丹酚酸B通过AKT/Bim/Bcl-2通路抑制肾细胞癌生长的机制研究

目的：研究丹酚酸B(SalB)对人肾透明细胞腺癌（ccRCC）细胞786-O生长、凋亡和蛋白激酶B(AKT)/细胞死亡调解子(Bim)/B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)通路表达的影响。方法：采用不同浓度SalB(40、80、120μmol/L)处理ccRCC细胞786-O 96h后,MTT比色法检测细胞生长活力;单克隆形成实验测定细胞增殖能力;膜联蛋白V(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)凋亡双染试剂盒测定细胞凋亡情况;活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧累计水平;荧光定量PCR检测细胞内AKT、Bim、Bcl-2、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达水平;Western blot检测细胞内AKT、磷酸化蛋白激酶B(p AKT)、Bim、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达水平。结果：SalB处理组和对照组相比,786-O细胞生长明显受到抑制（P<0.05）。SalB可引起细胞内活性氧物种（ROS）的累计并促进细胞凋亡（P<0.05）,可抑制pAKT、Bcl-2及Caspase 3蛋白的表达（P&l...     

基于PI3K/Akt通路探讨健脾化瘀方对大肠癌SW480增殖的影响

目的:探讨健脾化瘀方基于PI3K/Akt通路抑制大肠癌SW480增殖的相关机制。方法:取对数生长期的SW480细胞,噻唑蓝(MTT)检测不同质量浓度健脾化瘀方(0.25,0.5,1,2,4,8 g·L~(-1))对SW480细胞增殖的影响;不同质量浓度健脾化瘀方(1,2,4 g·L~(-1))培养24 h,另设空白组,流式细胞仪检测对SW480细胞凋亡、细胞周期的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),p27,细胞周期素D1(Cyclin D_1),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测健脾化瘀方对SW480细胞中PI3KⅢ,Akt,p27,Cyclin D_1,Bcl-2及Bax蛋白表达的影响。结果:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖有抑制作用,且呈现量效和时效关系。与空白组比较,健脾化瘀方作用于SW480细胞后明显促进细胞凋亡,细胞周期阻滞于G0/G1期,健脾化瘀方明显降低PI3K,Akt,Cyclin D_1,Bcl-2基因及蛋白的表达,明显升高p27,Bax基因及蛋白的表达(P0.05,P0.01)。结论:健脾化瘀方对人大肠癌细胞SW480增殖具有抑制作用,其机制可能是通过下调PI3K和Akt的表达,从而影响下游的Cyclin D_1,p27,Bcl-2,,Bax的表达,引起SW480细胞发生G0/G1期阻滞和凋亡。     

绿原酸基于PI3K/Akt信号通路对结肠癌细胞增殖和凋亡的调控作用

目的:探讨绿原酸对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:采用CCK8实验方法检测绿原酸对HCT116细胞增殖的影响,流式细胞术检测绿原酸对HCT116细胞凋亡的影响,免疫印迹技术检测绿原酸对HCT116细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)及Bax蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,绿原酸能明显抑制HCT116细胞增殖,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能显著诱导HCT116细胞凋亡,差异具有统计学意义(P0.05);绿原酸能明显抑制p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达,诱导Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性。结论:绿原酸能明显抑制HCT116细胞的增殖、诱导其凋亡,其作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。     

基于PTEN/PI3K/AKT信号通路花蕊石抗肝癌细胞增殖作用机制研究

目的探讨花蕊石对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及其初步作用机制。方法采用CCK-8法检测花蕊石含药血清对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路中第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和磷酸蛋白激酶B(p-Akt)相关蛋白的表达水平;RT-PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)相关基因mRNA的表达水平。结果花蕊石具有明显的抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用。花蕊石含药血清可明显上调PTEN/PI3K/AKT信号通路中PTEN蛋白的表达水平,降低PI3K及p-Akt蛋白的表达,同时下调NF-κB mRNA的表达。结论花蕊石能够抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并促进肝癌细胞凋亡,其作用机制可能与激活PTEN表达水平从而抑制PI3K/AKT信号通路及其下游基因NF-κB的异常活化有关。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法:不同浓度血根碱(2,4,6μmol·L~(-1))处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况。结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组时红绿荧光无变化,血根碱4,6μmol·L~(-1)组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6μmol·L~(-1)组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P0.05)。结论:血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡。     

加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞的影响

目的:探讨加味四君子汤含药血清对肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法:不同浓度加味四君子汤含药血清处理Hep-G2细胞后,采用细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;Annexin V/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡形态;免疫印迹法(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(m TOR)信号通路相关蛋白表达水平。结果:加味四君子汤含药血清呈浓度依赖性抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期。hoechst33342染色后,随着含药血清浓度的增加,Hep-G2细胞核显著呈碎块状致密浓染。同时,加味四君子汤含药血清能够抑制Hep-G2细胞Akt,m TOR,核糖体S6蛋白激酶(S6),真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)的磷酸化,从而上调Bcl-2相关X蛋白(Bax)和下调细胞周期蛋白(Cyclin D1),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达。加味四君子汤含药血清与300 nmol·L-1的PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584联合使用具有协同作用,含药血清能增强PI3K/m TOR双重抑制剂VS-5584对Hep-G2细胞中PI3K/Akt/m TOR信号通路靶点Akt和m TOR磷酸化的抑制作用。结论:加味四君子汤含药血清能抑制Hep-G2细胞的增殖,诱导其凋亡,阻滞其于G0/G1期,其机制可能通过阻断PI3K/Akt/m TOR信号通路而实现。     

1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮诱导人肺癌A549细胞凋亡

目的:研究1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对人肺癌A549细胞的促凋亡作用及其可能的分子机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对A549细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮对A549细胞中活化型半胱天冬酶-3(cleavedCaspase-3),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),叉头框蛋白O1(FOXO1),磷酸化叉头框蛋白O1(p-FOXO1),Bcl-2促细胞凋亡蛋白(Bim)表达的干预作用。结果:1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮(1.25,2.5,5,10,20 mg·L-1)能质量浓度和时间依赖性地抑制A549细胞增殖。作用12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为2.80,2.05μmol·L-1。流式细胞术结果显示1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮能显著诱导细胞凋亡,随着药物质量浓度的提高,细胞凋亡率逐渐上升。Western blot检测显示,1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮上调cleaved-Caspase-3和Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。同时会下调p-Akt和p-FOXO1的表达,上调Bim的表达。结论:1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮能够诱导A549细胞凋亡,该药理作用可能与1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹诺酮抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt/FOXO1信号通路有关。     

益气小复方通过PI3K/AKT通路逆转乳腺癌他莫昔芬耐药的机制研究

目的:研究益气小复方在乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药中的作用及对胞内磷脂酞肌醇激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的影响。方法:建立乳腺癌TAM耐药细胞(MCF-7/TAM)模型,细胞形态观察及MTT法测定细胞抑制率;不同浓度益气小复方处理MCF-7/TAM细胞,MTT法测定增殖抑制率,流式细胞仪测定凋亡率,蛋白印迹法(WB)测定细胞bax、bak、Bcl-2、PI3K、AKT、p-AKT、P-gp、PTEN蛋白表达水平。结果:与MCF-7细胞相比,MCF-7/TAM细胞形态不规则,细胞变大,触角延伸,细胞呈簇状生长,同浓度TAM处理后,MCF-7/TAM细胞抑制率明显降低,IC_(50)值显著升高(P0.05)。进一步研究益气小复方对MCF-7/TAM细胞增殖抑制发现,与MCF-7细胞相比,同浓度益气小复方处理后,MCF-7/TAM细胞细胞抑制率、IC_(50)值无差异(P0.05);选取40mg/ml、80mg/ml、160mg/ml进行后续实验,与MCF-7/TAM细胞组相比,低、中、高剂量益气小复方处理MCF-7/TAM细胞48h后,细胞凋亡率显著升高(P0.05);与MCF-7细胞组相比,MCF-7/TAM细胞组PI3K、P-gp、Bcl-2蛋白表达水平、AKT磷酸化水平显著升高(P0.05),PTEN蛋白表达水平、bax、bak显著降低(P0.05);与MCF-7/TAM细胞组相比,低、中、高剂量益气小复方组PI3K、P-gp、Bcl-2蛋白表达水平、AKT磷酸化水平显著降低(P0.05),PTEN蛋白表达水平、bax、bak显著升高(P0.05),呈剂量依赖性。结论:益气小复方可能通过抑制PI3K/AKT通路活化,逆转乳腺癌他莫昔芬耐药。     

左归丸调控PI3K/AKT信号通路的研究进展

左归丸是滋阴补肾的代表方剂,具有滋阴益髓、温壮肾阳、填精补肾之功效。现代研究表明其主要通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路中的相关细胞因子对机体神经、生殖、内分泌及骨科疾病等方面发挥防治功能,其主要机制为通过磷酸化AKT不同位点精准调控其下游B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2-associated X的蛋白质(BCL2-Associated X,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase3β,GSK3β)、雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)、叉头转录蛋白O(forkhead box O,FOXO)等靶蛋白发挥调节细胞周期,促进细胞代谢、生长及增殖,抑制细胞凋亡,调节氧化应激、炎症反应及能量代谢,调控肿瘤...     

基于PI3K/Akt信号通路探讨茯苓杏仁甘草汤抗动脉粥样硬化巨噬细胞凋亡的作用机制

目的 探讨茯苓杏仁甘草汤对内毒素(lipopolysaccharide, LPS)联合氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)诱导巨噬细胞凋亡的干预作用。方法 构建巨噬细胞凋亡模型，检测巨噬细胞凋亡率、细胞Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平、PI3K、Akt蛋白磷酸化水平，检测茯苓杏仁甘草汤对上述指标的影响，及PI3K抑制剂LY294002干预后上述指标的变化。结果 茯苓杏仁甘草汤降低Bax与Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平比值，升高PI3K、Akt蛋白磷酸化水平，其作用受到LY294002抑制。结论 茯苓杏仁甘草汤抑制巨噬细胞凋亡，其机制与激活PI3K/Akt信号通路有关，为临床治疗巨噬细胞凋亡相关心血管疾病提供了实验依据。     

α-常春藤皂苷对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-HN)对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:常规培养B16细胞至对数生长期,给予不同浓度α-HN(50,100,200μmol·L~(-1))处理,设未经α-HN处理的B16细胞为空白组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测α-HN处理24,48,72 h后各组细胞的增殖情况,采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测α-HN处理48 h后的细胞凋亡率,半胱天冬蛋白酶(Caspase)活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达情况。结果:与空白组相比,经50,100,200μmol·L~(-1)α-HN处理24,48,72 h后,B16细胞增殖抑制率显著增加(P0.01),且随着观察时间的延长,增殖抑制率有逐渐增加趋势,该抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;与空白组相比,α-HN处理48 h后B16细胞的凋亡率升高,Caspase-3和Caspase-9活性增强,且Bcl-2水平降低而Bax水平升高(P0.01);α-HN处理48 h后的p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达较空白组降低(P0.05,P0.01)。结论:α-HN具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,其可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥细胞毒及诱导凋亡作用,在黑色素瘤治疗中有较好的应用前景。     

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L~(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L~(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L~(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L~(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。     

覆盆子黄酮对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察覆盆子黄酮对Aβ_(25-35)所致的PC12细胞AD模型的保护作用;探讨覆盆子黄酮对Aβ_(25-35)所致的PC12细胞AD模型的保护作机制,为进一步探索覆盆子防治AD提供实验依据。方法采用不同浓度的Aβ_(25-35)处理分化后的PC12细胞,同时应用覆盆子黄酮进行干预,Annexin V-FITC/Hoechst33342法检测凋亡率,Western blot方法检测相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达量及其对PI3K/AKT通路的影响。结果覆盆子黄酮可明显降低细胞的死亡率和凋亡率。与模型组相比较,覆盆子黄酮能降低促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达,增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。覆盆子黄酮对总PI3K和总AKT的表达无明显差别,但p-PI3K和p-AKT显著升高。结论覆盆子黄酮具有抗AD作用,可能与激活PI3K/AKT通路,降低促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达,增高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,从而减少细胞凋亡有关。     

益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的：探讨益肾疏肝汤含药血清对雷公藤多苷干预的大鼠颗粒细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：分离大鼠卵巢颗粒细胞,使用不同含量的肾疏肝汤含药血清以及不同浓度的雷公藤多苷含药血清处理细胞48 h后,使用CCK-8法检测细胞存活率,筛选益肾疏肝汤含药血清和雷公藤多苷含药血清剂量。并将细胞分为正常组（正常培养的细胞）、损伤组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性对照组（雌二醇）。分别采用CCK-8法、TUNEL法、蛋白质印迹法检测细胞增殖、细胞凋亡、凋亡及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达。结果：与正常组比较,损伤组细胞增殖、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达均显著受到抑制（P<0.05）,而细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、裂解胱天蛋白酶-3（cl-caspase-3）蛋白水平均显著增加（P<0.05）;与损伤组比较,阳性对照组及中药低、中药中剂量组、中药高剂量组细胞增殖、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）,而细胞凋亡率、Bax、cl-caspase-3蛋白水平均显著抑制（P<0.05）;且中药组呈剂量依赖。结论：益肾疏肝汤含药血清可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡。     

蛇床子素对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡的影响以及其潜在的机制。方法:不同浓度蛇床子素作用于卵巢癌SKOV3细胞,采用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测蛇床子素对细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果:蛇床子素明显抑制SKOV3细胞的增殖;蛇床子素干预后,有典型的凋亡小体形成,SKOV3细胞的凋亡率随着药物浓度的增加而增加,80mg/L处理组细胞的凋亡率达到(24.90±5.35)%;qRT-PCR和Western Blot结果显示各浓度蛇床子素对SKOV3细胞促凋亡因子Bax mRNA和蛋白水平表达均有上调作用,而抗凋亡因子Bcl-2mRNA和蛋白表达均下调。结论:蛇床子素能够抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与其下调抗凋亡因子Bcl-2和上调促凋亡因子Bax的表达有关。     

基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷对脊髓损伤大鼠的神经保护作用

目的基于PI3K-Akt-eNOS通路探讨松果菊苷(ECH)对脊髓损伤(SCI)大鼠的神经保护作用并探讨其机制。方法大鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组、松果菊苷干预组、PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组。采用改良的Allen法建立SCI大鼠模型。通过脊髓运动功能(BBB)评分评估大鼠运动功能,HE染色观察脊髓组织病理变化,TUNEL检测脊髓组织细胞凋亡率,试剂盒检测血清一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量,qRT-PCR法检测各组脊髓组织eNOS和iNOS mRNA表达水平,Western blotting法检测脊髓组织Bax、Bcl-2、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果与假手术比较,脊髓损伤组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织eNOS m RNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著降低(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS m RNA、Bax蛋白表达均显著升高(P 0.05)。与脊髓损伤组比较,松果菊苷干预组大鼠BBB评分、血清NO和eNOS水平、脊髓组织e NOS mRNA以及Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著升高(P 0.05),血清iNOS水平、脊髓组织细胞凋亡数、iNOS mRNA、Bax蛋白表达均显著降低(P 0.05)。PI3K抑制剂LY294002组和松果菊苷干预+PI3K抑制剂LY294002组两组大鼠各检测指标差异均无统计学意义(P 0.05)。结论 ECH可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路对SCI大鼠发挥神经保护作用。     

芹菜素抑制蛋白激酶B活性诱导人卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨芹菜素通过抑制蛋白激酶B活性诱导人卵巢癌细胞凋亡的作用机制。方法采用细胞形态学观察、DNA ladder、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测Caspasse-3,Akt,磷酸化Akt,Bad及磷酸化Bad蛋白表达并测定Akt激酶活性。结果芹菜素明显抑制卵巢癌细胞的生长;DNA琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯形条带;Western blotting方法检测到Caspase-3的活性片段,并呈明显的时间依赖关系;芹菜素可以时间依赖方式抑制与细胞增殖相关的Akt及Akt下游促凋亡蛋白Bad的磷酸化,但对总Akt及总Bad蛋白的表达无影响。结论芹菜素通过抑制Akt活性能诱导人卵巢癌细胞发生凋亡。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨乌梅丸含药血清对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:观察乌梅丸含药血清对人胰腺癌SW1990细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法:制备乌梅丸含药血清,体外培养胰腺癌细胞株SW1990,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法筛选乌梅丸含药血清最佳作用时间用于后续实验;将SW1990细胞分为空白组和乌梅丸低、中、高组(含药血清2%、4%、8%),利用平板克隆实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验分别检测其克隆形成、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测乌梅丸含药血清对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SW1990细胞中凋亡相关蛋白,B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素C(Cyt C),活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)、cleaved Caspase-9,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中PI3K,磷酸化(p)-PI3K,Akt,磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平。结果:与空白组比较,作用72 h,乌梅丸低、中、高组吸光度A显著降低(P<0.01),与乌梅丸低组比较,乌梅...     

参芎葡萄糖注射液通过激活PI3K/AKT通路拮抗H_2O_2诱导H9c2细胞凋亡

探究参芎葡萄糖注射液拮抗H_2O_2诱导H9c2细胞凋亡的机制。体外培养H9c2细胞,预先给予体积分数1. 7%,3. 4%,6. 8%的参芎葡萄糖注射液处理H9c2细胞,再给予H_2O_2诱导细胞凋亡。MTS法检测细胞存活率,AO/EB荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,Annexin/PI法检测细胞凋亡率,基因芯片技术检测细胞表达谱的变化,荧光定量PCR技术(qRTPCR)检测PIK3CA,Bcl-2,Bax,caspase-3,GAPDH mRNA的表达,Western blot法检测PIK3CA,AKT,P-AKT,Bcl-2,Bax,caspase-3蛋白的表达水平,用试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和丙二醛(MDA)含量。结果显示,不同浓度的参芎葡萄糖注射液可显著提高H_2O_2诱导的H9c2细胞存活率(P0. 01),明显逆转H_2O_2诱导的细胞凋亡情况(P0. 01)。芯片实验发现,参芎葡萄糖注射液处理后,H9c2细胞有138个基因表达发生改变,其中与PI3K/AKT通路相关的PIK3CA差异表达倍数较高,为3. 59倍。qRT-PCR和Western blot结果表明,参芎葡萄糖注射液可下调H_2O_2处理后H9c2细胞中caspase-3的mRNA和蛋白表达水平(P0. 01),上调PIK3CA和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平(P0. 01),并上调AKT蛋白的磷酸化水平(P0. 01)。在PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用下,参芎葡萄糖注射液拮抗H_2O_2细胞损伤作用显著降低。结果表明,参芎葡萄糖注射液可能是通过调控PI3K/AKT信号通路来抑制H_2O_2诱导的H9c2细胞凋亡。