黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69 表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69 T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3 T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。     

人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb1对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H2O2作用下,人参皂苷Rb1对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果终浓度为5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4+/CD25+的表达具有促进作用,而CD3+/CD69+的表达明显下调(P<0.01);对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb1显著抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡进程(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

黄芩主要成分对PDB＋Ion诱导的Jurkat T 细胞CD69表达的影响

目的 :探讨治疗银屑病的临床有效外用药芩柏软膏中黄芩的主要成分黄芩苷(baicalin)、黄芩素(baicalein)和汉黄芩素(wogonic)对T细胞早期活化标志CD69表达的影响。 方法 :以体外培养的Jurkat T细胞为模型,以二丁基佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(Ionomycin,Ion)为刺激剂,采用单荧光染色流式细胞技术,检测Jurkat T细胞经PDB＋Ion刺激4 h后早期活化表面分子CD69的表达,以观察黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对Jurkat T细胞体外活化的影响。 结果 :在体外培养条件下,黄芩苷(200,100,50 mg ·L^-1)、黄芩素(54,27,13.5 mg ·L^-1)和汉黄芩素(8,4 mg ·L^-1)均能抑制PDB＋Ion刺激时Jurkat T细胞CD69的表达,且有剂量依赖性。 结论 : 黄芩主要成分黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素可明显抑制Jurkat T细胞的体外活化,这可能是黄芩用于治疗银屑病的作用机制之一。     

黄连解毒汤不同提取部位及相关单体对小鼠脾淋巴细胞增殖作用研究

目的:研究黄连解毒汤不同提取部位及小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响。方法:建立体外脾T、B淋巴细胞模型,运用MTT比色法分析比较黄连解毒汤的不同提取部位及其主要化学成分与丝裂原(ConA、LPS)共同作用时对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖作用的影响。结果黄连解毒汤全方水提部位(H2O部位)、醇提总部位(EtOH部位)、二氯甲烷萃取部位(CH2Cl2部位)和正丁醇萃取部位(n-Bu部位)对未活化或LPS和ConA诱导的脾T、B淋巴细胞具有不同程度的促进或抑制作用。小檗碱、黄芩苷(10μM)能促进未活化小鼠脾淋巴细胞增殖,而栀子苷、芦丁(50μM)对未活化小鼠脾淋巴细胞的增殖作用不明显。对于脂多糖(LPS)或刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞,小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁均能抑制其增殖。结论:黄连解毒汤不同提取部位及其中主要化学成分小檗碱、黄芩苷、栀子苷、芦丁对T、B淋巴细胞均有不同程度的增殖作用。     

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的:研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL-2及IFN-γmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据.方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1 h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL-2、IFN-γ mRNA的表达的影响.结果:TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL-2及IFN-γmRNA的表达.结论:TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一.     

垂盆草小麦黄素苷体外对正常小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的:观察垂盆草小麦黄素苷对小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化增殖的影响.方法:采用小鼠脾细胞3H-TdR掺入法,用刀豆球蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)刺激,测定掺入细胞DNA中3H-TdR的放射性相对数量(cpm).结果:小麦黄素苷100,10,1μg/mL(终浓度)对T淋巴细胞的cpm数有非常显著的抑制作用(均P＜0.001);小麦黄素苷100μg/mL对B淋巴细胞的cpm数有非常显著的抑制作用(P＜0.01).结论:垂盆草小麦黄素苷能明显抑制正常小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖.     

复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的：研究复方昆明山海棠颗粒（composite tripterygium hypoglaucum hutch，CTHH）对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及γ-IFN的影响，为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法：无菌分离小鼠脾淋巴细胞，加入不同浓度的复方昆明山海棠颗粒溶液，MTT法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖；流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25；酶联免疫法检测细胞因子IL-4及γ-IFN。结果：CTHH对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用。     

芒果苷对免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖的影响

目的:探讨芒果苷对免疫抑制小鼠T淋巴细胞增殖的影响。方法:以环磷酰胺复制免疫抑制小鼠模型,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定芒果苷对刀豆蛋白A(ConA)诱导T淋巴细胞增殖的影响。结果:当以ConA刺激时,芒果苷可显著提高免疫抑制小鼠的T淋巴细胞增殖能力。结论:芒果苷可拮抗环磷酰胺对Con A诱导的T淋巴细胞增殖反应的抑制作用。     

灵芝三萜对T淋巴细胞的活化作用

目的探讨灵芝三萜对人淋巴细胞活化时CD69和HLA-DR表达的影响。方法淋巴细胞与不同浓度的灵芝三萜分别培养6h和72h后,用流式细胞术测定四色荧光标记抗体,分析T淋巴细胞的活化。结果灵芝三萜对T淋巴细胞的CD69表达有促进作用,以10μg/mL的浓度对CD3CD4亚群上CD69的表达最明显(P<0.05);10μg/mL和20μg/mL两个浓度促进T细胞表达HLA-DR(P<0.05),对CD3CD4亚群上HLA-DR表达促进更显著(P<0.01);同时灵芝三萜对T淋巴细胞亚群的比例无显著影响。结论适当浓度的灵芝三萜能促进人T淋巴细胞的活化,主要是促进CD3CD4亚群的活化,对HLA-DR表达的作用超过对CD69的作用,而对细胞亚群的比例无影响。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的影响

目的:狼疮方对体外扩增小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的影响。方法:免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4+CD2+5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4+CD25+调节性T细胞;用CFSE法检测CD4+CD25+调节性T细胞体外抑制CD4+CD2-5T细胞的增殖情况。结果:经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4+CD25+T细胞数量明显升高,扩增后的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4+CD25+T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异(P0.05)。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4+CD2+5T细胞和扩增的CD4+CD25+T细胞对CD4+CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论:狼疮方有助于提高小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

小半夏加茯苓颗粒对荷瘤小鼠抑瘤及免疫调节作用的研究

目的研究小半夏加茯苓颗粒对小鼠S180、H22实体瘤的抑制作用以及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法建立S180、H22荷瘤小鼠模型,观察小半夏加茯苓颗粒的抑瘤作用,并检测各组小鼠的脾T淋巴细胞亚群的分布、CoA诱导的脾淋巴细胞增殖活性以及血清中TNF-α的含量。结果小半夏加茯苓颗粒对S180和H22荷瘤小鼠的肿瘤均具有明显抑制作用,抑瘤率分别为11.5%和9.3%;同时小半夏加茯苓颗粒可明显上调荷瘤小鼠CD4+、CD8+T细胞数量(P<0.01)及CD4+/CD8+比值(P<0.05);小半夏加茯苓颗粒可明显增强CoA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力(P<0.01)以及血清中TNF-α的含量(P<0.05)。结论小半夏加茯苓颗粒可增强荷瘤小鼠的免疫功能,抑制模型鼠肿瘤的生长。     

黄芩苷对溃疡性结肠炎CD4~+CD29~+抑制作用随机平行对照研究

[目的]观测黄芩苷对溃疡性结肠炎患者CD4+CD29+抑制作用。[方法]使用随机平行对照方法,按抛硬币方法简单随机分溃疡性结肠炎组33例,IBS-D组30例,健康对照组30例。流式细胞仪检测UC患者CD4+CD29+的表达及MTS法检测细胞增殖。[结果]UC患者外周血中CD4+CD29+T细胞发现与健康对照组和IBS-D组相比,CD4+和CD4+CD29+增高;黄芩苷干预,第2和3天抑制增殖明显,在40umol和20umol浓度干预下CD4+CD29+较未干预前、DMSO干预、5umol干预和10umol干预之间有明显差异。[结论]黄芩苷能通过抑制CD4+CD29+增殖作用治疗溃疡性结肠炎。     

小鼠体外T淋巴细胞模型的优化及在中药筛选中的应用

目的 :优化MTT法测定小鼠体外T淋巴细胞的实验条件 ,并对 6种种子类中药的活性进行筛选。方法 :无菌分离小鼠脾脏 ,制备脾淋巴细胞 ,与待测药物预孵 1h后 ,加入刀豆蛋白A刺激剂继续培养 ,总计培养 72h后收获细胞 ,进行MTT染色 ,以酶标仪进行测定。结果 :应用MTT法 ,在 (2～ 3 0 )× 10 9/L范围内细胞密度与A值呈线性正相关 ,优化后的测定条件为细胞悬液中加入 10 μl的ConA ,孵育 72h后再加入 2 0 μl的MTT ,继续孵育 4h ,测定波长为 5 12nm。结果表明 ,这 6种种子类中药对小鼠T淋巴细胞均有一定的抑制作用。结论 :用于进行中药的抑制T淋巴细胞活性的体外筛选。     

狼疮方对体外扩增小鼠CD4^＋CD（25）^＋调节性T细胞的影响

目的：狼疮方对体外扩增小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞数量的影响。方法：免疫磁珠法分离狼疮方治疗组与未治疗组小鼠CD4＋CD2＋5T细胞;通过流式细胞仪检测CD4＋CD25＋T细胞Foxp3表达情况;用抗CD3和抗CD28包被的微珠来进行刺激,体外扩增小鼠的CD4＋CD25＋调节性T细胞;用CFSE法检测CD4＋CD25＋调节性T细胞体外抑制CD4＋CD2-5T细胞的增殖情况。结果：经抗CD3和抗CD28包被的微珠刺激后,在TGF-β1和IL-2存在的环境中CD4＋CD25＋T细胞数量明显升高,扩增后的CD4＋CD25＋T细胞高表达Foxp3。与此同时,经狼疮方处理后的小鼠CD4＋CD25＋T细胞扩增后数量增加133.3±18.9倍,未经狼疮方处理的对照细胞数量增加104.7±10.8倍,两者比较有显著性差异（P〈0.05）。狼疮方治疗组与未治疗组中分离的CD4＋CD2＋5T细胞和扩增的CD4＋CD25＋T细胞对CD4＋CD2-5T细胞的增殖皆有明显抑制作用,荧光强度分别为32.1±4.8,33.1±4.9,30.1±3.8,32.9±4.2。结论：狼疮方有助于提高小鼠CD4＋CD25＋调节性T细胞的扩增效率,扩增的CD4＋CD25＋调节性T细胞表达Foxp3,具有体外免疫抑制功能。     

结血蒿醇提物对小鼠脾细胞增殖和活化的抑制作用

目的：观察藏药结血蒿75%乙醇提取物对体外丝裂原刀豆蛋白A（Concanavalin A,ConA）刺激的小鼠脾细胞活化和增殖的抑制作用.方法：用Con A刺激小鼠脾细胞,分别用四甲基偶氮唑盐染色法（MTT 法）,流式细胞术等方法观察结血蒿醇提物对细胞增殖和活化的作用.结果：结血蒿醇提物对体外Con A刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化均有显著的抑制,作用呈剂量依赖性.结论：结血蒿醇提物可抑制C0n A刺激的小鼠脾细胞的增殖和活化,提示其具有免疫抑制活性.     

滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4~＋CD25~＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响

目的：探讨滋阴清热方对缺乏淋巴增殖基因狼疮鼠CD4＋CD25＋T细胞亚群及Foxp3表达的影响。方法：选用自发性系统性红斑狼疮（SLE）模型MRL/lpr小鼠40只,随机平均分为4组,即模型组、滋阴狼疮方治疗组（中药组）、强的松治疗组（西药组）、滋阴清热复方＋强的松治疗组（中西药组）。另选用昆明小鼠10只作为对照组。连续用药10周后,流式细胞仪分析外周血CD4＋CD25＋T细胞亚群的百分比及CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率,RT-PCR检测T细胞Foxp3 mRNA的表达。结果：各组外周血CD4＋CD25＋T细胞、CD4＋CD25highT细胞和CD4＋CD25intT细胞占CD4＋T细胞的百分比组间比较,无统计学差异（P〉0.05）,而CD4＋CD25highT细胞与CD4＋CD25intT细胞的比率和T细胞Foxp3 mRNA表达水平,模型组与对照组比较,明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,各治疗组均高于模型组（P〈0.05）,尤其是中西医结合组（P〈0.01）。结论：中药滋阴狼疮方可上调MRL/lpr狼疮鼠Foxp3 mRNA表达水平,从而调节CD4＋CD25＋T细胞亚群比率,发挥对SLE的免疫治疗作用。     

中药灌肠1号对小鼠结肠炎CD4+ CD25+免疫作用的研究

目的：探讨CD4⁺CD25⁺调节性T细胞(Tregs)在2，4-二硝基氯苯(DNCB)和醋酸 (AA)复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎中的变化规律及中药灌肠1号治疗的作用机制。方法：建立DNCB＋AA复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎模型，设立正常对照、模型对照、柳氮磺氨吡啶(SASP)和中药灌肠1号治疗共4组，用流式细胞仪检测各组外周血、肠系膜淋巴结CD4⁺CD25⁺ Tregs细胞的变化以及结肠组织病理学改变。结果：建模后1～2周，模型组外周血和肠系膜淋巴结的CD4⁺CD25⁺ Tregs细胞数量较正常组明显下降，而使用SASP和中药灌肠Ⅰ号治疗后该细胞亚群明显高于模型组。结论：具有较强免疫抑制作用的CD4⁺CD25⁺Tregs细胞亚群在小鼠实验性溃疡性结肠炎的发病及病情转归中可能具有重要免疫调节作用，中药灌肠1号通过调节Tregs细胞的数量对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。