弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达的影响

目的探讨弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝（NF）mRNA表达和细胞免疫水平的影响。方法将4周龄雄性SD大鼠随机分成2组：弓形虫感染组（A组）腹腔感染弓形虫速殖子2×10^2／ml悬液2ml;正常对照组（B组）腹腔注射灭菌生理盐水2ml。感染弓形虫速殖子9周后,应用逆转录聚合酶链反应检测大鼠大脑组织中高分子量NF（NF—H）、中分子量NF（NF—M）和低分子量NF（NF—L）mRNA表达水平;流式细胞术检测大鼠外周血CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞;ELISA测定其血清IFN-γ、TNF-α、IL-4等细胞因子。结果大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF．LmRNA下降为正常对照组的64％（P〈0．01）;NF—M为96％（P〉0．05）;NF—H为89％（P〈0．05）。感染组大鼠的CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞与正常对照组相比,差异均无统计学意义（P均〉0．05）;感染组大鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4等细胞因子的水平均高于正常对照组大鼠水平（P〈0．05）。结论弓形虫感染可导致大鼠脑组织中NF亚单位mRNA表达水平的下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平的升高。     

PvMSP1对树突状细胞分化成熟和功能的影响

目的 目的 观察间日疟原虫裂殖子主要蛋白1 （PvMSP1） 对树突状细胞 （DC） 分化成熟和功能的影响, 并探讨该蛋白通 过Toll样受体 （TLR） 通路活化DC的机制。方法 方法 选择不同剂量的PvMSP1 （1.0、 10.0、 100.0 μg/ml） 体外刺激人单核细胞来 源的DC, 采用流式细胞术分析DC成熟性相关分子CD83、 CD86、 HLA?DR的表达变化; ELISA检测DC培养上清中IL?10、 IL?12 的表达水平; RT?PCR检测DC TLR4、 TLR9 mRNA的表达水平; MTT法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖的能力。同时选择未 刺激的DC作为阴性对照组, LPS刺激的DC作为阳性对照组。对所得数据进行方差分析和q检验。结果 结果 与未刺激组比 较, LPS诱导组CD83、 CD86、 HLA?DR的百分含量均增加, PvMSP1诱导组CD83、 CD86、 HLA?DR的表达也均升高 （P均 < 0.05）; LPS诱导组IL?10、 IL?12的表达量明显增加 （P < 0.01）, PvMSP1诱导组IL?10、 IL?12的表达量也均增加 （P均 < 0.05）; LPS组DC TLR4 mRNA的表达增加 （P < 0.05）, TLR9 mRNA的表达无明显变化 （P > 0.05）, PvMSP1诱导组DC TLR4 mRNA 的表达增加 （P < 0.01）, TLR9 mRNA无明显变化 （P > 0.05）; DC能够刺激自体淋巴细胞增殖。结论 结论 PvMSP1具有促进DC 分化成熟的作用, 且经其诱导成熟的DC具备抗原递呈功能; PvMSP1可能经TLR4通路而非TLR9通路诱导DC成熟。     

感染旋毛虫小鼠不同时期TLR2/TLR4 mRNA表达量及血清炎性因子的变化

目的 探讨旋毛虫感染对小鼠不同组织细胞TLR2/ TLR4（Toll样受体）表达量及血清炎性因子的影响.方法 分别取感染前、后不同时期小鼠心肌、肺及腹腔巨噬细胞,应用半定量PCR方法检测TLR2/ TLR4 mRNA相对表达量,同时应用ELISA方法对血清相关炎性因子进行检测.结果 随着旋毛虫感染时间的变化,TLR4和TLR2在心肌、肺和腹腔巨噬细胞上的表达略有不同,但大致呈双峰状.旋毛虫感染初期4d左右,TLR2/ TLR4 mRNA表达均有不同程度升高,之后降低,14 d左右,心肌与肺TLR升高,巨噬细胞TLR则继续下降,在21 d左右,心肌TLR表达量达到最高值,且与对照组差异显著（P＜0.05）,肺组织TLR呈下降趋势,巨噬细胞TLR表达升高,之后下降并趋于稳定.感染鼠的血清中炎性因子IL 2和NO的表达量显著升高（P＜0.05）,而TNF-α、IL-10和IL-12的表达量则显著降低（P＜0.05）,IL-6的表达量变化不明显.结论 旋毛虫感染可引起小鼠心肌、肺和巨噬细胞上的Toll样受体TLR2/TLR4表达发生变化,继而调节相关细胞因子分泌也发生变化,这种变化与旋毛虫生活史不同阶段抗原及其引起的宿主免疫反应和组织器官损伤具有一定相关性.     

TLR4基因表达及TNF-α在老年大鼠多器官功能障碍综合征中作用的研究

目的探讨Toll样受体4基因（TLR4）与TNF-α在老年大鼠多器官功能障碍综合征（MODSE）发病机制中的作用.方法20月龄和3月龄SD大鼠各40只,分别设为老年组及青年组,予油酸（OA）0.25ml/kg和脂多糖（LPS）3.5mg/kg分次静脉注射（间隔4h）,建立二次打击MODSE和青年多器官功能障碍综合征（MODSY）模型.观察对照组及伤后2、6、24h肺、心、肝、肾的病理改变及功能变化,检测肺、心、肝和肾组织中TLR4 mRNA表达及TNF-α含量.结果OA/LPS二次致伤能够导致青年及老年鼠MODS,其中肺脏损害出现最早最重,在同一时相点,老年鼠脏器损害重于青年鼠（P＜0.05～0.01）.致伤后肺、心、肝和肾组织中TLR4 mRNA表达均显著升高（P＜0.05～0.01）,以肺组织中表达最高,2h达峰值,心、肝、肾组织中于6h达峰值;各组织中TNF-α含量均显著升高（P＜0.05～0.01）,以肺组织中升幅最大.在相同时相点老年鼠各组织中TLR4 mRNA表达及TNF-α含量高于青年鼠（P＜0.05～0.01）.结论OA/LPS致伤后老年鼠肺组织中TLR4 mRNA表达及TNF-α水平迅速升高,在MODS发病机制中起重要作用,有可能是MODSE过程中肺损伤出现最早最重的重要原因.     

慢性弓形虫感染对大鼠海马神经细胞凋亡周期及caspase-3与细胞色素C蛋白表达的影响

目的观察弓形虫慢性感染对大鼠海马神经细胞周期、细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和细胞色素C(Cytc)表达的影响。方法将20只成年雄性SD大鼠随机分成2组:弓形虫感染组和正常对照组。弓形虫感染组每只大鼠腹腔注射纯化弓形虫速殖子2×107/ml悬液2ml;正常对照组大鼠每只腹腔注射2ml灭菌生理盐水。感染10周后应用流式细胞术检测大鼠海马神经细胞周期和细胞凋亡,罗丹明123染色检测其线粒体膜电位;应用免疫组化法检测海马caspase-3和Cytc蛋白表达。结果弓形虫感染10周后,大鼠海马神经细胞凋亡率为(49.3±13.6)%,与正常对照组(40.1±11.2)%相比较,差异有统计学意义(P0.05),G0/G1期细胞百分率增高(P0.05),出现G0/G1期阻滞,S期细胞减少(P0.05);感染组线粒体膜电位为(22.1±6.8)%,比对照组的(25.4±9.4)%低(P0.05);caspase-3和Cytc蛋白表达则均显著增高(P0.05)。结论弓形虫慢性感染可能导致大鼠海马神经细胞凋亡,进而引起一定的认知功能障碍。     

弓形虫感染对大鼠海马BDNF和NMDA表达的影响

目的观察弓形虫慢性感染对大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基天冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR2A、NR2B表达的影响。方法将4w雄性Wistar大鼠随机分成3组:A组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×107/mL;B组腹腔感染2 mL弓形虫速殖子2×105/mL和C组正常对照腹腔感染2 mL灭菌生理盐水。4w大鼠感染弓形虫速殖子9w后,应用免疫组化染色、原位杂交技术和图像处理方法分析海马BDNF,CA1、CA3和齿回状NR2A和NR2B的表达。结果BDNF的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠免疫组化海马BDNF阳性染色颗粒均高于对照组,分别为(54.27±23.18)、(50.39±19.34)和(44.68±22.74)mm2(P<0.05);原位杂交显示弓形虫感染A组和B组大鼠脑组织中BDNF mR-NA表达均增加,海马阳性杂交信号高于对照组,为(0.13±0.02)、(0.12±0.02)和(0.09±0.01)(P<0.05);NR2A蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA3区表达的免疫反应灰度值较正常组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),而在CA1区和齿状回表达的免疫反应灰度值与对照组相比较差异均无显著性(P>0.05)。NR2B蛋白的表达:弓形虫感染A组和B组大鼠在CA1和CA3区表达的免疫反应灰度值分别与对照组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);而在齿状回表达的免疫反应灰度值差异无显著性(P>0.05)。结论弓形虫慢性感染大鼠海马组织BDNF和BDNF mRNA表达增强,弓形虫感染可影响其海马NMDA受体的表达。     

弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化

目的 观察弓形虫感染大鼠外周血T淋巴细胞亚群及干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-4（IL-4）动态变化。 方法 将54只清洁级Sprague-Dawley（SD）成年大鼠随机分成9组,其中8组每鼠腹腔注射经纤维素-11（CF-11）纯化的活弓形虫速殖子悬液2 ml（2×10⁵/L）。分别于弓形虫感染后1、3、7、14、28、35、42、60 d时取大鼠外周全血,流式细胞术检测T细胞亚群变化,ELISA检测外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4动态变化。对照组腹腔注射2 ml生理盐水。 结果 T淋巴细胞亚群CD8+水平在感染弓形虫后3 d（14.22%）、7 d（14.93%）、14 d（16.08%）均显著低于正常水平（23.08%）（P＜0.05）,至感染后28 d恢复正常水平,而CD4+水平在整个感染过程中无明显变化。IFN-γ和IL-4水平在感染后第7 d分别升高至6.73 pg/ml和6.91 pg/ml（P＜0.05）,至感染60 d仍高于正常水平;TNF-α至感染后28 d（14.37 pg/ml）及60 d均高于正常水平（10.81 pg/ml）（P＜0.05）。 结论 弓形虫感染后大鼠外周血CD8+水平一度降低,28 d后恢复正常,CD4+无明显变化,IFN-γ、IL-4和TNF-α均高于正常水平,但出现时间有差异。     

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TLR4表达的影响

目的 探讨眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑组织中TLR4蛋白表达的影响及作用机制.方法 健康雄性SPF级Wistar大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组.CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型.RT-PCR及免疫组化方法检测大鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA和蛋白表达的变化.结果 与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA和蛋白水平均显示出高表达(P＜0.01),眼针组与模型组相比,TLR4 mRNA和蛋白表达则下调(P＜0.05).结论 眼针抑制脑皮层组织中TLR4的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一.     

CD47及其配体在孕期弓形虫感染小鼠中的表达

目的　观察孕早期弓形虫感染小鼠中分化簇CD47及其配体信号调节蛋白α（SIRPα）和血小板反应蛋白1（TSP⁃1）在孕中、晚期的动态表达。方法　以C57BL/6J小鼠（6～8周龄）构建孕早期弓形虫感染小鼠模型,将孕鼠随机分成正常对照组和感染组,每组10只。感染组孕鼠于孕6.5 d（Gd6.5）时腹腔注射150个弓形虫速殖子,正常对照组孕鼠同一时间腹腔注射等体积生理盐水。于Gd12.5、Gd18.5时,收集各组孕鼠子宫和胎盘组织,并记录妊娠状态结局。通过苏木精⁃伊红（HE）染色观察两组孕鼠子宫、胎盘组织Gd12.5和Gd18.5时病理损伤,采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测各组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα、TSP⁃1、主要表面抗原1（SAG1）及γ干扰素（IFN⁃γ）、白细胞介素2（IL⁃2）、IL⁃4和IL⁃13 mRNA表达水平,采用免疫组织化学技术检测CD47、SIRPα和TSP⁃1在孕鼠子宫、胎盘组织中的表达水平。结果 　与正常对照组相比,感染组孕鼠孕期出现弓背、耸毛、颤栗和精神萎靡状态,个别出现阴道流血和流产等现象。HE染色结果显示,感染组孕鼠子宫、胎盘组织均出现不同程度炎症细胞浸润、淤血和坏死等病理损伤。Gd12.5和Gd18.5时,感染组孕鼠流产率均较对照组升高（[χ2] = 20.405、28.644,P 均< 0.001）。qPCR检测结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠胎盘组织中 CD47、SIRPα、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[F′（F）= 37.511、29.337、97.343、53.755、67.188、21.145、8.658、13.930,P均< 0.001];与对照组相比,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1表达水平升高（P 均< 0.01）,而Gd18.5时表达降低（P 均< 0.001）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;此外,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠胎盘组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13表达下降（P 均< 0.001）。Gd12.5和Gd18.5时正常对照组和感染组孕鼠子宫组织中 CD47、TSP⁃1、SAG1、INF⁃γ、IL⁃2、IL⁃4和IL⁃13表达水平差异均有统计学意义[H （F′、F）= 14.951、25.977、18.711、48.595、39.318、14.248、15.468,P 均< 0.01];与正常对照组相比,Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中CD47和TSP⁃1表达水平均升高（P 均< 0.01）,但SIRPα表达无变化（P > 0.05）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中均有SAG1 表达（P 均< 0.01）;Gd12.5和Gd18.5时感染组孕鼠子宫组织中INF⁃γ和IL⁃2表达水平均升高（P 均< 0.001）,IL⁃4和IL⁃13 表达水平下降（P 均< 0.001）。相关性分析显示,Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ（rs = 0.735）、IL⁃2（rs = 0.655）表达水平呈正相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = -0.689）、IL⁃13达水平（rs = -0.795）表呈负相关（P 均< 0.05）;Gd18.5时胎盘组织中CD47表达水平与IFN⁃γ表达水平（rs = -0.745）、IL⁃2（rs = -0.816）呈负相关（P 均< 0.05）,与IL⁃4（rs = 0.704）、IL⁃13表达水平（rs = 0.802）呈正相关（P均< 0.05）。免疫组织化学染色结果显示,Gd12.5和Gd18.5时正常对照组孕鼠子宫、胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1均呈弱表达;Gd12.5时感染组孕鼠胎盘组织中CD47、SIRPα和TSP⁃1呈强表达,子宫组织中CD47和TSP⁃1呈强表达。结论　孕早期弓形虫感染可致小鼠孕中、晚期母胎界面出现CD47及其配体SIRPα和TSP⁃1异常表达,可能与虫体在母胎界面免疫逃逸有关。     

刚地弓形虫感染对雄性大鼠生殖激素及其受体影响的动态观察北大核心CSCD

目的观察雄性大鼠慢性感染弓形虫后血清及睾丸局部促黄体生成素（LH）、睾酮（T）水平及其受体的动态变化,探讨弓形虫感染对大鼠生精细胞损伤及生精过程的影响。方法选用9～10周龄雄性SD大鼠88只,随机分为对照组和弓形虫感染组。弓形虫感染组大鼠腹腔注射1×10^4个速殖子/只。对照组注射等量生理盐水。于感染前和感染后第3、6、9、12、……和30d两组各取4只大鼠,采用放射免疫法检测大鼠血清LH、T以及睾丸局部T水平的动态变化,采用免疫组化sABC法检测睾丸LH受体（LHR）和T受体（AR）的变化,并对睾丸组织进行病理学观察。结果整个实验期内弓形虫感染组大鼠血清LH[（29．3±3．3）mIU／m1]与对照组[（25．5±2．75）mIU／ml]差异无统计学意义（P〉0．05）;感染组大鼠T水平尤其是睾丸局部T水平在急性期[（238．3±38．9）ng／d1]较对照组[（915．4±119．3）ng／dl]显著下降（P〈0．01）,之后血清T逐渐升高,实验末期恢复至对照组水平（P〉0．05）,睾丸局部T仍维持低水平（P〈0．01）。感染组大鼠的睾丸间质细胞（leydig cell）LHR及AR表达均增强,精母细胞及支持细胞AR表达增强。病理学检查感染组大鼠卡精小管细胞层次混乱,精子细胞及精子减少甚至管腔关闭,至实验末期生精过程末见明显改善。结论雄性大鼠感染弓形虫后导致T水平尤其是睾丸局部T水平迅速降低,睾丸LHR及AR表达增强,导致生精细胞损伤和生精过程阻滞于精母细胞期。     

弓形虫感染对大鼠记忆力影响及其机制的实验研究

目的观察弓形虫感染对大鼠学习记忆能力和海马组织细胞因子(白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6)水平以及大脑皮层一氧化氮合酶(NOS)活性的影响,探讨其可能机制。方法40只清洁级SD大鼠随机分成4组,即对照组和高、中、低感染剂量的弓形虫感染组(2×107/ml×2ml、2×105/ml×2ml、2×103/ml×2ml)。9周后进行被动回避实验和Morris水迷宫试验,观察弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力等行为学变化。放射免疫法检测大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平,免疫组化检测NOS活性。结果弓形虫感染对大鼠的记忆获得没有影响,但高、中剂量弓形虫感染组大鼠的记忆消失要早于对照组(P<0.05),低感染剂量组大鼠记忆消失与正常对照大鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各感染组大鼠Morris水迷宫测试中逃避潜伏期均明显延长,其距离百分比明显降低(P<0.05)。各感染组大鼠海马组织IL-1β、TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05);但IL-6水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。感染组大鼠大脑皮层NOS阳性细胞数增加。结论弓形虫感染对大鼠的学习记忆能力有影响,其作用机制之一可能与大鼠海马组织IL-1β、TNF-α细胞因子水平升高有关。     

弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢影响的研究

目的探讨弓形虫慢性感染对小鼠脑内葡萄糖代谢的影响。方法将30只SPF级ICR小鼠随机分成弓形虫感染组和正常对照组,感染组每只小鼠口服感染弓形虫PRU株包囊悬液0.3m（l含包囊10个）,对照组口服0.3ml生理盐水。小鼠感染弓形虫6个月后,应用MicroPET扫描脑内葡萄糖代谢,结束后解剖小鼠进行脑组织病理学观察。结果与正常对照组小鼠相比,弓形虫慢性感染6个月后,＂无症状＂的感染小鼠脑内葡萄糖代谢均显著下降,脑组织中可见大小不一、数量不等的包囊,脑膜下有大量淋巴细胞浸润、血管充血、小血管淋巴细胞袖管形成。结论弓形虫慢性感染可造成宿主脑内葡萄糖代谢下降,神经元变性或细胞丢失。     

弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响

目的 探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝(NF)mRNA表达和细胞免疫水平的影响.方法 将4周龄雄性SD大鼠分成两组(每组10只):弓形虫感染组腹腔感染2×10~(10)个/L弓形虫速殖子悬液2 ml;对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后,应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF(NF-H)、中相对分子质量NF(NF-M)和低相对分子质量NF(NF-L)mRNA表达水平:流式细胞术检测大鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞;酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF-L、NF-H mRNA表达量(0.51±0.06、0.68±0.05)较对照组(0.79±0.03、0.76±0.05)明显下降(t值分别为3.41、2.17,P<0.01或<0.05);NF-M mRNA表达量(0.69±0.02)与对照组(0.72±0.03)比较.差异无统计学意义(t=2.09,P>0.05).弓形虫感染组大鼠的CD4~+T细胞[(32.19±5.01)%]和CD8~+T细胞[(20.06±2.28)%]与对照组[(35.82±3.71)%、(22.06±3.90)%]比较,差异均无统计学意义(t值分别为1.69、1.88,P均>0.05).弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[(6.03±0.16)ng/L]、TNF-α[(18.05±1.93)ng/L]、IL-4[(15.76±1.59)ng/L]水平均高于对照组((4.77±0.13)、(9.54±1.57)、(5.67±0.42)ng/L,t值分别为2.81、2.74、2.63,P均<0.05].结论 弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平升高.     

弓形虫感染对雌鼠性器官凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响

目的 采用弓形虫感染雌性小鼠,观察弓形虫对卵巢、输卵管、子宫、阴道等性器官组织细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响,分析和探讨凋亡调控蛋白bax和bcl-2的表达是否与生殖毒性有关.方法 10周龄的处女鼠18只,随机分为感染组和正常对照组,9只/组.感染组腹腔注射纯化弓形虫速殖子0.2ml(160个/只),正...     

我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对小鼠脑组织铁代谢影响

目的　探讨我国弓形虫Chinese 1优势基因型感染对宿主脑组织铁代谢及脑损伤的影响。方法　将20只C57BL/6（体质量15～17 g）小鼠随机分为对照组和感染组,每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射4 000个弓形虫Chinese 1优势基因型TgCtwh3虫株速殖子,对照组小鼠注射等量无菌PBS,饲养6 d后处死小鼠并取其脑组织。采用电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma mass spectrometry, ICP⁃MS）检测小鼠脑组织铁元素水平;采用RNA芯片检测两组小鼠脑组织差异基因数目并对功能基因表达情况进行基因本体论（Gene Ontology, GO）功能富集;采用实时荧光定量PCR（fluorescent quantitative real⁃time PCR, qPCR）技术检测小鼠脑组织中弓形虫表面抗原1（Toxoplasma gondii surface antigen 1,TgSAG1）基因及部分锌铁调控蛋白（Zrt⁃ and Irt⁃like protein, ZIP）家族mRNA表达水平;采用光镜和电镜观察小鼠脑组织海马齿轮回（dentate gyrus, DG）超微结构;采用Western blotting检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4, GPx4）蛋白表达水平;采用硫代巴比妥酸（TBA）法检测丙二醛（malondialdehyde, MDA）水平;采用免疫组化检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达光密度（optical density, OD）值。结果　光镜下可见感染组小鼠脑组织海马DG区细胞坏死,电镜下见感染组小鼠脑组织海马区出现胞质空泡化、核皱缩坏死、线粒体嵴断裂消融、自噬小体增加等超微结构变化。与对照组相比,感染组小鼠脑组织中铁元素水平上调[（32.92 ± 0.90） µg/g vs.（37.72 ± 1.10） µg/g;t = 3.397, P < 0.01];RNA芯片检测感染组小鼠脑组织发现721个基因上调、276个基因下调,差异表达基因在金属离子结合能力上有明显富集。与对照组相比,感染组小鼠脑组织金属元素转运体ZIP2 mRNA表达水平上调（t = 8.659,P < 0.05）、GPx4表达下降[（1.046 ± 0.025） vs. （0.720 ± 0.101）;t = 3.129,P < 0.01]）、MDA水平升高[（4.37 ± 0.33） nmol/mgprot vs.（5.93 ± 0.54） nmol/mgprot;t = 2.451,P < 0.05）]、VEGF蛋白平均OD值上调[（0.348 3 ± 0.017 8） vs. （0.490 6 ± 0.010 5）;t = 6.641,P < 0.01]。结论　Chinese 1优势基因型弓形虫感染后,小鼠脑组织中铁元素蓄积、抗氧化能力下调、氧化应激水平升高,提示弓形虫感染可影响宿主脑组织铁代谢而导致脑损伤。     

参附注射液对老年脓毒症大鼠心肌保护作用的研究

目的研究参附注射液对老年脓毒症大鼠心肌的保护作用及其可能机制。方法将20月龄SD老年大鼠随机分为空白对照组、单纯脓毒症组和参附治疗组,其中,空白对照组采用腹腔注射生理盐水5mg／kg,脓毒症组采用腹腔注射LPS5mg／kg,参附治疗组在腹腔注射LPS5mg／kg后立即尾静脉注射参附注射液7．5mL／kg。用ELISA方法榆测0h、2h和4h大鼠血清中炎症细胞因子TNF-α和IL-6的变化,及用RT—PCR检测各个时间点大鼠心脏TLR4-m RNA表达,并用透射电镜观察大鼠心肌细胞超微结构变化。结果脓毒症时TNF-α和IL-6的表达明显增高,各个时间点均显著高丁对照组（P〈0．05）,而参附治疗组与单纯脓毒症组相比,TNF-α和IL-6水平则明湿降低;参附治疗组心肌组织损伤较单纯脓毒症组明显减轻;脓毒症时心肌TLR4-m RNA表达明显上调,而参附则能抑制TLR4-m RNA的表达。结论参附可能通过降低心肌组织TLR—mRNA的表达,对脓毒症诱导的老年大鼠心肌损伤具有保护作用。     

内毒素急性肺损伤 TLR4-LPS 信号传导对 NF-κB 活性的影响黄继义简

目的 本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用.方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组.静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度.结果 肺损伤评分：ALI组〉TLR4拮抗剂干预组〉对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍.ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达.结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤.     

弓形虫（RH株）慢性感染小鼠空间学习记忆能力的初步研究

目的 探讨弓形虫所致慢性感染对小鼠空间学习记忆能力的影响。 方法　 将同系雌性昆明小鼠２０只，随机分为实验组和对照组，每组１０只。RH株弓形虫速殖子经－20 ℃贮存15 d后取出，37 ℃快速复苏，腹腔接种实验组小鼠（7.7×10⁵个/只）；对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.5 ml/只；2月后作莫里斯水迷宫实验，记录游泳轨迹；并作脑组织匀浆涂片和病理学检查。 结果 ①实验组小鼠脑组织匀浆涂片可见弓形虫包囊，平均密度为15个/ HP；海马及邻近脑区未见明显病理改变。②实验组和对照组小鼠逃避潜伏期、距离隐藏站台的累积距离、游泳总路程均随训练次数的增加呈明显下降趋势（P<0.01）；实验组的潜伏期、距离隐藏站台的累积距离均长于对照组（P<0.01）。③实验组小鼠在60 s 内搜索策略与对照组有明显区别。 结论 腹腔接种经处理的RH株弓形虫可以致小鼠慢性感染；慢性感染在一定程度上损害了小鼠的空间学习记忆能力。