蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其可能机制

目的观察蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响,并对其可能的作用机制进行探讨。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min后,松开结扎线再灌注120 min制备急性心肌缺血/再灌注损伤模型;将30只Wistar大鼠随机分为以下3组:对照(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、I/R+蛇床子素后处理(Ost)组。采用TUNEL法原位标记缺血区凋亡心肌细胞并计算凋亡指数,采用Western blot法检测心肌组织中Caspase-3、Bcl-2及Bax三种蛋白的表达。结果与Sham组相比,I/R组心肌细胞凋亡指数、心肌组织Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白和Bax蛋白含量明显增高(均P<0.05);与I/R组相比,Ost组心肌细胞凋亡指数(P<0.05)、心肌组织Caspase-3蛋白(P<0.01)及Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论蛇床子素后处理能抑制急性心肌缺血/再灌注损伤所致的大鼠心肌细胞凋亡,同时上调心肌组织中Bcl-2蛋白的表达及下调心肌组织中Bax蛋白的表达,提示上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白、进而上调Bcl-2/Bax比值可能是其发挥抗心肌细胞凋亡作用的机制。     

银杏叶提取物对急性心肌梗死大鼠心肌Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨银杏叶提取物对急性心肌梗死大鼠心室重构的保护作用及对心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶组各10只。模型组、银杏叶组结扎左前降支制备急性心肌梗死模型,假手术组左前降支仅穿线不结扎。造模后1 d,银杏叶组大鼠腹腔注射银杏叶提取物100 mg/kg,假手术组和模型组注射等体积生理盐水,均1次/d,连续4周。药物干预4周,应用动物超声仪测定3组药物干预后左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension, LVEDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension, LVESd)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、左心室短轴缩短分数(left ventricular fractional shortening, LVFS);Masson染色法观察心肌组织纤维化改变,免疫组织化学法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达。结果药物干预4周,银杏叶组、模型组LVEDd[(3.5±0.1)、(4.4±0.2)mm]、LVESd[(2.5±0.2)、(3.2±0.1)mm]大于假手术组[(2.6±0.1)、(1.5±0.1)mm](P0.05),LVEF[(52.9±1.5)%、(39.5±1.9)%]、LVFS[(31.7±2.1)%、(20.8±2.2)%]低于假手术组[(73.2±1.7)%、(45.8±1.8)%](P0.05),银杏叶组LVEDd、LVESd小于模型组(P0.05),LVEF、LVFS高于模型组(P0.05);Masson染色示银杏叶组梗死中心灶小,胶原纤维沉积较模型组少,炎症浸润较模型组轻;银杏叶组、模型组心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(0.19±0.08、0.52±0.17)、Ⅲ型胶原蛋白表达的吸光度值(0.25±0.14、0.36±0.16)均高于假手术组(0.06±0.01、0.05±0.01)(P0.05),且模型组高于银杏叶组(P0.05)。结论银杏叶提取物可通过减少Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达来抑制急性心肌梗死引起的心室重构。     

重组人白细胞介素-11对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的观察重组人白细胞介素-11(rhIL-11)对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用,并探讨其可能机制.方法将80只SD大鼠随机分为正常组10只、假手术组10只、脓毒症组30只、rhIL-11治疗组30只.采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症大鼠模型.术前治疗组给予rhIL-11[500μg/(kg·d)]皮下注射;脓毒症组、假手术组和正常组大鼠均注射平衡溶液[10mL/(kg·d)].酶联免疫吸附法测定术前和术后6、12和24h血清肿瘤坏死因子-α(TNF-d)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-11(IL-11)浓度.CLP后24 h取肺标本,进行组织病理学分析.Western blot检测肺组织中p-IκBα、Bcl-2、Bax及JAK1、STAT3蛋白的表达.实时定量(RT-PCR)法检测Bax mRNA表达浓度.结果①造模后12、24 h治疗组血清IL-6浓度(pg/mL)(307.4±48.6、204.2±31.5)明显低于脓毒症组(644.8±88.7、570.4±66.3)(P<0.05),治疗组血清TNF-α浓度(pg/mL)(319.2±32.8、258.6±40.5)明显低于脓毒症组(382.1±54.7、324.3±30.0)(P<0.05),治疗组血清IL-11浓度(pg/mL)(761.0±109.3、672.4±99.5)明显高于脓毒症组(618.2±71.7、530.6±90.2)(P<0.05);②治疗组Bax mRNA及蛋白Bax、p-IκBα的表达分别为(0.46±0.09、0.82±0.19、0.61±0.20),与脓毒症组(0.78±0.12、1.19-±0.33、0.82±0.22)比较明显降低(P<0.05);治疗组Bcl-2表达(0.65±0.19)与脓毒症组(0.41±0.11)比较明显增加(P<0.05).③治疗组JAK1和STAT3蛋白表达指数(2.37±0.26、2.39±0.25)明显高于其他组(P<0.05).④与脓毒症组比较,治疗组肺组织损伤和坏死明显减少;治疗组大鼠肺组织病理学评分(4.43±1.07)分明显优于脓毒症组(6.91±1.18)分(P<0.05).结论rhIL-11对脓毒症大鼠肺损伤具有保护作用,其机制可能与通过JAK1/STAT3通路的调控,抗凋亡并抑制炎症反应有关.     

脂氧素对大鼠心肌缺血再灌注后心梗程度和细胞凋亡的影响

目的:观察脂氧素A4(lipoxins,LXA4)对大鼠心肌缺血再灌注后心梗程度和细胞凋亡的影响。方法:36只大鼠随机分成假手术组(S组,n=12)、缺血/再灌注组(I/R组,n=12)和I/R+LXA4治疗组(L组,n=12),分别以HE染色光镜下观察心肌组织病理学变化,通过RT-PCR和Western blot法检测缺血心肌Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果:L组心肌组织病理学损伤较I/R组减轻。I/R组中基因Bax和Bcl-2的表达均增强,Caspase-3的含量升高(P<0.01)。L组中基因Bax、Caspase-3表达明显减弱,Bcl-2表达增强(P<0.01)。结论:脂氧素通过抑制Caspase-3和Bax活化,增强Bcl-2的表达而对缺血再灌注的心肌有一定保护作用。     

尼可地尔对缺血性心力衰竭大鼠心功能的保护作用及机制

目的探讨尼可地尔对缺血性心力衰竭大鼠心功能和左室重构的保护作用及相关机制。方法将40只大鼠随机分为空白对照组(Con组)、尼可地尔组(NIC组)、生理盐水组(NS组)及假手术组(Sham组),每组10只,分别采取不同处理方式。记录各组大鼠体重、呼吸模式、活动量和毛色差异。术后8周所有大鼠行超声心动图检查。实验结束后对大鼠左心室前壁组织进行HE染色及电镜观察。检测心肌组织中p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白的相对表达量。结果与Con组及Sham组相比,NS组及NIC组左心室射血分数(LVEF)、速度最大值(E)/心房收缩心室充盈速度最大值(A)(E/A)降低,NS组LVEF下降最多,差异有统计学意义(P<0.05)。左心室舒张末期容积(LVEDV)则呈相反趋势,3组间存在差异,NS组LVEDV最高,差异有统计学意义(P<0.05)。NS组左心室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期内径(LVIDd)和左室收缩末期内径(LVIDs)高于NIC组和Sham组,差异有统计学意义(P<0.05)。Sham组大鼠心肌细胞排列规则,横纹清晰;NS组心肌细胞排列紊乱,形状不规则,同时还表现出明显的纤维组织增生。Sham组、NIC组的左心室/体重比值(LVW/BW)和肺脏重量指数(Lungw/Bw)均低于NS组,差异有统计学意义(P<0.05)。与Con组及Sham组相比,NS组p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白相对表达量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。NIC组p-Akt、Bcl-2蛋白相对表达量高于NS组,但Bax蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论尼可地尔可通过改善心功能和左室重塑对缺血性心力衰竭大鼠起到保护作用,这可能与抑制Bax蛋白表达有关。     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。     

miR-22修饰的骨髓间充质干细胞外泌体抑制急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡

目的探讨miR-22修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法扩增培养从SD大鼠骨髓中分离的BMSCs,将携带miR-22重组慢病毒载体及其阴性对照(miR-NC)载体分别转染至BMSCs,并提取转染后BMSCs的外泌体。将60只SD大鼠随机分为Sham组、AMI组、Exo BMSCs组、Exo BMSCs/miR-NC组和Exo BMSCs/miR-22组,每组12只。采用冠状动脉左前降支结扎术构建AMI大鼠模型,于心肌梗死区原位注射外泌体进行干预。干预72 h后,采用超声心动图监测大鼠心脏功能;TTC染色观察大鼠心肌梗死情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡水平;qRT-PCR检测心肌组织中miR-22及p53 mRNA表达水平;Western blot检测心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶剪切体(Cleaved-caspase-3)及p53蛋白表达水平。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心脏功能明显降低(P <0.05),心肌梗死面积(%:1.16±0.84 vs.38.68±5.31)和心肌细胞凋亡率(%:9.04±1.95 vs.66.70±5.92)明显增加(P <0.05),心肌组织中miR-22和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P <0.05),而p53、Bax和Cleavedcaspase-3等蛋白表达水平明显升高(P <0.05);与AMI组比较,各外泌体干预组大鼠心功能明显改善(P <0.05),心肌梗死面积(%:38.68±5.31 vs.23.54±3.94,22.33±4.12,13.79±2.25)和心肌细胞凋亡率(66.70±5.92 vs.43.73±3.39,42.67±2.87,30.73±2.97)明显降低(P <0.05),心肌组织中miR-22以及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P <0.05),而p53、Bax和Cleaved-caspase-3等蛋白表达水平明显降低(P <0.05),其中Exo BMSCs/miR-22组大鼠各指标改善情况均优于Exo BMSCs组和Exo BMSCs/miR-NC组。结论 miR-22修饰的BMSCs外泌体可有效抑制p53介导的心肌细胞凋亡,从而改善AMI大鼠的心功能。     

二氮嗪对大鼠心肌缺血-再灌流损伤细胞凋亡的影响

目的观察二氮嗪对缺血-再灌流心肌细胞凋亡,以及对Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法21只SD大鼠随机分为假手术组(sham operation,SO),缺血-再灌流组(ischemia/reperfusion,IR)和二氮嗪处理组(Diazoxide,DI)。SO组和IR组静脉注射相应量溶媒,DI组12.5 mg/kg剂量静脉注射二氮嗪。10min后SO组不结扎前降支,4 h后取心脏,而IR组和DI组结扎前降支2 h,再灌流2 h。采用TUNEL法和免疫组化法检测缺血心肌细胞凋亡和Bax、Bcl-2、Caspase-3表达,及心肌梗死范围。结果与SO组相比,IR和DI组心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.05),Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白阳性细胞指数明显升高(P<0.05);与IR组相比,DI组明显降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)和Bax,Caspase-3蛋白阳性细胞指数(P<0.05),增加Bcl-2蛋白阳性细胞指数(P<0.05)。IR组心肌梗死范围为(36.9±2.3)%,DI组为(20.0±8)%,两组差异有显著性(P<0.05)。结论二氮嗪通过上调Bcl-2表达,下调Bax及Caspase-3表达而减少在体大鼠缺血-再灌流损伤心肌细胞凋亡。     

小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠心脏的保护作用

目的 探讨小剂量阿司匹林对糖尿病大鼠心脏的保护作用及机制.方法 雄性SD大鼠尾静脉注射链脲佐菌素30 mg/kg,造成1型糖尿病动物模型后,随机分为糖尿病模型组和阿司匹林组各8只,另选8只健康雄性大鼠为对照组.阿司匹林组大鼠灌服阿司匹林9 mg/kg+蒸馏水,对照组和糖尿病模型组大鼠灌服同体积的蒸馏水,12周后检测各组大鼠空腹血糖、血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,HE染色法检查心肌组织病理显微结构,免疫组织化学法检测Caspase-3,Bax和Bcl-2的表达情况.结果 糖尿病模型组和阿司匹林组大鼠空腹血糖、CK和LDH水平较对照组明显升高(P＜0.05),阿司匹林组空腹血糖较糖尿病模型组降低(P＜0.05);阿司匹林组CK和LDH水平较糖尿病模型组降低,但差异均无统计学意义(P＞0.05);糖尿病模型组大鼠心脏显微结构基本正常,但可见局部心肌纤维排列紊乱等病理改变,小剂量阿司匹林治疗12周后,心肌上述病理改变明显减轻;糖尿病模型组Caspase-3和Bax表达均强于对照组(P＜0.05),Bcl-2表达弱于对照组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值低于对照组(P＜0.05);阿司匹林组Caspase-3和Bax表达均弱于糖尿病模型组(P＜0.05),Bcl-2表达明显强于糖尿病模型组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值明显高于糖尿病模型组(P＜0.05).结论 小剂量阿司匹林可能通过调节细胞凋亡相关蛋白表达对糖尿病大鼠心脏起保护作用.     

海带多糖对人鼻咽癌HONE1细胞裸鼠移植瘤的抑制及凋亡相关基因的调控

目的:观察海带多糖(laminaria japonica polysaccharides,LJP)对人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HONE1细胞移植瘤生长抑制及凋亡相关基因调控效应,探讨其抗癌机制.方法:以人NPC细胞株HONE1建立裸鼠皮下移植瘤模型及LJP行体内抑瘤实验,并以RT-PCR检测移植瘤Bax,Bcl-2,Caspase-3,8,9 mRNA表达.结果:LJP中、高剂量组抑瘤率分别为33.7％和47.0％,具有明显抑瘤作用;RTPCR检测结果显示,Bax mRNA表达随着LJP浓度的增加而增高(P＜ 0.05);Bcl-2mRNA表达随着LJP浓度增加而降低(P＜0.05).Caspase-3mRNA表达随着LJP浓度增加而增高(P＜ 0.05);LJP组Caspase-8,9mRNA表达无差异,且Caspase-9mRNA表达均低于顺铂(cisplatin,DDP)组.结论:LJP具有抑制NPCHONE1细胞生长的作用,其机制是促进癌细胞凋亡而实现的.     

转染血管内皮生长因子基因的骨髓间充质干细胞修复糖尿病大鼠足背创面

背景：糖尿病足溃疡严重威胁患者的健康甚至生命,其治疗仍是国际性难题,目前缺乏良好有效的治疗手段,而基因疗法和干细胞疗法在创伤修复领域展现出独特的优势和潜力。目的：探索转染人血管内皮生长因子165（human vascular endothelial growth factor 165, hVEGF165）基因的骨髓间充质干细胞对大鼠糖尿病足背创面的治疗效果。方法：体外构建hVEGF165基因的腺病毒表达载体,转染第3代大鼠骨髓间充质干细胞;将120只雄性Wistar大鼠分成正常溃疡对照组、模型组、基因治疗组、干细胞治疗组和基因转染干细胞治疗组。后4组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病,在所有大鼠的后足背切取一3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成足背创面模型。各组大鼠均在足背创缘皮下分点注射移植,距创缘5 mm处、等距6点,正常溃疡对照组和模型组各点均注射50μL的PBS,基因治疗组各点注射50μL的腺病毒悬液（1×1013 pfu/L）,干细胞治疗组各点注射50μL的干细胞悬液（1×1010 L-1）,基因转染干细胞治疗组各点注射50μL的病毒转染后的干细胞悬液（1×1010 L-1）。结果与结论：与模型组、基因治疗组、干细胞治疗组相比,基因转染干细胞治疗组大鼠创面愈合率、血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达水平、局部毛细血管数量均有显著提高（P〈0.05）,但较正常溃疡对照组差（P〈0.05）。说明 hVEGF165基因联合骨髓间充质干细胞疗法能够促进大鼠糖尿病足背创面的愈合,其主要机制为促进局部血管的生成及血管内皮生长因子的表达。     

维奈克拉增强MDS 细胞系对地西他滨化疗敏感性机制的实验研究

目的 研究维奈克拉（venetoclax,VCX）对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS) 细胞系地西他滨（decitabine,DAC）化疗敏感性的可能作用机制。方法 CCK-8 法检测不同浓度VCX 对MDS 细胞（SKM-1 和MUTZ-1 细胞系）增殖活力的影响;将MUTZ-1 细胞根据不同处理分为4 组:对照组、VCX 组、DAC 组和VCX+DAC组;Annexin V-FITC/PI 法检测各组细胞凋亡率;Western blotting 检测细胞中凋亡相关蛋白[ 细胞色素C（cytochromeC）,裂解型半胱天冬酶3（cleaved Caspase-3）表达水平],B 细胞白血病/ 淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2) 与Bcl-2 相关蛋白X（Bax）比值;JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒检测各组SKM-1 和MUTZ-1 细胞的线粒体膜电位;H2DCF-DA 荧光探针法检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量;Western blotting 检测细胞中自噬相关蛋白Beclin1,P62 和LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值。结果 随VCX 浓度升高,MUTZ-1 细胞增殖活性明显降低,且呈浓度依赖性（F=0.003,P=0.001）。与对照组（4.28%±1.66%）相比,VCX 组（13.75%±3.02%）,DAC 组（12.39%±4.16%）和VCX+DAC组（18.10%±3.50%）细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义（F=45.782,P<0.05）。与对照组（1.01±0.02,1.04±0.02,1.01±0.04） 相比,VCX 组（1.67±0.05,2.23±0.10,0.43±0.05）,DAC 组（1.62±0.08,1.85±0.06,0.49±0.07） 和VCX+DAC 组（3.24±0.10,3.81±0.19,0.13±0.01） 细胞中凋亡相关蛋白cytochrome C,cleavedCaspase-3 蛋白表达及Bcl-2/Bax 比值明显升高,差异均有统计学意义（F=116.384,282.069,248.035,均P<0.05）。与对照组（2.05±0.34,8.78±1.37）相比,VCX 组（8.72±1.26,14.02±1.45）,DAC 组（8.44±2.13,13.20±2.41）和VCX+DAC 组（15.66±2.90,26.45±1.53）细胞线粒体膜电位及ROS 含量明显升高,差异具有统计学意义（F=66.782,69.071,均P<0.05）。与对照组（1.05±0.04,1.02±0.08,1.01±0.07）相比,VCX组（1.62±0.15,2.60±0.19,0.56±0.15）,DAC 组（1.67±0.17,2.45±0.20,0.54±0.14）和VCX+DAC 组（3.72±0.21,3.58±0.27,0.13±0.09）自噬相关蛋白Beclin1,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ表达明显升高,而P62 蛋白表达则明显降低,差异均有统计学意义（F=118.257,209.422,236.92,均P<0.05）。与DAC 组比较,VCX+DAC 组细胞凋亡率、cytochrome C,cleaved Caspase-3,Beclin1 蛋白表达水平,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值和ROS 含量均明显降低（t=2.473,28.564,17.291,16.115,7.021,9.319）;线粒体膜电位、Bcl-2/Bax 比值和P62 蛋白表达均明显升高（t=4.621,9.244,4.278）,差异具有统计学意义（均P ＜ 0.05）。DAC 组和VCX 组细胞中上述检测指标差异均无统计学意义（均P ＞ 0.05）。结论 VCX 可能通过调节细胞凋亡、自噬和氧化应激来促进MDS 细胞对DAC 的化疗敏感性。     

腺病毒介导入血管内皮生长因子_165基因转染促进人骨髓间充质干细胞的成骨特点

目的：课题组以前的实验证实，人血管内皮生长因子165基因重组腺病毒可高效感染人骨髓间充质干细胞，使之大量表达人血管内皮生长因子165，促进局部新生血管生成，有利于组织修复。实验观察腺病毒介导人血管内皮生长因子165基因转染对人骨髓间充质干细胞成骨能力的影响。 方法：实验于2005—03／2006—01在郧阳医学院附属人民医院临床研究所和创伤骨科完成。人骨髓间充质干细胞取自健康成年男性自愿者，得到医院伦理道德委员会批准。将人骨髓间充质干细胞体外扩增纯化后随机分为4组：①人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组。②β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组。③阳性对照组：培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组：不给予特殊处理。各组细胞处理后12d，应用全自动生化分析仪检测各组培养上液碱性磷酸酶活性；于处理后14d，应用VonKossa染色法检测人骨髓间充质干细胞中骨胶原结节形成情况。 结果：①经多次换液传代，人骨髓间充质干细胞呈均一梭形形态。处理后人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平，突起减少；β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组形态无明显变化。②Yon Kossa染色人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组可见大量红色骨胶原结节形成，明显多于β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组。③人血管内皮生长因子基因重组腺病毒组与阳性对照组培养上清碱性磷酸酶活性显著高于β-半乳糖酐酶基因重组腺病毒组和空白对照组（F=165．18，P=0．00）。结论：人血管内皮生长因子165基因重组腺病毒基因转染对人骨髓间充质于细胞成骨能力具有促进作用，验证了转染人血管内皮生长因子165的人骨髓间充质干细胞移植治疗骨?     

神经干细胞移植影响脊髓全横断大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因的表达

背景:多项研究已证实神经干细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚.目的:观察神经干细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质相关凋亡基因Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成.材料:孕14-15 d绿色荧光蛋白转基因鼠5只,取其胚胎用于神经干细胞培养.清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组:假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只.方法:模型组、细胞移植组大鼠建立T_9脊髓全横断脊髓损伤模型,假手术组只行T_8椎板切除.用DMEM/F12调整胎鼠神经干细胞密度为2×10~(10)L~(-1),吸取细胞悬液15 μL滴加到约2 mm~3大小的明胶薄片上,细胞移植组将此明胶薄片植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处.分别于细胞移植后3,7,14,21,28 d取材进行指标检测.主要观察指标:RT-PCR法检测大脑运动皮质Bax,Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达的变化.结果:与假手术组比较,模型组各时间点Bax的表达均无明显差异(P>0.05),术后14,28 d Bcl-2的表达明显减少(P<0.05),术后3 d Caspase-3的表达明显升高(P<0.05).与模型组比较,细胞移植组在神经干细胞移植后3 d Bax的表达明显减少(P<0.05),移植后14,21 d Bcl-2的表达明显增高(P相似文献   

中药筋脉通对高糖培养海马神经元细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨中药筋脉通含药血清对高糖培养海马神经元细胞的保护作用。方法采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清(JMT),原代培养新生鼠海马神经元细胞分别接种于不同条件的培养基中,分为正常对照组、高糖组、阳性对照组以及JMT大、中、小剂量组。不同培养基中培养72 h后使用Western blotting检测其Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,高糖组Caspase-3、Bax表达明显增加(P<0.01),Bcl-2的表达下降(P<0.05);与高糖组相比,阳性对照组和JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达明显下降(P<0.01),Bcl-2的表达升高(P<0.05);与阳性对照组相比,JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达下降(P<0.05),筋脉通大、中剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.05)。结论筋脉通含药血清可能通过提高Bcl-2蛋白的表达,减少Bax、Caspase-3的表达,上调Bcl-2/Bax的比值,从而减少海马神经元细胞的凋亡。     

内皮祖细胞来源外泌体在体外循环致脑损伤中作用研究

目的 探讨内皮祖细胞来源的外泌体在体外循环引起的脑损伤中的作用机制.方法 选取雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、体外循环组与外泌体处理组,每组15只.假手术组大鼠采用气管插管机械通气,仅在右股动脉、右颈内静脉穿刺置管;体外循环组建立无血预充非停跳体外循环术后认知功能障碍模型;外泌体处理组大鼠动物模型同体外循环组,待...     

胰岛素强化治疗拮抗烫伤大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨大鼠重度烫伤后胰岛素强化治疗拮抗心肌细胞凋亡的作用及机制.方法 将18只SD大鼠按随机数字表法分为假伤组、烫伤组和胰岛素强化治疗组(强化治疗组),每组6只.制作30％总体表面积(TBSA)Ⅱ度烫伤模型及胰岛素强化治疗模型.伤后6h取大鼠左室心肌组织,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,用免疫组化和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分别观察3种凋亡相关基因天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果 与假伤组比较,烫伤后心肌凋亡细胞明显增多[(13.1±3.4)％比(0.6±0.4)％,P＜0.01];caspase-3、Bax的蛋白表达明显增高(免疫组化caspase-3:13.72±4.13比1.36±0.95,Bax:29.64±5.42比2.24±1.04; Western blotting caspase-3:5.72±2.13比1,Bax:4.64±1.42比1),而Bcl-2表达水平显著降低(免疫组化:3.39±1.52比8.01±2.56;Western blotting:0.69±0.42比1,均P＜0.01).经胰岛素强化治疗后,心肌细胞的凋亡率较烫伤组明显降低[(6.7±1.8)％比(13.1±3.4)％,P＜0.01],3种凋亡相关基因的蛋白表达水平正好与烫伤组的变化相反(免疫组化caspase-3:8.88±3.36比13.72±4.13,Bax:14.43±3.69比29.64±5.42,Bcl-2:8.61±3.72比3.39±1.52;Western blotting caspase-3:2.18±0.86比5.72±2.13,Bax:2.87±1.35比4.64±1.42,Bcl-2:3.57±1.70比0.69±0.42,P＜0.05或P＜0.01).结论胰岛素强化治疗可能通过调节caspase-3、Bax和Bcl-2 3种细胞凋亡相关基因的表达,对烫伤后心肌细胞发挥抗凋亡作用.     

NG-硝基-L-精氨酸对脂多糖诱导大鼠肺损伤时肺表面活性物质和细胞凋亡的影响

目的 探讨NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质(PS)和细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠24只,按随机数字表法均分为对照组、模型组、L-NA治疗组.模型组、L-NA治疗组舌下静脉注射脂多糖(LPS)复制内毒素性肺损伤模型;对照组给予等量生理盐水.L-NA治疗组于注射LPS 3 h后给予L-NA 20 mg/kg;对照组和模型组给予等量生理盐水.6 h后处死动物,取肺组织,用原位杂交法测定肺组织表面活性物质相关蛋白A(SP-A)mRNA表达;用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡率;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达;用免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组SP-A mRNA表达[吸光度(A)值]明显下降(0.071±0.017比0.113±0.021),细胞凋亡率[(25.04±4.57)%比(11.37±3.08)%]、caspase-3蛋白表达(A值:298.64±37.11比110.24±14.35)、Bax蛋白表达(A值:0.145±0.011比0.076±0.010)明显升高,Bcl-2蛋白表达(A值:0.064±0.011比0.073±0.009)和Bcl-2/Bax比值(0.447±0.086比0.976±0.157)明显下降(均P<0.01).与模型组比较,L-NA治疗组SP-A mRNA表达(A值:0.085±0.015)和Bcl-2蛋白表达(A值:0.070±0.087)明显增强(P<0.01和P<0.05),但细胞凋亡率[(20.67±1.35)%]、caspase-3蛋白表达(A值:268.75±42.56)、Bax蛋白表达(A值:0.142±0.012)和Bcl-2/Bax比值(0.498±0.069)均无明显变化(均P>0.05).结论 L-NA不通过抑制肺细胞凋亡来减轻内毒素性肺损伤的程度,对调节凋亡相关基因caspase-3和Bax也无明显影响;而是可通过增强PS表达减轻内毒素性肺损伤.     

左西孟旦调控LOX-1/p38 MAPK通路减轻冠状动脉微栓塞后心肌损伤

目的:探讨左西孟旦（levosimendan,Levo）对冠状动脉微栓塞（coronary microembolization, CME）后心肌损伤和LOX-1/p38 MAPK信号通路的影响。方法:采用随机数字表法将24只巴马小型猪随机分为假手术组（Sham组）、CME组、CME+左西孟旦预治疗+对照腺相关病毒转染组（CME+Levo+NC组）及CME+左西孟旦预治疗+ LOX-1过表达腺相关病毒转染组（CME+Levo+LOX-1组）,每组6只。经冠脉介入法于前降支注射栓塞微球构建CME模型;Sham组则注射等量生理盐水代替。CME+Levo+NC组和CME+Levo+LOX-1组于造模前2周分别转染对照病毒和LOX-1过表达病毒,并均于造模前24 h开始持续静滴左西孟旦。心脏超声检测心功能指标;苏木精-伊红（HE）染色和苏木精碱性复红-苦味酸（HBFP）染色分别用于观察心肌组织病理改变和心肌微梗死区域;酶联免疫吸附测定（ELISA）用于检测血清肌钙蛋白I（cTnI）;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNLE）检测心肌细胞凋亡率;免疫荧光观察心肌组织LOX-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3 p12和p-p38 MAPK蛋白表达情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD- t检验。以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:⑴与Sham组比较,CME组小型猪左心室射血分数（LVEF） [（69.73±4.79）% vs （47.18±2.33）%, P<0.05]、左心室短轴缩短率（LVFS） [（42.47±2.54）% vs （21.43±1.76）%, P<0.05]、心输出量（CO）[（4.42±0.27）L/min vs （2.57±0.17）L/min, P<0.05]均显著下降,而左心室舒张期末径（LVEDd）[（32.37±1.33）mm vs （41.21±1.86）mm, P<0.05]显著增加,心肌微梗死面积占比[（3.73±0.87）% vs （20.72±2.49）%, P<0.05]显著增加,血清cTnI水平[（51.92±16.62）pg/mL vs （236.80±19.56）pg/mL, P<0.05]显著升高,心肌细胞凋亡率[（1.15±0.47）% vs （14.15±3.24）%, P<0.05]显著升高,心肌组织Bax、Caspase-3 p12、LOX-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显上调（均 P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显下调（ P<0.05）。⑵与CME组比较,CME+Levo+NC组小型猪LVEF[（47.18±2.33）% vs （55.48±3.92）%, P<0.05]、LVFS[（21.43±1.76）% vs （32.02±1.75）%, P<0.05]、CO[（2.57±0.17）L/min vs （3.45±0.25）L/min, P<0.05]均显著升高,而LVEDd[（41.21±1.86）mm vs （36.78±1.56）mm, P<0.05]显著下降,心肌微梗死面积占比[（20.72±2.49）% vs（11.63±3.12）%, P<0.05]显著减小,血清cTnI水平[（236.80±19.56）pg/mL vs （157.40±15.13）pg/mL, P<0.05]显著降低,心肌细胞凋亡率[（14.15±3.24）% vs （8.33±1.28）%, P<0.05]显著下降,心肌组织Bax、Caspase-3 p12、LOX-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显下调（均 P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显上调（ P<0.05）。⑶与CME+Levo+NC组比较,CME+Levo+LOX-1组小型猪LVEF[（55.48±3.92）% vs（48.52±1.69）%, P<0.05]、LVFS[（32.02±1.75）% vs （23.80±2.51）%, P<0.05]、CO[（3.45±0.25）L/min vs （4.25±0.23）L/min, P<0.05]均显著降低,而LVEDd[（36.78±1.56）mm vs （41.12±1.57）mm, P<0.05]显著增加,心肌微梗死面积占比[（11.63±3.12）% vs （18.93±1.58）%, P<0.05]显著增加,血清cTnI水平[（157.40±15.13）pg/mL vs （244.40±15.97）pg/mL, P<0.05]显著升高,心肌细胞凋亡率[（8.33±1.28）% vs （12.28±1.93）%, P<0.05]显著增加,心肌组织Bax、Caspase-3 p12、LOX-1和p-p38 MAPK蛋白表达明显上调（均 P<0.05）,Bcl-2蛋白表达明显下调（ P<0.05）。 结论:左西孟旦可通过抑制LOX-1/p38 MAPK信号通路介导的心肌细胞凋亡而减轻CME后心肌损伤。     

利多卡因与神经生长因子预处理对沙土鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨利多卡因与神经生长因子(NGF)预处理对脑缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞凋亡的影响.方法 将54只蒙古种沙土鼠按随机数字表法分为正常对照组(A组)、利多卡因对照组(L组)、NGF对照组(N组)、利多卡因预处理12、24、48 h组(L12、L24、L48组)和NGF预处理12、24、48 h组(N12、N24、N48组)9组,每组6只.除A组外,各组均夹闭双侧颈总动脉20 min后再松夹,造成I/R损伤模型.采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测海马CAl区神经细胞凋亡数,采用免疫组化法检测海马CAl区Bcl-2、Bax表达的阳性细胞数.结果 利多卡因与NGF不同时间预处理组CAl区神经细胞凋亡数(个:L12组32.87±0.99,L24组31.90±4.14,L48组24.50±0.70;N12组32.80±1.27,N24组32.83±1.30,N48组23.30±0.86)和Bax阳性细胞数(个:L12组33.47±1.21,L24组33.70±1.20,L48组24.67±2.09;N12组32.17±2.21,N24组31.97±1.79,N48 h组23.27±1.20)均较相应对照组[细胞凋亡数(个):L组67.43±3.92,N组67.80±3.82;Bax阳性细胞数(个):L组59.73±1.32,N组59.37±1.54]显著减少,而Bcl-2阳性细胞数(个:L12组36.60±3.31,L24组34.73±1.82,L48组65.17±1.53;N12组35.70±1.18,N24组37.30±3.86,N48组62.77±2.91)则较相应对照组(个:L组24.53±1.48,N组25.43±1.85)显著增加(P<0.05或P<0.01);其中48 h组较12 h组和24 h组作用更显著;而两个预处理组间不同时间凋亡细胞、Bcl-2、Bax的表达比较差异均无统计学意义.结论 利多卡因与NGF预处理均可减轻脑I/R损伤引起的神经细胞凋亡,具有脑保护作用,以缺血前48 h预处理效果明显,机制可能与Bcl-2及Bax表达有关.