连梅颗粒对糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白表达的影响

目的：观察连梅颗粒对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ 蛋白表达的影响。方法：将高脂饲料喂养的雄性SPF级ZDF(Zucker Diabetic Fatty rat）大鼠随机分为模型组、连梅颗粒组、吡格列酮组,普通饲料喂养的雄性SPF级ZL（Zucker Lean）大鼠为正常对照组,每组各10只。连梅颗粒组按照5.1g?kg-1灌胃给药,吡格列酮组按照1.07mg?kg-1灌胃给药,连续给药12周。经Western blot法检测各组大鼠腹部脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达水平。结果：在治疗第12周末,模型组、吡格列酮组、连梅颗粒组大鼠腹腔脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达明显高于正常对照组（P<0.01）。连梅颗粒组和吡格列酮组与模型组相比均明显降低（P<0.01,P<0.05）,且连梅颗粒组优于吡格列酮组（P<0.05）。结论：连梅颗粒组在一定程度上能抑制糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白的表达。     

黄芪甲苷抑制IKK/NF-κB炎症通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤

[目的]观察黄芪甲苷减轻高糖诱导H9c2细胞损伤的作用机制。[方法]通过高糖孵育诱导H9c2心肌细胞损伤模型,MTT法测定细胞存活率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞内IκB激酶β(IKK-β)、核转录因子κB(NF-κB)、p-NF-κB及TNF-α蛋白表达水平。[结果]给予高糖处理H9c2心肌细胞12 h能明显下调细胞存活率(P0.05);黄芪甲苷(20、40、80μmol/L)预处理10 min可呈剂量依赖性增强细胞活力,降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),下调IKK-β蛋白表达(P0.05),抑制NF-κB磷酸活化水平(P0.05),并降低TNF-α蛋白表达(P0.05)。[结论]黄芪甲苷可通过抑制IKK/NF-κB炎症通路过度激活减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤。     

电针预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织NF-κB p65、IκBα、IKKβ蛋白表达的影响

目的:观察电针心经腧穴预处理对急性心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠核转录因子-κB(NF-κB) p65、NF-κB抑制蛋白(IκB)α、IκB激酶(IKK)β蛋白表达的影响,探讨电针心经腧穴改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针心经组、电针肺经组,每组10只。电针心经组针刺"神门""通里",电针肺经组针刺"太渊""列缺",两组均采用电针刺激,刺激电压为1 V,频率为2 Hz,每次刺激20 min,每日1次。模型复制前共刺激7 d。模型组、电针心经组、电针肺经组大鼠采用左冠状动脉前降支结扎法复制急性MIRI模型。假手术组开胸后不结扎,仅在相应部位用针空穿1次。检测各组大鼠心电图,分析ST段位移情况;Western blot法检测各组大鼠心肌组织NF-κB p65、IκBα、IKKβ蛋白相对表达量;ELISA法检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-1β及IL-10含量。结果:与假手术组比较,模型组大鼠结扎后30 min、再灌注120 min的ST段位移值升高(P<0.05),电针心经组低于模型组和电针肺经组(P<0.05)。与假...     

黄芪甲苷调控STAT1/IκB/NF-κB信号通路抑制γ-干扰素诱导BV-2细胞激活

目的: 研究黄芪甲苷(ASI)对γ-干扰素(IFN-γ)诱导小胶质细胞激活的抑制作用及机制。 方法: 不同浓度的ASI(25,50,100 μmol·L^-1)预处理BV-2小胶质细胞2 h后,以IFN-γ刺激1.5 h或24 h,分别收集细胞培养基上清和细胞。分别以Griess和ELISA法检测培养基中一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;qPCR法检测细胞中CD11b,TNF-α,白介素1β(IL-1β)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平;Western blot法检测细胞STAT1/IκB/NF-κB信号通路蛋白表达。 结果: ASI能显著抑制 IFN-γ诱导BV-2细胞NO和 TNF-α水平的升高(P<0.001);进一步研究表明,50 μmol·L^-1ASI能够显著抑制细胞IL-1β和TNF-α的mRNA表达(P<0.01,P<0.05),并表现出下调iNOS mRNA表达的趋势,但对BV-2细胞CD11b的mRNA水平无显著影响;同时,ASI显著抑制IFN-γ诱导上调的 pSTAT1,pIκB和pNF-κB的蛋白表达。 结论: ASI能够抑制IFN-γ诱导的小胶质细胞的激活,其机制与其抑制STAT1/IκB/NF-κB信号通路的激活,降低炎症状态下小胶质细胞IL-1β,TNF-α以及iNOS的基因表达,从而减少NO和TNF-α的生成有关。     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

连花清瘟胶囊对脂多糖致急性肺损伤小鼠IKK/IκB/NF-κB信号通路的影响

目的探讨连花清瘟胶囊对经气管内滴注脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤引起的肺组织炎症因子和IKK/IκB/NF-κB信号通路的蛋白表达的影响。方法将急性肺损伤的100只SPF级18~20 g雄性KM小鼠随机均分为5组,LPS组,地塞米松组,连花清瘟胶囊高、中、低剂量组,另设正常对照组(n=20)。光镜下观察实验小鼠肺组织病理变化,流式细胞术检测外周血中白介素-6(IL-6)的阳性表达率,RT-PCR法检测肺组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达,Western blot检测肺组织中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达。结果与正常对照组相比,LPS组小鼠肺组织中有大量炎性细胞渗出,外周血中IL-6,肺组织中MCP-1 mRNA,NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达均明显升高;与脂多糖组相比,外周血中IL-6的阳性表达率用药组均有所下降,肺组织中MCP-1mRNA表达用药组均改善明显,肺组织中NE、NF-κB、IκBα、IKKβ的蛋白表达为地塞米松组与高剂量组改善较明显,连花清瘟中、低剂量组也有不同程度改善。结论连花清瘟胶囊能够通过降低IKK/IκB/NF-κB信号通路的表达来减轻肺内炎症反应程度。     

红芪总黄酮对离心运动大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号通路相关凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨红芪总黄酮对离心运动大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号通路相关凋亡蛋白表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:安静对照组(CG)、离心运动组(EG)和离心运动+药物预处理组(DPG),每组8只。DPG组在离心运动前3 d给予红芪总黄酮灌胃,CG组、EG大鼠给予等量生理盐水灌胃。EG组、DPG组大鼠均采用恒定速度20 m/min,-16°下坡跑台离心运动,持续运动至力竭。RT-qPCR法检测骨骼肌细胞核转录因子kappa B(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bcl-2 Associated X Protein,bax)、细胞色素C(cyt c)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达的影响,Western blotting法检测骨骼肌细胞pNF-κB、Bcl-2、Bax、Cyt c、Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡率。结果:EG组和DPG组NF-κB、Bax、Cyt c、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达明显高于CG组(P<0.05),DPG组及EG组的Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著低于CG组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值也显著低于CG组(P<0.05);与EG组比较,DPG组NF-κB、Bax、Cyt c、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达明显降低(P<0.05),DGP组的Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著高于EG组(P<0.05),DGP组Bcl-2/Bax比值较EG组也显著增高(P<0.05)。TUNEL染色结果显示,与CG组比较,EG组、DPG组大鼠骨骼肌细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);与EG组比较,DPG组大鼠骨骼肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论:一次离心力竭运动可激活大鼠骨骼肌细胞NF-κB信号分子,启动细胞的凋亡程序;红芪总黄酮能够降低高强度运动引发的应激反应,从而延缓离心运动后骨骼肌疲劳和损伤的发生,其机制可能与降低骨骼肌组织NF-κB、Bcl-2/Bax、Cyt c、Caspase-3表达水平、抑制骨骼肌细胞凋亡有关。     

艾灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及TNF-α、IL-1β调节作用的研究

目的：通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65及炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响,探讨艾灸治疗克罗恩病的效应机制。方法：清洁级雄性SD大鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、隔药灸组和西药组,采用三硝基苯磺酸（TN-BS）合乙醇溶液灌肠制备克罗恩病大鼠模型,模型制备成功后,隔药灸组取天枢穴（双）、气海穴进行隔药灸治疗,西药组采用美沙拉秦灌胃治疗。治疗结束后,采用HE染色,光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化,应用免疫组织化学技术观察各组大鼠结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达,并进行图像分析。结果：与正常组比较,模型组大鼠结肠组织呈现裂隙状溃疡及炎症表现,部分大鼠结肠在黏膜下层可见肉芽肿形成,结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达均显著增高（均P〈0.01）;与模型组比较,隔药灸组、西药组大鼠结肠形态结构改善,肠道炎症减轻,结肠NF-κB p65与TNF-α、IL-1β的表达均显著降低（均P〈0.01）;相关性分析结果显示,TNF-α、IL-1β的表达与NF-κB p65的表达均呈正相关性。结论：隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65、TNF-α、IL-1β的表达;艾灸（隔药灸）可能通过抑制克罗恩病大鼠结肠NF-κB p65的表达,进而减少其下游炎症因子TNF-α、IL-1β的表达,从而减轻肠道炎症,改善结肠组织形态结构,发挥治疗作用。     

疏肝温胆汤对代谢综合征大鼠TLR4/IKKβ/NF-κB通路的影响

目的 观察疏肝温胆汤对代谢综合征(MS)大鼠TLR4/IKKβ/NF-κB通路、炎症因子、血糖、血脂的影响,探讨其改善糖脂代谢的作用机制。方法 采用高脂高糖高盐饲料喂养方法诱导MS模型,将成模大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、疏肝温胆汤组。另取正常大鼠为对照组。二甲双胍组和疏肝温胆汤组大鼠分别给予盐酸二甲双胍片和疏肝温胆汤灌胃,模型组和对照组大鼠给予生理盐水灌胃,时间为8周。检测大鼠体质量、体长、腹围、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(PG2h)、胰岛素(FINS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算葡萄糖曲线下面积(OGTT-AUC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、Lee’s指数、肥胖指数;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定肝脏游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏Toll样...     

黄芩苷对血栓栓塞致急性肺栓塞大鼠NF-κB信号通路抑制作用的实验研究

目的:研究黄芩苷对血栓栓塞致急性肺栓塞(acute pulmonary embolism,APE)大鼠NF-κB信号通路的调控作用.方法:选取60只雄性SD大鼠随机分为Sham组、APE组、APE+黄芩苷低剂量组(1 mL/kg)、APE+黄芩苷中剂量组(2 mL/kg)、APE+黄芩苷高剂量组(4 mL/kg).除S...     

参芎葡萄糖注射液对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能及NF-κB表达的影响

目的 探讨参芎葡萄糖注射液对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能及NF-Κb表达的影响.方法 应用斜板试验、BBB评分法、免疫组化方法对各组大鼠脊髓损伤后神经功能及脊髓内NF-κB在各个时点表迭变化进行比较.结果 两治疗组大鼠神经功能较损伤组明显提高(P<0.05),NIP组与参芎葡萄糖组恢复无显著性差异(P>0.05).损伤组有大量的NF-出表达,MP组同参芎葡萄糖注射液组NF-κB的表达明显减少(P>0.05).结论 参芎葡萄糖注射液可抑制大鼠急性脊髓损伤后NF-κB表迭,对后肢功能具有明显的改善作用,有效促进神经功能恢复.     

山茱萸提取物对脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮与核转录因子-κB表达的影响

目的:观察光化学法诱导脑梗死大鼠大脑皮层一氧化氮(NO)与核转录因子-κB(NF-κB)含量的变化,以及中药山茱萸提取物(主要成分为环烯醚萜苷)对其的影响.方法:大鼠预先灌胃给药7 d后,制作光化学致脑梗死模型,采用分光光度法检测脑组织中NO和一氧化氮合酶(NOS)的变化,免疫组织化学方法检测NF-κB阳性细胞数量的变化.结果:模型组与对照组相比,出现了明显的梗死灶,脑皮层NO含量与NOS活性增加,NF-κB阳性细胞数量增多.与模型组相比,山茱萸提取物能明显减小脑梗死面积,降低脑皮层NO含量和NOS活性,并显著减少NF-κB阳性细胞数量.结论:山茱萸环烯醚萜苷可通过影响脑内NO,NF-κB的水平发挥对脑梗死的治疗作用.     

赤雹根总皂苷对类风湿性关节炎大鼠足跖组织中NF-κB p65活性作用的研究

目的 研究赤雹根总皂苷(SRTD)对类风湿性关节炎大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达的影响,探讨SRTD治疗类风湿性关节炎的机制.方法 雄性SD大鼠80只,随机取10大鼠作为正常对照,其余大鼠采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎,将造摸成功的50只大鼠随机分为模型组,赤雹根总皂苷160,80,40 mg/(kg.d)组和雷公藤多苷12 mg/(kg.d)组,各组分别给予相应药物,模型组ig蒸馏水,连续21 d.计算各组大鼠关节炎指数,给药后第22天,处死大鼠.用免疫组化法和Western blot法检测足跖组织中NF-κB p65蛋白的表达.结果 赤雹根总皂苷能明显降低RA大鼠的关节炎指数(P＜0.01,P＜0.05),显著下调NF-κB p65蛋白的表达(P ＜0.01,P＜0.05).结论 SRTD对大鼠类风湿性关节炎有明显治疗作用,下调NF-κB p65蛋白的表达是其作用机制之一.     

清热解毒药配伍桔梗汤对急性肺损伤大鼠肺核因子Kappa B p65蛋白表达的影响

目的:探讨清热解毒药配伍桔梗汤对内毒素致急性肺损伤模型大鼠肺核因子Kappa B(NF-κB)p65蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、急性肺损伤(ALI)模型组、清热解毒药组、清热解毒药 桔梗汤组。给药6天后股静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制备ALI大鼠模型,观察各组大鼠肺病理形态学、髓过氧化物酶(MPO)活性及NF-κB p65蛋白表达的变化。结果:与生理盐水组相比,ALI模型大鼠肺组织中性粒细胞(PMNs)浸润明显、毛细血管充血、水肿,肺组织MPO含量及NF-κB p65胞核蛋白表达明显增强(P<0.01或P<0.05),NF-κB p65胞浆表达减弱(P<0.01)。中药干预后肺组织病变明显减轻,肺MPO水平、NF-κB p65胞核蛋白表达也相应下降(P<0.01或P<0.05),且清热解毒药联合应用桔梗汤疗效优于单纯清热解毒中药。结论:桔梗汤对清热解毒药抑制NF-κB p65从胞浆向胞核转移、发挥解毒抗炎功效具有促进作用。     

黄芪甲苷对angiotensin Ⅱ诱发的血管内皮细胞炎症反应的影响及机制研究

该实验拟明确黄芪甲苷对心血管疾病最主要的致病因素血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)所诱发的血管内皮细胞介导的炎症反应的抑制作用,以及在该过程中钙离子(Ca²⁺)/phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt)/血管内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)/一氧化氮(nitric oxide, NO)信号通路的作用。通过人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)培养模型,利用ELISA、cell-based ELISA,Western blot及单核细胞黏附实验等方法,明确黄芪甲苷对AngⅡ所诱发的炎症反应的抑制作用及相关机制。实验结果显示,黄芪甲苷明显增加HUVECs产生和释放NO,呈剂量和时间依赖性,并伴有eNOS蛋白的磷酸化(P<0.05),黄芪甲苷所诱发的上述变化被特异性的一氧化氮合酶阻断剂NG-monomethyl-L-arginin...     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖诱导增生的大鼠GMCs中NF-κB?p65、MMP-2?mRNA表达的影响

目的:观察黄芪、水蛭及其配方含药血清对脂多糖(LPS)诱导增生大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)表达核转录因子p65(NF-κB p65)、金属蛋白酶组织抑制剂-2(MMP-2)的影响,探索益气化瘀药物及其配方含药血清治疗系膜增生性肾小球肾炎的可能机制。方法:LPS诱导大鼠GMCs(HBEH)增殖,分别采用黄芪高剂量血清、水蛭高剂量血清、黄芪高剂量水蛭高剂量血清、黄芪低剂量水蛭高剂量血清进行干预,24h后收集细胞,用CCK-8法观察含药血清对GMCs增殖的影响,Real time PCR法测定NF-κB p65、MMP-2因子的表达变化。结果:LPS诱导系膜细胞增殖后,NF-κB p65mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.07倍,各含药血清组NF-κB p65mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。LPS诱导GMCs增殖后,MMP-2 mRNA表达较正常组明显升高(P0.01),表达量达到正常细胞的2.0倍,而各含药血清组MMP-2 mRNA表达量与LPS组比较均显著下降(P0.01)。上述指标各含药血清组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:黄芪、水蛭及其配方含药血清能够通过影响NF-κB65、MMP-2的表达减少GMCs的增殖及细胞外基质的沉积,益气化瘀含药血清的应用有利于缓解系膜增生性肾小球肾炎的进展。     

三七总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠的改善作用及对NO/iNOS/NF-κB通路的影响

目的研究三七总皂苷对非酒精性脂肪肝大鼠的改善作用及对NO/iNOS/NF-κB通路的影响。方法96只雄性SD大鼠随机分为空白组,模型组,辛伐他汀组(2 mg/kg),三七总皂苷低、中、高剂量组(4.5、9、18 mg/kg),每组16只,灌胃给药(10 mL/kg),分别于第8、12周取材,检测2个时间点各组大鼠外周血丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和肝脏NO、iNOS(诱导型一氧化氮合酶);HE染色观察肝组织病理学形态;免疫组化法检测iNOS在肝脏细胞中的表达情况;Western blot法检测NF-κB(核因子-κB)、p-NF-κB(磷酸化核因子-κB)、IKKα(IκB激酶-α)、p-IKKα(磷酸化IκB激酶-α)、IκBa蛋白表达量。结果与模型组比较,给药8周后,大鼠血清各项生化指标均出现了显著下降(P<0.05);给药12周后,与第8周结果比较,模型组血清生化指标显著增加(P<0.05),而给药组增加趋势并不显著,且三七总皂苷给药剂量在抑制非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂质沉积方面存在剂量-效应关系。三七总皂苷可显著下调肝组织中NO、iNOS水平及NF-κB信号通路蛋白的表达量(P<0.05)。结论三七总皂苷可有效降低非酒精性脂肪肝大鼠转氨酶水平及血脂指标,同时可以抑制NO/iNOS/NF-κB信号通路,减少肝损伤,是三七总皂苷降脂护肝、减轻炎症反应的可能机制之一。     

黄芪甲苷对体外高迁移率族蛋白B1介导小鼠调节性T细胞免疫功能的影响

目的：观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）刺激的小鼠调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）对CD4＋CD25-T细胞免疫功能的影响及黄芪甲苷（AST Ⅳ）对HMGB1介导Treg免疫功能的拮抗作用。方法采用清洁级BALB/c小鼠,活杀后分离脾脏的CD4＋CD25＋Treg、CD4＋CD25-T细胞,将CD4＋CD25-T细胞在48孔板上随机分为4组（每组12孔）培养,对照组：单纯CD4＋CD25- T细胞;Treg实验组：CD25＋∶CD25-按照1∶10比例加入100μl CD4＋CD25＋Treg与CD4＋CD25-T细胞共同培养;HMGB1＋Treg组：按CD25＋∶CD25-比例为1∶10加入100μl经HMGB1（1μg/ml）刺激72 h的Treg与CD4＋CD25-T细胞进行共培养;HMGB1＋AST IV＋Treg组： CD25＋∶CD25-按照1∶10比例加入100μl经HMGB1（1μg/ml）、AST IV（100μg/ml）刺激72 h的CD4＋CD25＋Treg与CD4＋CD25-T细胞共同培养。以上4组均于培养后72 h重新分离收集CD4＋CD25-T细胞及其上清液,采用噻唑蓝（MTT）法检测脾脏CD4＋CD25-T细胞增殖活性;ELISA法检测CD4＋CD25-T细胞活化核因子（NFAT）活性、孵育上清液IL-2表达。结果将CD4＋CD25＋Treg加入CD4＋CD25-T细胞培养后,CD4＋CD25-T细胞增殖活性受到抑制（0.166±0.039）,P＜0.01,NFAT活性（0.156±0.035）、IL-2水平（2.38±0.58）pg/ml均较对照组下降（P＜0.01）。加入经HMGB1刺激的Treg后,CD4＋CD25-T细胞增殖活性受抑制程度逆转（0.477±0.097）,P＜0.01。与CD4＋CD25＋Treg组比较,HMGB1＋Treg组NFAT活性（0.409±0.094）、IL-2（4.55±0.96）pg/ml均升高（P＜0.01）。与HMGB1＋Treg组比较,HMGB1＋AST Ⅳ＋Treg组CD4＋CD25-T细胞增殖受抑制程度加重（0.287±0.052）、NFAT活性（0.261±0.046）、IL-2水平（2.73±0.62）pg/ml降低（P＜0.01）。结论 HMGB1在体外可抑制小鼠Treg免疫功能发挥,而ASTⅣ可拮抗HMGB1对Treg免疫功能的抑制作用,表明其对HMGB1介导的促炎效应具有治疗作用。     

黄芪总皂苷对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤的保护作用及对肠组织p38MAPK/NF-κB表达的影响

目的:探讨黄芪总皂苷对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤的保护作用及对肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/核因子κB (NF-κB)表达的影响。方法:将100只SD大鼠分为对照组、模型组、地塞米松组及黄芪总皂苷低、高剂量组(以下简称低、高剂量组)。除对照组外,其余各组用牛磺胆酸钠诱导重症急性胰腺炎大鼠模型。模型制备成功后,低、高剂量组及地塞米松组给予相应药物腹腔注射,对照组和模型组给予等体积生理盐水。24 h后获取大鼠胰腺、肠黏膜组织及血清,测定黏膜损伤指数、血清淀粉酶、胰腺比重,HE染色观察肠黏膜损伤病理情况,测定肠黏膜p38MAPK、NF-κB蛋白和mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组肠黏膜损伤指数、血清淀粉酶、胰腺比重、肠组织p38MAPK、NF-кB mRNA和蛋白表达水平升高(P0.05);与模型组比较,地塞米松组和低、高剂量组以上各指标降低(P0.05);与地塞米松组比较,低剂量组以上各指标升高(P0.05);与低剂量组比较,高剂量组以上各指标降低(P0.05)。结论:黄芪总皂苷对重症急性胰腺炎大鼠肠道损伤有保护作用,可减轻急性胰腺炎大鼠肠道炎症反应;其机制与黄芪总皂苷抑制p38MAPK、NF-κB mRNA和蛋白表达,进而抑制p38MAPK/NF-κB炎症通路的激活有关。