RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌血管生成拟态的影响

背景:研究表明大量高度恶性肿瘤组织中存在血管生成拟态(VM),其分子机制已形成相关假说,但确切机制和关键信号通路尚未明确。目的:探讨缺氧诱导因子(HIF)-1α在食管鳞癌VM形成中的作用。方法:设计合成3种HIF-1α-siRNA质粒,测序后瞬时转染293T细胞,蛋白质印迹法鉴定质粒的干扰效果。将筛选出的pGCsi-HIF3质粒稳定转染食管鳞癌细胞株Eca109和TE13,以蛋白质印迹法检测干扰效果,三维培养法观察VM形成情况,蛋白质印迹法检测VE-cadherin、EphA2、LN5γ2和MMP2蛋白表达。结果:成功构建了3个靶位的质粒,其中pGCsiHIF3的干扰效果最好。pGCsi-HIF3稳定转染食管鳞癌细胞株Eca109和TE13后,与对照组相比,HIF-1α表达明显降低,细胞体外管道形成能力被明显抑制(P0.05)。常氧下转染组细胞中VE-cadherin、EphA2、LN5γ2均显著下调(P0.05),MMP2表达无明显差异,且缺氧条件下上述指标蛋白表达无明显增加。结论:Eca109和TE13细胞能形成管状结构,HIF-1α可能通过调节VE-cadherin、EphA2、LN5γ2等的表达而调节食管鳞癌VM的形成。     

缺氧诱导因子-1α和己糖激酶-Ⅱ在食管鳞状细胞癌中的表达及对糖酵解的影响

目的 探讨人食管鳞状细胞癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)的表达变化及对糖酵解的影响.方法 缺氧条件(1％氧浓度)下培养TE13及Eca109细胞,设置不同缺氧时间(分别为6、12、24、48 h),并以常氧培养(20％氧浓度)为对照.Western印迹检测HIF-1α及HK-Ⅱ的蛋白表达变化;经RNA干扰技术特异性静默HIF-1α,利用实时定量PCR及Western印迹检测HIF-1α和HK-Ⅱ的表达变化;分光光度法检测常氧和缺氧条件下细胞培养液中细胞的乳酸浓度变化.结果 ①缺氧条件下,TE13及Eca109细胞中HIF-1α表达均随缺氧时间延长而逐渐升高(P＜0.05),在缺氧12 h表达达到高峰,后表达又随时间延长而下降.TE13及Eca109细胞缺氧12 h后HK-Ⅱ表达均较常氧培养明显增强(P＜0.05).②实时定量PCR法检测显示,常氧条件下被干扰的TE13/shRNA和Eca109/shRNA细胞中HIF-1α RNA表达量较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱(P＜0.05).HK-ⅡRNA表达结果与HIF-1 RNA一致.③常氧及缺氧培养时,HK-Ⅱ蛋白在TE13/shRNA和Eca109/shRNA细胞的表达均较未干扰的TE13、Eca109细胞明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).④缺氧时TE13和Eca109细胞乳酸分泌量为14.707±3.594和15.062±3.901,较常氧时增多(6.070±1.839和6.891±1.592,P＜0.05).TE13/shRNA、Eca109/shRNA乳酸分泌量较未静默TE13、Eca109细胞显著减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 食管鳞癌中HIF-1α及HK-Ⅱ在缺氧条件下表达明显增强,HK-Ⅱ表达及乳酸浓度与HIF-1α表达密切相关,HIF-1α可能通过HK-Ⅱ影响细胞的糖酵解水平.     

siRNA干扰PDCD4表达对人食管鳞状细胞癌细胞株Eca109的影响

背景:研究发现PDCD4是一种新的肿瘤抑制基因,其表达与多种肿瘤的恶性转化相关。然而,PDCD4在食管鳞状细胞癌中的作用尚未完全明确。目的:探讨沉默PDCD4表达对食管鳞状细胞癌细胞株Eca109体外增殖、迁移、凋亡能力的影响。方法:选择未转染的Eca109细胞(空白对照组)、转染无义序列的Eca109细胞(阴性对照组)和转染PDCD4 siRNA的Eca109细胞(si-PDCD4组),采用蛋白质印迹法检测PDCD4蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,平板单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力。结果:与空白对照组、阴性对照组相比,si-PDCD4组细胞中PDCD4蛋白表达降低(P0.05),细胞增殖能力增强(P0.05),细胞克隆形成数目增多(P0.05),细胞凋亡率降低(P0.05),细胞迁移能力增强(P0.05)。结论:PDCD4 siRNA可在体外促进食管鳞状细胞癌Eca109细胞的增殖、迁移,并抑制细胞凋亡,为食管鳞状细胞癌的诊治提供了新的实验依据。     

RNA干扰HIF-1α对血管生成拟态相关基因表达的影响

目的: 探讨常氧及缺氧培养条件下RNA干扰沉默人食管鳞癌细胞Ec a-109缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管生成拟态相关基因表达的影响.方法: 选择未转染处理的食管鳞癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1α SiRNA的Eca-109细胞, 分别予以常氧和缺氧培养, 缺氧培养12、24、36、48、60、72、96 h, 采用Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α蛋白及mRNA表达, 同时Western blot法检测上皮细胞激酶(EphA2)、血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、层粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)等血管生成拟态相关基因的表达.结果: 缺氧条件下培养Eca-109细胞HIF-1α蛋白表达较常氧时增高, 以24-48 h为明显, 72-96h开始减弱, 而HIF-1α mRNA检测差异无统计学意义( F = 0.70, P = 0.67);RNA干扰后细胞在常氧下HIF-1α、EphA2、LN-5γ2蛋白几乎无表达, 缺氧后亦无增强现象, VE-cadherin、MMP-2蛋白表达较未干扰细胞稍有减弱, 缺氧后表达稍增强, 但差异无显著性(均P>0.05).结论: RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达, HIF-1α基因沉默后可以不同程度减少EphA2、LN-5γ2等血管生成拟态相关基因的表达.     

RNA干扰HIF-1α对食管癌细胞株TE13的生物学特性的影响

目的:探讨HIF-1α仅沉默后对食管癌细胞株TE13的生物学行为的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察HIF-1α的干扰质粒转染食管癌细胞TE13后绿色荧光蛋白的表达:采用、Western blot方法检测HIF-1α蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化:Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化;流式细胞术检测干扰前后细胞周期的变化.结果:TE13/12单克隆干扰效果好,Westernblot结果显示无HIF-1α表达.HIF-1α被干扰后,细胞增殖能力明显减弱(p<0.05),运动迁移能力显著下降,与未转染的细胞相比穿过人工基底膜的细胞数明显减少(18.2±3.7 VS 103.8±8.5,P<0.05).与未转染组相比,TE13/12的细胞周期发生变化,G2/M期细胞明显减少(5.99%±1.19% vs 20.47%±4.30%,P<0.05),S期增加(64.67%±1.98%VS 48.53%±3.89%,P<0.05).结论:RNA干扰可引起TE13中HIF-1α的沉默,而HIF-1α表达下调后食管癌细胞株TE13的增殖与迁移能力均减弱.推测阻断HIF-1α通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点.     

HIF-1α基因沉默对食管鳞癌细胞功能性基因的影响

目的观察食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因与血管内皮生长因子（VEGF）、血红素加氧酶（HO-1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因之间的关系及其对细胞周期的影响。方法以HIF-1α基因沉默的Eca-109细胞、化学模拟缺氧细胞及未干预细胞为研究对象，通过Western blot检测VEGF、HO-1、MMP-2基因在三种细胞中的表达差异以了解其与HIF-1α基因的关系，并通过流式细胞术分析了解HIF-1α基因沉默后细胞周期的变化。结果Western blot检测发现，同空白及模拟缺氧组比较，HIF-1α基因沉默后HIF-1α蛋白表达明显下调，同时VEGF、HO-1、MMP-2的蛋白表达均出现了明显下降。流式细胞分析表明，HIF-1α基因沉默后的Eca-109细胞组同对照组相比G1、G0期细胞明显增加，G2、M期细胞变化不大，S期细胞比例明显减少。结论HIF-1α与上述三种基因存在明显相关性，进而可能影响着食管鳞癌的血管生成、侵袭、应激保护等生物学行为，HIF-1α沉默可将食管鳞癌细胞阻滞于G1、G0期。     

食管鳞癌细胞系EC-109中缺氧诱导因子-1α的表达意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌细胞系EC-109中的表达及其意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测HIF-1αmRNA和蛋白在常氧及缺氧状态下在食管鳞癌EC-109细胞中的表达.结果:HIF-1αmRNA在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中过表达(P<0.05),在缺氧24h时HIF-1αmRNA表达最高,其后随时间延长表达下降;HIF-1α蛋白水平在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中无明显上调(P>0.05).结论:低氧可诱导食管鳞癌EC-109细胞中HIF-1αmRNA的过度表达,缺氧状态下HIF-1α蛋白水平较常氧时无明显增加.     

SIRT3在食管鳞癌中的表达及作用机制

目的探讨SIRT3在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其相关作用机制,为ESCC的早期诊断提供依据。方法收集ESCC患者癌组织、正常食管组织标本各20例,免疫组化(IHC)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测各组标本中SIRT3的表达;Western blotting检测ESCC细胞株Eca109在常氧、缺氧(6 h、12 h、24 h)状态下SIRT3、HIF-1α蛋白的表达。结果 SIRT3蛋白在ESCC组织中的表达水平高于正常食管组织,差异有统计学意义(0.51±0.06 vs 0.26±0.04,P0.05);缺氧状态下Eca109细胞中SIRT3表达水平降低,HIF-1α表达水平升高。结论 SIRT3的高表达可能与ESCC的发生、发展有关;HIF-1α对ESCC的发生、发展有促进作用,对其表达的检测可能会成为ESCC的早期诊断手段之一。     

食管鳞癌中MDR1基因的表达与多药耐药的关系

目的探讨MDR1基因与食管鳞癌多药耐药的关系。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测80例食管鳞癌、不典型增生及正常食管组织中MDR1基因的表达水平,并比较食管鳞癌组织中MDR1基因表达与不同临床参数之间的关系。利用阿霉素(ADM)药物浓度递增细胞培养方法建立食管癌多药耐药细胞Eca109/ADM,利用RT-PCR、流式细胞术及激光共聚焦显微镜检测Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平。结果 MDR1基因在食管鳞癌中的表达水平显著高于不典型增生及正常食管组织(P<0.05)。食管鳞癌中MDR1基因表达与食管癌细胞分化程度、有无淋巴结转移及浸润深度密切相关(P<0.05)。Eca109/ADM细胞中MDR1基因及蛋白表达水平显著高于其亲代细胞Eca109中的表达水平(P<0.05)。结论 MDR1基因在食管鳞癌中的异常高表达可能参与了多药耐药的形成。     

新疆哈萨克族食管鳞癌中微小RNA let-7的表达及病理生物学意义

目的探讨微小RNA（miRNA）let-7在食管鳞癌细胞及组织中的表达,及let-7与食管鳞癌临床病理的关系。方法在细胞水平,运用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测let-7在正常食管鳞状上皮细胞Heepic及食管鳞癌细胞CaES-17、Eca109和KYSE-150中的表达差异;在组织水平,采用qRT-PCR技术检测let-7在15对哈萨克族食管鳞癌组织和癌旁正常组织中的表达,并分析其与食管鳞癌浸润、转移等临床病理的关系。结果 qRT-PCR结果显示,let-7在3个食管鳞癌细胞系中的表达明显低于在正常食管鳞状上皮细胞Heepic中的表达,let-7在食管鳞癌组织中的表达明显低于其在癌旁正常组织中的表达,其相对表达量比值为0.79±0.56,差异有统计学意义（P〈0.05）;let-7在不同性别、分化程度、大体分型、浸润深度及淋巴结转移之间的相对表达量比值均无统计学差异（P〉0.05）。结论 Let-7在正常食管鳞状上皮细胞和食管鳞癌细胞中均有表达,但在食管鳞癌细胞中呈低表达;let-7在食管鳞癌组织和正常食管鳞状上皮组织中均有表达,但在癌组织中呈显著低表达;哈萨克族食管鳞癌患者let-7低表达与其临床病理参数之间无显著相关性;let-7对哈萨克族食管鳞癌的发生起抑制作用,是食管鳞癌的潜在分子标记物。     

EphA2在缺氧条件下的表达及其对食管癌细胞体外三维培养的影响

目的:探讨在正常氧分压和缺氧条件下,食管癌细胞中上皮细胞激酶A2(EphA2)表达变化及其对体外三维培养的影响.方法:正常氧分压及缺氧条件下培养食管癌Ecal09及TE13细胞,RT-PCR及Western blot 分别监测细胞中EphA2表达的变化:EphA2 miRNA干扰质粒转染Ecal09和TE13细胞后,采...     

HIF-1α induces VE-cadherin expression and modulates vasculogenic mimicry in esophageal carcinoma cells

AIM: To investigate whether hypoxia inducible factor (HIF)-1α modulates vasculogenic mimicry (VM) by upregulating VE-cadherin expression in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).METHODS: Esophageal squamous cancer cell lines Eca109 and TE13 were transfected with plasmids harboring small interfering RNAs targeting HIF-1α or VE-cadherin. The proliferation and invasion of esophageal carcinoma cells were detected by MTT and Transwell migration assays. The formation of tubular networks of cells was analyzed by 3D culture in vitro. BALB/c nude mice were used to observe xenograft tumor formation. The relationship between the expression of HIF-1α and VE-cadherin, ephrinA2 (EphA2) and laminin5γ2 (LN5γ2) was measured by Western blot and real-time polymerase chain reaction.RESULTS: Knockdown of HIF-1α inhibited cell proliferation (32.3% ± 6.1% for Eca109 cells and 38.6% ± 6.8% for TE13 cells, P < 0.05). Both Eca109 and TE13 cells formed typical tubular networks. The number of tubular networks markedly decreased when HIF-1α or VE-cadherin was knocked down. Expression of VE-cadherin, EphA2 and LN5γ2 was dramatically inhibited, but the expression of matrix metalloproteinase 2 had no obvious change in HIF-1α-silenced cells. Knockdown of VE-cadherin significantly decreased expression of both EphA2 and LN5γ2 (P < 0.05), while HIF-1α expression was unchanged. The time for xenograft tumor formation was 6 ± 1.2 d for Eca109 cells and Eca109 cells transfected with HIF-1α Neo control short hairpin RNA (shRNA) vector, and 8.4 ± 2.1 d for Eca109 cells transfected with an shRNA against HIF-1α. Knockdown of HIF-1α inhibited vasculogenic mimicry (VM) and tumorigenicity in vivo.CONCLUSION: HIF-1α may modulate VM in ESCC by regulating VE-cadherin expression, which affects VM formation through EphA2 and LN5γ2.     

血管内皮钙黏附素下调对食管鳞癌细胞血管生成拟态、增殖和凋亡的影响

背景：血管内皮钙黏附素（VE-cad）作为血管生成拟态的重要调控分子在多种高侵袭性肿瘤中均存在表达,参与肿瘤的发生、发展过程。前期研究发现食管鳞癌细胞中亦存在VE—cad表达。目的：探讨微小RNA（miRNA）干扰技术下调VE-cad对食管鳞癌细胞血管生成拟态形成、细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法：将已成功构建的VE—cadmiRNA干扰质粒稳定转染Eca109、TE13细胞,同时设置阴性对照组（转染空质粒）和空白对照组（未转染）。荧光显微镜观察单克隆转染效率,三维培养观察细胞管腔样结构形成的能力,RT—PCR和蛋白质印迹法分别检测VE-cad、EphA2、LN5γ2 mRNA和蛋白表达,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡。结果：荧光显微镜显示Eca109、TE13细胞稳定转染效率均达90％以上。与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞管腔样结构数目明显减少（P〈0．01）,VE—cad、EphA2、LN5γ2mRNA和蛋白表达明显受抑（P〈0．01）,细胞增殖能力明显下降（P〈0．05）,凋亡率明显增高（P〈0．05）。结论：miRNA干扰技术能有效抑制食管鳞癌细胞Eca109、TE13的VE-cad表达。VE—cad通过下调EphA2和LN5γ2表达抑制血管生成拟态的体外形成,并影响细胞增殖和凋亡。VE—cad可能成为食管鳞癌分子靶向治疗的新靶点。     

Experimental and clinicopathologic study on the relationship between transcription factor Egr-1 and esophageal carcinoma

AIM: To observe the growth suppression effect of exogenous introduction of early growth response gene-1 (Egr-1 gene) on esophageal carcinoma tissue as well as on esophageal carcinoma cell line Eca109 and to explore the potential application of Egr-1 gene in gene therapy of tumor. METHODS: Eukaryotic expression vector of PCMV-Egr-1 plasmid was introduced into Eca109 cell line which expressed no Egr-1 protein originally with lipofectamine transfection method. The introduction and expression of PCMV-Egr-1 plasmid into Eca109 cell line was confirmed by G418 selection culture, PCR amplification of neogene contained in the vector, Western blot analysis and immunocytochemical analysis. The cell growth curve, soft agar colony formation rate and tumorigenicity in SCID mice were examined to demonstrate the growth suppression effect of exogenous Egr-1 gene on Eca109 cell line. The Egr-1 mRNA and Egr-1 protein were also detected in 50 surgical specimens of esophageal carcinoma by in situ hybridization and immunohistochemistry. RESULTS: Exogenous Egr-1 gene was introduced successfully into Eca109 cell line and expressed Egr-1 protein stably. The transfected Eca109 cell line grew more slowly than control Eca109 as shown by cell growth curves, the soft agar colony formation rate (4.0% vs 6.9%, P < 0.01) and the average growth rate of tumor in SCID mice (35.5 +/- 7.6 vs 65.8 +/- 7.6, P < 0.05). The expression level of Egr-1 mRNA and protein significantly increased in dysplastic epithelia adjacent to cancer rather than in cancer tissues (65.8% vs 20.0% by ISH and 57.9% vs 0.01). CONCLUSION: Exogenous Egr-1 gene shows the strong effect of growth inhibition in Eca109 cell line. Egr-1 in the cancer tissue shows down-regulated expression that supports the inhibited function of Egr-1 in cancer growth and suggests Egr-1 may have an important role in gene therapy of esophageal carcinoma.     

RNA干扰Akt对食管癌细胞株Eca109生物学特性的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Akt对人食管鳞癌细胞体外增殖、迁移及血管生成拟态(VM)形成的影响.方法:应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达;采用Western blot方法检测Akt蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化;Transwell方法...     

Wortmannin influences hypoxia-inducible factor-1 alpha expression and glycolysis in esophageal carcinoma cells

AIM: To investigate the influence of phosphatidylinositol-3-kinase protein kinase B(PI3K/AKT)-HIF-1α signaling pathway on glycolysis in esophageal carcinoma cells under hypoxia. METHODS: Esophageal carcinoma cell lines Eca109 and TE13 were cultured under hypoxia environment, and the protein, m RNA and activity levels of hypoxia inducible factor-1 alpha(HIF-1α), glucose transporter 1, hexokinase-Ⅱ, phosphofructokinase 2 and lactate dehydrogenase-A were determined. Supernatant lactic acid concentrations were also detected. The PI3K/AKT signaling pathway was then inhibited with wortmannin, and the effects of hypoxia on the expression or activities of HIF-1α, associated glycolytic enzymes and lactic acid concentrations were observed. Esophageal carcinoma cells were then transfected with interference plasmid with HIF-1α-targeting si RNA to assess impact of the high expression of HIF-1α on glycolysis.RESULTS: HIF-1α is highly expressed in the esophageal carcinoma cell lines tested, and with decreasing levels of oxygen, the expression of HIF-1α and the associated glycolytic enzymes and the extracellular lactic acid concentration were enhanced in the esophageal carcinoma cell lines Eca109 and TE13. In both normoxia and hypoxic conditions, the level of glycolytic enzymesand the secretion of lactic acid were both reduced by wortmannin. The expression and activities of glycolytic enzymes and the lactic acid concentration in cells were reduced by inhibiting HIF-1α, especially the decreasing level of glycolysis was significant under hypoxic conditions.CONCLUSION: The PI3K/AKT pathway and HIF-1α are both involved in the process of glycolysis in esophageal cancer cells.     

Effect of S1P5 on proliferation and migration of human esophageal cancer cells

AIM:To investigate the sphingosine 1phosphate (S1P) receptor expression profile in human esophageal cancer cells and the effects of S1P5 on proliferation and migration of human esophageal cancer cells. METHODS: S1P receptor expression profile in human esophageal squamous cell carcinoma cell line Eca109 was detected by semiquantitative reverse trans cription polymerase chain reaction. Eca109 cells were stably transfected with S1P5EGFP or controlEGFP constructs. The relation between the responses of cell prol...     

老年原发性肺癌患者缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1的表达及临床意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及老年人原发性肺癌组织中的表达及临床意义. 方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测氯化钴诱导缺氧下肺腺癌细胞A549的生长活性.分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)、免疫组化法测定缺氧不同时间下A549细胞及60例老年人原发性肺癌组织和26例老年人良性疾病(非癌组)组织中HIF-1α和GLUT-1的mRNA和蛋白表达,并分析HIF-1α、GLUT-1与临床病理特点之间的关系. 结果 肺腺癌细胞在缺氧下增殖能力较正常时增强.RT-PCR结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA的表达分别为0.69±0.08、0.65±0.09,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA表达分别为0.99±0.16、0.83±0.11,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.47±0.11、0.40±0.08(t值分别为3.81、4.97、6.35、7.89,P＜0.01);Western blot结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为1.57±0.29、1.66±0.28,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为2.31±0.46、2.22±0.34,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.93±0.07、1.06±0.17(t值分别为3.67、3.21、5.19、5.37,P＜0.01).肺癌组织中HIF-1α、GLUT-1的mRNA和蛋白阳性表达率明显高于非癌组(X2值分别为25.31、31.12、20.26、28.70,P＜0.01).有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ+Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(Ⅰ+Ⅱ期),差异有统计学意义(t值分别为2.56、2.19、3.46、2.15,X2值分别为5.14、4.15、7.54、5.57,P＜0.05).HIF-1α与GLUT-1的mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.527与r=0.408,P＜0.01). 结论 氯化钻诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1在肺腺癌细胞中的表达,加速肺癌细胞的生长,使之进一步耐受缺氧.HIF-1α、GLUT-1在老年人原发性肺癌组织中的过表达与肺癌的恶性进展有密切关系,联合两者的检测有助于老年人原发性肺癌的诊断及预后评估.     

胃癌组织中EphA2基因的表达及其与细胞凋亡、增殖的关系

目的 探讨EphA2基因在胃癌组织中表达的生物学意义及与细胞凋亡、增殖的关系.方法 利用免疫组织化学法(immunohisochemistory,IHC)检测82例胃癌手术切除标本的癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中EphA2的表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹技术对其中随机选取的30例标本进行EphA2 mRNA及其蛋白的定量检测,分析其表达与临床病理参数的关系.采用流式细胞术(FCM)检测82例癌组织中细胞凋亡率及增殖指数(PI),分析EphA2表达与细胞凋亡、增殖的关系.结果 IHC结果显示EphA2在癌组织中的表达显著高于癌旁组织及正常胃黏膜(P<0.01),且随胃癌分化程度降低、浸润深度增加及淋巴结转移而升高(P<0.05),但与肿瘤大小、患者年龄无关(P>0.05);RT-PCR结果显示EphA2 mRNA在各组中的表达水平无显著性差异(P>0.05);Western印迹与IHC结果一致,显示EphA2蛋白在癌组织中异常高表达(P<0.01).FCM结果显示EphA2高表达组细胞凋亡率显著低于低表达组(P=0.018),而其PI显著高于低表达组(P=0.002).结论 EphA2在胃癌组织中表达明显上调,可抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,在胃癌的发生发展中发挥重要作用,其机制与EphA2 mRNA的转录异常无关,而可能是其翻译水平上调或蛋白质稳定性增高所致.