祛风消炎汤对类风湿关节炎大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的:探究祛风消炎汤对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究。方法:制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,分为模型组、祛风消炎汤低、中、高剂量组(10、20、40g/kg)及地塞米松组(2mg/kg),每组10只,另取10是正常大鼠作为对照组,共治疗35天。测定各组大鼠治疗前后足关节炎指数(AI)和右后足肿胀度,流式细胞术检测各组大鼠滑膜组织辅助性T细胞17(Th17)和调节性细胞T细胞(Terg)水平,RT-PCR法检测RORγt mRNA和Foxp3mRNA表达水平。结果:治疗后,相比较于模型组,祛风消炎汤能呈剂量依赖性降低CIA大鼠AI评分及足肿胀程度(P0.05)。与模型组比较,祛风消炎汤低、中、高剂量组Treg细胞占比及Foxp3mRNA水平显著增加(P0.05),Th17细胞占比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平显著降低(P0.05)。结论:祛风消炎汤对RA大鼠具有良好的治疗作用,其作用机制可能与通过降低RA大鼠滑膜组织RORγt水平,提升Foxp3水平来调节Th17/Treg平衡有关。     

艾灸对实验性RA家兔Th17/Treg平衡的影响

目的:观察艾灸对类风湿关节炎(RA)的抗炎作用,探索艾灸对Th17/Treg平衡的影响。方法:将日本大耳白兔按随机数字表法分为空白组、模型组、治疗组,分别于造模前后以及治疗第1、2、3周测量膝关节周长,用ELISA法测滑膜液的IL-10、IL-17含量,用RT-PCR法测滑膜组织中Foxp3、RORγt基因表达量。结果:与模型组比较,治疗组膝关节周长明显偏低。与空白组比较,模型组IL-10量偏低,IL-17量明显偏高,IL-10/IL-17值明显偏低;与模型组比较,治疗组IL-10量偏高,IL-17含量偏低,IL-10/IL-17值偏高。与空白组比较,模型组Foxp3mRNA表达存在下降趋势,但差异无统计学意义,RORγtmRNA表达升高,Foxp3/RORγt值降低;与模型组比较,治疗组Foxp3mRNA表达存在升高趋势,但差异无统计学意义,RORγmRNA表达降低,Foxp3/RORγt值存在升高趋势,但差异无统计学意义。结论:对于RA艾灸具有明显的抗炎效应,艾灸可显著调节RA家兔滑膜液IL-10、IL-17的含量,可调节滑膜组织中Foxp3、RORγt基因的表达,表明艾灸具有调节Th17/Treg平衡的作用,可能是艾灸治疗RA抗炎效应的重要机制之一。     

黄芪甲苷对结肠炎小鼠的抑炎作用及对外周血Th17细胞比例的影响研究

探讨黄芪甲苷对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的抑炎作用及对外周血辅助性T细胞(Th17)比例的影响。采用2%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立结肠炎小鼠模型,阳性对照组以及黄芪甲苷低、高剂量组小鼠分别灌胃相应药物,计算疾病活动指数(DAI),ELISA法检测血清白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)含量,HE染色法观察结肠组织病理学变化,流式细胞仪检测外周血Th17细胞/调节性T细胞(Treg)比例,蛋白印迹法检测叉头蛋白p3(Foxp3)、视黄酸相关孤儿核受体γt(ROR-γt)蛋白相对表达量。结果显示,正常小鼠结肠组织结构完整,杯状细胞未减少,腺体排列整齐,无黏膜糜烂、出血,无阳性细胞浸润;模型组小鼠结肠组织黏膜结构严重破坏,腺体排列紊乱或缺失,可见血管扩张、充血,大量炎性细胞浸润;各药物治疗组结肠组织病理损伤出现不同程度减轻。与正常组比较,模型组Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与模型组比较,阳性对照组、黄芪甲苷低剂量组、黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;与阳性对照组比较,黄芪甲苷低剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量升高,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量降低;与黄芪甲苷低剂量组比较,黄芪甲苷高剂量组DAI评分、组织病理学评分、Th17细胞百分比、IL-17和TNF-α含量、ROR-γt蛋白相对表达量降低,TGF-β含量、Treg细胞百分比、Foxp3蛋白相对表达量升高;阳性对照组与黄芪甲苷高剂量组比较,各指标差异无统计学意义。结果表明,黄芪甲苷可抑制结肠炎小鼠的炎症反应,降低Th17细胞比例。     

红景天含药血清对肿瘤坏死因子α 诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨红景天含药血清对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞 （HFLS-RA）增殖的影响。方法制备空白组、模型组、雷公藤多苷组（9.45 mg·kg-1）及红景天低、中、高剂量 组（1.05、2.1、4.2 g·kg-1）大鼠含药血清;体外培养HFLS-RA,以20 ng·mL-1 TNF-α 及10%不同组含药血清对 HFLS-RA 进行干预。采用MTT 法检测各组含药血清对HFLS-RA 细胞的增殖作用;ELISA 法检测细胞上清液 中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素17（IL-17）、转化生长因子β（TGF-β）、白细胞介素10（IL-10）的含量; PCR 法检测细胞中维甲酸受体相关孤儿受体γt（ROR-γt）、信号转导及转录激活因子3（Stat3）、叉头样转录因 子3（Foxp3）mRNA 表达;Western Blot 法检测细胞中ROR-γt、Stat3、Foxp3 蛋白表达。结果与空白组比较, 模型组培养HFLS-RA 24、48 h 后细胞增殖水平明显升高（P＜0.01）,ROR-γt、Stat3 mRNA 及蛋白表达上调 （P＜0.01）,IL-6、IL-17 水平升高（P＜0.01）,Foxp3 mRNA 及蛋白表达下调（P＜0.01）,TGF-β、IL-10 水平降 低（P＜0.01）。与模型组比较,红景天各剂量组HFLS-RA 细胞增殖水平降低（P＜0.01）,ROR-γt、Stat3 mRNA 及蛋白表达下调（P＜0.05,P＜0.01）,IL-6、IL-17 水平降低（P＜0.01）,Foxp3 mRNA 及蛋白表达上调 （P＜0.01）,TGF-β、IL-10 水平升高（P＜0.01）。结论红景天含药血清可抑制TNF-α 诱导的HFLS-RA 细胞 的异常增殖,其机制可能与下调ROR-γt、Stat3 表达及上调Foxp3 表达有关。     

槲皮素通过抑制支气管哮喘大鼠miR-155表达重塑Th17/Treg细胞平衡的机制研究

目的 观察槲皮素对哮喘大鼠炎症介质水平、支气管病理形态、miR-155、Foxp3、RORγt表达的影响，探讨槲皮素通过抑制哮喘大鼠miR-155表达，以重塑Th17/Treg平衡的可能机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组（0.005 g/kg）、槲皮素低剂量组（0.75 g/kg）、槲皮素高剂量组（3.0 g/kg）、槲皮素高剂量组+miR155抑制剂组。卵蛋白（OVA）激发致敏建立大鼠哮喘模型。各干预组根据分组予以相应剂量药物灌胃或尾静脉注射，干预周期为2周。观察各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞总数及分类；酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清IgE及炎症介质[白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17(IL-17)]水平；苏木精-伊红染色法（HE）观察支气管病理形态变化；免疫组化法（IHC）检测Foxp3、RORγt蛋白的表达；实时荧光定量PCR(RT-PCR)分析检测miR-155、Foxp3、RORγt的mRNA水平。结果 与正常组相比，模型组血清IgE、IL-4、IL-5、IL...     

虎杖对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜PPARγ/ NF-κB信号途径的影响

目的通过观察虎杖对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠踝关节病理及滑膜组织、血清中过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARγ)、p65、白细胞介素17(IL-17)表达的影响,探讨虎杖抑制类风湿关节炎(RA)滑膜免疫炎性损伤的作用机制。方法采用大鼠尾根部注射牛CⅡ方法制备CIA模型,将成模大鼠按随机数字表法分为模型组、阳性对照组、虎杖2倍剂量组、虎杖常量组,另设正常对照组,每组6只。正常对照组与模型组每天予去离子水10 mL/kg灌胃,阳性对照组每天予来氟米特1.87 mg/kg灌胃,虎杖2倍剂量组、常量组每天分别以8、4 g/kg灌胃,连续干预12周。采用光镜观察各组大鼠踝关节病理改变。运用RT-PCR、Western Blot及ELISA检测技术,观察各组大鼠滑膜组织、血清中PPARγ、p65、IL-17 mRNA及蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠踝关节关节周围纤维组织增生,炎性细胞浸润;与模型组比较,虎杖常量组大鼠关节软骨、关节腔未见明显病变。与正常对照组比较,模型组PPARγ、p65、IL-17 mRNA及蛋白表达上调(P0.01)。与模型组比较,虎杖2倍剂量组及常量组p65、IL-17 mRNA及蛋白表达均下调(P0.01);PPARγmRNA蛋白表达水平上调(P0.01)。结论虎杖改善CIA模型大鼠关节滑膜免疫炎性损伤的机制,可能与调节PPARγ/NF-κB信号途径相关。     

藤莓汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜PPARγ/NF-κB信号途径的影响

目的观察藤莓汤对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARγ)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、IL-17表达的影响,探讨该方抑制类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜免疫炎性病理损伤的分子机制。方法建立SD大鼠CIA模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组、中药高剂量组、中药低剂量组,并设正常组,每组6只。正常组与模型组予去离子水10 m L/(kg·d)灌胃,西药组予来氟米特1.87mg/(kg·d)灌胃,中药高、低剂量组分别以藤莓汤生药量31.8、15.9 g/(kg·d)灌胃,连续干预12周。干预结束后检测PPARγ、P65、IL-17蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组PPARγ、P65、IL-17 mRNA及蛋白表达上调(P0.01)。与模型组比较,中药高剂量组PPARγ蛋白表达上调,P65、IL-17 mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P0.01);西药组及中药低剂量组PPARγmRNA及蛋白表达上调,P65、IL-17 mRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论藤莓汤可改善CIA大鼠关节滑膜病理损伤,抑制免疫炎性因子表达。     

悬灸治疗中性粒细胞哮喘的细胞免疫学机制研究

目的:探讨悬灸对中性粒细胞哮喘相关信号因子的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组与悬灸组,每组8只。用鼻腔滴入脂多糖、腹腔注射卵白蛋白及雾化吸入卵白蛋白引喘制备中性粒细胞哮喘模型。造模成功后,地塞米松组按0.5mg/kg予以腹腔注射地塞米松,悬灸组悬灸"肺俞""脾俞""肾俞""膻中",40min/次,均每日1次,共14d。治疗结束后,统计各组支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞计数与分类,流式细胞术检测脾及外周血辅助性T淋巴细胞17(Th 17)含量,酶联免疫法检测BALF中的白介素17(IL-17)含量,免疫组化法及免疫印迹法检测右肺下叶维甲酸相关孤儿受体γ的胸腺异构体(ROR-γt)蛋白的表达水平,real-time PCR法检测ROR-γt mRNA的表达水平。结果:模型组与正常组比较,气道有大量炎性细胞浸润,中性粒细胞显著升高(P0.01),BALF中IL-17含量显著增高(P0.01),脾与外周血中Th 17含量显著增多(P0.01),肺组织中ROR-γt蛋白与mRNA的表达水平显著升高(P0.01)。地塞米松组与模型组比较,上述指标皆显著降低(P0.01);悬灸组与模型组比较,上述指标亦显著降低(P0.05,P0.01)。与悬灸组比较,地塞米松组外周血Th 17含量更低(P0.05)。结论:悬灸可以通过抑制ROR-γt转录因子表达,下调炎性反应因子IL-17含量,降低气道内中性粒细胞水平,从而达到减轻中性粒细胞哮喘炎性反应的作用,其疗效与地塞米松相当。     

寒痹方对佐剂型关节炎大鼠的治疗作用

目的研究寒痹方(黄芪、制川乌、全蝎、蜈蚣、地龙)对佐剂型类风湿性关节炎(RA)大鼠的治疗作用,并探讨其机制。方法建立佐剂型大鼠RA模型后,大鼠分为正常组,模型组,地塞米松阳性组,宝光风湿液(羌活、独活、川芎等)阳性组,寒痹方低,高剂量组,测量大鼠足跖容积和肿胀度。ELISA法检测血清白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α);四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定淋巴细胞的增殖能力;HE染色检查关节滑膜组织病理学变化;免疫组化法检测滑膜组织中白介素-17(IL-17)和TNF-α的表达。结果寒痹方可显著缓解RA大鼠的足跖肿胀。与模型组相比,寒痹方可显著缓解RA大鼠的滑膜腔炎症,下调血清及滑膜组织中IL-1β和TNF-α的表达,抑制淋巴细胞增殖。以上指标在低、高剂量寒痹方组之间无统计学差异,寒痹方整体效果与宝光风湿液相当,但不及地塞米松。结论寒痹方具有较强的抗RA作用,其机制可能与抑制淋巴细胞增殖以及降低炎性细胞因子的分泌有关。     

千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织Th17/Treg分化及其相关细胞因子表达的影响

目的:观察千金苇茎汤对香烟烟雾暴露模型大鼠肺组织辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化及其相关细胞因子表达的影响。方法:雄性大鼠60只,随机分为正常组,烟雾模型组,乙酰半胱氨酸组、千金苇茎汤高、中、低剂量组,共6组,每组10只。香烟烟雾造模30 d后,药物分别干预30 d,后处死各组大鼠并取组织;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测维甲酸相关孤儿受体(ROR-γt),叉头状/翼状螺旋转录因子3(Foxp3)mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织白细胞介素-17(IL~(-1)7),IL-6,IL~(-1)0,转化生长因子-β_1(TGF-β_1)含量,苏木素-伊红(HE)染色切片观察肺组织病理,流式细胞术检测Treg(Foxp3~+CD25~+)比例,Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例,Treg/Th17。结果:与正常组比较,模型组ROR-γt mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后都能够降低其表达(P0.05,P0.01);与正常组比较,模型组Foxp3 mRNA表达明显降低(P0.05),与模型组比较,千金苇茎汤中低剂量组干预后表达明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL~(-1)7,IL-6含量明显升高,IL~(-1)0,TGF-β1含量明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,千金苇茎汤高、中、低剂量组干预后能够降低肺组织IL~(-1)7,IL-6含量,同时升高IL~(-1)0的含量(P0.05),与Real-time PCR检测的结果趋势一致。流式细胞术检测显示,千金苇茎汤中、低剂量组干预后Th17(CD4~+IL~(-1)7~+)比例降低,Treg/Th17增加(P0.05,P0.01)。结论:千金苇茎汤能调节Treg/Th17,使Th17/Treg达到平衡状态。