白术内酯Ⅲ通过调节自噬水平清除过氧化物减轻小鼠溃疡性结肠炎＊

目的 探讨白术内酯Ⅲ是否通过调节自噬水平清除过氧化物减轻小鼠溃疡性结肠炎（UC）。方法 将32只健康雄性BALB/c小鼠随机分为空白组（n=8）和造模组（n=24），造模组小鼠均采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇诱导造UC小鼠模型，造模成功后小鼠随机分为模型组、白术内酯Ⅲ组（20 mg·kg^-1）、白术内酯Ⅲ+自噬抑制剂组（20 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1），造模成功后第2天起按相应剂量给药，连续给药14天。进行小鼠疾病活动指数（Disease activity index，DAI）及结肠黏膜损伤指数（Colonic mucosal damage index，CMDI）评分；测量小鼠结肠长度及重量；苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色观察结肠组织病理学变化；酶联免疫吸附（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测结肠组织超氧化物歧化酶（Superoxidedismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase，GSH-PX）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量；蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）检测结肠组织Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62蛋白表达；透射电镜观察结肠上皮细胞中的自噬泡。结果 与空白组比较，模型组小鼠DAI、CMDI评分、单位结肠重量、结肠组织MDA含量及p62蛋白表达明显升高（P<0.05），小鼠结肠长度明显缩短、结肠组织SOD、GSH-PX含量及Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，白术内酯Ⅲ组小鼠DAI、CMDI评分、单位结肠重量、结肠组织MDA含量及p62蛋白表达明显降低（P<0.05），小鼠结肠长度、结肠组织SOD、GSH-PX含量及Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显升高（P<0.05）。自噬抑制剂阻止白术内酯Ⅲ诱导的Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达升高，抑制结肠组织SOD、GSH-PX含量。结论 白术内酯Ⅲ可明显改善UC病理损伤，通过调节自噬水平清除过氧化物发挥对UC小鼠的治疗作用。     

南葶苈子提取液对心肌缺血/再灌注大鼠心肌自噬及MAPK/ERK1/2通路的影响

目的观察南葶苈子提取液对心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)大鼠心肌自噬的影响并探讨其可能的作用机制。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、南葶苈子提取液低剂量组、南葶苈子提取液中剂量组、南葶苈子提取液高剂量组。采用结扎大鼠冠脉左前降支缺血30 min、再灌注120 min建立MI/RI模型。检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平以及心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,HE染色观察大鼠心肌组织病理学变化,透射电镜观察自噬小体变化,Western blotting测定心肌组织Beclin-1、LC3Ⅱ、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、蛋白激酶p38(p38)和p-ERK1/2蛋白水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠心电图ST段抬高,血清LDH、CK-MB和cTnⅠ均升高,心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,SOD活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达降低(P 0.05)。与模型组比较,阳性对照组及南葶苈子提取液中、高剂量组大鼠心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,SOD活力、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达升高(P 0.05)。与阳性对照组比较,南葶苈子提取液低、中剂量组大鼠心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量均升高,心肌组织SOD活力、p-ERK1/2降低,且南葶苈子提取液高剂量组大鼠血清CK-MB降低,低剂量南葶苈子提取液Beclin-1、p38及不同剂量南葶苈子提取液LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高,南葶苈子提取液低剂量组Bcl-2降低(P 0.05)。心电图ST段、血清LDH、CK-MB和cTnⅠ、心肌组织MDA含量、Beclin-1、p38蛋白以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值随南葶苈子提取液剂量增加呈下降趋势,心肌组织SOD活力、p-ERK1/2蛋白表达随剂量增加呈上升趋势。结论南葶苈子提取液处理可通过降低MI/RI大鼠心肌自噬保护心肌损伤,其保护机制可能与MAPK/ERK1/2通路有关。     

竹节参总皂苷对妊娠期高血压胎盘滋养细胞氧化应激损伤与过度自噬的影响

目的探讨竹节参总皂苷对妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞氧化应激反应与自噬的影响及作用机制。方法采用100μmol/L亚硝基左旋精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methylester,L-NAME)处理人胎盘滋养细胞株HTR-8/SV-neo 48 h,并给予竹节参总皂苷(20、40、80μg/mL)干预24 h,采用CCK-8法检测各组细胞活力;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用试剂盒检测各组细胞上清液中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽(glutataione,GSH)水平;采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein4,FABP4)m RNA和蛋白表达情况;采用Westernblotting法检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3 Ⅱ,LC3-Ⅱ)、LC3-Ⅰ、p62和自噬效应蛋白(Beclin-1)表达情况;采用免疫荧光法检测各组细胞LC3表达情况。结果与模型组比较,竹节参总皂苷组细胞活力显著升高(P0.05),细胞凋亡率显著降低(P0.01);上清液中SOD和GSH水平显著升高(P0.01),MDA水平显著降低(P0.01);FABP4 m RNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05);LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白表达水平显著升高(P0.05);LC3荧光染色强度降低。结论竹节参总皂苷能够改善妊娠期高血压疾病胎盘滋养细胞中的氧化应激反应,并抑制过度自噬,其机制可能与调控FABP4表达有关。     

电针对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子的影响

目的探讨电针对失神经骨骼肌萎缩大鼠自噬相关因子的影响。方法健康SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、电针组,每组10只。采用暴露并切断坐骨神经的方法制备失神经骨骼肌萎缩大鼠模型,假手术组只暴露坐骨神经不离断神经。造模后第2天,电针组电针术侧足三里、承山两穴,每日1次,每次10 min;其余两组只固定,不作处理,连续干预21 d。测定术侧腓肠肌湿重比,HE染色观察腓肠肌组织病理变化,Masson染色观察腓肠肌纤维变化,Western blot检测腓肠肌组织p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达,q RT-PCR检测腓肠肌组织Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA表达。结果与假手术组比较,模型组腓肠肌湿重比明显下降,腓肠肌组织内部肌纤维严重萎缩变形,p62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白和Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA水平明显升高(P0.05);与模型组比较,电针组的腓肠肌湿重比明显升高,腓肠肌萎缩较模型组明显减轻,电针组可明显降低Beclin-1蛋白和Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3ⅠmRNA水平(P0.05)。结论电针干预能下调失神经骨骼肌萎缩大鼠腓肠肌中Beclin-1、Vps34、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达,提示电针可能通过抑制细胞自噬的激活,稳定细胞内环境,延缓肌萎缩的进程。     

护心方含药血清对THP-1源性泡沫细胞自噬相关蛋白的影响

目的探讨护心方抗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法用160 nmol/L佛波醇酯类多克隆刺激剂孵育THP-1细胞24 h后诱导分化成巨噬细胞,加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养48 h,使其转化为泡沫细胞。以40%护心方含药血清作用12 h。采用蛋白质印迹检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3I(LC3-Ⅰ)、Beclin-1及p62表达,激光共聚焦显微镜观察自噬蛋白指标LC3B在细胞内分布及含量。结果与空白组比较,模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,LC3B表达平均荧光强度显著升高(P0.05);与模型组比较,护心方组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达显著降低,p62表达显著升高,LC3B表达平均荧光强度降低(P0.05)。结论护心方能够逆转ox-LDL诱导的细胞自噬相关蛋白的表达,从而抵抗动脉硬化过程中过度自噬。这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

熊果酸对肺癌细胞A549自噬相关蛋白的影响

目的研究自噬在熊果酸抑制人肺癌A549细胞增殖中的作用及机制。方法应用CCK8法检测熊果酸对A549细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR法检测自噬相关基因LC3、 Beclin-1及p62的表达情况;Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、 Beclin-1及p62的表达情况。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌(3-MA)观察熊果酸对A549细胞增殖的抑制作用。结果熊果酸可以显著抑制人肺癌A549细胞的活力(P0.01)且随着熊果酸剂量增加,对细胞的生长抑制率显著上升。熊果酸可诱导A549细胞自噬发生,诱导自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达的增加;p62表达降低(P0.01);3MA使得自噬相关基因、蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1表达明显降低;p62表达明显增加(P0.01)。自噬抑制剂3-MA提高了熊果酸对A549细胞的抑制作用(P0.01)。结论熊果酸抑制A549细胞的增殖,可能通过调节LC3Ⅱ/Ⅰ、 Beclin-1及p62蛋白表达诱导细胞发生自噬。自噬抑制剂3-MA能够增强熊果酸抑制A549细胞的增殖抑制作用,有望为肺癌的临床治疗提供新的联合治疗方案。     

竹节参总皂苷调节大鼠海马区自噬减轻脑缺血再灌注损伤

目的探讨竹节参总皂苷对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织中自噬的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、竹节参总皂苷低剂量组(50 mg/kg)、竹节参总皂苷高剂量组(100 mg/kg)。提前连续给药7 d。末次给药30 min后,采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型使大鼠缺血1.5 h,再灌注24 h后进行神经功能评分。TTC染色检测脑梗死范围百分比,电镜观察自噬小体,Western blot检测海马组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬底物蛋白p62的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分和脑梗死范围百分比增加(P0.01),自噬小体增多,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增加(P0.01),p62表达下调(P0.01)。与模型组比较,竹节参各组大鼠的神经功能损伤明显改善,脑梗死范围百分比减小(P0.01),自噬小体减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低(P0.01),p62表达上调(P0.01)。结论竹节参总皂苷可能通过抑制自噬的过度激活,从而减轻脑缺血再灌注损伤的发生。     

益肾汤经结肠透析调节自噬改善慢性肾衰竭大鼠肾纤维化

目的?探讨益肾汤经结肠透析通过调节肾脏自噬活性改善慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾纤维化的作用机制。方法? SD大鼠随机分为正常（N）组10只和造模组20只，腺嘌呤200 mg/（kg·d）灌胃4周制作CRF模型。造模成功后随机分为CRF组和益肾汤经结肠透析（YS）组，每组10只。干预2周后检测血清肌酐、尿素氮水平，HE染色、Masson染色观察肾脏病理改变，HE染色观察结肠组织病理，免疫组化检测结肠组织ZO-1、Claudin-1表达，Westen Blot检测肾脏组织Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、FN、α-SMA表达。结果?CRF大鼠的血清肌酐、尿素氮水平较N组升高（P<0.05），肾脏组织可见肾小球硬化，肾小管扩张，间质炎症细胞浸润，胶原纤维增生；结肠组织可见肠道黏膜绒毛萎缩、倒塌，黏膜层炎性细胞浸润。YS组血清肌酐、尿素氮水平较CRF组下降（P<0.05），病理改变减轻。免疫组化及Western Blot结果显示，与N组比较，CRF组结肠组织ZO-1、Claudin-1表达下降，肾组织FN、α-SMA、p62表达升高，Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达下降（P<0.05）。与CRF组比较，YS组结肠组织ZO-1、Claudin-1表达升高，肾组织FN、α-SMA、p62表达下降，Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高（P<0.05）。结论?益肾汤经结肠透析可降低肌酐、尿素氮，改善肾纤维化，其机制可能是通过修复肠道屏障，上调肾脏自噬活性。     

基于自噬探讨健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜保护的作用机制

目的 通过观察健脾益肠散对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠自噬相关分子表达的影响,探讨其肠黏膜保护 的作用机制。方法 将 SD 大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益肠散组和柳氮磺吡啶组。采用 2, 4, 6-三硝基 苯磺酸 （TNBS） -乙醇溶液复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型;模型复制成功后灌胃给药,每日 1 次,持续 14 d。 观察大鼠一般状况,计算疾病活动指数 （DAI） 评分;苏木素-伊红 （HE） 染色法观察结肠组织病理形态;透射电 镜观察结肠上皮细胞自噬情况;免疫荧光染色法、蛋白免疫印迹法 （Western Blot） 检测结肠组织肌球蛋白样 BCL2 结合蛋白 （Beclin1） 、微管相关蛋白 1 轻链 3 （LC3） 蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应 （Real-time PCR） 检测自噬蛋白 5 （Atg5） 、自噬蛋白 7 （Atg7） 、泛素结合蛋白 62 （p62） mRNA 表达。结果 与正常组比较, 模型组一般情况较差,DAI 评分明显升高 （P＜0.000 1） ;结肠组织出现明显的上皮细胞损伤,电镜下自噬体的 数量明显减少;结肠组织 Beclin1、LC3-II/LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显降低 （P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显升高 （P＜0.000 1） 。与模型组比较,健脾益肠散组大鼠一般情况明显恢复,DAI 评分明显降低 （P＜0.000 1） ;结肠组织病理损伤有不同程度的改善,电镜下自噬体的数量明显增多;结肠组织 Beclin1、LC3-II/ LC3-I 蛋白及 Atg5、Atg7 mRNA 表达明显升高 （P＜0.01,P＜0.001,P＜0.000 1） ,p62 mRNA 表达明显降低 （P＜0.01） 。结论 健脾益肠散可通过上调自噬相关分子 Beclin1、LC3、Atg5 及 Atg7 的表达,下调 p62 的表 达,增强自噬以达到保护溃疡性结肠炎模型大鼠结肠黏膜损伤的作用。     

电针“肠病方”对急性溃疡性结肠炎大鼠结肠自噬及AMPK/mTOR信号通路的影响

目的：观察电针“肠病方”对溃疡性结肠炎（UC）大鼠自噬水平和腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路相关蛋白表达的影响，探讨其治疗UC的作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、西药组和电针组，每组8只。采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠溶液7 d复制UC大鼠模型。电针组予双侧“天枢”“上巨虚”和“中脘”电针治疗，每次20 min，每日1次，连续3 d；西药组予美沙拉嗪悬液（200 mg/kg）灌胃，每日1次，连续3 d。观察并记录各组大鼠一般情况，记录粪便形态并进行隐血试验以评估疾病活动指数（DAI）;HE染色法观察大鼠结肠形态及病理变化；ELISA法检测血清白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子（TNF-α）、IL-10的含量；荧光定量PCR法检测结肠组织自噬标志物微管相关蛋白3B(LC3B)、p62 mRNA的表达水平；Western blot法检测结肠组织中p62蛋白表达量及LC3BⅡ/LC3BⅠ、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR比值。结果：与空白组比较，模型组大鼠一般情况较差，结肠黏膜屏障破坏，炎性细胞浸润，腺体萎缩或消失，隐...     

川陈皮素防治肝缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的探究川陈皮素防治肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的作用及机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组和川陈皮素(10 mg/kg)组,采用ELISA法检测各组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)活性;采用苏木素-伊红(HE)染色法考察各组大鼠肝组织病理变化;采用透射电子显微镜(TEM)观察各组大鼠肝细胞线粒体结构;采用Western blotting和qRT-PCR考察各组大鼠肝组织自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)、自噬相关基因-7 (autophagy-related gene-7,ATG-7)、p62蛋白和mRNA表达情况。采用H2O2诱导大鼠肝细胞BRL建立氧化损伤细胞模型,设置对照组、模型组和川陈皮素(10μmol/L)组,采用Western blotting和qRT-PCR考察各组细胞Beclinl、LC3-Ⅱ、ATG-7、p62蛋白和mRNA表达情况;采用MitoTracker染色和免疫荧光法考察各组细胞自噬蛋白与线粒体的共定位情况;考察自噬抑制剂和诱导剂对川陈皮素细胞保护作用的影响。结果与对照组比较,模型组大鼠血清ALT和AST活性均显著升高(P0.05),肝组织病变,肝细胞线粒体数目增加,结构错乱,受损的线粒体被吞噬,肝组织中LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05);与模型组比较,川陈皮素组大鼠血清ALT和AST活性明显降低(P0.05),肝组织病变程度减轻,线粒体形态变化得到明显改善,肝组织中LC3-Ⅱ、Beclinl、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05)。氧化损伤细胞模型中BRL细胞LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),Beclin1和MitoTracker的共定位数目增加;与模型组比较,川陈皮素组BRL细胞中LC3-Ⅱ、Beclin1、ATG-7蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.05),p62蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05),Beclin1和MitoTracker的共定位数目减少;自噬抑制剂3-MA (1、5 mmol/L)显著增强川陈皮素对BRL细胞的保护作用(P0.05),自噬诱导剂雷帕霉素显著抑制川陈皮素对BRL细胞Beclin1蛋白和mRNA表达水平的下调作用(P0.05)。结论川陈皮素对HIRI具有较好的防治作用,其机制可能与抑制线粒体自噬有关。     

电针“百会”“太冲”对自发性高血压大鼠心肌肥大和自噬的影响

目的:通过观察电针对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞超微结构和自噬相关蛋白表达的影响,探究电针调节SHR心肌肥大的内在机制。方法:选用12只12周龄雄性WKY大鼠作为正常组,24只同周龄雄性SHR随机分为模型组和电针组各12只。电针组电针"百会"和右侧"太冲",留针20min,每日1次,共30d。以无创血压仪检测大鼠尾动脉收缩压,超声心动检测大鼠左心室肥厚程度和功能,Masson染色和透射电子显微镜观察心肌组织结构和细胞超微结构的变化,Western blot法检测各组大鼠心肌组织中Beclin-1和LC3表达的变化。结果:模型组大鼠收缩压与正常组比较显著升高(P0.01),电针组大鼠收缩压与模型组相比显著降低(P0.01)。与正常组比较,模型组左心室质量指数(LVMI)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)显著升高(P0.01),舒张末期左室内径(LVIDd)显著降低(P0.01);与模型组比较,电针组LVMI、LVAWd和LVPWd明显降低(P0.01,P0.05),LVIDd显著升高(P0.01)。Masson染色和透射电子显微镜结果显示,电针组较模型组心肌组织损伤明显改善,自噬现象明显减少。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P0.01);与模型组比较,电针组心肌组织Beclin-1、LC3-Ⅱ的相对表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低(P0.01,P0.05)。结论:电针"百会""太冲"可有效改善SHR心肌肥大,其机制可能与电针调节Beclin-1和LC3的表达,从而抑制心肌细胞的过度自噬有关。     

通窍明目汤通过p53/AMPK/mTOR信号通路介导的细胞自噬改善青光眼视网膜神经节细胞损伤的机制研究

目的 观察通窍明目汤对青光眼视网膜神经节细胞（RGC）氧化应激损伤的作用机制及其对p53/AMPK/mTOR通路所介导的RGC自噬的影响。方法 采用CCK-8法检测RGC增殖率,流式细胞术检测RGC凋亡率,免疫荧光检测RGC内活性氧（ROS）表达,ELISA法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量及活性,Western blot检测RGC中Beclin-1、p62表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及p53/AMPK/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 与空白组比较,模型组RGC增殖率下降,RGC凋亡率升高;ROS阳性细胞数量增加,SOD活性、MDA和GSH-PX含量升高,模型组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、细胞核p53、p-AMPK及mTORC1表达升高,p62、细胞质p53、AMPK及p-mTORC1蛋白表达降低（P<0.05）;与模型组比较,各浓度通窍明目汤组RGC增殖率升高,RGC凋亡率下降;RGC中ROS阳性细胞数量减少;SOD活性,MDA和GSH-PX含量降低,与模型组相比,各剂量通窍明目汤组及PFT-ɑ组细胞...     

艾灸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬功能的影响

目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及自噬相关蛋白LC3、p62表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组12只与造模组48只,采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF模型,将建模成功的大鼠随机均分为模型组、艾灸组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。艾灸组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴,每日1次,每次20min,治疗3周。3-MA组按15 mg/kg给予3-MA混悬液腹腔注射,每日1次,共3周。RAPA组按2mg/kg给予RAPA混悬液灌胃,每日1次,共3周。观察大鼠的一般情况及行为体征;心功能测量仪检测大鼠心率(HR)、心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升或下降速率(±dp/dtmax);HE染色法观察心肌病理变化;Western blot法检测心肌细胞自噬相关蛋白LC3及p62表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现肿胀、空泡,肌纤维断裂、溶解,排列紊乱;与模型组比较,艾灸组和3-MA组大鼠心肌细胞的数量正常,心肌纤维排列相对整齐,RAPA组心肌细胞出现肿胀、空泡,心肌纤维断裂、溶解,排列紊乱等状况。与正常组比较,模型组HR和LVEDP明显升高(P0.01),CO、LVSP及±dp/dtmax明显下降(P0.01),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),而p62表达明显下降(P0.01)。与模型组比较,艾灸组和3-MA组HR和LVEDP明显下降(P0.05),CO、LVSP及±dp/dtmax明显升高(P0.05),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显降低(P0.01),p62表达明显升高(P0.01),而RAPA组LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P0.01),p62表达明显降低(P0.01)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低心肌细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ、升高p62蛋白表达水平,发挥类似于3-MA的自噬抑制作用,抑制心肌细胞过度自噬、减轻心肌损伤有关。     

三才连梅颗粒通过Nrf2/HO-1信号通路对糖尿病小鼠生精功能的影响

目的:探讨三才连梅颗粒通过核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路影响糖尿病小鼠生精功能的作用机制。方法:将2型糖尿病小鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、三才连梅组、二甲双胍组。给药4周后,取小鼠附睾检测精子参数;透射电镜及HE染色观察睾丸病理改变,TUNEL染色检测睾丸生精细胞凋亡情况;qPCR及Western blot检测睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62的表达水平;ELISA检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的表达水平。结果:与糖尿病模型组比较,三才连梅组能显著提高大鼠精子密度、活力及存活率,上调糖尿病小鼠睾丸组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达水平,增加SOD生成,减少MDA的生成,下调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、P62、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达(均P<0.05)。与糖尿病模型组比较,三才连梅组可显著抑制生精细胞过度自噬,减轻生精细胞凋亡。结论:三才连梅颗粒能有效提高...     

基于自噬蛋白研究恒清Ⅰ号方对血管性痴呆大鼠的作用及其机制

目的基于自噬蛋白研究恒清Ⅰ号方对血管性痴呆大鼠的作用及其机制。方法将50只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、恒清Ⅰ号方低剂量组、恒清Ⅰ号方中剂量组和恒清Ⅰ号方高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余组均利用双侧颈总动脉永久性结扎法建立血管性痴呆模型。造模7 d后,恒清Ⅰ号方低、中、高剂量组分别给予恒清Ⅰ号方0.268 g/mL、0.535 g/mL、1.070 g/mL灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,均2次/d,持续灌胃30 d。灌胃结束后采用Morris水迷宫实验测试大鼠的学习及记忆能力,取海马组织检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测海马区Beclin-1、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果水迷宫实验第1～5天,模型组大鼠逃避潜伏期均明显长于假手术组(P均0.05);实验第2～5天,恒清Ⅰ号方各剂量组大鼠逃避潜伏期均明显短于模型组(P均0.05),且恒清Ⅰ号方中、高剂量组均明显短于恒清Ⅰ号方低剂量组(P均0.05),恒清Ⅰ号方高剂量组明显短于恒清Ⅰ号方中剂量组(P均0.05);水迷宫实验第6天,模型组大鼠跨越平台次数明显少于假手术组(P0.05),恒清Ⅰ号方中、高剂量组大鼠跨越平台次数均明显多于模型组和恒清Ⅰ号方低剂量组(P均0.05),且恒清Ⅰ号方高剂量组明显多于恒清Ⅰ号方中剂量组(P0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中MDA含量明显升高(P0.05),SOD活力明显降低(P0.05);与模型组和恒清Ⅰ号方低剂量组比较,恒清Ⅰ号方中、高剂量组大鼠海马组织中MDA含量及Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均明显降低(P均0.05),SOD活力均明显升高(P均0.05);与恒清Ⅰ号方中剂量组比较,恒清Ⅰ号方高剂量组大鼠海马组织中MDA含量及Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平明显降低(P均0.05),SOD活力明显升高(P0.05)。结论恒清Ⅰ号方可能通过抗自由基损伤和抑制某些自噬蛋白,从而改善血管性痴呆大鼠学习及记忆能力,并且其效应具有剂量依赖性。     

云南哈尼族验方“魔呐奇”抑制缺血半影区神经元自噬流诱导卒中后神经保护研究

目的观察云南哈尼族验方"魔呐奇"对大鼠缺血性脑卒中后半影区神经元自噬流的影响。方法将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和魔呐奇组各18只,模型组和魔呐奇组参照线栓法制备大脑中动脉梗死模型。造模24 h后,魔呐奇组给予"魔呐奇"洒剂腹腔注射,模型组腹腔注射等量生理盐水。灌胃14 d后,评估神经功能缺损评分,TTC染色测定大脑相对梗死体积;Westernblot法检测缺血半影区自噬流通路相关蛋白Beclin-1、LC3、P62(Insouble, Souble)、Ubiquitin、CathepsinB、LAMP1表达水平;免疫荧光双标法对皮质缺血半影区LC3阳性神经元蛋白表达进行定位,计算阳性细胞占比。结果模型组大鼠mNSS评分为(5.16±0.98)分,梗死脑组织占比为(23.87±3.78)%,魔呐奇组分别为(2.67±0.52)分和(18.35±1.75)%,魔呐奇组均明显低于模型组(P均0.05)。模型组大鼠缺血半影区Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62(Insouble)、Ubiquitin、CathepsinB、LAMP1蛋白表达水平均明显高于假手术组(P均0.05),P62(Souble)蛋白表达水平明显低于假手术组(P0.05);魔呐奇组大鼠缺血半影区Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62(Insouble)、Ubiquitin、CathepsinB、LAMP1蛋白表达水平均明显低于模型组(P均0.05),P62(Souble)蛋白表达水平与模型组比较差异无统计学意义(P0.05);模型组皮质缺血半影区LC3阳性表达占比明显高于假手术组(P0.05),魔呐奇组明显低于模型组(P0.05)。结论 "魔呐奇"可抑制皮质缺血半影区自噬流,保持自噬与溶酶体清除动态平衡,提高自噬流通畅性,发挥卒中后神经保护作用。     

电针预处理对急性心肌梗死无复流大鼠心肌自噬与凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察电针预处理对急性心肌梗死大鼠心肌无复流及对缺血区心肌组织自噬、凋亡相关蛋白表达的影响。方法 40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和阿托伐他汀组,采用结扎左冠状动脉的方法复制急性心肌梗死无复流模型。6%硫磺素、伊文思兰和TCC染色观察心肌缺血、无复流及梗死的范围;Western blotting法检测缺血区心肌组织中自噬相关蛋白(Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62/SQSTM1)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)的表达。结果电针预处理组心肌无复流和梗死面积显著减少(P0.01);此外,电针还能够显著降低再灌注大鼠心肌组织中Beclin1、LC3Ⅱ、p62/SQSTM1和Bax蛋白,增加LC3Ⅰ、Bcl-2蛋白的表达,调控再灌注大鼠心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2/Bax的比例,与模型组比较,差异均具有显著统计学意义(P0.01)。结论电针预处理能够通过调控心肌细胞自噬和凋亡水平,改善急性心肌梗死再灌注无复流现象,减少心肌梗死的面积。     

丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响

目的 观察丹参通络解毒汤对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1及LC3表达的影响,探讨其治疗MIRI的作用机制。方法 将大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、丹参通络解毒汤组和自噬抑制剂组,除空白组外,其余各组采用左冠状动脉前降支结扎法建立MIRI大鼠模型,假手术组只穿线不结扎。造模结束后,丹参通络解毒汤组每日予丹参通络解毒汤（15.66g/kg）灌胃,其余各组大鼠均灌胃等体积生理盐水,连续7 d。自噬抑制剂组术后腹腔注射3-甲基腺嘌呤溶液（15 mg/kg）,透射电镜观察大鼠心肌组织超微结构;生化分析仪检测血清乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平;ELISA检测大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平;免疫组化检测大鼠心肌组织LC3蛋白表达;RT-PCR检测心肌组织Beclin-1 mRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织Atg5、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠心肌纤维排列不整齐,结构破裂,有自噬小体形成;血清LDH、CK-MB和MDA水平显著升高,SOD水平显著降低...     

平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响

目的:通过测定Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达,探讨平喘颗粒对哮喘大鼠自噬的抑制机理。方法:随机将30只Wistar大鼠分为3组,正常组、模型组、平喘颗粒组,每组10只。在第2次致敏后第4天开始给予给与中药药液灌胃。平喘颗粒组按体质量给予平喘颗粒溶液1 mL/100 g灌胃,激发阶段则每次激发前1h灌胃;正常组与模型组均予等量生理盐水灌胃。各组均于末次激发24 h后处死,取肺组织,光镜下观察肺组织的病理学改变。采用免疫组化SP法检测肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ的表达。结果:平喘颗粒组和模型组大鼠肺组织Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达均高于正常组,差异有统计学意义(P0.01);平喘颗粒组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达较模型组明显受到抑制,差异有统计学意义(P0.01)。结论:平喘颗粒能减轻哮喘后的炎症反应,并且可抑制细胞自噬信号通路,从而保护肺部组织细胞,减轻哮喘发作。