乳腺癌和乳腺导管内增生性病变Notch1基因甲基化的检测及临床意义

目的 探讨Notch1基因甲基化与乳腺浸润性导管癌(IDC)及乳腺导管内增生性病变的相关性.方法 用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪(MALDI-TOF MS)对89例乳腺IDC、20例导管原位癌(DCLS)、11例不典型导管增生(ADH)及20例普通型导管增生(UDH)组织进行Notch1基因甲基化的定量检测.采用...     

Notch信号通路与乳腺癌发生关系的研究进展

1983年Artavanis Tsakonas研究组首次克隆了Notch基因,并发现其编码一类大的跨膜受体,即Notch受体.随后相继在线虫、爪蟾、鼠和人等多个物种体内发现其家族不同成员~([1]).Notch信号不仅影响细胞的增殖、分化、凋亡、黏附和上皮细胞-间叶细胞转变(epithelial-mesenchy maltransition,EMT)等活动,在胚胎发育、造血、血细胞发育、血管生成、某些神经系统疾病及肿瘤形成等生理病理过程中起着重要的作用~([1]).     

Notch1和JAG1在乳腺癌和癌旁组织的表达比较

目的 检测Notch1和JAG1在乳腺癌中的表达,及其与乳腺癌相关临床指标的关系,分析Notch基因在人类乳腺癌中的作用和意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例乳腺癌组织和25例癌旁正常乳腺组织中Notch1和JAG1的表达, 对乳腺癌组织与癌旁组织进行表达率和表达强度标准化系数的统计学比较, 并在不同的腋窝淋巴结转移情况间、不同TNM分期和病理学分级间进行Notch1表达强度标准化系数的统计学比较.结果 乳腺癌组织Notch1的表达率和标准化系数分别为93.3%和0.83, 均明显高于癌旁正常乳腺组织, 乳腺癌组织中JAG1的表达率为10%,癌旁组织中无JAG1表达,伴腋窝淋巴结转移的病例Notch1标准化系数高于无腋窝淋巴结转移的病例;乳腺癌Ⅰ期病例Notch1标准化系数(0.57)低于Ⅱ期(1.05),Ⅱ期高于Ⅲ期(0.59),Ⅰ期与Ⅲ期差异无统计学意义;乳腺癌I级病例Notch1标准化系数(0.55)低于Ⅱ级(0.83)和Ⅱ级低于Ⅲ级(1.05),Notch1可能在分化较好的人乳腺癌中的表达是低的,在分化较差的人乳腺癌中的表达是增高的.结论 人类乳腺癌中存在Notch1和JAG1的异常高表达,而在癌旁正常乳腺组织存在Notch1和JAG1的低表达和不表达,该研究为进一步探明Notch基因的表达对乳腺癌的发生、发展的影响奠定了良好的基础.     

RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。     

Wnt和Notch信号通路在肿瘤干细胞自我更新中的作用

肿瘤干细胞是一类能够导致肿瘤发生的具有自我更新能力的细胞，它与干细胞具有很多相似性，其中最重要的一点是自我更新能力。它们具有相似的自我更新调节通路，如：Wnt，Notch和Shh(Sonic hedgehog)。Wnt和Notch信号通路通过其受体和配体的相互作用在自我更新的增殖和分化中都起着重要的作用，两者均能促进干细胞增殖而抑制其分化，但各自侧重不同。此外，Wnt和Notch信号通路之间相互作用、协调共同完成干细胞的自我更新。对肿瘤干细胞的Wnt和Notch信号通路研究将为未来肿瘤的靶向治疗提供新的方向。     

Notch1/Hes1信号通路在调控低分化胃腺癌细胞钙离子和侵袭能力中的作用

目的 探讨Notch1/Hes1信号通路对胃癌细胞钙离子水平的影响及其与侵袭的关系.方法 采用免疫组化法检测32例原发性低分化胃腺癌组织及32例癌旁正常组织中Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达.将MGC-803细胞分为对照组、Lipofectamine 2000组、Notch1 ...     

快速老化小鼠胸腺细胞分化与Notch信号相关基因表达关系的研究

目的：研究快速老化小鼠（Senescence-accelerated mice，SAM）增龄过程中胸腺T细胞亚群的变化与Notch 1、Presenilin 1、2（PS1、2）、HES1等Notch信号转导通路相关基因mRNA表达变化及这两种变化的关系。方法：选择出生后1—8周龄SAM，采用流式细胞技术检测胸腺细胞亚群变化、用荧光实时定量PCR的方法检测Notch1、PS1、PS2、HES1基因mRNA表达的动态变化。结果：SAM出生1-2周，胸腺中CD4^＋CD8^＋细胞所占比例较高，4周龄后逐渐降低，各周龄SAMP8与SAMR1之间无显著性差异；在CD4^＋CD8^＋。细胞比例上，SAM呈增龄性增加，1—6周龄的SAMP8与SAMR1之间无显著性差异，8周龄的SAMP8低于SAMR1；在CD4^＋CD8^＋细胞比例上，SAM呈增龄性增加，4周龄后的SAMP8均明显高于SAMR1；Notch1、PS2、HES1基因mRNA表达量呈增龄性增加，各周龄SAMP8的Notch1基因表达水平高于SAMR1，4周龄后SAMP8的PS2、HES1基因表达水平高于SAMR1；PS1基因mRNA表达量呈增龄性降低，4周龄后的SAMP8低于SAMR1。结论：Notch1、PS2、HES1的表达与胸腺CD4^＋CD8^＋细胞的分化呈正相关，PS1表达与胸腺CD4^＋CD8^＋细胞的分化呈负相关。     

Notch信号分子在ICA诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的作用

目的观察Notch信号通路在淫羊藿苷(ICA)诱导胚胎干细胞(ESC)向心肌细胞分化过程中的作用。方法实验分为自然分化组、ICA诱导分化组及ICA+MW167(Notch信号抑制剂)组。相差显微镜下观察各组自发性节律收缩细胞出现情况的差别,免疫荧光染色观察各组细胞心肌特异性蛋白ANP的表达,RT-PCR检测各组细胞ANP mRNA的表达。结果 ICA+MW167组自发性节律收缩细胞数明显多于自然分化组与ICA诱导分化组,ICA+MW167组心肌细胞特异性蛋白ANPmRNA和蛋白的表达水平随培养时间延长逐渐增加,明显高于自然分化组与ICA诱导分化组。结论 Notch信号通路参与了ICA诱导ESC分化为心肌细胞的过程,抑制该信号通路可以明显提高心肌细胞特异性ANP基因及蛋白的表达,上调分化的心肌细胞比率。     

Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义.方法 采用实时定量PCR(Q-PCR)和Western blotting方法检测135例新鲜前列腺癌病理组织标本及临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes1 mRNA和蛋白表达情况.同时采用免疫组化方法检测135例前列腺癌病理组织标本与临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes 1蛋白表达情况,并分析各蛋白表达与前列腺癌患者临床病理因素的关系.结果 135例新鲜前列腺癌病理组织标本Q-PCR及Western blotting结果表明,与临近非肿瘤组织相比,前列腺癌组织中Notch 1、Notch 3及Hes 1 mRNA和蛋白表达均上调(P均＜0.05).免疫组化的结果表明,59.26％(80/135)前列腺癌样本为Notch 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％ (24/135)(P＜0.05);65.19％(88/135)前列腺癌样本为Notch 3阳性,高于临近非肿瘤组织22.22％(30/135) (P＜ 0.05);62.22％ (84/135)前列腺癌样本为Hes 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％(24/135)(P＜0.05).统计分析证实Notch 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Notch 3蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Hes 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤大小密切相关(x2=6.781,P=0.012).结论 Notch信号通路相关蛋白Notch 1、Notch 3及Hes 1在前列腺癌患者组织中表达升高,Notch信号通路的激活可能在前列腺癌发生、发展过程中起重要作用.     

miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制

BACKGROUND:It has been proved that miR-34a plays an inhibitory role in the growth of lung cancer stem cells, but the underlying mechanism remains unclear. OBJECTIVE:To explore the inhibitory effect of miR-34a on lung cancer stem cells and the underlying mechanism. METHODS:The CD133⁺ lung cancer stem cells were separated from lung cancer A549 cell lines using magnetic activated cell sorting method. And miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were established by liposome transfection technology. Besides, the targeted relationship between miR-34a and Notch1 was analyzed by the dual-luciferase reporter. Afterwards, Notch1 silencing was performed by gene knockout, and its effect on lung cancer stem cells was determined. RESULTS AND CONCLUSION:After sorted and detected by immunomagetic selection and flow cytometry assay respectively, a high rate of CD133⁺ lung cancer stem cell was obtained. And qRT-PCR detected that the expression level of miR-34a in CD133⁺ lung cancer stem cells was significantly lower than that in CD133^- lung cancer stem cells. Moreover, miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were successfully constructed and miR-34a significantly inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. Dual-luciferase reporter assay indicated that Notch1 mRNA was a target of miR-34a. In addition, Notch1 silencing obviously inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. These findings suggest that miR-34a can inhibite lung cancer stem cells via the Notch1 signaling pathway.     

乳腺癌和癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA及蛋白的表达

目的 检测Notch1基因mRNA及Notch1蛋白在人乳腺癌和癌旁乳腺组织中的表达,分析其临床病理学意义.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法榆测60例乳腺浸润性导管癌和60例癌旁乳腺组织中Notch1基因mRNA,应用免疫组织化学SP法检测60例乳腺浸润性导管癌、30例导管原位癌及60例癌旁乳腺组织Notch1蛋白的表达,分析Notch1表达水平与乳腺癌临床病理特征的相关性.结果 Notch1基因mRNA在人乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中均有表达.Notch1蛋白在癌旁乳腺组织和导管原位癌中的阳性牢分别为55%(33/60)、70%(21/30),二者差异无统计学意义(P>0.05),在乳腺浸润性导管癌中的阳性率为90%(54/60),明显高于癌旁乳腺组织和导管原位癌的阳性率(P<0.05).乳腺浸润性导管癌Notch1蛋白的高表达与肿瘤的淋巴结转移(P=0.006)、病理学分级(P=0.001)和TNM分期(P=0.022)均呈显著正相关.结论 乳腺浸润性导管癌存在Notch1蛋白的高表达.Notch1蛋白高表达与乳腺癌的恶变演进有关.Notch1基因的表达可能影响乳腺癌的发生、发展.     

Notch1突变对HSC体外分化为T/B淋巴细胞的影响

目的:探讨Notch1信号传递水平对小鼠造血干细胞(HSC)体外分化为T/B淋巴细胞的影响。方法:应用表达Notch1配体Delta1的基质细胞OP9-DL与来源于小鼠胎肝和骨髓的Lin-HSC在体外共培养,检测Notch1基因突变对HSC在体外分化后B淋巴细胞或者CD4+CD8+细胞的比例。结果:Notch1基因点突变后Notch1受体结构发生改变,和特异性抗体以及配体的结合能力降低,导致信号传递能力下降。Notch1突变后,胎肝和骨髓HSC向B淋巴细胞分化过程未受影响,但是向T淋巴细胞的分化过程受到明显抑制,其中Notch1突变对胎肝HSC分化能力的影响高于骨髓HSC,分别被抑制44%和34%。结论:Notch1突变导致Notch1信号水平降低,对HSC向B淋巴细胞分化没有影响,但是能抑制向T淋巴细胞的分化。     

Rab5在胰腺癌细胞BxPC3中对Notch1活性的调节

目的 本研究拟阐明内吞调节蛋白Rab5在Notch活化中的作用.方法 用RNA干扰的方法抑制BxPC3细胞中Rab5蛋白的表达,用Western blot测定Notch1活性型Notch ICD的表达.用Wortmannin和LY294002抑制PI3激酶的活性,观察Notch活性的变化.结果 抑制Rab5蛋白的表达,或者抑制PI3激酶的活性后,Notch1的活性型Notch ICD的表达量均显著下降,同时BxPC3细胞的生长受到抑制.结论 在胰腺癌细胞BxPC3中内吞调节蛋白质Bab5和PI3激酶在Notch活化中起着关键的作用,提示Notch的活化依赖于内吞.     

非小细胞肺癌中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达及意义

目的 探讨Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义.方法 采用免疫组化SP法和原位杂交法分别检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达.结果 Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在非小细胞肺癌中阳性表达率分别为81.5%(53/65)、96.9%(63/65)、93.8%(61/65)、73.8%(48/65),均明显高于正常支气管上皮组织阳性表达率(P<0.05);NSCLC中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达均与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Notch1、HIF-1与VEGF蛋白间均正相关;Notch1蛋白与Notch1 mRNA的表达呈正相关.结论Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在NSCLC中均表达上调,提示在肺癌的发生、发展中可能起重要作用;检测NSCLC组织Notch1蛋白及mRNA可作为判断肿瘤侵袭与转移的重要指标.     

Notch1在前列腺癌细胞PC3中对其配体Jagged1表达的调控

目的探讨在前列腺癌细胞PC3中,Notch1和Jagged1对细胞生长的影响,及Notch1对其配体Jagged1表达的调控作用。方法通过siRNA干扰的方法分别抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达,用MTT法检测PC3细胞的生长;分别通过siRNA干扰和转染质粒的方法,抑制和促进PC3细胞中Notch1蛋白的表达,用Western blot检测Jagged1蛋白水平,用Real-timePCR检测Jagged1 mRNA水平。结果抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达后,PC3细胞的生长减慢;抑制Notch1的表达引起Jagged1的蛋白水平下降而过表达Notch1引起Jagged1的蛋白水平上升,同时,Jagged1蛋白水平与mRNA水平的变化不一致。结论Notch1和Jagged1对前列腺癌细胞PC3的生长有重要影响。Notch1可以调控其配体Jagged1的表达。     

人胚胎神经干细胞向神经元分化过程中Notch1基因的表达

目的 :探讨Notch1基因在全反式维甲酸 (ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法 :用不同浓度 (0 .5、1、5和 10 μmol/L)的ATRA在体外诱导人胚胎神经干细胞 ,7d后 ,做NSE免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。用 1μmol/L的ATRA诱导人胚胎神经干细胞 ,于诱导前、诱导 3d和诱导 7d,提取细胞的总RNA ,用半定量RT PCR法检测Notch1基因的表达。结果 :与对照组相比较 ,ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1)。其中 1μmol/L的ATRA诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例最高 ,为 (2 9.2 0± 1.0 9) %。Notch1基因在ATRA诱导后表达明显下调 (P <0 .0 0 1)。结论 :ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 ,Notch1基因在人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中表达量下调     

Notch1 modulates mesenchymal stem cells mediated regulatory T‐cell induction

Notch1 signaling is involved in regulatory T (Treg)‐cell differentiation. We previously demonstrated that, when cocultured with CD3⁺ cells, mesenchymal stem cells (MSCs) induced a T‐cell population with a regulatory phenotype. Here, we investigated the molecular mechanism underlying MSC induction of human Treg cells. We show that the Notch1 pathway is activated in CD4⁺ T cells cocultured with MSCs. Inhibition of Notch1 signaling through GSI‐I or the Notch1 neutralizing antibody reduced expression of HES1 (the Notch1 downstream target) and the percentage of MSC‐induced CD4⁺CD25^highFOXP3⁺ cells in vitro. Moreover, we demonstrate that FOXP3 is a downstream target of Notch signaling in human cells. No crosstalk between Notch1 and TGF‐β signaling pathways was observed in our experimental system. Together, these findings indicate that activation of the Notch1 pathway is a novel mechanism in the human Treg‐cell induction mediated by MSCs.     

乳腺癌和乳腺导管内增生性病变Notch1基因甲基化的检测及临床意义

Objective To explore the relevance between the promoter methylation status of Notch1gene and the invasive ductal carcinoma and ductal hyperplastic lesions of the breast.Methods Methylation status of Notch1 gene in human breast invasive ductal carcinoma(IDC,n=89),ductal carcinoma in situ (DOS,n=20),atypical ductal hyperplasia(ADH,,n=11)and usual ductal hyperplasia(UDH,n=20)were quantitatively evaluated by MALDI-TOF MS.The expression of Notch1 protein was detected by immunohistochemical stain(SP method).Results Positive expression rates of Notch1 protein in IDC and DCIS were 91.0%(81/89)and 75.0%(15/20),respectively,which were significandy higller than those 0f ADH(4/11)and UDH(30.0%.6/20;P＜0.05).Notch1 protein expression was correlated significantly with lymph node metastasis,pathological grades and TNM stages of IDC.The mean methylation levels of Notch1 gene at CpG_3,CpC 4.5 and CpG_8 significantly decreased in IDC group compared with those of DCIS.ADH and UDH groups(P＜0.0083).In breast carcinomas, the mean methylation rates of Notch1 gene at CpG-4.5,CpG-10.11,and CpG_14.15.16 loci in cases with axillary node metastasis were significantly lower than those without axillary node metastasis(P＜0.05):and the methylation rates at CpG_14.15.16 and CpG_18 lociin stage Ⅰ were lower than that in stage Ⅱ,further lower than that in stage Ⅲ(P＜0.05);and that in CpG_1.2,CpG_12.13 loci in grade Ⅰ(highly-differentiated group)were higher than that in grade Ⅱ(moderate-differentiated group)and grade Ⅲ(peody-differentiated group) (P＜0.05);and the methylation rates at CpG_3,CpG_8 and CpG_14.15.16 loci in ER+ PR+ HER2-group were lower than that in ER-PR-HER2+ group(P＜0.05).Conclusions There is an overall hypomethylation of Notch1 gene in breast invasive ductal carcinomas with corresponding over-expression of Notehl protein.This inverse correlation show that the alteration of protein expression result from hypomethylation oncogene Notch1,and this change may have important significance in breast tumorigenesis and the development.Specific hypomethylation at CpG_3,CpG_4.5 and CpG_8 loci of Notehl gene may play a role in the pathogenesis of breast carcinoma,suggesting the progression and/or malignant transformation from benign glandular lesions of the breast.