HBVDNA基因型与肝细胞肝癌的预测相相关研究

将百放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ重组质粒ＥｃｏＲＩ酶切片段制备了乙型肝炎病毒ＤＮＡ探针。用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交技术，结合乙肝血清学指标、ｓＩＬ－２Ｒ测定等综合分析了慢性乙型肝炎１７８例及肝细胞肝癌５４例的肝细胞、血清、淋巴细胞、唾液内ＨＢＶＤＮＡ存在类型、复制表达状态、分布定位特点与病发展趋势的相关性，探讨了肝癌高危人群肝组织可能发生恶性转化的预测     

HBV基因型与肝癌的预测性相关研究 Ⅰ.地高辛甙元标记HBV-DNA探针的制备

用地高辛甙元随机引物法标记HBV DNA探针,通过核酸分子杂交技术测试该探针。结果证实,该探针检测HBV DNA的特异性和敏感性均达到了实验要求,为进一步开展临床HBV核酸分子杂交检测技术提供了可靠的实验材科。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

HBx—DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲ Ｉ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨ Ｉ、Ｂｇｌ Ⅱ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶ ＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘ ＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情     

乙型肝炎病毒x基因与肝细胞肝癌

肝细胞肝癌(HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居我国癌症的第3位。乙型肝炎病毒(HBV)x基因具有相当广泛的功能，它的整合与HCC的形成密切相关。现就HBV x基因的结构、主要功能、在HCC中的表达、对p53及DNA修复蛋白的影响、对原癌基因的反式激活和作为癌基因直接诱导HCC几方面的研究进展进行综述。     

丙型病毒性肝炎相关肝细胞肝癌的研究

丙型肝炎病毒(HCV)感染不仅是造成慢性肝病的主要原因,同时也是部分国家和地区肝细胞肝癌(HCC)的主要病因。HCV的结构特点和生命周期的规律使感染易转为慢性化,病毒通过其基因组编码的若干蛋白使肝细胞发生转化。在此过程中,肝脏反复发生的损伤和修复、肝纤维化和肝硬化是HCC发生过程中的几个关键阶段。反应性氧分子家族的作用和HCV感染造成肝细胞基因的遗传损伤可能是导致肝细胞癌变的重要机制。运用体外细胞转染方法和转基因动物模型研究HCV-HCC发病机制已取得一定进展,并将成为研究的主要手段。     

丙型病毒性肝炎相关肝细胞肝癌的研究

丙型肝炎病毒(HCV)感染不仅是造成慢性肝病的主要原因,同时也是部分国家和地区肝细胞肝癌(HCC)的主要病因.HCV的结构特点和生命周期的规律使感染易转为慢性化,病毒通过其基因组编码的若干蛋白使肝细胞发生转化.在此过程中,肝脏反复发生的损伤和修复、肝纤维化和肝硬化是HCC发生过程中的几个关键阶段.反应性氧分子家族的作用和HCV感染造成肝细胞基因的遗传损伤可能是导致肝细胞癌变的重要机制.运用体外细胞转染方法和转基因动物模型研究HCV-HCC发病机制已取得一定进展,并将成为研究的主要手段.     

原发性肝细胞肝癌及癌旁组织中乙型肝炎病毒表面抗原表达的研究

应用免疫组织化学技术，检测40例原发性肝细胞肝癌（HCC）及癌旁组织中乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）表达，阳性率达83％。表明乙型肝炎病毒（HBV）感染与HCC发生密切相关。HBsAg在HCC中表达较癌旁组织中少而弱。可能系肝细胞癌变后不利于HBsAg表达及S基因发生重排或缺失之故。碎点状HBsAg小包涵体。可能为HCC中HBsAg的特殊表现形式。小细胞肝细胞结构不良（LED）中HBsAg表达显著高于癌旁其它类型病变。支持小细胞LCD更接近癌前病变的观点。HBsAg染色可作为鉴别HBV感染的肝病中癌前病变与早期癌及高分化癌的一种辅助手段。     

乙肝患者肝组织和淋巴细胞内HBV检测及存在状态

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞内ＨＢＶ存在状态及其与肝内带毒状况的相关性。方法 抽提肝穿刺活检组织，外周血淋巴细胞ＤＮＡ、以ＨＢＶ探针点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ，并以Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析其存在状态。结果 慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞、肝组织ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率分别为８７．１％和８３．８％，配对计数的３１例标本Ｘ＾２检验显示，二者间有一定相关性（ｒ＝０．８１，Ｐ〈０．０５），整合型与混     

HBV亚基因整合及其致癌性研究

探讨乙型肝炎病毒亚基因在肝细胞癌发生中的作用。方法 以ＢａｍＨ，Ｉ，ＢｇｌⅡ酶切３．２ｋｂ ＨＢＶ ＤＮＡ，回收其ＨＢｓ，ＨＢｘ，ＨＢｃ，ＰｒｅＳ亚基因片段，以地高辛甙元标记成探针。以ＨＢＶ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析其存在状态，以ＨＢＶ亚基因探针Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交亚基因转录。     

紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量

紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量山东医科大学实验药厂武桂兰山东医科大学实验中心刘传华山东医科大学校医院赵光华用紫外分光光度法测定利胆素片中羟甲基烟酰胺含量，所用的仪器为上海分析仪器厂产的７５１Ｇ分光光度计，７５３Ｗ分光光度计，岛津ＵＶ－２...     

慢性乙型肝炎患者肝组织、淋巴细胞内HBV－DNA的检测及相关性研究

用分子生物学方法检测了乙型肝炎３７例的血清、外周血淋巴细胞及肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ存在情况，阳性率分别是５７．１％、８７．１％和８３．８％。统计分析表明，血清与外周血淋巴细胞、血清与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异有显著性（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），外周血淋巴细胞与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率的相关系数是０．８１（Ｐ＜０．０５），提示外周血淋巴细胞与肝组织中的ＨＢＶ－ＤＮＡ有一定的相关性。     

原发性肝癌与乙型肝炎病毒感染

分析我院１００例原发性肝癌（ＰＨＣ）与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的关系。１００例中有ＨＢＶ感染者８８例，无ＨＢＶ感染者１２例。男：女＝６．６９：１。乙肝组发生ＰＨＣ以３０～３９岁者居多，占４０．９％；平均发病年龄为３７．３岁。无乙肝组以５０～５９岁为多，占４１％，较乙肝组明显滞后。故认为，ＨＢＶ感染并发肝硬化１０年以上及ＨＢｓＡｇ与抗－ＨＢｅ阳性均可视为发生ＰＨＣ的高危人群。     

乙型肝炎病毒C区反义基因真核表达载体的构建

我们以PEcob6含双拷贝乙型肝炎病毒的质粒为模板，进行聚合酶连反应，获取C区基因．平端连结克隆到PBKS 质粒中，选译出C区反义基因。再将C区反义基因亚克隆到PREP8质粒．构建成了乙型肝炎病毒C区反义基因的真核表达载体。     

HBV前C区1896位点变异与HBV感染者肝功能损害程度的关系

了解ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异与乙型肝炎病毒感染者肝功能损害程度的关系。方法：用ＰＣＲ技术，通过改变引物３’端的方法，检测ＨＢＶ感染者的前Ｃ区第１８９６位点变异株。结果：１０５例ＨＥＶ感染者中的ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异株总检出率为５６．２％；男性与女性患者的检出率分别为５７．０％与５００％；≤３０岁组，３１－５９岁组，≥６０岁年龄组的检率分别为６０．０％，５６．６％，２８．６％；无黄疸组，轻～中度黄疸组，重度黄疸组的检出率分别为５３．２％，６５．１％，４０．０％；在ＨＢＶ携带者、慢性肝炎（包括轻、中、重庆），重症肝炎及肝硬化患者中的检出率分别为６０．０％，５７．４％，３３．３％，７０．０％。结论：ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变株广泛存在于ＨＢＶ感染者中，而且其检出率与患者性别、年龄、ＨＢＶ感染时间长短及肝功能损害程度并无明显联系。     

HBeAg、HBeAb双阳性患者血清中病毒前C区基因序列分析

目的　了解乙型肝炎病毒e抗原和e抗体双阳性患者血清中病毒前C区基因的变异情况。方法　采用时间分辨荧光免疫分析方法检测乙肝病毒免疫标志物 ,对HBeAg、HBeAb双阳性患者采用聚合酶链反应 (PCR)扩增其血清中HBVDNA前C区基因 ,然后对阳性样品的PCR产物直接标记测序 ,并和Genbank中登录的代表株进行比较分析。结果　 1 5例HBeAg、HBeAb双阳性患者中有1 1例HBVDNA阳性 ,序列分析显示所有阳性血清中病毒前C区基因均发生了变异 ,其中有 4例存在A1 896变异。结论　在HBeAg和HBeAb血清学转换过程中 ,均伴有HBV前C区基因变异 ,A1 896变异的产生主要在HBeAb产生过程中或产生以后。