吗啡依赖戒断大鼠海马区长时程增强变化研究

目的 应用在体电生理方法观察吗啡依赖戒断后大鼠海马CA1区长时程增强(LTP)的变化情况。方法 18只健康SD大鼠,随机分为吗啡依赖组、戒断组、盐水对照组,每组6只。建立大鼠吗啡依赖戒断模型,在制备模型基础上,采用在体脑立体定位胞外电生理记录技术检测海马CA1区LTP的变化情况。结果 与对照组相比,吗啡依赖组、戒断组大鼠在高频刺激(HFS)后,各时间点所记录的群体峰电位(PS)相对幅值显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 吗啡依赖戒断大鼠海马LTP减弱,提示LTP参与吗啡依赖戒断过程。     

海洛因急、慢性给药状态下大鼠海马CA1区生物电活动的记录

目的:记录海洛因慢性给药戒断期大鼠离体海马脑片和海洛因急性灌流正常大鼠离体海马脑片生物电活动,观察其特征性变化。方法:制作海洛因慢性给药戒断大鼠模型及其海马离体脑片,正常组大鼠海马脑片用两种浓度海洛因急性灌流,分别记录海马CA1区神经元的电活动。结果:慢性给药戒断状态:大鼠海马CA1神经元的被动电学性质与各组比较差异无显著性,但锋电位的半幅时程、10%-90%衰减时间显著缩短(P<0.05,P<0.01);给予1.6-2.0nA胞内电流刺激时,放电频率较对照组增加(P<0.01);CA1区神经元兴奋性突触后电位(EPSP)幅值显著增强(P<0.01)。急性灌流用药:0.3mmol.L-1海洛因灌流,使膜电位和阈值绝对值减小(P<0.05,P<0.01),锋电位的半幅时程、10%-90%衰减时间显著延长(P<0.05,P<0.01);膜斜率电阻增大(P<0.01),EPSP幅值显著下降(P<0.01)。结论:海洛因急、慢性给药状态下,大鼠海马CA1区生物电特性存在着明显的差别。     

海马 GDNFmRNA的表达参与大鼠吗啡戒断反应

目的：观察吗啡戒断大鼠侧脑室胶质细胞源性神经营养因子（glial cell derived neurotrophic factor，GDNF）反义寡脱氧核苷酸注射后对海马GDNFmRNA表达的影响。方法：SD大鼠侧脑室立体定位，皮下注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型，侧脑室微注射GDNF有义和反义寡脱氧核苷酸，纳洛酮催促戒断，应用原位杂交方法检测海马GDNFmRNA的表达。结果：侧脑室注射GDNF反义寡脱氧核苷酸能显著抑制大鼠吗啡戒断症状评分（n=t,p〈0．05）。吗啡依赖大鼠海马CA2区GDNFmRNA表达较对照组显著增加（n=3，P〈0．05），CA1和CA3区变化不明显；吗啡依赖大鼠纳洛酮（4mg／kg，岫催促戒断后海马CA1、CA2和CA3区GDNFmRNA表达较依赖组有增加趋势，但均没有显著差异心=3，P〉0．05）；吗啡依赖大鼠纳洛酮激发前24h侧脑室注射GDNF反义寡脱氧核苷酸能显著抑制吗啡依赖大鼠依赖和戒断后CA2区GDNFmRNA表达的增加（n=3，p〈0．05），而CA1和CA3区与戒断组大鼠相应区域相比没有差异；吗啡依赖大鼠纳洛酮激发前24h侧脑室注射GDNF有义寡脱氧核苷酸与戒断组大鼠相比海马CA1、CA2和CA3区GDNFmRNA表达均没有显著性差异（n=3，P〉0．05）。结论：在转录水平，海马CA2区GDNF表达的变化在吗啡依赖和戒断中可能起重要作用。     

当归芍药散活性部位JD-30对淀粉样β蛋白片段25-35抑制大鼠海马脑片CA1区长时程增强的改善作用

目的研究当归芍药散改善学习记忆能力的物质基础和作用机理。方法采用细胞外微电极记录技术,记录大鼠海马脑片CA1区群峰电位(PS)幅值和高频刺激诱发LTP后PS的增幅。结果用含当归芍药散活性部位JD-30(25,50和100mg.L-1)的人工脑脊液灌流大鼠海马脑片,其CA1区的PS幅值无明显变化。用相同浓度的JD-30孵育海马脑片90min以上并持续灌流,其CA1区高频刺激后的PS增幅与空白对照组相比无明显差异。而用Aβ25-35200nmo.lL-1处理的海马脑片CA1区高频刺激后的PS增幅受到明显抑制;若同时给予Aβ25-35和上述浓度的JD-30处理海马脑片,CA1区高频刺激后的PS增幅较Aβ25-35组升高,其中JD-30100mg.L-1组的PS增幅达到正常对照组水平。提示JD-30对正常海马脑片CA1区的基础突触传递和LTP没有影响,但可改善Aβ25-35所抑制的LTP。结论JD-30可改善神经突触可塑性,拮抗Aβ对LTP的抑制作用可能是其益智机制之一。     

丁螺环酮对吗啡戒断焦虑大鼠海马、杏仁核突触结构可塑性和CaMKⅡ的影响

目的獉獉:探讨丁螺环酮治疗吗啡依赖戒断焦虑的细胞和分子机制。方法獉獉:66只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组(对照组)、吗啡戒断焦虑组(模型组)、丁螺环酮治疗组(治疗组)。吗啡剂量递增皮下注射10 d自然戒断,于戒断1-3 d丁螺环酮灌胃治疗行高架十字迷宫实验后,取海马CA3区和杏仁核组织,用电镜体视学方法定量检测其各组突触的数密度(Nv)、面密度(Sv)、突触连接带平均面积(S),Western-blot技术检测其CaMKⅡ的含量和磷酸化水平。结果獉獉:与模型组比较,治疗组大鼠进入开放臂的次数和时间明显增加(P<0.01或P<0.05);海马CA3区和杏仁核突触的Nv和Sv显著降低、S增加(P<0.01或P<0.05),CaMKⅡ蛋白含量和β亚基磷酸化水平显著下调(P<0.01或P<0.05)。结论獉獉:逆转吗啡戒断焦虑大鼠海马、杏仁核突触结构的可塑性和CaMKⅡ分子的变化可能是丁螺环酮缓解吗啡戒断焦虑的重要细胞和分子机制。     

青风藤对吗啡成瘾小鼠学习与记忆能力的影响

目的：研究青风藤对吗啡成瘾小鼠学习与记忆能力的影响及可能机制。方法：通过Y-迷宫观察青风藤对吗啡成瘾小鼠学习与记忆能力的影响,观察海马形态研究青风藤对海马CA1区神经元的影响。结果：青风藤治疗组与吗啡戒断组小鼠的分辨学习及记忆保持能力有显著差异．小鼠海马CA1区神经元细胞数差异显著。结论：青风藤对吗啡戒断小鼠的分辨学习及记忆保持能力有极大提高．对吗啡戒断致小鼠海马CA1区神经元的损伤有一定的治疗作用。     

丙泊酚对大鼠海马CA1区突触传递长时程抑制的作用

目的研究丙泊酚对大鼠海马CA1区兴奋性突触反应及突触可塑性的影响。方法取3周龄Wistar大鼠,快速断头取脑,用振动切片机切取400μm厚的海马脑片,电刺激靠近海马CA1区的Schaffer纤维,用全细胞膜片钳技术记录CA1区锥体细胞的兴奋性突触后电流(excitatory post-synaptic current,EPSC)。循环液中加入不同浓度的丙泊酚,观察其对EPSC的影响。然后给与低频刺激(900pulse,3Hz)诱导长时程抑制(long-termdepression,LTD),并观察丙泊酚对LTD诱导的影响。结果丙泊酚呈剂量依赖性地抑制EPSC,其作用可被印防己毒素(picrotoxin)阻断;丙泊酚可易化由N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体介导的LTD的诱导。结论丙泊酚可影响大鼠海马CA1区的兴奋性突触传递和突触可塑性,从而对大鼠的学习和记忆产生影响。     

白藜芦醇对大鼠海马CA1区诱发癫痫样放电的影响

目的观察不同浓度白藜芦醇(resveratrol,Res)对癫痫大鼠海马CA1区场电位的影响,为临床研发抗癫痫新药提供理论依据。方法正常大鼠海马脑片灌流γ-氨基丁酸受体拮抗剂bicuculline引起癫痫样活动以及在正常大鼠右侧海马CA3区注射海人藻酸(KA)建立颞叶癫痫(TLE)大鼠模型,应用离体脑片细胞外场电位记录,刺激辐射层Schaffer侧支通路,在海马CA1区锥体细胞层记录群峰电位(PS)的变化。结果正常大鼠海马脑片CA1区锥体细胞记录到的场电位为单个PS,分别灌流含有低、中和高剂量(分别为5、15和50μmol.L-1)Res的ACSF,PS幅度均无明显变化(n=8,P>0.05)。灌流bicuculline(30μmol.L-1)后,记录到的场电位为多个PS的痫样电位,在此基础上灌流低和中剂量的Res,PS幅度和数目没有明显改变(n=8,P>0.05);而灌流高剂量的Res,前4个PS幅度均有明显降低(n=8,P<0.01),PS数目也有明显减少(n=8,P<0.01)。在TLE模型大鼠海马脑片上记录到的场电位也为多个PS的痫样电位,灌流低和中剂量的Res,PS幅度和数目没有明显改变(n=6,P>0.05);灌流高剂量Res,前4个PS幅度均有明显降低(n=6,P<0.01),PS数目也有明显减少(n=6,P<0.01)。结论高剂量的Res能部分抑制大鼠海马CA1区诱发癫痫样放电活动。     

石杉碱甲增强大鼠海马脑片CA1锥体神经元的兴奋性突触传递

目的:观察石杉碱甲(Hup-A)对海马CA1锥体神经元兴奋性突触传递的影响,以探讨其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制。方法:应用大鼠海马脑片CA1锥体神经元细胞内记录技术,观察Hup-A对大鼠海马CA1锥体神经元膜电性质和刺激Schaffer侧支诱发的兴奋性突触后电位(EPSP)的影响。结果:(1)Hup-A(1μmol/L)灌流15min对CA1锥体神经元的膜电性质没有显著性影响。(2)Hup-A(0.3～3.0μmol/L)浓度依赖性使EPSP幅度升高、时程延长、曲线下面积增大,该作用可被阿托品(10μmol/L)预处理取消。(3)Hup-A对外源性谷氨酸诱导的去极化反应无明显影响。结论:Hup-A可增强CA1锥体神经元的兴奋性突触传递,其增强突触传递作用与M型乙酰胆碱受体激动有关。     

酸枣仁皂甙A对青霉素钠诱发大鼠海马CA1区过度兴奋的抑制作用

目的：观察中药酸枣仁皂甙A对青霉素钠诱导产生的大鼠海马脑片CA1区兴奋性放电的抑制作用。方法：细胞外记录离体大鼠海马脑片CA1区锥体细胞层群体峰电位。结果：青霉素钠500、1000和2000kU/L可剂量依赖地诱导海马脑片上CA1区神经元的兴奋。苯巴比妥钠0．02－0．05g/L和酸枣仁皂甙A0．5－0．10g/L都可以剂量依赖性地抑制这种青霉素钠诱发的兴奋反应。结论：高剂量的酸枣仁皂甙A能够抑制青霉素钠诱导的海马CA1区兴奋性电位。群峰电位（PS）的个数和第一个峰电位的幅度受到的抑制较明显,而兴奋性突触后场电位的变化不大。     

气体信号分子NO对可卡因戒断所致的大鼠成瘾记忆的影响

目的一氧化氮(NO)作为一种内源性气体信号分子,在中枢神经系统发挥广泛的生物学效应。有研究报道NO参与可卡因等药物成瘾的形成过程。近年来的研究发现,可卡因成瘾戒断会导致伏隔核(NAc)区突触表面的AM-PA受体表达上调,而这种上调被认为与可卡因的行为敏化的维持有关。然而,NO是否也在可卡因成瘾的戒断行为中发挥重要作用则尚未见报道。方法采用Western blotting技术结合脑片膜片钳和场电位记录方法,研究NO在可卡因成瘾戒断所致大鼠成瘾记忆中的作用及其机制。结果可卡因戒断导致大鼠NAc区突触部位GluR1和GluR2亚基的蛋白表达出现不成比例的上调,nNOS的表达、NO的含量,以及NSF的亚硝基化水平均有所增加。外源性使用NO供体可增加戒断大鼠NAc区的NSF亚硝基化水平并选择性上调突触部位GluR2的含量,逆转戒断后NAc区的突触可塑性变化。另外,外源性给予NO供体和亚硝酸钠均可通过增加NAc区NSF与GluR2的结合能力来阻断戒断后大鼠的行为敏化。结论可卡因戒断引起的NAc区NSF亚硝基化水平和突触部位GluR2亚基表达增加是大脑出现的一种内源性代偿机制,从而限制机体对可卡因的长时程异常行为反应。     

钙蛋白酶抑制剂calpeptin对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用

目的通过观察电生理学和神经元凋亡的变化,研究钙蛋白酶抑制剂calpeptin对大鼠离体海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。方法40片SD大鼠海马脑片随机分为两组:对照组和calpeptin组。根据人工脑脊液中calpeptin的浓度,再细分为1μmol.L-1组、10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组,每组8片脑片。采用细胞外记录技术观察calpeptin对大鼠离体海马脑片在缺氧无糖条件下顺向群峰电位(orthodromicpopulationspikes,OPS)及缺氧损伤电位(hypoxicinjurypotential,HIP)变化的影响,采用TUNEL法观察缺氧无糖损伤后海马脑片CA1区锥体细胞凋亡情况及calpeptin对它的影响。结果10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组HIP出现率及海马CA1区锥体细胞层凋亡细胞数减少,OPS恢复率和OPS恢复程度与对照组比较提高。而10μmol.L-1组、100μmol.L-1组和200μmol.L-1组之间各项指标差异无显著性。结论(10～200)μmol.L-1calpeptin可以减轻大鼠海马脑片的缺氧无糖损伤,其机制可能与calpeptin减少海马CA1区神经元凋亡有关。     

四逆散干预创伤后应激障碍及睡眠障碍大鼠海马的超微结构研究

目的研究四逆散对创伤后应激障碍导致大鼠睡眠障碍的干预作用。方法按照体重将大鼠随机分为5组,每组10只:空白对照组、模型组、阴性对照组、阳性对照组、实验组。除了空白对照组以外,其他4组动物均制备模型。空白对照组和模型组不给药,阴性对照组灌胃等量0.9% NaCl,阳性对照组灌胃盐酸帕罗西汀溶液0.42 mg·m L^-1,实验组灌胃四逆散水煎液(含生药0.24g·mL^-1)。于应激造模前1 h,每组大鼠灌胃给药10 mL·kg^-1,每天灌服1次,共计7 d。用透射电镜观察比较各组大鼠给药前后的海马CA1区、CA3区超微结构改变。结果空白对照组的海马CA1、CA3区神经元突触结构清晰,突触间隙明显,突触小泡可见。与空白对照组比较,模型组的海马CA1、CA3区神经元突触结构明显改变,突触小泡减少,突触结构不清晰。与模型组比较,阴性对照组变化与其相似,提示0.9%NaCl灌胃对大鼠没有产生明显的影响。与阴性对照组比较,阳性对照组和实验组的海马CA1神经元突触结构明显恢复,且2组变化相似。结论用4万倍透射电镜观察的创伤后应激障碍所致睡眠障碍大鼠的海马CA1、CA3区超微结构特征性强。     

噻吩诺啡对大鼠海马区突触可塑性的影响

目的考察噻吩诺啡慢性处理对大鼠海马区突触可塑性的影响,探讨药物对学习记忆(认知功能)的作用特点。方法大鼠噻吩诺啡慢性处理后,通过电生理学方法测定海马齿状回LTP的变化和免疫组化方法测定海马区学习记忆相关蛋白突触素含量的变化反映海马突触功能可塑性;通过电镜观察突触结构的超微变化并测定突触界面结构参数反映海马突触结构可塑性变化。结果①各药物慢性处理5 d,噻吩诺啡租大鼠在给予高频串刺激后,反映LTP现象的PS幅值显著增高至基线的(278±11)%,吗啡组大鼠为基线的(193±3)%,对照组为(152±6)%。②各处理大鼠在3 d,5 d海马脑区突触素的含量无明显变化;在8 d,与吗啡组比较,噻吩诺啡组大鼠海马突触素含量的明显升高(P<0.05),吗啡组大鼠海马突触素的含量与盐水对照组比较出现降低(P<0.05)。③各药物慢性处理14 d,噻吩诺啡组大鼠海马CA1区神经元胞核圆,核膜结构较清晰,极少数线粒体、内质网轻度扩张,肿胀;吗啡组大鼠海马CA1区神经元胞核大而圆,部分神经细胞核膜呈节段性结构不清楚,模糊,胞浆内线粒体及粗面内质网丰富,但有部分线粒体结构模糊,嵴消失,甚至空泡变性;盐水对照组大鼠海马CA1区结构正常。④各药物慢性处理14 d,与对照组相比,吗啡组、噻吩诺啡组三组大鼠突触活性区长度减小(P<0.05),吗啡组的PSD厚度明显减小(P<0.01);与吗啡组相比,噻吩诺啡组大鼠的PSD厚度增加及突触活性区长度增加(P<0.05),其他突触界面结构参数组间差异无显著性(P>0.05)。结论噻吩诺啡慢性处理对突触可塑性有影响,但其损害程度远小于吗啡,这可能是噻吩诺啡的低依赖性且区别于吗啡的突触机制之一。     

急性吗啡依赖大鼠脑内G_(i2)蛋白的表达

目的研究急性吗啡成瘾后大鼠腹侧背盖区(Ventral tegmental area,VTA)、伏隔核(Nucleus accumbens,NAc)、前额皮质(Prefrontal cortex,PC)、海马(Hippocampus)及去甲肾上腺能神经中枢蓝斑(Locus coeruleus,LC)五个脑区Gi2蛋白的改变,探讨急性吗啡成瘾的可能机制。方法18只SD大鼠随机分为三组,每组6只,分别是急性吗啡成瘾组、急性吗啡戒断组、空白对照组。吗啡成瘾组和戒断组腹腔注射吗啡,直到吗啡成瘾模型建立。戒断组腹腔注射纳络酮5mg/kg,作用30min后断头处死各组大鼠。取出脑组织,进行冰冻切片。用免疫组化技术检测NAc、PC、LC、VTA和Hippocampus五个脑区相对Gi2蛋白水平。结果急性吗啡成瘾组和急性戒断组与空白对照组相比,NAc区Gi2蛋白水平有明显降低(P<0.01),其它脑区则未发现明显的改变。结论急性吗啡成瘾可引起大鼠脑内Gi2蛋白水平发生改变,NAc区Gi2蛋白水平有明显降低,其它脑区则未发现明显的改变。Gi2蛋白水平的改变可能是吗啡耐受和依赖潜在的分子机制。     

依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响

目的 探讨依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响.方法 将32只Wistar大鼠海马脑片均分为四组:脂肪乳剂组;10μM依托咪酯组;荷包牡丹碱+10μM依托咪酯组;士的宁+10μM 依托咪酯组.记录用药前和40 min后膜钳制电压为-70 mV时的兴奋性突触后电流(EPSC)幅值.结果 在膜钳制电压为-70 mV时,脂肪乳剂对CA1区锥体神经元细胞EPSC幅值无明显影响,而10μM依托咪酯可明显降低EPSC幅值(P＜0.05).应用荷包牡丹碱预孵脑片可完全消除10μM依托咪酯对大鼠海马CA1区EPSC值的抑制作用(P＜0.05).在应用士的宁预孵脑片后,10μM依托咪酯可使EPSC值下降约16.2％;但与依托咪酯组相比,该抑制作用被明显削弱(P＜0.05).结论 依托咪酯可能主要通过增强突触 γ-氨基丁酸A受体功能而抑制兴奋性突触活动.甘氨酸受体在其中亦起到一定的调节作用.     

脱瘾扶正康对吗啡依赖大小鼠戒断症状的治疗作用

目的：观察及评价中药制剂脱瘾扶正康对吗啡依赖大小鼠戒断症状的治疗作用。方法：以剂量递增法形成吗啡依赖大小鼠模型,ｉｐ纳洛酮进行催促或自然戒断后,记录成瘾动物的戒断症状及体重变化,所得数据经统计学处理后进行评价。结果：脱瘾扶正康低、中、高三个剂量组均可明显降低成瘾大鼠纳洛酮催促戒断及自然戒断泊总分值,减少成瘾小鼠的跳跃反应次数,对吗啡依赖大、小鼠的体重下降有不同程度的缓解作用。脱瘾扶正康对吗啡依赖大     

吗啡依赖对小鼠海马内一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的·· :探讨吗啡依赖对小鼠海马不同亚区一氧化氮合酶(NOS)活性的影响。方法·· :以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型 ,采用还原型辅酶Ⅱ -黄递酶(NADPH -d)组织化学法显示吗啡依赖组、纳洛酮催促戒断组和正常对照组小鼠海马CA1区、CA3区和齿状回NOS阳性神经元。结果·· :与对照组相比 ,吗啡依赖组和纳洛酮催促戒断组海马CA1区和齿状回NOS阳性神经元的数目均明显减少 (P<0.01) ,纳洛酮催促戒断组更为明显 ,而在CA3区无明显改变。结论·· :吗啡依赖和纳洛酮催促戒断小鼠海马CA1区和齿状回NOS活性降低 ,提示NO合成的能力下降 ,戒断期下降更明显。这些变化可能是吗啡依赖造成学习记忆功能下降的原因之一。     

新生大鼠海马脑片培养方法

目的　建立新生大鼠海马脑片体外长期培养方法。方法　取出生后 10d的新生大鼠海马 ,切成30 0 μm厚的脑片 ,转至带有微孔膜插件的培养皿中进行培养。培养期间进行形态学观察 ,并通过MTT法鉴定组织活力 ,免疫组化法观察胶质细胞对损伤的反应 ,电生理反应以检测神经细胞功能。结果培养海马脑片逐渐变薄 ,5d后结构清晰 ,细胞形态完整 ;MTT法显示培养 4 0d内的海马组织均能保持高摄入MTT能力 ;在Schaffer侧枝给予单脉冲刺激 ,于CA1区能接收到完整的群峰电位 ;谷氨酸导致胶质细胞抗胶质纤维酸性蛋白高表达。结论　本方法培养 4 0d的海马脑片具有正常的活力和功能。     

吗啡短期戒断时大鼠伏核TRPV1受体对兴奋性突触后电流调节功能的变化

目的：研究吗啡短期戒断后,TRPV1受体功能变化对大鼠伏核中等大小有棘神经元接受的自发性兴奋性突触后电流的影响。方法：20只sD大鼠随机分配为对照组和吗啡组,每天分别接受10mg·kg-1的盐酸吗啡和生理盐水腹腔注射,连续5d。在自然戒断的d3制作伏核脑片,采用红外可视全细胞膜片钳记录技术,检测对照组和吗啡组大鼠的TRPV1受体功能变化对伏核中等大小有棘神经元接受的自发性兴奋性突触后电流的频率及幅度的影响。结果：（I）脑片灌流足量TRPV1受体激动剂capsaicin（CAP）后,对照组和吗啡组自发性兴奋性突触后电流的频率分别为基线水平的138．9±s5．3（％）和176．3±s8．8（％）,两组差异显著（P〈0．05）;幅度分别为基线水平的的101．9±s2．2（％）和103．9±s2．3（％）,无显著差异（P〉0．05）。（2）吗啡组脑片依次灌流TRPV1受体拮抗剂capsazepine（CPZ）及激动剂CAP后,记录到自发性兴奋性突触后电流的频率分别为基线水平的99．1±s1．8（％）和101．2±s0．9（％）,两组无显著差异（P〉0．05）。结论：大鼠反复吗啡暴露短期戒断时伏核TRPV1受体功能增强。