中国人遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1/hMSH2表达及其临床意义

目的探讨hMLH1和hMSH2表达对于中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)患者的临床意义。方法 利用免疫组织化学(免疫组化)的方法研究符合Amsterdam标准的22例典型HNPCC(Ⅰ组)、15例非典型HNPCC(Ⅱ组)、10例散发性结直肠癌(Ⅲ组)和10例良性疾病(Ⅳ组)患者的hMLH1和hMSH2表达情况。结果 hMLH1和(或)hMSH2表达缺失率在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别为64％、20％、10％和0;Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅲ组相比,差异有显著性意义(P<0.05);而Ⅱ组与Ⅲ组之间相比,差异无显著性意义(P=0.513)。结论 免疫组化检测错配修复基因的表达可能成为HNPCC的一种简单、重要的分子生物学诊断方法。     

hMLH1及hMSH2蛋白免疫组化结合微卫星不稳定性检测在遗传性非息肉病性结直肠癌家系筛选中的作用

目的 探讨hMLH1及hMSH2蛋白免疫组化结合微卫星不稳定性检测在遗传性非息肉病性结直肠癌家系筛选中的敏感性、特异性及临床应用价值。方法 对12例符合Amsterdam标准的HNPCC患者和16例散发性结直肠癌患者的肿瘤标本进行hMLH1及hMSH2蛋白免疫组化检查和微卫星不稳定性检测。结果 hMLH1及hMSH2蛋白免疫组化筛选HNPCC家系的敏感性为91．7％,特异性为87．5％;微卫星不稳定性检测的敏感性为100％,特异性为75．0％;两者结合敏感性为91．7％,特异性为93．8％。结论 hMLH1及hMSH2蛋白免疫组化结合微卫星不稳定性检测筛选HNPCC家系敏感性和特异性明显提高,而且方法简单、经济,适合在临床广泛应用。     

组织芯片检测技术在遗传性非息肉性结直肠癌家系筛选中的价值

目的研究组织芯片在遗传性非息肉性结直肠癌(HNPCC)家系筛选中的价值。方法将22例HNPCC家系中结直肠癌患者和15例散发性结直肠癌患者的肿瘤组织蜡块制作组织芯片,免疫组化方法检测hMLH1、hMSH2蛋白表达。结果常规免疫组化检测HNPCC组hMLH1或hMSH2阴性68.2%(15/22);散发性结直肠癌组hMLH1阳性14例、阴性1例(6.7%),hMSH2全部阳性。组织芯片检测HNPCC组hMLH1或hMSH2阴性77.2%(17/22);散发性结直肠癌组hMLH1阳性13例、阴性2例(13.3%);hMSH2全部阳性。应用常规免疫组化和组织芯片方法检测hMSH2其结果一致。对hMLH1常规免疫组化和组织芯片技术检测进行比较,P>0.05;差异均无统计学意义。结论组织芯片检测技术是一种高通量的筛选方法,适合于回顾性HNPCC家系筛选。     

hMLH1/hMSH2基因启动子变异在遗传性非息肉病性结直肠癌发生中的作用

目的 探讨hMLH1及hMSH2基因启动子变异在遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)发生中的作用。方法 PCR法扩增25例HNPCC患、20例散发性结直肠癌和10例非肿瘤患的hMLH1及hMSH2基因启动子序列，对PCR产物进行测序。对发现携带突变患的肿瘤标本进行hMLH1及hMSH2基因表达研究和微卫星不稳定(MSI)检测，同时用测序方法检测该患hMLH1及hMSH2基因编码序列的改变。结果55例检测样本中，C3．1及C3．2发现hMLH1启动子在-342位和-337位2处A插入变异，免疫组化检测该患hMLH1表达阴性，肿瘤MSI检测为MSI—H，而编码序列的检测未发现异常。结论 hMLH1／hMSH2基因启动子种系突变可能导致该基因的不表达，从而导致HNPCC结直肠癌的发生。错配修复基因编码序列正常的HNPCC患中可能存在该基因启动子突变。     

遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1和hMSH2蛋白表达与其临床病理特征及预后的关系

目的探讨错配修复(MMR)基因hMLH1和hMSH2的蛋白表达与遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)临床病理特征及预后的关系。方法应用免疫组化方法(Elivision-两步法)检测48例符合修订后的《Bethesda指南》的HNPCC患者中hMLH1和hMSH2蛋白的表达情况,并定义两者同时表达阳性为MMR蛋白表达,分析其表达与HNPCC临床病理特征及预后的关系。结果 hMLH1蛋白的表达缺失率为20.83(10/48),高于hMSH2蛋白的表达缺失率(8.33%,4/48),Ρ<0.05;MMR蛋白的表达阳性率为70.83%(34/48)。MMR蛋白表达与肿瘤的浸润深度相关(Ρ<0.05)。MMR蛋白表达缺失与表达正常者的总生存率分别为85.71%(12/14)和85.29%(29/34),两者生存曲线比较差异无统计学意义(Ρ>0.05)。结论 hMLH1蛋白的表达缺失率高于hMSH2蛋白,hMLH1和hMSH2蛋白表达缺失与肿瘤的浸润深度相关,与患者的预后无关。     

结直肠癌中hMLH1和hMSH2表达的临床意义

目的：探讨结直肠癌中hMLHl和hMSH2蛋白的表达的临床意义。方法：对山东省沂南县人民医院2007年2月-2010年2月间符合中国人HNPCC诊断标准的15例结直肠癌患者及同时期40例散发性结直肠癌患者的结直肠癌组织标本进行hMLH1和hMSH2蛋白检测,并对其临床病理资料进行回顾性分析。结果：15例HNPCC患者发病年龄〈50岁的4人。在结直肠癌发生的部位上,10发生在右半结肠,5例发生在左半结肠。病理类型上管状腺癌3例、黏液腺癌7例、混合癌5例。分化程度上高分化3例、中分化4例、低分化癌8例。HNPCC组中hMLH1／hMSH2蛋白阴性表达共9例,其中有8例癌灶位于右半结肠,7例病理为低分化。散发组中hMLH1／hMSH2蛋白阴性表达共6例。尚未发现hMLH1和hMSH2两种蛋白在同一病例中均为阴性表达者。结论：hMLH1和hMSH2的阴性表达与癌灶部位与病理分化高度相关;可作为HNPCC的临床初步筛查指标之一。     

遗传性非息肉病性结直肠癌家系临床及分子遗传学分析

目的探讨总结遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)的临床和分子生物学特征,提高临床诊断和治疗水平。方法分析总结温州地区12个HNPCC家系临床病理特征。用显微切割、微卫星不稳定性分析、免疫组织化学、直接DNA测序法,检测HNPCC患者肿瘤组织微卫星不稳定性状态,错配修复基因hMHL1和hMSH2蛋白水平表达及hMHL1和hMSH2基因种系突变。结果12个家系32例患者中,患第1癌的中位年龄45．2岁;75．0％的患者在50岁以前发病;51．1％的肿瘤位于脾曲近侧结肠,34．4％为多原发结直肠癌,53．1％为组织分化差的癌,68．8％为Dukes A、B期。12个家系中6个家系伴有7例肠外肿瘤患者;19例健在患者生存1～28年,13例死亡患者平均生存期6．4年。9例患者肿瘤组织均表现高度微卫星不稳定性,其中5例患者表现hMSH2或hMLH1蛋白失表达(5／9);5个家系中3个家系存在hMH;1或hMSH2突变(3／5),其中有2个新发现的突变。结论HNPCC有特定的临床病理特征;检测错配修复基因hMHL1和hMSH2序列对HNPCC家系的成员具有指导价值;微卫星不稳定性和错配修复蛋白失表达是HNPCC的重要特征,可作为测序前的筛选手段。     

微卫星不稳定结直肠癌hMLH1和hMSH2及hMSH6种系突变与hMLH1启动子甲基化检测

目的探究微卫星不稳定（MSI）结直肠癌患者的hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变特征和hMLH1启动子甲基化状态。方法对前瞻性收集的34例MSI结直肠癌患者检测其hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变，并研究其肿瘤的hMLH1启动子甲基化状态。结果34例MSI结直肠癌中。共检测到MLH1基因启动子的甲基化19例（55．9％）。19例MSI—H结直肠癌中检测到MLH1基因的甲基化14例（73．7％）；15例MSI—L结直肠癌检测到MLH1基因的甲基化5例（33．3％）；两组差异有统计学意义（P〈0．05）。全组共发现8个hMSH2和hMSH6基因的突变，其中hMSH6基因突变3个，hMSH2基因突变5个。结论中国人MSI结直肠癌错配修复基因突变（未测到MLH1基因突变）和MLH1基因启动子的甲基化检出率可能有别于国外MSI结直肠癌。     

典型和非典型遗传性非息肉病性大肠癌的研究

目的：研究中国人遗传非息肉病性大肠癌（HNPCC）的临床、病理及其hMLH1和hMSH2基因种系突变的特点。方法：随访13个典型HNPCC家系54例患者,并与19个非典型HNPCC家系的38例患者进行比较。对典型和非典型HNPCC各6个家系的先证者进行了hMLH1和hMSH2基因的PCR-SSCP检测,对异常者进行测序确定突变类型。结果：典型HNPCC盲肠、升结肠肿瘤占39.7％,横结肠肝区癌为5.0％;非典型组直肠癌占65.8％,2组差异无显著性意义。异时性多原发癌为11.5％,典型HNPCC患者的3、5、10年的生存率分别为64.0％、45.3％和31.2％,而非典型HNPCC组分别为54.4％、42.3％和26.8％,2组差异无显著性意义。12例先证者中,PCR-SSCP共检测到MLH111外显子（c3、c1）、hMLH1 12外显子（c8）、hMLH1 18外显子（c4）、hMSH2 11外显子（c13）、hMSH2 1外显子（c6）,hMSH2 13外显子（c11）和hMSH2 15外显子（c4）的异常条带。除MLH1 11外显子（c3）为内含子多态性外,6例（50％）发现7个外显子的突变,测序证实错义突变4处、插入突变7外,无义突变1处。结论：中国人的典型HNPCC是一种发病年龄早、近段结肠多见预后较好的大肠癌,而通过比较,发现中国非典型HNPCC与典型HNPCC非常相似。中国人的典型HNPCC家系的错配修复基因突变hMSH2多见,而非典型的hMLH1突变多见。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌hMLH1与hMSH2基因的种系突变研究

目的 探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）患hMLH1与hMSH2基因的种系突变特点。方法 对诊治的6个HNPCC家系的先证用聚合边反应（PCR）的方法扩增其hMHL1及hMSH2的35个外显子，SSCP方法检测其变异，对可疑突变进行自动测序以确定突变类型。结果 6例先证SSCP检测在3例患中发现4处异常条带，自动测序证实hMSH211外显子有1处插入突变和1处错义突变、13外显子有1处错义突变，1例在hMLH118外显子及hMSH215外显子均有插入突变。结论 中国人HNPCC的错配修复基因突变以hMSH2为主，插入造成的移码突变和错义突变仍为主要病理突变类型。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌临床及遗传学特征分析

目的分析中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)家系的临床及遗传性突变特点。方法收集整理符合中国人HNPCC诊断标准的31个家系资料,应用PCR及变性高效液相色谱分析(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)筛查hMLH1和hMSH2基因的突变,对DHPLC图形异常的样本进行测序。结果31个家系中共发生136例次恶性肿瘤(多原发肿瘤14例),其中结直肠癌106例次,占所有肿瘤患者的77．9%,诊断年龄均数为48．6±29．0岁；胃癌14例。肿瘤先证者中共检出分属于17个不同家系的23个碱基变异位点,经DNA序列分析,证实10个家系存在10个不同的碱基突变(10/31,32．9%),其中3个为同义突变未引起蛋白质序列的改变,另外7个为病理性改变,分别为错义突变、无义突变、移码突变。这10个突变中7个位点为首次报道。外显子区检测到5个已知SNP,内含子区检测到8个碱基改变。结论(1)符合中国人HNPCC标准家系约有1/3可检出hMLH1、hMSH2基因遗传性种系突变。(2)中国人HNPCC家系以左半结肠癌和直肠癌多见。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌家系错配修复基因突变的研究

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中hMLH1、hMSH2基因遗传性突变情况。方法取14个符合中国人HNPCC标准的HNPCC家系肿瘤先证者外周血DNA样本,聚合酶链反应扩增hMLH1、hMSH2基因共35个外显子,应用变性高效液相色谱技术(DHPLc)结合DNA测序法检测突变。结果14个家系中共发生41个大肠癌和19个肠外恶性肿瘤,其中胃癌是最常见的肠外恶性肿瘤类型。14个患者中检测到分属于9个家系的12个遗传性单个碱基改变,其中8％为无义突变,25％为错义突变,其余42％为单核苷酸多态,17％为内含子区的单碱基改变,8％为同义突变。结论(1)应用DHPLc成功检测到hMLH1、hMSH2基因杂合性突变。(2)符合中国人HNPCC标准家系约有1／3可检出hMLH1、hMSH2基因遗传杂合性突变,其中错义突变较多见。     

hMLH1 and hMSH2 gene mutation in Brazilian families with suspected hereditary nonpolyposis colorectal cancer

Background The aim of this study was to search for mutations in the humanmutS homolog 2 (hMSH2) and humanmutL homolog 1 (hMLH1) genes in 25 unrelated Brazilian kindreds with suspected hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC). Methods The families were grouped according to the following clinical criteria: Amsterdam I or II; familial colorectal cancer (CRC); an early age of onset of CRC in the proband only; or with at least one or two relatives who had HNPCC-related cancers; CRC in the proband only. All patients were studied with direct sequencing. Results Ten mutations were detected (10 of 25 [40%]); of nine different mutations, seven were novel. ThehMLH1 gene had a higher mutation detection rate thanhMSH2 (8 of 25 [32%] vs. 2 of 25 [8%]). Only 3 of these 10 families fulfilled the Amsterdam criteria. Two different polymorphisms were detected in thehMLH1 gene and four in thehMSH2 gene. Conclusions ThehMLH1 gene had a higher mutation detection rate thanhMSH2. The physician who deals with CRC must take into consideration the heredity issue with patients who present with an early age of onset or a familial history of CRC- or HNPCC-related cancers, including gastric cancer, even if they do not fulfill the former Amsterdam criteria.     

Erbliches Coloncarcinom ohne Polyposis (HNPCC) ohne Erfüllung der Amsterdam-Kriterien

Epidemiologic data suggest that an underlying genetic disposition can be detected in up to 10% of all colorectal cancer patients and autosomal dominantly inherited hereditary non-polyposis colorectal cancer (HNPCC) is the entity most frequently identified. It was described first by A. Warthin in 1895 in "Family G" and is characterized by a predisposition to an early onset of colorectal cancer and other intestinal or genitourinary tumors. We report the case of a 61-year-old woman with five different cancers. Although the strict Amsterdam Criteria were not fulfilled, molecular analysis revealed HNPCC; further genetic testing in the family confirmed that the 36-year-old and so far healthy son had inherited the germline mutation of his affected mother. Genetic testing in clinically suspected HNPCC cases is recommended for patients with colorectal cancer meeting the Amsterdam Criteria. In patients meeting one of Bethesda Criteria 2-7 without meeting the Amsterdam Criteria, germline mutation analysis is recommended only in MSI-positive tumors.     

单链构象多态性分析和变性高效液相色谱分析技术检测hMLH1和hMSH2基因突变的比较

目的比较单链构象多态性分析（SSCP）和变性高效液相色谱分析技术（DHPLC）应用于遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）分子遗传学诊断的灵敏性和特异性。方法应用PCR-SSCP和DHPLC方法分析经测序验证有序列变异的7个家系的所有成员的相应PCR扩增产物，分别计算SSCP和DHPLC的灵敏度和特异度。结果应用SSCP对hMLH1和hMSH2进行基因突变筛查的敏感性和特异性分别为51．6％和66．6％；而应用DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性则分别为100％和93．3％；两种方法进行基因突变筛查的结果差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性均高于SSCP，是理想的分子遗传学检测方法。     

Immunohistochemistry for hMLH1 and hMSH2: a practical test for DNA mismatch repair-deficient tumors.

Inactivation of deoxyribonucleic acid (DNA) mismatch repair genes, most commonly human mutL homologue 1 (hMLH1) or human mutS homologue 2 (hMSH2), is a recently described alternate pathway in cancer development and progression. The resulting genetic instability is characterized by widespread somatic mutations in tumor DNA, and is termed high-frequency microsatellite instability (MSI-H). Although described in a variety of tumors, mismatch repair deficiency has been studied predominantly in colorectal carcinoma. Most MSI-H colorectal carcinomas are sporadic, but some occur in patients with hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC), and are associated with germline mutations in mismatch repair genes. Until now, the identification of MSI-H cancers has required molecular testing. To evaluate the role of immunohistochemistry as a new screening tool for mismatch repair-deficient neoplasms, the authors studied the expression of hMLH1 and hMSH2, using commercially available monoclonal antibodies, in 72 formalin-fixed, paraffin-embedded tumors that had been tested previously for microsatellite instability. They compared immunohistochemical patterns of 38 MSI-H neoplasms, including 16 cases from HNPCC patients with known germline mutations in hMLH1 or hMSH2, with 34 neoplasms that did not show microsatellite instability. Thirty-seven of 38 MSI-H neoplasms were predicted to have a mismatch repair gene defect, as demonstrated by the absence of hMLH1 and/or hMSH2 expression. This included correspondence with all 16 cases with germline mutations. All 34 microsatellite-stable cancers had intact staining with both antibodies. These findings clearly demonstrate that immunohistochemistry can discriminate accurately between MSI-H and microsatellite-stable tumors, providing a practical new technique with important clinical and research applications.