过氧化物酶体增殖物激活受体α对急性肝衰竭小鼠内质网应激的影响

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)通过调控内质网应激(ERS)在小鼠急性肝衰竭(ALF)肝损伤病理机制中的作用。方法腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal N)和脂多糖(LPS)诱导小鼠ALF模型。将小鼠分为对照组(仅给予相应量的磷酸盐缓冲液,10只)、模型组(16只)和Wy-14643干预组(造模前2 h以6 mg/kg通过尾静脉注射,16只)。同时,将模型组进一步分为给药后1、3、6 h 3个亚组,比较各亚组与对照组间内质网应激特异性凋亡蛋白CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和PPARα表达情况。建模6 h后,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)评价肝脏功能。采用免疫印迹技术比较对照组、模型组及Wy-14643干预组间caspase-3、cleaved caspase-3、CHOP表达情况。另取13只小鼠为4-丁酸苯酯(4-PBA)干预组(建模前6 h腹腔注射给予100 mg/kg的4-PBA),比较对照组、模型组及4-PBA干预组间PPARα蛋白及m RNA表达情况。结果与对照组相比,随着ALF的逐渐进展,模型组给药后3、6h CHOP表达显著升高(F=6.341,P=0.025),PPARα表达显著降低(F=7.115,P=0.022)。三组小鼠间血清ALT、AST、caspase-3、cleaved caspase-3和CHOP表达水平比较,差异均有统计学意义(F=8.454,P=0.027;F=10.252,P=0.016;F=6.231,P=0.042;F=30.072,P0.001;F=8.596,P=0.014)。Wy-14643干预组血清ALT[(524±330)U/L vs.(1 465±485)U/L]、AST[(1 227±314)U/L vs.(4 038±1 537)U/L]水平均显著低于模型组(P均0.05),且与模型组相比,对照组与Wy-14643干预组小鼠caspase-3显著升高,cleaved caspase-3和CHOP表达显著降低(P均0.05)。与此同时,4-PBA干预组PPARα的m RNA和蛋白表达均显著高于模型组(F=6.665,P=0.017;F=5.441,P=0.043)。结论 PPARα可能通过抑制严重内质网应激而保护小鼠急性肝衰竭后肝损伤。     

异丙酚对热打击小鼠氧化应激损伤的保护作用研究

目的观察热打击小鼠复温后血清中超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)以及丙二醛(MDA)的变化趋势以及异丙酚对上述指标的干预效应,探讨异丙酚对热打击小鼠氧化应激损伤的保护效应。方法 BALB/c小鼠按随机数字法分为对照组和42℃热打击组,对照组动物始终置于常温(25±0.5)℃,相对湿度(35±5)%环境下;42℃热打击组置于仿真高温气候舱内,舱内温度(35.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%,记录小鼠直肠温度(Tc),当热打击小鼠Tc达42℃移置(25±0.5)℃,(35±5)%相对湿度环境下复温随机分为0 h、3 h、6 h、12 h组(n=3);异丙酚、脂肪乳组于热打击前15 min、100 mg/kg腹腔注射;ELISA法检测血清中SOD、ROS以及MDA含量。结果热打击小鼠血清中SOD浓度在复温后3 h开始降低,至复温后12 h其值达最低,而血清中ROS与MDA浓度均在复温后3 h开始升高,至复温后12 h其值达最高,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05);热打击小鼠血清中SOD浓度与ROS、MDA表达呈显著的负相关;使用异丙酚预处理小鼠,可以明显上调热打击小鼠血清中SOD表达,降低ROS和MDA水平,与热打击组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论异丙酚可以通过上调热打击小鼠血清中SOD表达,降低ROS和MDA水平,从而促进机体内氧化与抗氧化系统的动态平衡恢复发挥抗氧化损伤效应。     

内质网应激和NOD样受体蛋白3在重症中暑小鼠肠黏膜损伤中的作用

目的:研究内质网应激和NOD样受体蛋白3（NOD-like receptor protein 3,NLRP3）在重症中暑肠黏膜损伤中的作用及内质网应激抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid,4-PBA）的保护效应。方法:30只雄性BALB /c小鼠随机（随机数字法）分成对照组（control）、重症中暑组（heat stroke,HS）和4-PBA预处理组（4-PBA+HS,4-PBA 120 mg/kg,腹腔注射）。Control组置于室温,HS组和4-PBA+HS组置于高温气候动物培养箱[温度（35.5±0.5） ℃,湿度（60.0±5.0）%],小鼠直肠温度达到42 ℃为重症中暑造模成功标准。中暑6 h后,采用比色法检测小肠匀浆丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）,ELISA法检测血清白介素-1β（IL-1β）及白介素-18 （IL-18）,HE染色观察肠道组织病理,电镜下观察肠道超微结构,Western blot检测葡萄糖调节蛋白78（glucose regulated protein 78,GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP）、NLRP3和活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（cleaved caspase-1）蛋白表达。计量资料多组间比较如满足方差齐性采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD- t检验;如不满足方差齐性采用Welch分析,组间两两比较采用Dunnett's T3检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与control组相比,HS组小肠匀浆MDA升高（ t=14.243, P<0.01）而SOD下降（ t=7.781, P<0.01）,血清IL-1β和IL-18显著升高（ t=12.664, P<0.01; t=16.240, P<0.01）,小肠绒毛广泛破坏伴有炎症细胞浸润,内质网扩张及线粒体肿胀空泡化,小肠组织GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达增加（ t=14.824, P<0.01; t=12.667, P<0.01; t=9.298, P<0.01, t=6.588, P=0.001）。与HS组相比,4-PBA预处理降低MDA（ t=9.167, P<0.01）并升高SOD（ t=6.077, P<0.01）,降低血清IL-1β和IL-18（ t=4.889, P=0.001; t=5.693, P<0.01）,减轻小肠黏膜的病理改变及超微结构的损伤,降低了GRP78、CHOP、NLRP3和cleaved caspase-1蛋白表达（ t=9.080, P<0.01; t=7.152, P<0.01; t=4.249, P=0.005; t=3.650, P=0.011）。 结论:内质网应激和NLRP3参与重症中暑肠黏膜损伤,4-BPA通过抑制内质网应激及NLRP3炎症小体活化减轻重症中暑肠黏膜损伤。     

炎症因子在小鼠肾缺血再灌注损伤相关的肺损伤中的表达

目的观察炎症因子在肾缺血再灌注损伤小鼠全身和肺组织局部表达的变化,探讨炎症反应在肾缺血再灌注损伤相关的急性肺损伤中的作用。方法选取8～10周龄雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为假手术组（Sham组n=10）、缺血再灌注组（I/R组n=10）和双肾切除组（BNx组n=10）。分别于术后6、24h留取小鼠肾和肺组织及血浆标本,观察肾和肺组织学改变,计算肺组织中中性粒细胞浸润数,称肺湿干重,计算肺湿干重比（W/D）;ELISA法检测小鼠血清和肺冲洗液中的IL-6、IL-1β、TNF-α的浓度,实时定量PCR检测小鼠肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α基因表达,免疫组化检测肺组织IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达。结果 I/R组和BNx组小鼠术后24h时的BUN和Scr均显著高于Sham组（P均〈0.05）,I/R组和BNx组小鼠术后24h出现肺组织炎症细胞浸润、肺泡周围毛细血管出血和肺间质水肿,两组肺组织中性粒细胞计数均高于Sham组（P〈0.05）。术后6h时I/R组和BNx组小鼠血清IL-6、IL-1β和TNF-α浓度与Sham组相比显著升高（分别为606.32±59.07和300.22±169.73vs121.52±9.12pg/ml;443.93±91.98和959.47±184.46vs21.71±2.47pg/ml,119.67±21.66和132.33±62.64vs30.21±2.46pg/ml,P均〈0.05）;I/R组和BNx组小鼠肺组织冲洗液中IL-6、IL-1β和TNF-α的水平与Sham组比较显著升高（109.74±15.91和70.00±2.42vs37.69±7.96pg/mg,117.02±27.46和215.35±18.49vs42.10±5.20pg/mg,512.31±71.95和988.25±133.55vs52.76±12.82pg/mg,P〈0.05）;术后6h肺组织IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达较Sham组显著升高（P均〈0.05）;免疫组化显示了相似的结果。结论肾缺血再灌注损伤可以介导急性肺损伤,全身和肺组织局部的炎症因子表达明显升高可能参与了肾缺血再灌注损伤相关的肺损伤。     

凋亡基因Bcl-2和Bad在急性肺损伤小鼠肺组织中的表达

目的 观察凋亡基因Bcl-2(B-cell leukemia-2,B细胞淋巴瘤/白血病-2)和凋亡基因Bad(bcl-xl/bcl-2-associated death promoter,Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子)在急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中的表达.方法 在苏州大学附属第一医院中心实验室里,24只BALB/C小鼠随机分为正常生理盐水对照组(n=6)和ALI模型组(n=18).从尾静脉注射油酸0.9 mL/kg制备ALI模型,以肺部特征性病理改变作为ALI模型成功的主要指标;ALI模型组又按注射油酸后4 h,6 h,8 h三个时间点分为3组,每组6只,分别观察肺组织病理改变,RT-PCR法定量检测肺组织中Bcl-2和Bad的表达.采用SPSS 13.0统计软件行单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 ALI 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bcl-2相对值分别为(58.00±5.31),(42.00±4.30),(32.51±10.40),较正常对照组(24.30±1.00)升高(P<0.05);Au 4 h,6 h,8 h组肺组织中Bad的相对值分别为(29.32±1.19),(58.64±4.45),(95.12±4.34),较正常对照组(4.01±0.34)升高(P<0.05);Au 4 h,6 h,8 h组的肺损伤评分分别为(1.82±0.14)分,(2.52±0.25)分,(3.45±0.29)分)较正常对照组(0.27±0.03)分升高(F值为260.512,P<0.05);各组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05).结论 油酸致小鼠急性肺损伤的加重与肺组织中凋亡基因Bcl-2的表达下调和凋亡基因Bcl-2的表达上调可能有关.     

TUBA1C促进人肺腺癌细胞系增殖和迁移的机制研究

目的　探究TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征及其对人肺腺癌细胞系增殖、迁移的影响和相关潜在分子机制。方法　通过临床数据库GEPIA 检索TUBA1C 在肺腺癌中的表达特征以及与临床预后相关性;通过30 组临床组织样本探究TUBA1C 在肺腺癌及其临近正常组织中的表达特征;通过siRNA 介导敲低TUBA1C 表达,利用细胞增殖实验、克隆形成实验、划痕迁移实验和细胞周期实验分别检测TUBA1C 对肺腺癌细胞生物学行为的影响;通过分析与TUBA1C 共表达基因参与的信号通路,探索TUBA1C 在肺腺癌发展进程中的潜在分子机制,并进一步通过回补实验进行验证。结果　GEPIA 数据库检索显示肺腺癌中TUBA1C 显著高表达（P<0.05）,且高表达的病人具有不良预后（logrankP=9.3E-5）。30 组肺腺癌临床样本中TUBA1C 表达水平（6.4±1.3）显著高于癌旁正常组织（5.2±0.9）,差异有统计学意义（t=4.157,P ＜ 0.001）,且随着癌症的不断恶化,TUBA1C 表达逐渐升高（P=0.003 49）。转染培养3,4 和5天时siTUBA1CA#1 组和siTUBA1CA#2 组细胞增殖A 值明显低于对照组,差异均有统计学意义（F=7.000~27.780,P＜ 0.05）。siTUBA1CA#1 组（41.2±1.5）和siTUBA1CA#2 组（40.3±1.3）细胞克隆形成率明显低于对照组（72.4±2.2）,差异有统计学意义（F=342.482,P ＜ 0.001）;两实验组细胞迁移率为73.4±3.2 和72.1±2.8,明显低于对照组（98.6±1.7）,差异有统计学意义（F=95.778,P ＜ 0.001）;细胞周期较对照组相比显著阻滞在G1 期。siTUBA1CA#1 组（0.21±0.02,0.33±0.03）和siTUBA1CA#2 组（0.20±0.03,0.36±0.02）细胞中E2F1 和MYC mRNA 表达水平较对照组（1.01±0.03,1.00±0.02）明显降低,差异有统计学意义（F=883.773,758.294,均P ＜ 0.001）。在敲低TUBA1C 表达的细胞中分别回补E2F1,MYC 以及共回补E2F1 和MYC 后,细胞增殖速率、迁移速率及细胞周期较单纯敲低TUBA1C 组相比均逐渐恢复正常（P<0.01）,接近正常水平。结论 　肺腺癌中TUBA1C 高表达,通过激活促癌基因E2F1 和MYC 的表达促进肺腺癌细胞的增殖、克隆形成及迁移,诱导细胞凋亡,参与促进肺腺癌的发展进程。     

三种复温速率对兔肢体爆炸伤合并海水浸泡后肝肾功能的影响

目的 观察三种复温速率对兔肢体爆炸伤合并海水浸泡后肝肾功能的影响.方法 复制肢体爆炸伤合并海水浸泡致低体温[(31±0.5) ℃]模型,成年家兔18只,随即等分为Ⅰ组[快速复温组,复温速率(8.94±0.93)℃/h]、Ⅱ组[缓慢复温1组,复温速率(3.88±0.22)℃/h]、Ⅲ组[缓慢复温2组,复温速率(2.18±0.12)℃/h], 以调节环境温度及加温输液的方法将体温恢复至38±0.5 ℃后维持该体温观察6 h.于致伤前(T0)、浸泡降温后(T1)、复温即刻(T2)、复温后3 h(T3)和复温后6 h(T4)时相点检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN),实验结束后取肝肾组织测定组织匀浆丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 Ⅰ组GPT、GOT、Cr及BUN值在复温后3 h及6 h较Ⅱ、Ⅲ组明显升高(P<0.05,P<0.01),Ⅱ、Ⅲ组比较差异无统计学意义(P>0.05).Ⅰ组肝肾组织匀浆的SOD活性较Ⅱ组、Ⅲ组明显降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量较Ⅱ组、Ⅲ组明显升高(P<0.01);Ⅱ组、Ⅲ组比较差异无统计学意义(P>0.05).Ⅲ组总尿量(130.7±92.2)mL明显高于Ⅰ组(75.5±35.1)mL、Ⅱ组(97.6±85.3)mL(P<0.01).结论 肢体爆炸伤合并海水浸泡致低体温后,采取缓慢复温方式(复温速率为2～4 ℃/h)可以有效抑制机体脂质过氧化作用,提高机体抗氧化能力,对机体肝肾功能有一定的保护效应.     

癫痫大鼠海马硫氧还蛋白还原酶活性及cleaved caspase-3表达检测

目的研究海人酸诱导癫痫大鼠海马组织硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性及cleaved caspase-3表达变化。方法 Sprague-Dawley大鼠随机分为癫痫对照组(NS组)和癫痫组(KA组)。采用脑室注射海人酸制作大鼠癫痫模型。海人酸注射6h取海马组织匀浆,应用5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)还原法对海马TrxR活性进行测定,采用western blotting法检测cleaved caspase-3表达。结果 NS组、KA组TrxR活性分别为:(71±19)、(116±40)U/mg;KA组cleaved caspase-3的表达较NS组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫大鼠海马组织TrxR活性明显增加,引起caspase-3裂解,导致神经元凋亡。     

GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响及作用机制探讨

目的　通过检测G蛋白偶联受体家族C群5成员A（G protein coupled receptor C type group 5 member A, GPRC5A）在肝癌组织及细胞中的表达,探讨GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其相关作用机制。方法　收集2018年12月～2019年11月在解放军联勤保障部队第九六九医院行手术治疗的38例肝癌患者癌组织及配对癌旁正常组织样本;另选取人正常肝上皮细胞株HL-7702和人肝癌细胞株（HepG2,HCCLM3,HuH-7和MHCC-97H）进行研究。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝癌组织、癌旁正常组织及肝癌细胞、正常肝上皮细胞中GPRC5A表达量。通过转染pcDNA3.1-GPRC5A质粒构建过表达GPRC5A肝癌细胞株,采用MTT实验和V-FITC/PI凋亡试剂盒分别检测过表达GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。采用活性氧指示剂DCFH-DA检测细胞中氧化应激相关因子活性氧（ROS）,NAD+/NADH和三磷酸腺苷（ATP）水平。采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3及上皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平。结果　肝癌组织中GPRC5A表达较癌旁正常组织显著降低（0.34±0.09 vs 0.73±0.10）,差异有统计学意义（t=17.869,P<0.01）。肝癌细胞HepG2（0.35±0.06）,HCCLM3（0.38±0.10）,HuH-7（0.53±0.07）,MHCC-97H（0.67±0.06）中GPRC5A表达量显著低于人正常肝上皮细胞HL-7702中的GPRC5A表达量（1.00±0.08）,差异有统计学意义（t=5.716~11.258, 均P<0.05）。pcDNA3.1-GPRC5A组转染36 h细胞增殖吸光度（A）值（0.94±0.16）显著低于对照组（1.49±0.05）和pcDNA3.1组（1.45±0.07）（F=25.640,P<0.01）。GPRC5A过表达组VEGF（0.98±0.04）表达量较对照组（2.94±0.15）和pcDNA3.1组（2.89±0.11）显著降低（F=310.450,P<0.001）。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中ROS（182.12±13.42）水平显著高于对照组（101.23±11.20）和pcDNA3.1组（98.30±10.26）（F=49.577,P<0.001）;NAD+/NADH（35.24±6.43）及ATP（55.34±6.51）水平显著低于对照组（100.25±12.41,100.17±14.36）和pcDNA3.1组（97.86±9.67,102.23±11.02）（F=42.338,17.077,P<0.05）。GPRC5A过表达组细胞凋亡率高于对照组和pcDNA3.1组;细胞凋亡蛋白caspase-3（2.61±0.16）表达量也高于对照组（1.00±0.11）和pcDNA3.1组（1.01±0.02）（F=202.843,P<0.001）。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中p-STAT3表达量（0.43±0.06）显著低于对照组（1.00±0.13）和pcDNA3.1组（1.03±0.12）（F=29.476,P<0.001）;pcDNA3.1-GPRC5A组下游基因Socs3（0.47±0.05）,c-MYC（0.54±0.06）表达量也显著低于对照组（1.01±0.05,1.00±0.04）和pcDNA3.1组（0.98±0.09,1.02±0.06）（F=63.275,75.409,P<0.001）。肝癌组织中STAT3与GPRC5A表达量呈显著负相关（r=-0.746,P<0.01）。过转染pcDNA3.1-STAT3或pcDNA3.1-NLRP3后显著逆转了pcDNA3.1-GPRC5A对肝癌细胞的抑制作用（P<0.05）。结论　GPRC5A低表达可能通过调节STAT3/Socs3/c-MYC信号和炎症反应抑制了肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞的氧化应激和凋亡。     

富含脂质肠内营养支持对脓毒症小鼠全身炎症反应的影响

目的:研究富含脂质肠内营养支持对脓毒症小鼠全身炎症反应影响。方法:采用盲肠结扎和穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）构建脓毒症模型。雄性BALB/c小鼠80只,随机（随机数字法）分为假手术组（Sham）,脓毒症组（CLP）,低脂肠内营养组（lipid low,LL）和高脂肠内营养组（lipid rich,LR）,每组20只。在构建脓毒症模型前后,实验组分别给予小鼠肠内喂养富含脂质或低脂质的营养液,观察各组小鼠生存情况,ELISA检测小鼠血浆、肺、肾和肝组织TNF-α、IL-1β和IL-6以及血浆IL-10水平,苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠肺、肾和肝组织病理学改变。采用SPSS 16.0软件进行统计学分析,并使用Kaplan-Meier和对数秩检验评估组之间的生存分析,多组间的差异通过单因素方差分析,两组间比较使用LSD- t检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CLP组相比,LR组小鼠生存数量显著升高（ P=0.005）,肺、肾和肝组织病理损伤均有所减轻,LL组和LR组小鼠血浆、肺、肾和肝组织内TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平均显著降低（ P<0.01）,而血浆IL-10水平明显升高（ P<0.01）。与LL组相比,LR组小鼠血浆TNF-α（pg/mL）[（23.19±3.49） vs（33.38±2.07）, P<0.01]、IL-1β（pg/mL）[（26.42±2.63） vs（35.14±2.43）, P<0.01]、IL-6（pg/mL）[（35.76±2.83） vs（50.75±4.03）, P<0.01];肺组织中TNF-α（pg/mL）[（17.99±4.29） vs（23.38±2.07）, P<0.01]、IL-1β（pg/mL）[（23.92±2.41） vs（32.97±2.63）, P<0.01]、IL-6（pg/mL）[（21.76±4.77） vs（35.35±2.71）, P<0.01];肾组织中TNF-α（pg/mL）[（17.98±4.91） vs（23.08±1.67）, P<0.01]、IL-1β（pg/mL）[（23.12±2.26） vs（31.57±1.74）, P<0.01]、IL-6（pg/mL）[（21.46±3.06） vs（33.55±1.91）, P<0.01];肝组织中TNF-α（pg/mL）[（15.05±2.91） vs（22.38±1.19）, P<0.01]、IL-1β（pg/mL）[（14.62±2.41） vs（22.97±2.63）, P<0.01]、IL-6（pg/mL）[（23.06±4.56） vs（34.05±2.34）, P<0.01]水平降低均更加显著。 结论:短期富含脂质的肠内营养治疗可改善脓毒症小鼠全身性和器官特异性炎症,有望成为调节炎症反应干预措施。     

低温对失血性休克炎症小体活化的影响研究

目的 探索治疗性低温对失血性休克(hemorrhagic shock,HS)大鼠肺组织炎症小体活化的影响.方法 本研究将24只SD大鼠随机(随机数字法)分成3组:假手术组,常温液体复苏(normothermia resuscitation,NR)组,低温液体复苏(hypothermia resuscitation,HR)组.各组通过股动脉放血到平均动脉压达40 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)保持1h建立HS模型,随后NR组和HR组通过液体复苏使平均动脉压达90 mmHg,维持1h,4h后通过放血处死各组大鼠,留取大鼠肺组织.经苏木精-伊红(HE)染色于光镜下观察肺组织的损伤程度,使用于湿比重法检测肺组织水肿情况,采用RT-PCR和Western blotting检测肺组织炎症小体NLRP-3、Caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达水平.多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 (1) HE染色结果示,与NR组相比,HR组急性肺损伤程度明显较低.(2)肺组织湿/干比重与HR组相比NR组肺水肿显著降低,HR组(5.85 ±0.10);NR组(6.47±0.17),t=3.14,P＜0.05;(3)与NR组相比,HR组的NLRP-3和Caspase-1的蛋白表达均显著减少;(4)与NR组相比,HR组的NLRP-3 mRNA表达水平显著降低,HR组(1.027±0.143),NR组(1.349 ±0.163),t=4.36,P＜0.05;HR组的IL-1β mRNA表达水平显著降低,HR组(1.623±0.125),NR组(2.388±0.229),t=7.72,P＜0.05.结论 治疗性低温能够降低炎症小体信号通路的活化,从而减弱HS诱导的肺组织损伤.     

针刺预处理脑组织提取液对小鼠缺氧存活时间的影响

目的探讨针刺预处理脑组织提取液的抗缺氧损伤作用,为针刺效应物质的探讨提供初步的实验依据. 方法大鼠肾俞、百会穴针刺后不同时间段断脑提取脑组织液,行小鼠腹腔注射,广口瓶密闭缺氧,记录小鼠缺氧存活时间. 结果生理盐水腹腔注射对小鼠标准缺氧存活时间没有影响( F=1.93,P >0.05);大鼠正常脑组织提取液使小鼠标准缺氧存活时间 [(12.0633± 2.6964) min]缩短( F=143.25,P< 0.05);针刺预处理后不同时间段 [预处理即时(38.269 7± 3.004 3) min, 针刺预处理后 0.5 h(49.296 1± 4.974 0) min, 针刺预处理后 1 h (31.087 0± 3.773 0) min; 针刺预处理后 2 h(26.446 5± 3.497 2) min]脑组织提取液均可使小鼠标准缺氧存活时间明显延长( F=143.25,P< 0.05),且呈现明显的时间变化规律,针刺预处理后 0.5 h脑组织提取液效果最好,使小鼠标准缺氧存活时间延长至 (49.296 1± 4.974 0) min(是空白组的 2.3倍 ). 结论针刺预处理脑组织提取液可提高机体的缺氧耐受能力,具有抗缺氧损伤作用.     

黄芪甲苷对缺血性卒中小鼠神经功能保护作用及机制研究

目的 探讨黄芪甲苷（astragaloside-IV, AST-IV）对缺血性卒中（ischemic stroke）模型鼠神经功能保护作用及机制研究。方法 选取改良线栓法制备大脑中动脉梗死（middle cerebral artery occlusion,MCAO）小鼠模型,小鼠分成四组,每组8 只,分别为假手术组（Sham）、药物对照组（AST-IV）、MCAO 组和治疗组（AST-IV+MCAO）;采用改良神经功能损伤评分（modified neurological severity score,mNSS）实验和转棒（Rotarod）实验综合评价ASTIV的神经保护功能;采用ELISA 法检测AST-IV 对MCAO 脑组织核转录因子(NF-KB)、Toll 样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein ,GFAP)、血红素氧合酶-1(HO-1) 以及半胱天冬酶-1(caspase-1) 表达水平的影响;采用比色法检测AST-IV 对MCAO 脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH) 和活性氧（ROS）表达水平的影响。结果 MCAO组的mNSS评分（54.06±8.52）、脑组织ROS（54.06±8.52AFU）、MDA（2.40±0.33 nmol/mg）,NF-κB（304.94±39.93pg/mg）,TLR4（225.60±37.51pg/mg）,TNF-α（80.14±11.06pg/mg）,GFAP（181.24±19.88pg/mg）和caspase-1（1.76±0.20）表达均显著高于Sham 组（0.75±0.89,19.85±2.45AFU,1.43±0.29 nmol/mg,131.03±29.45 pg/mg,102.74±19.18 pg/mg,32.04±10.30 pg/mg,63.14±14.48pg/mg,1.00±0.09),差异具有统计学意义（F=38.572 ～ 184.478,均P<0.001）;MCAO 组在Rotarod 上的停留时间（74.63±18.73s）,脑组织SOD（2.88±0.49unin/mg）,GSH（3.49±0.64nmol/mg）和HO-1（105.93±24.45pg/ml）表达均显著低于Sham 组（186.50±48.10s,5.58±0.71unit/mg,6.32±0.82 pg/ml,203.11±28.65pg/ml）,差异具有统计学意义（F=37.586 ～ 78.889,均P<0.001）;AST-IV+MCAO组的mNSS评分（3.88±1.36）、脑组织ROS（24.64±14.26AFU）,MDA（2.00±0.21nmol/mg）,NF-κB（212.03±38.63 pg/mg）,TLR-4（134.81±25.60 pg/mg）,TNF-α（53.61±12.49pg/mg）,GFAP（101.00±15.04 pg/mg）和caspase-1（1.46±0.15）表达均显著低于MCAO 组,差异具有统计学意义（F=4.639 ～ 82.890, 均P<0.05）;AST-IV+MCAO 组在Rotarod 上的停留时间（160.75±33.33s）, 脑组织SOD（4.51±0.51unit/mg）,GSH（5.30±0.73nmol/mg）和HO-1（179.96±20.97pg/ml）均显著高于MCAO 组,差异具有统计学意义（F=27.681 ～ 42.364,均P<0.001）。结论 AST-IV 的脑保护作用可能与其抗炎、抗氧化应激、抑制焦亡进程有关。     

体外膈肌起搏对机械通气兔膈肌功能障碍的保护作用及机制研究

目的:探讨体外膈肌起搏对机械通气兔膈肌功能障碍的保护作用及其机制。方法:85只成年新西兰兔按随机数字表法分为空白对照组（blank control group,BC）、自主呼吸组（spontaneous breathing group,SB）、容量控制通气组（volume control ventilation group,VC）、体外膈肌起搏组（external diaphragm pacing group,EDP）、体外膈肌起搏+容量控制通气组（EDP+VC）,BC组5只,其余各组20只。气管切开后给予容量控制性机械通气建立动物模型。BC组麻醉后立即取膈肌标本,其余各组分别于相应的处理后6 h及l、3、7 d取标本,检测膈肌重量（DW）、膈肌重量/体质量比（DW/BW）及离体膈肌收缩力;HE染色观察膈肌病理改变;Western blot检测膈肌Cyt c、RyR1、caspase-3、p-mTORC1蛋白表达。多组变量间不同时间点比较采用重复测量的方差分析,同一时间点进一步两两分组间比较采用LSD- t检验,以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与BC组比较,VC组DW、DW/BW下降,膈肌损伤明显,收缩力显著下降,Cyt c、caspase-3蛋白表达上调,RyR1、p-mTORC1表达水平下降,且具有时间依赖性,随时间延长进行性加重（ P<0.05）。与VC组比较,随治疗时间的延长,EDP+VC组DW、DW/BW增高[治疗1 d组：（0.80±0.05）kg vs （0.56±0.04）kg,治疗3 d组：（1.06±0.05）kg vs （0.47±0.03）kg,治疗7 d组：（1.24±0.10）kg vs （0.39±0.07）kg,均 P<0.05;治疗1 d组：（2.05±0.54） vs （1.86±0.72）,治疗3 d组：（2.19±0.61） vs （1.74±0.40）,治疗7 d组：（2.46±0.62） vs （1.53±0.85）,均 P<0.05],膈肌损伤明显改善,收缩力显著增强[治疗1 d组：（2.39±0.42）N/cm 2vs （1.91±0.25）N/cm 2,治疗3 d组：（2.57±0.62）N/cm 2vs （1.72±0.50）N/cm 2,治疗7 d组：（2.77±0.55）N/cm 2vs （1.54±0.33）N/cm 2,均 P<0.05],Cyt c、caspase-3蛋白表达逐渐下降,RyR1、p-mTORC1蛋白表达明显升高,差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:体外膈肌起搏对呼吸机相关膈肌功能障碍具有保护性作用,其机制可能是抑制膈肌线粒体损伤,减轻氧化应激反应,减轻机械通气诱导的膈肌萎缩和结构改变,进而改善呼吸机相关膈肌功能障碍。     

维奈克拉增强MDS 细胞系对地西他滨化疗敏感性机制的实验研究

目的 研究维奈克拉（venetoclax,VCX）对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS) 细胞系地西他滨（decitabine,DAC）化疗敏感性的可能作用机制。方法 CCK-8 法检测不同浓度VCX 对MDS 细胞（SKM-1 和MUTZ-1 细胞系）增殖活力的影响;将MUTZ-1 细胞根据不同处理分为4 组:对照组、VCX 组、DAC 组和VCX+DAC组;Annexin V-FITC/PI 法检测各组细胞凋亡率;Western blotting 检测细胞中凋亡相关蛋白[ 细胞色素C（cytochromeC）,裂解型半胱天冬酶3（cleaved Caspase-3）表达水平],B 细胞白血病/ 淋巴瘤2(B cell leukemia/lymphoma-2,Bcl-2) 与Bcl-2 相关蛋白X（Bax）比值;JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒检测各组SKM-1 和MUTZ-1 细胞的线粒体膜电位;H2DCF-DA 荧光探针法检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量;Western blotting 检测细胞中自噬相关蛋白Beclin1,P62 和LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值。结果 随VCX 浓度升高,MUTZ-1 细胞增殖活性明显降低,且呈浓度依赖性（F=0.003,P=0.001）。与对照组（4.28%±1.66%）相比,VCX 组（13.75%±3.02%）,DAC 组（12.39%±4.16%）和VCX+DAC组（18.10%±3.50%）细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义（F=45.782,P<0.05）。与对照组（1.01±0.02,1.04±0.02,1.01±0.04） 相比,VCX 组（1.67±0.05,2.23±0.10,0.43±0.05）,DAC 组（1.62±0.08,1.85±0.06,0.49±0.07） 和VCX+DAC 组（3.24±0.10,3.81±0.19,0.13±0.01） 细胞中凋亡相关蛋白cytochrome C,cleavedCaspase-3 蛋白表达及Bcl-2/Bax 比值明显升高,差异均有统计学意义（F=116.384,282.069,248.035,均P<0.05）。与对照组（2.05±0.34,8.78±1.37）相比,VCX 组（8.72±1.26,14.02±1.45）,DAC 组（8.44±2.13,13.20±2.41）和VCX+DAC 组（15.66±2.90,26.45±1.53）细胞线粒体膜电位及ROS 含量明显升高,差异具有统计学意义（F=66.782,69.071,均P<0.05）。与对照组（1.05±0.04,1.02±0.08,1.01±0.07）相比,VCX组（1.62±0.15,2.60±0.19,0.56±0.15）,DAC 组（1.67±0.17,2.45±0.20,0.54±0.14）和VCX+DAC 组（3.72±0.21,3.58±0.27,0.13±0.09）自噬相关蛋白Beclin1,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ表达明显升高,而P62 蛋白表达则明显降低,差异均有统计学意义（F=118.257,209.422,236.92,均P<0.05）。与DAC 组比较,VCX+DAC 组细胞凋亡率、cytochrome C,cleaved Caspase-3,Beclin1 蛋白表达水平,LC3- Ⅱ /LC3- Ⅰ比值和ROS 含量均明显降低（t=2.473,28.564,17.291,16.115,7.021,9.319）;线粒体膜电位、Bcl-2/Bax 比值和P62 蛋白表达均明显升高（t=4.621,9.244,4.278）,差异具有统计学意义（均P ＜ 0.05）。DAC 组和VCX 组细胞中上述检测指标差异均无统计学意义（均P ＞ 0.05）。结论 VCX 可能通过调节细胞凋亡、自噬和氧化应激来促进MDS 细胞对DAC 的化疗敏感性。     

细胞周期蛋白Ⅰ基因在骨髓间质干细胞诱导致瘤过程中的表达

目的 研究人骨髓间质干细胞(MSCs)诱导肿瘤的机制.方法 取18只SCID裸鼠随机分为对照组和实验组,对照组注射MSCs,实验组注射F6细胞,于第4(F6-4)、6(F6-6)、7(F6-7)周取肿瘤组织(每组3只).4例肺癌患者的肺癌标本(Lc)和癌旁标本为分别取自不同部位的手术病理标本.并用荧光差异显示技术(FDD)寻找差异基因;用PCR扩增、蛋白质印迹(WB)加以验证;实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR技术检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织基因表达水平.用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)诱导MSCs致肿瘤细胞(F6细胞).结果 FDD结果显示,细胞周期蛋白(cyclin)Ⅰ基因高表达,与PCR、WB结果一致.FQ-RT-PCR表明,cyclin Ⅰ基因在MSCs、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义(F=12.29,P<0.01),F6组cyclin Ⅰ基因表达水平为4.49±0.40,MSCs基因表达水平为0.04±0.02,增高112倍(P<0.01).裸鼠皮下注射致瘤细胞后,第4,6,7周分离肿瘤组织内cyclin Ⅰ基因表达分别为1.82±0.80、3.30±0.43和3.68±1.67,且呈上升趋势(与MSCs对比,P分别为<0.05或<0.01).4例肺癌患者肺癌组织基因表达分别为0.15±0.02、0.58±0.23、4.82±1.12、1.21±0.60,癌旁组织基因表达分别为0.04±0.02、0.09±0.04、0.94±0.74、0.15±0.08,肺癌组织内cyclin Ⅰ基因表达明显高于癌旁组织(F=12.39,P<0.01).WB证明F6细胞cyclin Ⅰ蛋白表达为0.32±0.08,MSCs蛋白表达为0.09±0.06,增高3.6倍(t=3.86,P<0.05).结论 cyclin Ⅰ基因在MSCs诱导突变到肿瘤细胞形成过程中高表达,且在MSCs诱导肿瘤发生过程中可能发挥重要作用.     

中枢拮抗高迁移率族蛋白 B1对脓毒症脑损伤的影响

目的：探讨脓毒症时脑组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达规律及其与脑损伤的关系。方法40只C57BL／6小鼠随机（随机数字法）分为4组：假伤组、脓毒症组、侧脑室注射假伤组以及脓毒症动物侧脑室注射HMGB1抑制剂（ BoxA）组。采用盲肠结扎穿孔复制脓毒症模型及全自动小鼠脑立体定位仪构建侧脑室置管模型,脓毒症后立即经侧脑室导管向侧脑室注射1μg BoxA,于24 h取出脑组织并分离出海马结构,采用组织免疫荧光、蛋白印迹分析、组织TUNEL染色及HE染色方法分别检测脑组织HMGB1、胱天蛋白酶（ caspase）-3表达及组织凋亡、损伤等改变,组间差异采用单因素方差分析,两组之间采用t检验。结果（1）脓毒症组较假伤组海马组织HMGB1表达明显增加（22.74±9.29 vs.4.57±2.18, P＜0.01）;（2）脓毒症组与假伤组比较,海马组织细胞凋亡明显增加[（35±9.17） vs.（1.67±1.53）, P＜0.01]及caspase-3表达显著上调[（16.79±8.17） vs.（3.39±2.09）, P＜0.05],组织损伤明显加重;（3）侧脑室注射BoxA能有效地抑制海马组织HMGB1表达[（2.66±2.06） vs.（22.74±9.29）, P＜0.01];（4）侧脑室注射BoxA能减轻脑组织损伤,并减少组织细胞凋亡[（12±4.36） vs.（35±9.17）, P ＜0.01]及 caspase-3表达[（4.10±2.11） vs.（16.80±8.17）, P＜0.05]。结论脓毒症状态下HMGB1表达增加与脓毒症脑组织损伤的发生、发展密切相关,中枢抑制HMGB1能明显减轻脓毒症脑损伤。     

高迁移率族蛋白B1在失血性休克致急性肺损伤中的作用

目的 探讨高迁移率族蛋白 B1(high mobility group box1,HNGB1)在失血性休克(hemarrhag-ic shock,HS)所致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠体内的变化和意义.方法健康雄性BALB/c小鼠42只,随机分为对照组、HS致ALI组和抗HMGB1抗体干预组.心脏穿刺抽血复制小鼠HS致ALI模型,酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织IL-1β,TNF-α,Westemblot检测肺组织HMGB1,比色法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、伊文蓝(EBD),观察肺脏病理变化.统计学采用方差分析及LSD-t检验.结果 HS后2 h即可见肺血管通透性增高,肺脏出现弥漫件炎细胞侵润.肺绀织IL-1β和TNF-α在HS诱导的ALI早期(4 h)升高[IL-1β(333.83±31.18)vs.(284.83±30.49),P=0.014;TNF-α(805.00±114.67)vs.(584.17±181.17),P=0.023];肺组织HMCB1在ALI 16～48 h显著升高[HMGB1/β-actin(0.99±0.16)vs.(0.50±0.18),P=0.003].ALI组小鼠肺MPO及EBD水平显著增高,分别于ALI 4 h和24 h达峰值[MPO(38.33±3.88)vs.(8.00±0.89),P<0.01;EBD(20.05±2.79)vs.(4.63±0.43),P<0.01];抗HMGB1抗体干预组肺组织MPO及EBD峰值显著下降[MPO(25.67±1.63)vs.(38.33±3.88),P<0.01;EBD(5.68±0.53)vs.(20.05±2.79),P<0.01],抗体干预组小鼠肺组织病理切片见肺部弥漫性炎细胞浸润减轻,抗体干预24 h组尤为明显.结论 HNGB1是HS所致ALI的晚期炎症介质,HNGBl拮抗治疗能减轻小鼠HS所致ALI病理牛理改变.