定程度上诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,且对其侵袭和迁移有抑制作用;通过Western blot实验结果发现,苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、凋亡、自噬、侵袭和迁移等生物功能相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、LC3、Beclin-1、MMP2、MMP9的表达水平具有调节作用。结论苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学功能具有调节作用,可能是通过调控相关蛋白的表达来影响瘢痕疙瘩的生长。     

山萘酚通过抑制Akt磷酸化的水平抑制增生性瘢痕成纤维细胞的迁移和生长

目的 探讨山萘酚是否能通过抑制Akt的磷酸化水平抑制增生性瘢痕成纤维细胞（hypertrophic scar fibroblasts,HSFB）迁移的能力、阻滞其细胞周期、促进其凋亡,并抑制其增殖能力。方法 选取自2021年2-12月,北部战区总医院烧伤整形科接受瘢痕切除术治疗的15例患者的增生性瘢痕（hypertrophic scars,HS）组织。获取HSFB后,将细胞分为3组,分别使用0、50、100μmol/L山萘酚对细胞进行处理,在处理后的第0、12、24、36、48 h采用MTT检测细胞的增殖情况,通过流式细胞技术检测不同细胞周期中的细胞占比;Hoechst 33258实验检测细胞的凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移能力;Western blot实验检测山萘酚对于蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B, p-Akt)表达的作用。将经过Akt si-RNA转染后的细胞分为4组,空白对照组、si-Akt组、50μmol/L山萘酚组、50μmol/L山萘酚+si-Akt组...     

FH535对结直肠癌肿瘤干细胞自我更新及侵袭迁移的抑制作用及机制

目的:探讨小分子药物FH535对结直肠癌肿瘤干细胞(CRC-CSCs)自我更新、迁移侵袭的影响及机制。方法:通过流式细胞术从人结直肠癌DLD-1细胞中分选CD133+CD44+的CRC-CSCs,不同浓度(20、30、40μmol/L)FH535作用CRC-CSCs并计算半数抑制率(IC50);用IC50浓度作用CRC-CSCs,以无处理的CRC-CSCs为对照组,然后分别采用成球实验及有限浓度稀释法检测细胞的自我更新能力,Transwell迁移侵袭实验及实时迁移侵袭实验(RTCA)检测细胞迁移侵袭能力,qRT-PCR及流式细胞术检测Wnt/β-catenin信号通路相关分子及下游分子的mRNA及蛋白质表达变化。结果:FH535对CRC-CSCs的IC50为40μmol/L。与对照组细胞比较,40μmol/LFH535作用后的CRC-CSCs成球能力明显减弱(57.33vs.313.67,P0.01),CSCs比例明显下降(11.60/100vs.75.50/100,P0.05),迁移(Transwell:10.66vs.90.00;RTCA:0.17vs.0.37)及侵袭(Transwell:8vs.20;RTCA:0.14vs.0.37)能力受到明显抑制(均P0.01);Wnt/β-catenin信号通路分子LEF1、AXIN1及下游分子c-myc、VEGF、cyclinD1、survivin的mRNA与蛋白表达均明显下调(均P0.01)。结论:FH535可能通过抑制Wnt/β-catenin通路的活性而削弱CRC-CSCs的自我更新、侵袭迁移能力。     

雷帕霉素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的通过体外细胞培养实验,观察雷帕霉素对瘢痕疙瘩及正常皮肤成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响,探讨雷帕霉素用于治疗瘢痕疙瘩的可能性及有效性。方法在无菌条件下切取人瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,分离培养其成纤维细胞;实验分为不同浓度雷帕霉素(2.5、5.0、7.5、10.0μmol/L)处理组和DMSO溶剂对照组。分别采用MTS法、划痕法和Annexin V-PI染色检测不同浓度雷帕霉素对两种成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果雷帕霉素能够抑制两种成纤维细胞的增殖,且对正常皮肤成纤维细胞增殖的抑制作用更强,其浓度越高抑制效率越高;能够显著抑制两种成纤维细胞的迁移,并明显诱导正常皮肤成纤维细胞的凋亡,且高浓度(10.0μmol/L)雷帕霉素处理组的凋亡率最高,但对瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡作用不明显。结论雷帕霉素可以抑制两种成纤维细胞的增殖和迁移,诱导成纤维细胞的凋亡;雷帕霉素对成纤维细胞的影响,可能成为预防瘢痕疙瘩等纤维化疾病的有效药物。     

Sufu通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用

目的探讨Sufu(suppressor of fused)是否通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用。方法自2019年3—8月通过北部战区总医院烧伤整形科获取手术切除的增生性瘢痕组织和正常皮肤组织,经Western blot检测组织中Sufu的表达情况,原代提取增生性瘢痕成纤维细胞。通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide, MTT)实验检测Sufu作用0、12、24、36和48 h时成纤维细胞的增殖情况,流式细胞技术和propidine iodide,Annexin V-碘化丙啶(PI)实验检测Sufu作用24 h后细胞周期和细胞凋亡情况。Western blot实验检测Sufu作用24 h后成纤维细胞中Sufu、Gli1和α-SMA蛋白的表达情况。结果 Sufu在增生性瘢痕组织中表达下调,并能够显著抑制成纤维细胞的增殖,其中12、24、36和48 h时对于成纤维细胞增殖的抑制率分别为(31.92±1.69)%、(33.24±3.55)%、(47.22±2.07)%和(51.33±2.32)%。Sufu作用细胞24 h后能够抑制细胞周期G1/S期的进程,促进细胞凋亡,并下调细胞中Gli1和α-SMA蛋白的表达。结论 Sufu可以通过抑制Hedgehog信号通路抑制成纤维细胞的纤维化作用。     

辣椒素抑制体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的实验研究

目的探讨辣椒素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖能力、胶原表达及迁移能力的影响,为辣椒素治疗瘢痕疙瘩提供依据。方法取人瘢痕疙瘩9例,胶原酶消化获取瘢痕疙瘩成纤维细胞,用含有0.5μg/L和5μg/L辣椒素的DMEM培养液培养细胞,常规DMEM培养液培养作为对照。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测周期变化,QPCR检测胶原和炎症因子等的表达水平,并以划痕实验检测细胞的迁移能力。结果辣椒素能抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖,阻滞细胞于G0/G1期,并抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白的表达。此外,辣椒素还能降低瘢痕疙瘩细胞炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。但是,辣椒素对细胞的迁移能力没有影响。结论辣椒素能抑制体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力,并抑制其胶原和炎性因子等的表达。     

Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌发生中的分子机制研究

目的探讨Wnt/β-Catenin信号通路在肝癌细胞增殖、迁移方面的影响和其在肝癌发生发展中的可能作用。方法体外培养HepG2和L02细胞,采用免疫荧光和Western Blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平。培养的HepG2细胞分别用浓度100ng/ml的Wnt3α和20 ng/ml的DKK1处理,采用CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞实验检测细胞周期,Western Blot检测β-catenin、GSK3β、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平,Trans-well检测HepG2的迁移情况。结果与正常肝细胞L02相比,HepG2细胞高表达β-catenin,cyclin D1和c-myc,低表达GSK3β。Wnt3α能够显著促进HepG2细胞的增殖活力,而DKK1能够显著抑制其增殖。与Wnt3α组相比,DKK1处理组细胞G0/G1期细胞比例增加,(68.6±0.5)%VS(47.5±1.5)%(P0.01),而S期细胞比例减少(17.4±0.5)%VS(28.6±0.5)%,(P0.01)。Western Blot检测结果说明,Wnt3α提高了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达水平,抑制了GSK3β的表达,而DKK1抑制了β-catenin、cyclin D1和c-myc的表达。迁移实验透膜细胞数对照组为(176.40±12.98)、Wnt3α组为(238.20±18.38)、DKK1组为(110.40±9.46),P0.05。结论 Wnt/β-catenin信号通路在促进HepG2细胞的增殖和迁移方面起重要作用,在肝癌的发生发展和转移中起着重要的作用,是肝癌发生的重要分子机制。     

虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用及机制研究

目的:探讨虾青素对人源增生性瘢痕成纤维细胞的作用以及机制研究。方法:体外培养人源增生性瘢痕成纤维细胞分别加入0、10、50、100μmol/L浓度的虾青素作用24h,MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中的TIMP-1、MMP-1、COL-I及COL-Ⅲ的浓度;Western-blotting检测Bcl-2、α-SMA、TGF-β1及Bax等蛋白的表达。结果:不同浓度的虾青素使人源增生性瘢痕成纤维细胞活力降低而凋亡率增加;促凋亡蛋白Bax表达上调,抑制凋亡蛋白Bcl-2表达下调,同时抑制α-SMA、TGF-β1的表达及TIMP-1、MMP-1、COL-I、COL-Ⅲ合成。结论:虾青素能诱导人源增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡并抑制HSF细胞增殖、转化,减少胶原分泌,促进胶原酶解,继而有效改善增生性瘢痕的发生与发展。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用实验研究

目的:研究苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其相关作用机制。方法:通过收集手术切除的瘢痕疙瘩进行体外培养成纤维细胞,将细胞分为3组,分别加入10μmol/L,20μmol/L的苦参碱以及对照组(0.9%NaCl)进行实验。MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞技术进行细胞周期分析;Hoechest33258染色检测细胞凋亡情况;Westernblot实验检测苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白表达的影响。结果:通过不同浓度的苦参碱处理细胞后,MTT结果发现成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制作用具有剂量依赖性;细胞周期分析发现,苦参碱作用后细胞的G1-S期转化受到了不同程度的抑制;Hoechest 33258染色发现苦参碱可以促进凋亡细胞的增加;Western blot实验结果发现苦参碱可以抑制CDK4、CDK6、Bcl-2和LC3-I蛋白的表达,促进Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达。结论:苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,能够影响细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白的表达。     

机械创伤诱导皮肤成纤维细胞去分化的实验研究

目的:研究机械创伤是否能诱导皮肤成纤维细胞发生去分化.方法:建立体外培养细胞划痕损伤模型和体内全层皮肤损伤模型,应用免疫荧光染色、免疫组织化学、蛋白质印迹、转录组测序、siRNA等方法,检测机械创伤后成纤维细胞的形态、增殖情况、干细胞相关标志物的表达、集落形成能力、表达谱等的变化.结果:机械创伤后成纤维细胞逐渐变小变圆,发生类干细胞形态转变,并于创伤后36 h被激活而发生明显增殖,且创伤后成纤维细胞的激活不受创伤严重程度的影响.机械创伤后成纤维细胞中的干细胞标志物Sox2、波形蛋白的表达明显增强,集落形成能力也明显提高.体内实验也发现创面肉芽组织中出现大量Sox2阳性细胞.表达谱分析发现成纤维细胞的多能干细胞通路及相关调控分子表达明显增强.机械划痕后2h创缘成纤维细胞中的总β-catenin和ser 675磷酸化的β-catenin的表达较对照组明显增强;应用β-catenin siRNA抑制成纤维细胞内的β-catenin表达后,机械创伤后创缘成纤维细胞中的Sox2阳性细胞几乎消失.结论:机械创伤可诱导皮肤成纤维细胞的去分化:β-catenin介导了机械创伤后成纤维细胞的去分化过程.     

AcSDKP对正常人真皮成纤维细胞表达TGF-β1的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对真皮成纤维细胞表达TGF—β1的影响。方法对人皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP（10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／L、10^-11mol／L）干预,设立空白对照组。WST-8法检测人皮肤成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人皮肤成纤维细胞TGF～β1 mRNA表达：酶联免疫法检测培养细胞上清液TGF-β1含量。结果与空白对照组相比,各浓度组对成纤维细胞的增殖都有抑制作用,其中10^-10mol／LAcSDKP抑制成纤维细胞增殖作用最强;10^-7mol／L、10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／LAcSDKP对TGF-β1 mRNA表达有显著的抑制作用,且各浓度组间的抑制作用无差异;10^-8mol／L、10^-9mol／L、10^-10mol／LAcSDKP可使培养上清液中的TGF—β1显著减少,各浓度组间差异无显著性。结论AcSDKP能够抑制人皮肤成纤维细胞增殖及TGF—β1的生成,有望成为病理性瘢痕防治的新方法。     

蛋白激酶C在肾上腺素抑制人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞增殖中作用的实验研究

目的观察蛋白激酶C(PKC)在肾上腺素诱导人正常皮肤成纤维细胞(NFb)和增生性瘢痕成纤维细胞(SFb)增殖抑制中的作用。方法体外培养人NFb和SFb,均加入酚妥拉明(终浓度为0×10-6、3×10-6μmol/L)培养1h,再加入肾上腺素(终浓度0.00、0.05、0.10、0.20μmol/L)培养24h.用噻唑蓝(MTT)法检测NFb和SFb的增殖活力,计算细胞存活率。收集细胞培养上清液,检测乳酸脱氢酶(LDH)活性。用蛋白印迹(Western blot)法检测两种细胞磷酸化PKC的表达水平并进行半定量分析。结果(1)与未刺激时(酚妥拉明0×10-6μmol/L 肾上腺素0.00μmol/L)比较,单独用0.05、0.10、0.20μmol/L肾上腺素刺激以及3×10-6μmol/L酚妥拉明与0.20μmol/L肾上腺素联用时,NFb、SFb增殖活力及存活率均明显下降(P<0.05或0.01)。(2)与未刺激时比较,单独应用0·20μmol/L肾上腺素或3×10-6μmol/L酚妥拉明与各种剂量肾上腺素联用后,SFb、NFb培养上清液中LDH活性差异均无统计学意义(P>0.05).(3)单独应用0.05、0.10、0.20μmol/L肾上腺素时,NFb、SFb磷酸化PKC表达水平均明显高于未刺激时(P<0.01).单用3×10-6μmol/L酚妥拉明时,NFb磷酸化PKC表达水平为123±5,高于未刺激时(80±5,P<0.01),而SFb磷酸化PKC表达水平与未刺激时接近(P>0.05).3×10-6μmol/L酚妥拉明分别与0.05、0.10、0·20μmol/L肾上腺素联用时,两种细胞的磷酸化PKC表达水平低于3种剂量肾上腺素单独作用时(P<0.01).结论肾上腺素通过与α受体结合激活PKC,从而抑制NFb和SFb增殖。