荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

双探针实时荧光定量法检测HCV RNA抗原的临床意义

目的 建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性.方法 选取100例抗HCV抗体阳性样本,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例,并选取献血员50例为对照,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测.结果 双探针荧光定量法阳性率为93%（93例）;两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%（84例）和79%（79例）.结论 双探针荧光定量提高HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与丙型肝炎患者病情变化及严重程度相关.     

荧光定量PCR检测1000例丙型肝炎RNA结果分析

目的：分析荧光定量PCR检测1 000例丙型肝炎RNA结果,了解不同年龄组HCV-RNA的病毒复制情况。方法：使用荧光定量PCR法检测不同年龄组、不同性别的HCV-RNA拷贝数。结果：根据临床用药不同将其分三个阶段,第一阶段为阴性,第二阶段为1.0E＋3-1.0E＋5,第三阶段为1.0E＋5-1.0E＋8。在（20~30）岁三阶段共54人。在（31~40）岁三阶段为共177人。在（41~50）岁三阶段共411人。在（51~60）岁三阶段共197人。在60岁以上三阶段共161人。合计：第一阶段为469人,第二阶段为93人,第三阶段为438人,共1 000人。2=37,P〈0.005,丙肝RNA的检测结果与发病年龄两者之间有关联性。阳性率为53.1%,男占52%,女占48%,比为10.92。结论：分析结果认为本组资料较准确的反映了不同年龄组HCVRNA的病毒复制情况,为临床诊断治疗提供了依据。     

PCR和ELISA法检测献血员HCV携带者对比研究

笔者对４６份献血员的血清标本和ＰＣＲ法进行了检测，结果发现，ＰＣＲ阳性与ＥＬＩＳＡ法检测时的ＯＤ值有一定的关系。ＯＤ值在１．０００以上的，特别是超过阳性对照标本的ＯＤ值时，ＰＣＲ法的检测结果为阳性；ＯＤ值在ｃｕｒ ｏｆｆ值以下２３份标本之中全为阴性。通过实验结果和一些资料的分析，认为在目前我国血站对献血员检测ＡＬＴ和抗－ＨＣＶ情况下，在血站系统不应盲目引进ＰＣＲ检测技术。     

1561例肝炎病人的血清HCV—RNA PCR检测

丙型肝炎是一种由丙型肝炎病毒引起的传染病。为提高丙型肝炎检测的准确性,我们于1995年引进了套式HCV-RNA PCR试剂盒,对肝炎病人的血清进行检测。本文报道我院1995年7月至1996年6月间1561例肝炎病人使用套式HCV-RNAPCR技术检测丙型肝炎的情况。     

血清第三代抗—HCV与第二代抗—HCV及HCV—RNA检测结果的比较分析

对一组２５４例排除了甲型、乙型及戊型肝炎病毒感染的病毒性肝炎患者的血清同时检测第三代抗－ＨＣＶ、第二代抗 －ＨＣＶ及ＨＣＶ－ＲＮＡ，并对第三代抗－ＨＣＶ与第二代抗－ＨＣＶ及ＨＣＶ－ＲＮＡ之间的头等比较及分析。     

定量PCR结合混合标本检测献血者HCV-RNA

目的:探讨应用核酸扩增技术(NAT)定量检测献血者混合标本方法的可行性。方法:用荧光定量PCR法检测38例抗-HCV阳性标本、3 274例抗-HCV阴性标本及二者随机抽样组成的混合标本的HCV-RNA含量。结果:在38例抗-HCV阳性标本中有15例核酸检测阳性,两者阳性符合率39.5%(15/38)。15例双阳性标本与抗-HCV阴性标本混合检测核酸,仍为阳性。常规血清学检测阴性的标本NAT检测为阴性。结论:定量PCR检测HCV-RNA的方法适用于献血者的筛查。     

荧光聚合酶链反应定量检测丙型肝炎患者血清中HCV RNA及其意义

目的：为了解丙型肝炎患者血清HCVRNA含量与疾病程度及血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平的关系。方法：采用荧光聚合酶健反应（PCR）的方法，对105例不同临床类型丙型肝炎患者的血清HCVRNA进行定量检测。结果：丙型肝炎血清HCVRNA含量在103～109．5拷贝／ml之间。无症状HCV感染者血清HCVRNA含量（105.2±1.8拷贝／ml）显著低于急性丙型肝炎患者（107.5±2.4拷贝／ml）、慢性丙型肝炎患者（107.8±3.1拷贝／ml）及肝硬化（107.6±2.5拷贝／ml）。相关分析显示，慢性丙型肝炎病毒血症水平与血清ALT呈显著正相关。结论：高水平的HCV复制可能在肝损害和肝脏疾病的进展中发挥着重要作用。     

抗HCV与HCV—RNA相关性的探讨

目的 探讨丙肝病毒抗体与丙肝病毒核糖核酸的关系。为基屋医院临床检验，判断传染性，预测病情转是提供科学依据。方法 酶免疫法检测丙肝病毒抗体，逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 １１３例抗ＨＣＶ阳性者，共检出丙肝病毒核糖核酸９８例（８６．７３％），前者Ａ值≥２．５者，全部检出丙肝病毒核糖核酸，结论 抗ＨＣＶ高滴度时常伴有阳性。     

3种HBV DNA荧光定量PCR试剂检测结果比较

目的 比较及评价3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂检测结果的差异.方法 同时用3种HBV-DNA荧光定量PCR试剂对已知结果的质控血清、标准品及本院79份HBsAg阳性的临床标本进行检测,并对检测结果进行比较分析.结果 试剂A、B、C检测阳性率分别为41.77%(33例)、45.57%(36例)和41.77%(33例).3种方法结果一致者66例,总符合率83.54%.试剂A、B与试剂C检测结果相比差异有统计学意义(P<0.05),试剂A与B检测结果相比差异无统计学意义(P>0.05).试剂A与C的灵敏度、特异性均为77.78%、88.37%;试剂B灵敏度为89.66%、特异性80.00%.结论 试剂A与B总体性能优于试剂C,适于临床检测与筛查.实验室必须选择质量好且符合自己实验室要求、与本实验室仪器相匹配的试剂以保证检验质量.     

荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较

目的了解荧光定量聚合酶链反应(PCR)法与分支链DNA信号扩增(bDNA)法在检测血清中HBV DNA含量上的优缺点.方法分别用这两种方法平行检测44份乙型肝炎患者的血清标本,并与定性PCR检测结果比较.同时用荧光定量PCR法观察15例乙肝患者干扰素治疗期间HBV DNA含量变化.结果①荧光定量PCR法和bDNA法比较,a前者测出的HBV DNA含量均值为(3.50×105±33.6)copies/μl;后者为(3.07×105±12.9)copies/μl,两者比较差异无显著性(P＞0.05).b前者的HBV DNA阳性率79.5%;后者及常规PCR定性法均为59.1%.荧光定量PCR法的阳性检出率显著高于bDNA法及常规定性PCR法(P＜0.05).②15例中5例获完全应答的乙型肝炎患者其血清HBV DNA含量在治疗16周内均逐渐下降至完全转阴.结论荧光定量PCR法与bDNA法在检测血清HBV DNA含量上,结果大多一致,且敏感性强,检验也较简便、价廉,并能较好评价和检测乙肝患者抗病毒疗效,宜于临床推广.     

多聚酶链反应与丙肝抗体诊断技术检测丙肝病毒感染

作者采用多聚酶链反应(PCR)和丙型肝炎抗体诊断(EIA)技术对30例单采浆献血员进行血清 HCV RNA、抗-HCV 同步检测,结果显示:①献血员抗-HCV 阳性率(50%)较 HCVRNA 阳性率(33%)高;②在抗-HCV 阳性标本中,OD 值在1.0以止者,HCV RNA 阳性率为86%,OD 值在0.99以下者 HCV RNA 阳性率为25%;③抗-HCV 阴性标本中 PCR 阳性率为22%;该研究表明在 EIA 检测基础上进行 PCR 测定,即节约 PCR 试剂,又可最大限度地阻断输血后丙型肝炎病毒的传播。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的临床意义

目的检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量,了解其与免疫学指标的关系。方法采用荧光定量PCR技术和ELISA法,分别检测287例乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量和免疫学指标。结果287例乙型肝炎患者血清中检出HBVDNA199例,阳性率为69.34%(199/287);144例HBsAg、HBeAg、抗HBc三项阳性的血清,其血清中HBVDNA也全部阳性;而HBsAg、抗HBe、抗HBc三项阳性和HBsAg、抗HBc二项阳性的标本,HBVDNA的检出率分别38.9%(42/108)和37.1%(13/35)。结论乙型肝炎患者血清中HBVDNA的拷贝数与HBeAg密切相关,但系统转换不能说明HBV停止复制,而只是复制水平的降低而已。     

全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制

目的 研究一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂。方法 使用一个生物素标记的上游引物,对HBV DNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面,用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交,而后加底物显色,测定吸光度进行分级定量分析。结果 该定量方法可以检测10拷贝数的模板,而且对简单处理的标本适应性强;以分级定量的形式定量时,具有良好的重复性。结论 该试剂适用于仪器操作,可对临床血清中HBV DNA进行分级定量分析。     

鼠痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的 建立鼠痘病毒的荧光定量PCR检测方法,以期能快速、准确、灵敏、特异的检出鼠痘病毒。方法 经过比对和筛选,本研究选取鼠痘病毒的ERPV_027基因480-800位序列段,作为引物设计位点设计引物和探针,并对该引物对和探针的特异性、灵敏性、稳定性和重复性进行检测。结果 本研究建立的方法,对鼠痘病毒的检测极限是68.8copies/μl;该方法特异性强,只对鼠痘病毒特定片段进行特异性扩增,而对小鼠肝炎病毒、仙台病毒、沙门氏菌等其它病毒、细菌无扩增;该方法稳定性和重复性均较好。结论 本研究成功建立了检测鼠痘病毒的荧光定量PCR方法,该方法特异性强、灵敏度高,且具有较好的稳定性和重复性,具有广阔的应用价值。     

实时荧光定量PCR应用及实验条件优化

实时荧光定量PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,在保持了PCR技术灵敏、快速、特异特点的基础上增加了定量的特点.在检测微小残留病变,肿瘤标志性基因及病毒负荷量等方面为临床医生判断病情,了解预后发挥着不可替代的作用.荧光定量PCR为科学发挥着巨大作用的同时,人们也不断对其实验条件进行优化,保证定量结果的准确.     

实时荧光定量PCR检测CD258在前列腺癌组织中的表达

目的 应用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测CD258(肿瘤坏死因子14,TNFSF14)在前列腺癌(PCa)组织中的表达,以探讨CD258基因与PCa的关系.方法 提取正常前列腺组织、良性前列腺增生(BPH)组织及经病理确诊的PCa组织中的总KNA,并逆转录为cDNA,应用RQ-PCR.法检测CD258的表达.结果 在正常前列腺、BPH及PCa组织,CD258的阳性表达率均为100%.在正常前列腺组织中,CD258基因平均相对表达强度为(10.2±1.53),BPH组织中为(9.91±2.01),而在PCa组织中为(3.14±1.72).BPH组及正常对照组比较无统计学差异(P＞0.05),Pca组与BPH组及正常对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论 CD258在PCa组织中出现较低的表达强度,提示其有可能与PCa的发病相关.     

不同状态乙型肝炎病毒感染患者血清中HBV DNA定量聚合酶链反应测定

目的 :采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)测定不同状态乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒 (HBV)的载量 ,为乙型肝炎的临床诊断、病程判断和治疗提供参考。方法 :采用实时定量PCR方法 ,检测不同病程状态的乙肝患者血清样本 1 90份 ,其中HBeAg阳性的慢性乙型肝炎 (CHB)患者 2 5例 4 7份样品 ,HBeAg阴性的 4例CHB患者 4份样品 ,接受α-干扰素治疗后发生HBeAg血清学转归的患者 5例 4 0份样品 ,非活动性HBV携带者 37例 5 7份样品。由CHB康复患者 2 1例 4 2份样品。结果 :HBeAg阳性的CHB血清中HBVDNA水平为 8.3× 1 0 8拷贝 /ml,明显高于HBeAg阴性的CHB患者 (7.0× 1 0 6拷贝 /ml)和HBeAg血清转归患者HBVDNA水平 (6 .2× 1 0 3 拷贝 /ml)以及非活动性HBsAg携带者HBVDNA水平 (5 .6× 1 0 3 拷贝 /ml)。乙型肝炎康复者中未检出HBVDNA。结论 :定量PCR方法可以作为确认HBV感染不同状态的一种有效手段