基于网络药理学及实验验证探究金水六君煎对人支气管上皮细胞黏液高分泌的影响

目的：通过网络药理学挖掘金水六君煎治疗气道黏液高分泌的潜在靶点,并采用体外实验探究金水六君煎对人支气管上皮细胞黏液高分泌的干预作用及作用机制。方法：采用网络药理学预测金水六君煎治疗气道黏液高分泌潜在靶点。将24只雄性SPF大鼠随机分为2组,中药组与正常组分别用金水六君煎[5.26g/(kg·d)]和等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,5 d后麻醉下取大鼠含药血清和正常血清;将第5代人支气管上皮细胞分为正常组、模型组、不同浓度(10%、15%、20%)含药血清组、阿奇霉素组;正常组予常规培养液培养12 h后,加入15%正常大鼠血清干预12 h;其余各组采用香烟提取物(CSE)联合脂多糖(LPS)干预12h构建人支气管上皮细胞黏液高分泌模型,模型组干预后,加入15%正常大鼠血清干预12 h;不同浓度含药血清组干预后,分别加入10%、15%、20%含药血清继续干预12 h;阿奇霉素组干预后,加入含25μmol/L阿奇霉素血清继续干预12 h。采用CCK8检测细胞活力;采用Western blot法验证潜在靶点。结果：网络药理学预测黄芩素、松柏苷是与疾病靶点连接最广泛的活性物质,蛋白质-蛋白质相互...     

冠通方及其拆方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:通过冠通方及其拆方含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响研究,探讨冠通方防治再狭窄的部分作用机制.方法:每组SD大鼠每天给药剂量分别为冠通方组23.75 g·kg-1,活血祛瘀组8.75 g·kg-1,益气养阴组5 g·kg-1,清热化痰组10 g'kg-1,连续给药7d,制备冠通方及其各拆方含药血清,将大鼠VSMC分为6组(每组6个复孔),空白组加5％正常大鼠血清,模型组加5％正常大鼠血清及10-6mol· L-1的AngⅡ,冠通方及各拆方组在每组分别加入5％含药血清及10-6mol·L-1的AngⅡ,孵育48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;结果:血管平滑肌细胞模型组早期细胞凋亡率(0.36 ±0.14)％,晚期细胞凋亡率(1.02±0.86)％与空白对照组早期细胞凋亡率(2.22±0.43)％,晚期细胞凋亡率(1.29±0.57)％相比,细胞凋亡率均明显降低(P＜0.01).与模型组相比早期、晚期细胞凋亡率冠通方组为(23.4±0.95)％,(9.1±0.69)％、活血祛瘀组为(8.08±0.54)％,(18.6±1.48)％、益气养阴组(16.9±0.79)％,(4.38±0.90)％、清热化痰组(5.9±0.99)％,(11.5±0.71)％,早期及晚期凋亡率均明显升高(P＜0.05);结论:冠通方抑制VSMC的增殖与影响其周期、诱导其凋亡有关;且冠通方组作用优于其拆方组.     

二仙汤及其拆方含药血清对成骨细胞分化的影响

目的:研究二仙汤及其君、臣、佐、使拆方含药血清对成骨细胞分化的影响。方法:实验以成骨细胞系MC3T3-E1细胞为基础,分为空白组、白藜芦醇15mg/kg组、二仙汤整方8g/kg组及依据君臣佐使关系的4个拆方组,即淫羊藿+仙茅3.2g/kg组、淫羊藿+仙茅+巴戟天4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+当归4.8g/kg组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏4.8g/kg组。分别灌胃大鼠,制备含药血清,分别以10%含药血清作用于成骨细胞,以对硝基苯磷酸盐(pNPP)法和碱性磷酸酶(ALP)染色检测成骨细胞ALP活性;以Von Kossa染色法检测成骨细胞矿化结节形成;采用Western blot法检测成骨细胞骨钙素(OC)、骨形成蛋白-2(BMP-2)的表达。结果:与空白组比较,二仙汤整方和各拆方组10%含药血清均能显著增强成骨细胞ALP的活性,其中二仙汤整方组、淫羊藿+仙茅+知母+黄柏组提高成骨细胞ALP活性的作用最为明显,二仙汤整方和各拆方组均可显著提高成骨细胞OC、BMP-2的表达。结论:二仙汤及各拆方含药血清均不同程度地提高成骨细胞ALP活性,增强矿化结节的形成,促进OC、BMP-2的表达,知母、黄柏的作用尤为重要。     

蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823的影响研究

目的研究蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823增殖凋亡,以及细胞E-钙黏素(Ecad)、整合素(Integrin)、基质金属蛋白酶(MMP-9)蛋白表达水平的影响,阐明蜥蜴胃康方干预胃癌细胞的作用及其机制。方法 70只SPF级雄性SD大鼠,随机分为7组:生理盐水对照组(A),蜥蜴胃康方组(B)、拆方补气组(C)、养阴组(D)、解毒通络组(E)、华蟾素片对照组(F)、5-FU对照组(G),每组10只。各组分别用相应浓度药物灌胃1周后处死,于腹主动脉处取血、离心,制备含药血清,加于人胃癌细胞BCG-823培养48h,MTT法检测含药血清对胃癌细胞增殖凋亡的影响;Western-Blot检测胃癌细胞Integrin、E-cad、MMP-9蛋白表达的变化。结果各含药大鼠血清干预组OD均值小于生理盐水对照组;蜥蜴胃康方组(B)及其拆方C、E组与对照组F、G比较,P0.05;蜥蜴胃康方组B与拆方组C、D、E比较,P0.05;拆方组C、D、E组之间比较,P0.05,以补气组C作用较佳,其次为解毒通络组;Integrin、E-cad蛋白表达与生理盐水组比较,呈显著升高趋势;MMP-9蛋白表达与生理盐水组比较则显著降低,均以蜥蜴胃康方组为著。结论蜥蜴胃康方可通过影响Integrin、E-cad及MMP-9蛋白表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,具有较好的抗癌作用。     

蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823影响的研究

目的:研究蜥蜴胃康方及其拆方含药SD大鼠血清对人胃癌细胞BCG-823增殖凋亡,以及细胞E-钙黏素(E-cad)、整合素(Integrin)、基质金属蛋白酶(MMP9)蛋白表达水平的影响,阐明蜥蜴胃康方干预胃癌细胞的作用及其机制。方法:70只SPF级雄性SD大鼠,随机分为7组:生理盐水对照组A,蜥蜴胃康方组B、拆方补气组C、养阴组D、解毒通络组E、华蟾素片对照组F、5-FU对照组G,每组10只。各组分别用相应浓度药物灌胃1周后处死,于腹主动脉处取血、离心,制备含药血清,加于人胃癌细胞BCG-823培养48h,MTT法检测含药血清对胃癌细胞增殖凋亡的影响;WesternBlot检测胃癌细胞Integrin、E-cad、MMP-9蛋白表达的变化。结果:各含药大鼠血清干预组OD均值小于生理盐水对照组;蜥蜴胃康方组B及其拆方C、E组与对照组F、G比较,P﹤0.05;蜥蜴胃康方组B与拆方组C、D、E比较,P﹤0.05;拆方组C、D、E组之间比较,P0.05,以补气组C作用较佳,其次为解毒通络组;Integrin、E-cad蛋白表达与生理盐水组比较,呈显著升高趋势;MMP-9蛋白表达与生理盐水组比较则显著降低,均以蜥蜴胃康方组为著。结论:蜥蜴胃康方可通过影响Integrin、E-cad及MMP-9蛋白表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,具有较好的抗癌作用。     

化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响

目的:观察化瘀祛痰方药及其拆方对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症因子表达的影响。方法:SD大鼠随机分为空白对照组、全方组、补气组、化瘀组、祛痰组,生理盐水和相应中药予以ig,第9天腹主动脉采血,分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为①正常对照组、②LPS刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为10 mg.L-1 LPS,③～⑦组用相应含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为10 mg.L-1 LPS,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。RT-PCR法检测核因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达;ELISA法检测TNF-α蛋白的表达;免疫荧光细胞化学法检测NF-κB蛋白的表达。结果:经LPS刺激后NF-κB和TNF-α的表达与正常组比较均明显升高(P<0.01)。全方组NF-κB和TNF-α的表达与刺激组相比明显受抑制(P<0.01);拆方各组中,化瘀组NF-κB和TNF-α的表达显著减少。补气、祛痰、空白血清对照组NF-κB和TNF-α的表达显著高于全方组;而化瘀组NF-κB和TNF-α的表达与全方组相比较无统计学差异。结论:化瘀祛痰方药及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞炎症因子NF-κB和TNF-α的表达,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

肺瘤平膏及其拆方含药血清对人外周血树突状细胞迁移功能影响及机制研究

目的 :探讨中药肺瘤平膏及其拆方对树突状细胞(dendritic cell,DC)迁移功能的影响及分子机制。 方法 :采用transwell小室法测定DC的迁移能力;realtime-PCR法测定DC表面CCR7,CXCR4等趋化因子受体 mRNA的表达。 结果 :解毒中药有抑制DC迁移的趋势,而肺瘤平膏、益气药物、活血药物则可促进DC迁移;在不同趋化因子作用下,药物对DC迁移的影响不同;不同药物作用下,DC表面趋化因子受体表达不同,益气组CCR7表达最高,活血组、肺瘤平组次之,解毒组最低,益气组、活血组与解毒组比较,P<0.05;CXCR4在益气组、肺瘤平组表达最高,活血组次之,解毒组最低,肺瘤平组、益气组、解毒组与对照组比较,P<0.01,解毒组与其他各组比较,P<0.01。 结论: 肺瘤平膏及益气组分、活血组分对DC的迁移有促进作用,解毒组分则明显抑制DC的迁移,不同中药作用下DC趋化能力的改变可能与趋化因子受体的表达有关。     

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病患者血清超氧化物歧化酶、丙二醛的影响

目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平的影响。方法选择COPD患者44例,随机分为两组,对照组予西医常规治疗,治疗组在此基础上加服金水六君煎。两组均于治疗前后检测SOD、MDA水平。结果治疗前两组血清SOD和MDA水平相近;治疗组治疗后SOD、MDA水平的改善优于对照组。结论在西医常规治疗基础上加服金水六君煎可减轻自由基对COPD患者的损伤。     

金水六君煎对慢性支气管炎小鼠血清超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量的影响

目的：探讨金水六君煎口服液对慢性支气管炎水鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活力及丙二醛（MDA）含量的影响。方法：采用烟熏方法复制慢性支气管炎模型小鼠，并用金水六君煎口服液治疗，检测小鼠血清SOD活力与MDA含量。结果：金水六君煎口服液高剂量组SOD活力[(0．67±0．15）NU／L]增高，与模型组[(0.39±0.13)NU/L]比较，差异有显著性（P＜0．01）；MDA含量[(9.26±2.90)nmol/L]降低，与模型组[(16.07±5.62)nmol/L]比较，差异有显著性（P＜0．01）。结论：金水六君煎口服液可清除自由基对机体造成的损伤。     

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病患者血清超氧化物歧化酶及丙二醛的影响

目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平的影响。方法 COPD患者44例随机分为治疗组与对照组,对照组予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用金水六君煎;两组分别于治疗前和治疗后7d检测SOD、MDA水平。结果治疗前两组血清SOD和MDA水平无明显差异;经治疗两组血清SOD水平明显高于治疗前,血清MDA水平低于治疗前。治疗组血清SOD水平明显高于对照组,血清MDA水平明显低于对照组。结论金水六君煎可减轻自由基对COPD患者机体的损伤。     

固本抑瘤Ⅱ号及其拆方含药血清诱导MCF7细胞自噬的研究

目的:研究固本抑瘤Ⅱ号(GYⅡ)及其拆方大鼠含药血清对人乳腺癌细胞MCF7自噬的影响。方法:制备GYⅡ及其拆方大鼠含药血清,培养MCF7细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制,单丹磺酰尸胺(MDC)及Hoechst 33342双染色荧光显微镜、微管相关蛋白1轻链3(MAP-LC3)蛋白Ⅱ(MAP-LC3-Ⅱ)染色激光共聚焦及透射电镜观察自噬,MAP-LC3-Ⅱ/DNA双参数流式细胞术同步分析细胞自噬与细胞周期。结果:与空白组比较,全方组、益气组含药血清处理MCF7细胞表现出细胞抑制效应,活血组、鸡血藤组含药血清处理MCF7细胞均表现出明显的自噬。结论:GYⅡ全方和益气组具有抑制MCF7细胞增殖的效应,而活血组和鸡血藤组未见抑制作用,可能与该两组含药血清诱导MCF7细胞自噬有关。     

金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC及水通道蛋白5表达的影响

目的观察金水六君煎对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道黏液高分泌大鼠肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)、水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨其治疗气道黏液高分泌的可能机制。方法 24只SD大鼠随机分成正常组、模型组、金水六君煎组和阿奇霉素组,每组6只。采用烟熏加气管内脂多糖滴入制作大鼠COPD气道黏液高分泌模型,成模后给予相应药物干预,连续2周。观察大鼠一般情况,小动物肺功能仪检测肺功能,HE染色观察肺组织病理,PAS染色检测气道杯状细胞数及黏液量,RT-PCR和Western blot分别检测肺组织MUC5AC、AQP5基因与蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肺组织HE染色符合COPD病理改变,肺功能及AQP5基因与蛋白表达明显降低(P0.05),气道杯状细胞数、黏液量增加及MUC5AC基因与蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组比较,金水六君煎组大鼠肺功能明显改善(P0.05,P0.01),气道杯状细胞数、黏液量减少及肺组织MUC5AC基因与蛋白表达明显降低(P0.05),肺组织AQP5基因与蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论金水六君煎可促进肺组织AQP5表达,抑制MUC5AC表达,纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是其治疗COPD气道黏液高分泌的机制之一。     

金水六君煎对哮喘缓解期患者免疫及肺功能的影响

近年来 ,对哮喘的研究在病因病机、临床症状控制及疗效机理诸方面均取得了一定的进展 ,但在临床中对该病缓解期的观察治疗甚少 ,有鉴于此 ,笔者采用金水六君煎内服 ,对 32例此类患者的免疫功能 (主要观察血清 T淋巴细胞亚群 )与肺功能的相关指标进行观察 ,并与另 30例缓解期未服药、发作时予用舒喘灵气雾剂的患者对照 ,兹将有关结果报告如下。1　对象和方法1.1　对象 :选择哮喘缓解期患者 62例 ,随机分组 ,治疗组 32例中 ,男 18例 ,女 14例 ,年龄 2 2～ 64岁 ;对照组 30例中 ,男 16例 ,女 14例 ,年龄 2 4～ 62岁。1.2　方法 :对照组未服药 …     

健脾活血解毒法拆方含药血清对人大肠癌细胞HCT-116细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的:探讨健脾活血解毒法拆方含药血清对人结直肠癌细胞系HCT-116细胞的生长、细胞凋亡率、细胞凋亡相关基因和自噬基因表达的影响.方法:实验分为对照组、健脾组、活血组、解毒组、健脾活血组、健脾解毒组和健脾活血解毒组,分别采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术(FCM)和Western blot法检测各组含药血清对肿瘤细胞的生长、细胞凋亡率的变化、凋亡相关基因Caspase-3表达以及自噬相关基因LC3表达.结果:各组10％含药血清作用24h后均能抑制HCT-116细胞增殖,但组间不具有明显差异.光镜下可见,健脾活血解毒法各组含药血清作用24 h后,细胞数量减少,且体积变小;细胞早期及中晚期凋亡率与对照组相比无显著性差异,但自噬相关蛋白LC3出现活性剪切条带.结论:健脾活血解毒法含药各拆方血清体外可抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖,机制可能与自噬作用通路密切相关.     

金水六君煎口服液对慢性支气管炎小鼠血清IL-2水平等影响的研究

以金水六君煎制成口服液,检测慢性支气管炎模型小鼠血清ＩＬ－２水平及迟发性超敏反应强度的变化。结果：金水六君煎口服液可提高慢支模型小鼠血清ＩＬ－２含量,增强小鼠迟发性超敏反应强度。提示;金水六君煎口服液能够调节机体免疫功能,尤其可增强机体细胞免疫力。     

黄连解毒汤及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的 探讨黄连解毒汤（Huanglian Jiedu Decoction,HJD）及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制。     

金水六君煎对慢性支气管炎模型小鼠气管粘膜影响的研究

目的：研究金水六君煎对慢性支气管炎模型小鼠气管粘膜的影响。方法：用金水六君煎为慢性支气管炎模型小鼠灌胃,取小鼠气管并在扫描电镜下观察气管内粘膜及纤毛的情况。结果：与对照组比较,金水六君煎组小鼠气管内纤毛脱落、倒伏、粘连轻于对照组。结论：金水六君煎可防止慢性支气管炎模型小鼠气管纤毛的脱落、倒伏及粘连。     

滋肾通络方含药血清对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：从细胞水平观察滋肾通络方含药血清对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(Glomerular Mesangial Cells,GMCs)增殖的影响,探讨其在糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)防治中的可能机制。方法：体外培养培养大鼠肾小球系膜细胞株,利用噻唑蓝(3-［4,5-dimethylthylthiazol-2-yl］-2,5 diphenyltetrazolium broide,MTT)比色法动态观察各组含药血清作用下各组GMC不同时间点的增殖情况。结果：与正常组相比,高糖+LPS能明显刺激体外培养的GMC增殖,而与模型组相比,滋肾通络方含药血清能明显抑制GMC增殖。结论：高糖+LPS可促进GMC增殖,滋肾通络方含药血清能明显抑制高糖+LPS条件下GMC增殖,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

桂枝甘草汤及其拆方含药血清对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的探讨桂枝甘草汤及不同组分含药血清对单个豚鼠心室肌细胞L-型钙离子电流(ICa-L)及其动力学参数的影响。方法急性分离豚鼠心室肌细胞,随机分为空白组、甘草组(炙甘草30 g煎液)、桂枝组(桂枝60 g煎液)、甘草加桂枝组(炙甘草30 g单煎液+等体积桂枝60 g单煎液)、桂枝甘草汤组(炙甘草30 g+桂枝60 g合煎液),共5组。实验分为10%、15%两个浓度药物组,加药完成后细胞放于37℃,5%CO_2的孵育箱中孵育24 h后进行膜片钳实验。结果与空白组比较,10%、15%各药物组均不同程度抑制钙离子电流(P0.05),其中10%桂枝甘草汤组抑制率最大为58.4%。15%浓度药物组使ICa-L激活、失活及恢复时间均延长(P0.05),其中桂枝组激活时间常数、慢失活时间常数和失活后恢复时间常数变化率最大;甘草组快失活时间常数变化率最大。结论桂枝甘草汤及各组分含药血清对钙离子通道有不同程度的抑制作用,与钙离子阻滞剂的作用机制相同,这可能是桂枝甘草汤抗心律失常的作用机理。