钾通道开放剂与肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡

肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣｓ)增殖和凋亡的变化是低氧性肺动脉高压 (ＨＰＨ)血管重建的重要组成部分 ,钾通道活性改变在这两方面的作用还不清楚 ,我们的研究旨在明确钾通道开放剂对ＰＡＳＭＣｓ增殖和凋亡的作用。材料与方法　细胞培养 :酶消化法培养大鼠ＰＡＳＭＣｓ,细胞纯度为 98%。细胞增殖 :继代ＰＡＳＭＣｓ按 5× 1 0 3/孔接种于 96孔板 ,长满后静止 48ｈ ,加入 1 0 %胎牛血清 (ＦＣＳ ,美国ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ公司 )和不同浓度的钾通道开放剂比那地尔(Ｐｉｎ ,美国Ｓｉｇｍａ公司 ) ,2 4ｈ后按ＣｅｌｌＴｉｌｔｅｒＴＭ(美国Ｐｒ…     

加强对低氧性肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞钾通道活性的研究

加强对低氧性肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞钾通道活性的研究陈文彬低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）的发病机制主要为低氧引起的肺血管收缩和肺小动脉结构的重建。在上述机制中各种影响血管舒缩的体液因子和肺动脉平滑肌细胞（ＳＭＣｓ）膜离子通道活性的改变，在ＨＰＨ形成中发...     

急性缺氧抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞钙ATP钾通道

目的研究急性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道活性的影响，以探讨钾通道活性改变在急性低氧性肺血管收缩（ＨＰＶ）反应中所起的作用。方法应用膜片钳单通道技术，在对称性高钾溶液中，于急性酶分离的大鼠单个肺动脉平滑肌细胞的内面向外式膜片（ｉｎｓｉｄｅｏｕｔｐａｔｃｈ）上，记录外向性钾通道电流，并用常氧和低氧的细胞浴液持续灌流肺动脉平滑肌细胞，以观察其对外向性钾通道电流的影响。结果在记录的外向性钾电流中，证实了一种电流为钙、ＡＴＰ激活性钾通道（Ｋ＋ＣａＡＴＰ）；用低氧的细胞浴液灌流肺动脉平滑肌细胞可明显抑制这种钙、ＡＴＰ激活性钾通道的活性（Ｐ＜０．０１）。而钾通道开放剂卡吗克啉（ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）对低氧所抑制的肺动脉平滑肌细胞钙、ＡＴＰ激活性钾通道具有明显的激活作用（Ｐ＜０．０１）。结论急性低氧可通过对钙、ＡＴＰ激活性钾通道的抑制作用，使肺动脉平滑肌细胞膜发生去极化，肺动脉收缩而导致急性肺血管阻力增加，进而产生肺动脉高压。肺动脉平滑肌细胞钙、ＡＴＰ激活性钾通道活性的降低，可能在低氧性肺血管收缩反应中起着重要的作用。Ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ可作为拮抗低氧性肺血管收缩的有效药物之一。     

慢性缺氧抑制肺动脉平滑肌细胞钾通道活性

目的研究慢性缺氧性肺动脉高压发生机制中钾通道活性改变的作用，及其开放剂卡吗克林（ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）对钾通道活性的调控作用。方法２０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组１０只和缺氧组１０只，缺氧组大鼠缺氧３周，每天缺氧８小时；运用急性酶分离法对Ｗｉｓｔａｔ大鼠肺动脉平滑肌细胞进行了分离；应用膜片钳小片膜单通道技术，分别对正常和慢性缺氧３周大鼠的肺动脉平滑肌细胞的钾离子通道进行了测定；记录并比较了两组大鼠肺动脉平滑肌细胞钙、ＡＴＰ激活性钾通道（Ｋ＋ＣａＡＴＰ）和延迟整流性钾通道的活性，并观察了ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ对缺氧组大鼠钾通道的影响。结果慢性缺氧组大鼠肺动脉平滑肌细胞钙、ＡＴＰ激活性钾通道（Ｋ＋ＣａＡＴＰ）和延迟整流性钾通道的活性均比正常组低，ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ可使慢性缺氧组Ｋ＋ＣａＡＴＰ的活性明显增高（Ｐ均＜０．０１）。结论慢性缺氧可明显抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞钾通道活性，这可能在慢性缺氧性肺动脉高压的发病机制中发挥重要的作用，钾通道开放剂ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ可作为降低缺氧性肺动脉高压的有效药物。     

低氧高二氧化碳对肺动脉基质金属蛋白酶体系的影响

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)作为降解细胞外基质 (ＥＣＭ)最重要的酶体系之一 ,其在保持血管的完整性和稳定性方面起重要作用[1] 。我们在研究慢性低Ｏ2 高ＣＯ2 肺动脉高压大鼠模型上 ,测定大鼠肺组织、肺细小动脉ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9、ＴＩＭＰ 2的动态变化 ,探讨基质金属蛋白酶体系在慢性低Ｏ2 高ＣＯ2性肺动脉高压和肺血管重建中的作用及其作用机制 ,为肺动脉高压的防治提供思路。材料与方法　二级雄性ＳＤ大鼠 4 0只 (温州医学院实验动物中心 ) ,随机分成正常对照组 (Ａ组 )、低Ｏ2 高ＣＯ2 1周组(Ｂ组 )、2周组 (Ｃ组 )与 3周组 (Ｄ组 )…     

低浓度一氧化碳对大鼠肺动脉平滑肌细胞的作用机制

慢性阻塞性肺疾病、肺动脉高压等疾病,其病理基础是动脉中膜肌层增厚,平滑肌细胞由收缩型变为合成型,肥大增殖。一氧化碳(ＣＯ)作为新的血管舒张因子,可能具有与一氧化氮(ＮＯ)相似的性质,对肺组织又没有直接毒性作用,有研究之必要。本实验探讨低浓度ＣＯ对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞(ＲＡＳＭＣ)的作用机制。材料与方法　采用贴块法培养ＲＡＳＭＣ并鉴定后[1],应用本研究所建立的低浓度ＣＯ和缺氧气体处理培养细胞容器,对各组细胞进行相应处理,常氧组放在二氧化碳孵箱内作为对照。分为常氧组(Ｎ),缺氧组(Ｈ)及低浓度ＣＯ复合缺氧组(Ｃ…     

银杏叶制剂对低氧肺动脉平滑肌蛋白激酶Cα表达的影响

银杏叶提取物可明显抑制低氧性肺动脉高压的发生并阻止低氧介导的右心室肥厚的形成[1 3 ] ,但机制尚未明确。我们应用原位杂交、免疫细胞化学及四甲基偶氮唑盐 (ＭＴＴ)微量比色法等技术观察了银杏叶制剂 (ＢＮ5 2 0 2 1)对低氧肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)增殖速率及蛋白激酶Ｃ (ＰＫＣ)αｍＲＮＡ表达的影响 ,以探讨银杏叶制剂治疗低氧性肺动脉高压的机制。材料与方法　猪ＰＡＳＭＣ培养按贴块法进行 ,根据细胞生长呈典型的“峰与谷”结构 (图 1)及免疫荧光α 平滑肌肌动蛋白 (α ＳＭａｃｔｉｎ)阳性 (图 2 )鉴定为平滑肌细胞。取 3～ …     

克罗卡林对缺氧性肺动脉高压的影响及其机制探讨

肺血管上存在的多种钾通道可能是重要的氧感受器 ,缺氧时钾通道的抑制是缺氧性肺动脉高压 (ＨＰＨ)发生、发展的重要机制[1,2 ] 。ＡＴＰ敏感钾通道 (ＫＡＴＰ)在缺氧时开放 ,可减轻ＨＰＨ ,成为缺氧时的调节机制之一 ,具有重要的病理生理意义。目前长期应用ＫＡＴＰ开放剂克罗卡林 (ｃｒｏ)对ＨＰＨ的影响及其机制的研究国内、外尚少报道 ,我们的实验对此进行了初步的探讨。材料与方法　Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠 42只 ,体重 2 5 0～ 3 0 0ｇ,随机分为 7组 ,每组 6只 :(1)常氧 2周组 (Ａ组 ) ;(2 )常氧 4周组 (Ｂ组 ) ;(3 )常氧治疗 2周组 (Ｃ…     

对肺动脉平滑肌细胞趋化反应和DNA合成的研究

探讨肺血管平滑肌细胞（ＰＶＳＭＣ）迁移在缺氧性肺血管结构重组中的作用以及缺氧本身对ＰＶＳＭＣ增殖和迁移的影响。方法利用细胞趋化研究方法和３Ｈ－胸腺嘧啶掺入法研究了血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）对培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）趋化反应和ＤＮＡ合成的作用，以及缺氧和心钠素（ＡＮＰ）对ＰＤＧＦ这种作用的影响。结果表明缺氧可促进ＰＤＧＦ诱导的ＰＡＳＭＣ的趋化反应和ＤＮＡ合成，ＡＮＰ可抑制ＰＡＳＭＣ对ＰＤＧＦ的趋化作用，并抑制ＰＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成，鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝（ＭＢ）可抑制ＡＮＰ的这种抑制作用。结论研究提示ＰＤＧＦ、ＡＮＰ和缺氧本身对ＰＡＳＭＣ的增殖和迁移有重要作用，这可能对缺氧性肺血管结构重组具有重要意义     

精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖效应及其对IL—6分泌的…

我们以培养的ＳＤ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）为模型，动态观察了精氨酸加压素（ＡＶＰ）对ＶＳＭＣｓ增殖作用和白细胞介素－６（ＩＬ－６）分泌功能的影响，亦对ＩＬ－６与ＶＳＭＣｓ增殖效应的关系进行了研究，旨在探讨ＡＶＰ和ＩＬ－６在高血压发病中的意义。结果表明：（１）ＡＶＰ对培养大鼠ＶＳＭＣｓ具有明显保增殖效应，随剂量增加和时间延长其作用加强；（２）ＶＳＭＣｓ可自身分泌ＩＬ－６ＡＶＰ对其分泌有明显的抑     

蛋白激酶C α mRNA在低氧猪肺动脉平滑肌细胞的表达及对细胞增殖的作用

我们最近发现蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)参与正常肺血管张力的调控[1,2 ] ;低氧可使肺动脉ＰＫＣ蛋白水平表达增高[3] ,且可使ＰＫＣ对肺血管张力的调控作用明显增强[4 ] 。但有关低氧对肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)在ｍＲＮＡ转录水平表达的影响以及ＰＫＣ对ＰＡＳＭＣ增殖的影响的研究报道尚较少见 ,我们对此进行探讨。材料与方法　取幼年猪肺动脉主干 ,刮去内皮细胞 ,将中膜肌层切割成小组织块 ,接种在培养瓶内 ,待贴壁后 ,加入含 10 %胎牛血清的Ｍ199液 ,置 37℃ ,ＣＯ2 培养箱内培养。生长融合的ＰＡＳＭＣ以 1∶1的 0 2 5 %胰蛋白酶和 0 …     

精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖效应及其对IL－6分泌的影响

我们以培养的ＳＤ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）为模型，动态观察了精氨酸加压素（ＡＶＰ）对ＶＳＭＣｓ增殖作用和白细胞介素－６（ＩＬ－６）分泌功能的影响，亦对ＩＬ－６与ＶＳＭＣｓ增殖效应的关系进行了研究，旨在探讨ＡＶＰ和ＩＬ－６在高血压发病中的意义。结果表明：（１）ＡＶＰ对培养大鼠ＶＳＭＣｓ具有明显促增殖效应，随剂量增加和时间延长其作用加强；（２）ＶＳＭＣｓ可自身分泌ＩＬ－６，ＡＶＰ对其分泌有明显的抑制作用，且作用时间愈长，抑制作用愈显著；（３）ＩＬ－６作用于ＶＳＭＣｓ可明显促进其ＤＮＡ合成。上述结果提示，ＡＶＰ与ＩＬ－６可能均参与了高血压的发病。     

灯盏花素对低氧肺动脉平滑肌细胞蛋白激酶Cα mRNA表达影响的观察

采用原位杂交技术观察了灯盏花素在整体水平对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)及离体低氧培养猪ＰＡＳＭＣ蛋白激酶Ｃα(ＰＫＣα)ｍＲＮＡ表达的影响 ,以从分子水平探讨灯盏花素对低氧性肺动脉高压治疗作用的机制。材料与方法　选用体重 2 0 0～ 3 0 0ｇ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,分为正常对照组、低氧 5ｄ、14ｄ和 2 8ｄ组各 6只 ,每天低氧前腹腔注射生理盐水 2ｍｌ;灯盏花素治疗组 18只 ,每天低氧前腹腔注射灯盏花素 [中美合资黑龙江迪龙制药有限公司生产 ],4ｍｌ/ｋｇ。低氧方法参照我们以往的方法[1] ,按孙波等[2 ] 的方法测定并记录…     

N^ω——硝甘——L——精氨酸甲酯增强大鼠慢性缺氧性肺高压的研究

目的：建立大鼠慢性氧性肺动脉高压（ＣＨＰＨ）模型，通过注入Ｎ＾ω－－硝基－－Ｌ－－清氨酸甲酯（Ｌ－－ＮＡＭＥ）探讨内源性一氧化氮（ＮＯ）地ＣＨＰＨ的调节作用。方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ｎ＝３０）进行１周及２周缺氧，每时程缺氧大鼠按性别、年龄、体重配伍、分至对照组、缺氧组、缺氧＋Ｌ－ＮＡＭＥ组。缺氧采用常压氧舱法（Ｏ２１１％，ＣＯ２〈３％），缺氧前腹腔注射Ｌ－ＮＡＭＥ。在１周及２周缺结束时对肺动脉平均     

肺动脉血管紧张素转换酶在缺氧性肺动脉高压演进过程中的…

目的 探讨肺动脉局部肾素血管紧张素系统对缺氧性肺动脉高压（ＰＡＨ）的影响。方法 采用常压缺氧ＰＡＨ动物模型，观察缺氧后肺动脉收缩压（ＰＡＰｓ）、肺动脉血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性、胶原蛋白含量（Ｈｐ）及血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）超微结构的变化，以及ＡＣＥ抑制剂－西拉普利对以上变化的影响。结果 缺氧期间ＰＡＰｓ、ＡＣＥ活性、Ｈｐ显著增高，ＳＭＣ较为分泌型。西拉普利组ＡＣＥ活性下降，ＰＡＰｓ、Ｈｐ降至     

氯血红素对大鼠缺氧性肺动脉高压的作用

肺动脉平滑肌细胞增殖引起的肺血管重构是造成慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)缺氧性肺动脉高压的病理形态学基础。诱导型血红素氧合酶 (ＨＯ 1)在缺氧状态下表达增多 ,分解血红素产生的ＣＯ可抑制肺动脉平滑肌细胞 (ＰＡＳＭＣ)增殖。我们检测了血红素氧合酶促进剂—氯血红素 (Ｈｅｍｉｎ)对慢性缺氧大鼠肺组织中ＨＯ 1基因表达及肺动脉压的影响。材料与方法　按薛全福方法[1] 复制动物模型。雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 72只 ,体重 2 0 0～ 30 0ｇ,随机分为下列 3组 ,每组各 8只。Ｈｅｍｉｎ干预组 :即每次缺氧前 0 5ｈ腹腔注射Ｈｅｍｉｎ15ｍｇ/…     

肺动脉血管紧张素转换酶在缺氧性肺动脉高压演进过程中的作用

目的探讨肺动脉局部肾素－血管紧张素系统对缺氧性肺动脉高压（ＰＡＨ）的影响。方法采用常压缺氧ＰＡＨ动物模型，观察缺氧后肺动脉收缩压（ＰＡＰｓ）、肺动脉血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性、胶原蛋白含量（Ｈｐ）及血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）超微结构的变化，以及ＡＣＥ抑制剂－西拉普利对以上变化的影响。结果缺氧期间ＰＡＰｓ、ＡＣＥ活性、Ｈｐ显著增高，ＳＭＣ转为分泌型。西拉普利组ＡＣＥ活性下降，ＰＡＰｓ、Ｈｐ降至正常，ＳＭＣ恢复收缩表型。结论肺动脉ＡＣＥ参与缺氧性ＰＡＨ形成、转归过程中肺动脉胶原代谢、ＳＭＣ表型变化的调节。     

诱导型一氧化氮与缺氧性肺血管结构重建

诱导型一氧化氮合酶与缺氧性肺血管结构重建林红蔡英年利用缺氧性肺动脉高压大鼠模型和离体培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分别观察一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂对大鼠肺泡内无肌性血管肌化程度和ＰＡＳＭＣ一氧化氮（ＮＯ）生成和细胞增殖的影响，探讨缺...     

肾上腺髓质素对缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

为了探讨肾上腺髓质素 (ＡＭ)在缺氧性肺动脉高压的作用 ,我们检测了ＡＭ对缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞(ＰＡＳＭＣ)增殖的影响。材料与方法　ＰＡＳＭＣ获取与培养 :健康成年猪 ,体重12 0ｋｇ ,在无菌条件下取出肺动脉干 ,用组织贴块法进行原代和传代培养 ,实验用第 1～ 2代细胞 ,分别接种于 96孔板 ,10 0μｌ/孔或接种于装有盖玻片的 2 5ｍｌ培养瓶中 (1ｍｌ/瓶 ) ,培养2 4ｈ后换无血清培养液 ,静息 2 0ｈ ,换含 2 0ｍｌ/Ｌ小牛血清的培养液后分组培养。常氧组 :培养液不含ＡＭ ,于体积分数为5 %ＣＯ2 、95 %空气 ,常氧条件下培养。缺氧组…     

血管钠肽,C型钠尿肽和心房钠尿肽降低慢性低氧性肺动脉 …

我们根据Ｗｅｉ等[1] 的工作 ,人工合成了一个新的含有 2 7个氨基酸 (Ａａ)残基组成的多肽—血管钠肽 (ＶＮＰ) ,它是心房钠尿肽 (ＡＮＰ)和Ｃ型钠尿肽 (ＣＮＰ)的杂交物 ,即具有ＣＮＰ的2 2个Ａａ残基和ＡＮＰ羧基端 5个Ａａ残基组成的结构。本实验比较ＶＮＰ、ＣＮＰ和ＡＮＰ对慢性低氧性肺动脉高压 (ＨＰＨ)大鼠的治疗作用 ,将为ＨＰＨ治疗的新药研究与开发开辟新的措施。材料与方法　实验用ＳＤ雄性大鼠 10只 ,体重 (2 30±2 0 )ｇ ,由第四军医大学实验动物研究中心提供。去甲肾上腺素 (ＮＥ)和乙酰胆碱 (ＡＣｈ)系美国Ｓｉｇｍａ公司产…