色素框同源蛋白7基因在人体多种癌组织中表达下调

目的 研究色素框同源蛋白7(cbx7)基因在结肠癌、胃癌和肝癌组织中的表达变化,探讨这种表达变化与肿瘤发生和发展的相关性.方法 收集22例结肠癌患者、20例胃癌患者、30例肝癌患者的肿瘤组织及其切缘组织标本、临床病理资料和随访资料.提取各标本RNA,用荧光定量PCR检测cbx7 mRNA含量,分析肿瘤组织中cbx7 mRNA表达水平与患者临床特征相关性及与患者术后生存时间的关系.结果 结肠癌、胃癌和肝癌组织中cbx7 mRNA的相对拷贝数分别为0.010±0.015、0.197±0.195、0.008±0.008;对应各癌组织的切缘正常组织中cbx7 mRNA的相对拷贝数分别为0.053±0.042、1.891±1.254、0.030±0.021.与切缘正常组织相比,3种癌组织中的cbx7 mRNA含量均明显下调(结肠癌:t=-7.351,P<0.01;胃癌:t=-5.417,P<0.01;肝癌:t=-6.680,P<0.01).结肠癌患者中,年龄>55岁组cbx7 mRNA相对拷贝数为0.007±0.015,≤55岁组为0.017±0.012,两组间差异有统计学意义(t=-2.586,P=0.022);有脉管癌栓组cbx7 mRNA的相对拷贝数为0.022±0.021,无癌栓组为0.006±0.011,两组间差异有统计学意义(t=-3.175,P=0.010).通过受试者特征曲线[ROC曲线,曲线下面积为0.769(P=0.033)]确定结肠癌患者cbx7 mRNA相对拷贝数的Cut-off值为0.002,小于0.002者确定为表达降低;cbx7低表达的结肠癌患者术后生存时间短,5年生存率仅为30.8%(4/13),而cbx7高表达患者5年生存率达77.8%(7/9),差异有统计学意义(χ2=4.329,P=0.037).在胃癌和肝癌患者中未见此现象.结论 在结肠癌、胃癌、肝癌组织中cbx7的表达明显下降;cbx7 mRNA的表达含量变化影响结肠癌患者预后.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between chromobox protein homolog 7 (cbx7) expression and the occurrence and development of colorectal carcinoma (CRC),gastric carcinoma (GC) and hepatocarcinoma (HCC) tissues.Methods The samples of neoplastic tissues and the corresponding cutting-edge normal tissues from 22 cases of CRC,20 cases of GC,30 cases of HCC were surgically collected.Level of cbx7 mRNA was detected with a fluorescent quantitative RT-PCR assay,and the correlationship among expression of cbx7 mRNA,the patients′ clinicopathologic features and the surviving time after surgery was analyzed.Results The relative copy number of cbx7 mRNA in carcinomas and the normal tissues was 0.010±0.015 vs 0.053±0.042 for CRCs,0.197±0.195 vs 1.891±1.254 for GCs,and 0.008±0.008 vs 0.030±0.021 for HCCs,respectively.Compared with the corresponding normal tissues,cbx7 expression was significantly downregulated in CRCs,GCs,and HCCs (t=-7.351,-5.417 and -6.680,respectively,P<0.01).The expression of cbx7 mRNA in CRCs had significant differences not only between two age groups (the relative copy number of cbx7 mRNA in age>55 group was 0.007±0.015,but 0.017±0.012 in age≤55 group,t=-2.586 ,P=0.022); but also between vascular embolus-positive and negative groups (the level of cbx7 mRNA in positive and negative group was 0.022±0.021 vs 0.006±0.011,t=-3.175,P=0.010).The area under the receiver operating characteristics(ROC) curve is 0.769 (P=0.033).when the Cut-off value of the relative copy number of cbx7 mRNA was 0.002 in CRCs.The values less-than 0.002 were defined as low expression.The CRC patients with low expression of cbx7 had a shorter overall survival time; whose 5 years survival rate was only 30.8%(4/13); while the rate was 77.8% (7/9) in high expression of cbx7 group.The difference had statistical significance (χ2=4.329,P=0.037).The similar differences could not be found among GC and HCC patients.Conclusion Downregulation of cbx7 expression was very common among multiple carcinomas cases,and the downregulation influenced the prognosis of CRC patients.     

HIV-1核心抗原p24基因的表达、纯化及抗原性分析

目的在原核系统中表达全长HIV-1 p24抗原,并对其抗原性进行鉴定。方法利用PCR技术从HIV-1全基因质粒(BH-10)中扩增p24抗原基因,通过酶切消化后连接到表达载体pET22b上,用此连接产物转化大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达p24抗原。运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳检测插入基因片段的正确性,并用W estern B lot(WB)及ELISA法对表达产物的抗原性进行检测。结果PCR产物和构建的重组质粒pET22b-p24经双酶切插入的外源基因片段均为690 bp,与预期p24抗原全基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE电泳,可见1条相对分子量约26×103的外源表达蛋白带,与预期大小一致,未见杂蛋白带。WB结果显示重组蛋白与HIV-1阳性血清呈特异性反应,与健康人血清没有反应。ELISA检测p24抗原灵敏度为93.94%(62/66),特异性为93.33%(28/30)。结论构建了HIV-1 p24表达载体pET22b-p24,并在原核细胞中高效表达,其表达产物具有良好的抗原性,为研制HIV抗体确认试剂奠定了良好的基础。     

Survivin基因在胃癌中表达的研究

目的 研究凋亡抑制基因survivin在胃癌组织中的表达。方法 运用S-P免疫组化技术，检测survivln基因在93例胃癌组织、20例正常胃黏膜组织以及胃癌细胞株MGC-803中的表达。结果 Survivin基因在20例正常胃黏膜组织中不表达，而93例胃癌组织中有66例表达阳性，占71％，两者差异有统计学意义（P〈0．01），胃癌细胞株MGC-803中survivin呈高表达。Survivin基因表达阳性率与胃癌组织的分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关，而与浸润程度不相关。结论 Survivin基因的特异性高表达在胃癌的发生发展中起重要作用，其过度表达可能提示胃癌预后不良。     

大肠癌中p53蛋白异常表达与细胞增殖和浸润转移的关系

应用ＬＳＡＢ免疫组织化学方法检测７４例大肠癌中ｐ５３、ＰＣＮＡ和Ⅳ型胶原的表达情况，并探讨ｐ５３蛋白的表达与肿瘤细胞增殖和浸润转移的关系。结果显示大肠癌ｐ５３、ＰＣＮＡ的阳性率分别为５２７％、８１１％。ｐ５３、ＰＣＮＡ过表达与浸润程度以及淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０５），提示ｐ５３过表达在浸润转移过程及细胞增殖中均起重要作用。     

大肠肿瘤中Bcl-2表达的免疫组化研究

目的　通过观察大肠腺癌、大肠腺瘤中 Bcl- 2蛋白的表达状态 ,探讨 Bcl- 2在大肠肿瘤发生、发展中的作用。方法　利用免疫组化 S- P法 ,观察 4 8例大肠腺癌 ,15例大肠腺瘤中 Bcl- 2蛋白阳性细胞比率和分布 ,以 10例正常大肠粘膜组织做对照。结果　腺癌和腺瘤中 Bcl- 2阳性细胞比率均显著高于正常粘膜组织(P<0 .0 5和 P<0 .0 0 1) ,腺癌与腺瘤表达无明显差异 (P>0 .1)。早期腺癌显著高于腺瘤 (P<0 .0 0 1) ,但中晚期腺癌显著低于早期腺癌 (P<0 .0 0 1)。结论　 Bcl- 2高表达可能是大肠肿瘤形成的早期事件 ,对大肠腺瘤的发生和恶变起着重要的促进作用 ,中晚期腺癌中 Bcl- 2表达明显减少 ,其原因有赖于进一步研究。     

KLK11基因在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨KLK 11基因mRNA及其蛋白在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法:采用半定量RT-PCR和免疫组化SP法检测87例卵巢癌组织KLK 11 mRNA及蛋白的表达。结果:KLK 11基因mRNA及蛋白表达与卵巢癌临床病理特征关系密切,晚期卵巢癌(Ⅲ、Ⅳ)中KLK 11基因mRNA和蛋白表达明显高于早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ)(P<0.05);中低分化卵巢癌中KLK 11基因mRNA和蛋白表达明显高于高分化卵巢癌(P<0.05)。在卵巢癌不同组织学类型中KLK11基因mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:KLK 11基因表达可能与卵巢癌的恶性度有关,可作为一项检测卵巢癌预后的指标。     

女性肺癌组织中细胞周期蛋白E的表达

目的　研究细胞周期蛋白E在女性肺癌组织中的表达及意义。方法　采用链菌素亲生物素 -过氧化酶免疫组化方法。结果　女性肺癌组织中细胞周期素E的表达占 62 % ,癌旁正常组织中阳性率占 2 6 % ,二者相比有显著性差异 (P <0 0 5) ,同时鳞癌中细胞周期素E的阳性略要高于腺癌。但细胞周期素E的表达与临床分期及分化无关。结论　女性肺癌组织中存在细胞周期素E的过表达 ,提示细胞周期素E有可能是肺癌的潜在预报因子     

骨桥蛋白在鼻咽癌组织中的表达研究

目的 探讨骨桥蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学染色法检测44例鼻咽癌、25例癌旁正常黏膜组织骨桥蛋白的表达情况,分析骨桥蛋白的表达与鼻咽癌病理特征的关系.结果骨桥蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达率和阳性染色面积显著高于癌旁正常黏膜组织[77.27％(34/44)比8.00％(2/25)、(60.24±17.51)％比(1.32±0.48)％](P＜0.05).骨桥蛋白的阳性表达与鼻咽癌的临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与鼻咽癌的病理分级无关(P＞0.05).结论 骨桥蛋白的表达与鼻咽癌的侵袭转移相关,骨桥蛋白过表达可能是促成鼻咽癌侵袭转移的重要因素之一.     

宫颈癌组织中E-钙粘素基因5’端CpG岛甲基化与蛋白表达的关系

目的:探讨宫颈癌组织中E-钙粘素(E-Cad)基因5’端CpG岛甲基化与蛋白表达的关系。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)和免疫组织化学法分别检测10例正常宫颈鳞状上皮、31例宫颈癌组织中E-Cad基因5’端CpG岛的甲基化状况与蛋白表达情况,并分析其与宫颈癌临床病理特征的关系。结果:1正常宫颈鳞状上皮组织中未发现存在E-Cad基因甲基化状态,而在宫颈癌组织中E-Cad基因的甲基化率为54.84%(17/31);2宫颈癌组织中存在E-Cad蛋白表达降低或缺失,阳性率仅为38.71%(12/31),显著低于正常宫颈组织的100.00%(10/10),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:E-Cad基因5’端CpG岛甲基化是宫颈癌中该基因失活的机制之一,可能与宫颈癌的发生、发展有关。     

隐睾组织P53，Rb，nm23，C-berB-2基因研究

为探讨隐睾患者患侧睾丸恶变的机理,采用免疫组织化学的方法。对30例经临床确诊的先天性隐睾患者的患侧睾丸组织进行P53、Rb、nm23、C-berB-2基因进行检测。结果发现nm23有4例及C-berB-2基因有2例阳性结果,其中1例腹腔型隐睾显示nm23、C-berB-2基因两项均为阳性。结论：提示隐睾患者患侧睾丸恶变可能与nm23、C-berB-2基因变异有关,腹腔型隐睾更容易导致睾丸组织相关基因的变异。     

Survivin基因在人胃癌中表达的研究

目的探讨凋亡抑制基因Survivin在胃癌组织中的表达.方法应用RT-PCR,免疫组织化学染色技术研究Survivin mRNA在胃癌及正常胃组织中的表达.结果 46例胃癌组织的Survivin mRNA阳性表达率为32.6%,46例相应正常组织为10.9%,两组阳性表达率差异非常显著(P＜0.005).胃癌组织Survivin蛋白阳性表达率(78%)与相应正常组织(30%)均有显著性差异(P＜0.05).胃癌组织Survivin mRNA蛋白表达阳性率在不同的性别、肿瘤长径(＞和≤5cm)、发生部位、大体类型、组织类型、分化程度、有无脉管侵犯、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、TNM分期间差异无显著性(P＞0.05).结论 Survivin在胃癌中的表达高于正常组织,与临床病理特征无关,提示Survivin与胃癌形成有关,与胃癌发展侵袭无关.     

人卵丘细胞内基因表达与胚胎发育潜能的关系

缺乏准确、客观、非侵入性的胚胎评估标准是目前体外受精-胚胎移植技术所面临的主要挑战之一。本文对卵丘细胞内基因表达与胚胎及卵子发育潜能之间的相关研究进行了总结,发现卵丘细胞内特定基因的表达与胚胎发育、成熟及发育潜能之间存在紧密的联系。近年来,通过实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）及微阵列技术筛选出一系列颗粒细胞中能够预测受精结局、胚胎形态学评分、妊娠结局等胚胎发育潜能的候选标记基因,这些基因主要涉及卵丘扩展、脂类代谢、细胞凋亡等过程。然而,卵母细胞及胚胎的发育受卵泡内、外多种因素的影响。欲确立一种全面、准确、非侵入性的胚胎发育潜能评估方法仍需更深入的研究。     

卵巢癌组织中凋亡相关蛋白8的检测及其临床意义

目的 检测卵巢癌组织中凋亡相关蛋白8(THAP-8)的表达,探讨其相关的临床意义.方法 选择卵巢癌患者86例,分别取卵巢癌组织和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应法检测THAP-8基因的表达量,免疫组织化学法检测THAP-8蛋白的表达量.结果 在卵巢癌组织和癌旁组织中THAP-8基因表达量分别为0.304±0.104和0.615±0.152,THAP-8蛋白表达量分别为30.16±12.34和67.34±22.37,卵巢癌组织均显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.01).中、低分化卵巢癌组织中THAP-8基因和蛋白表达量显著低于高分化卵巢癌组织(0.216±0.085比0.457±0.124、24.22±9.21比46.24±17.52),有淋巴结转移卵巢癌组织中显著低于无淋巴结转移卵巢癌组织(0.247±0.087比0.476±0.133、23.44±8.57比49.60±18.35),临床分期Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌组织中显著低于临床分期Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌组织(0.232±0.114比0.424±0.125、25.64±8.12比44.78±16.84),差异均有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).结论 THAP-8的失活参与了卵巢癌的发生、发展,可以作为卵巢癌患者肿瘤分级和预后评估的一个指标.     

细胞凋亡和相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白在睾丸肿瘤中表达的研究

目的研究细胞凋亡和相关基因Fas、hax和bcl-2蛋白在睾丸肿瘤发生和发展中的作用。方法应用DNA未端标记、流式细胞术和细胞免疫荧光技术检测56例睾丸肿瘤细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas、bax和bcl-2蛋白的表达。结果凋亡指数与肿瘤病理类型和淋巴结转移密切相关(P＜0．05)。Fas蛋白阳性表达37例(66．1％)，bax阳性48例(85.7％)，bcl-2阳性40例(71．4％)；Fas、bax和bcl-2蛋白表达与肿瘤的病理类型、临床分期和淋巴结转移无明显相关(P＞0.05)：凋亡指数在Fas、bax及bcl-2蛋白阳性表达和阴性表达者中差异有显著性(P＜0.05)。结论细胞凋亡在睾丸肿瘤发生中有重要作用。Fas、bax和bcl-2蛋白的异常表达尚不能成为睾丸肿瘤发生和发展的预后参数。     

p16基因结构及表达异常与非小细胞肺癌的关系

目的　探讨p16基因结构及表达异常与非小细胞肺癌临床病理因素的相关性。方法　利用免疫组化、PCR -SSCP方法检测了p16基因的表达水平及第 2外显子突变 ,并将以上结果与 5 2例非小细胞肺癌 (NSCLC)临床病理因素进行相关性研究。结果　p16基因第 2外显子缺失 /突变率为 2 3 1% (12 /5 2 ) ,p16蛋白丢失率为 5 3 8% (2 8/5 2 ) ,基因的缺失和蛋白的丢失与肺癌的转移和分期有关。结论　p16基因突变及表达异常可能在NSCLC的发生、发展中起重要作用 ,检测该基因可作为临床诊断及预后评估指标。     

舞蹈病一家系临床分析及基因诊断

目的从分子水平探讨Huntington舞蹈病(HD)的致病突变,为该家系的基因诊断和遗传咨询提供科学依据。方法对该病进行家系调查,应用巢式PCR及琼脂糖凝胶电泳技术检测患者、HD症前高风险成员、正常人(CAG)n片段的长度,进行基因诊断。结果该家系符合常染色体显性遗传病特征,患者DNA电泳显示2条扩增区带,正常人显示1条扩增区带。结论舞蹈病为常染色体性遗传病,患者相关基因分端(CAG)n重复序列存在异常扩增。     

HCV的C/E1区PCR扩增方法的改进

目的通过对丙型肝炎病毒（HCV）基因组变异度较大的C/E1区兼并性引物的修改以提高该基因片段的扩增成功率,同时也为突变发生频繁的RNA病毒的核酸扩增提供方法上的借鉴。方法选用文献中针对C/E1区的多点兼并性引物（＂原引物＂）进行PCR扩增、测序,根据序列比对结果对原引物进行修改,没有突变的点进行去兼并还原,新突变点重新兼并,最终设计出特异性高适用性好的新引物。结果以44例HCV核酸阳性的艾滋病病毒（HIV）感染者为研究样本,原引物仅能成功扩增23例（52.3%）,而改进后的新引物能成功而高效的扩增40例（90.9%）。结论新引物能显著提高HCV核酸的检出率和扩增效率,为HCV的基因分型提供新的检测策略。