全面性癫痫伴高热惊厥附加症基因定位及GABRA6基因测序研究

目的 对全面癫痫伴高热惊厥附加症(GEFS^ )家系进行基因定位，并对候选基因进行测序研究。方法 用连锁分析的方法对GEFS^ 家系进行研究；设计GABRA6外显子-内含子交界处全部9对内含子引物，采用Sanger双脱氧链终止法，对GABRA6 PCR测序。结果 在5q34区域最大LOD值3．815。GABRA6基因测序显示外显子8有一C／G多态性。结论 GEFS^ 症致病基因在5q34区域取得了肯定的连锁关系。在该研究的两家系未发现GABRA6基因突变；所显示的单个碱基多态性对其他癫痫家系的连锁分析及其他癫痫综合征分子遗传学机制的研究均有意义。     

全面性癫癎伴热性惊厥附加症家系GABRB2基因测序研究

目的对全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS )侯选基因GABRB2进行测序研究。方法设计GABRB2外显子-内含子交界处内含子引物,采用PCR直接测序法,对一GEFS 家系GABRB2编码区全部11个外显子进行测序分析。结果患儿GABRB2基因外显子2,mRNA第133个碱基发现一新的C/G多态性。结论该家系未发现GABRB2基因编码区的突变;所显示的mRNA的单个碱基多态性对以后其他癫家系的连锁分析及GABRB2 mRNA、基因功能研究均有重要意义。     

良性家族性婴儿惊厥一家系基因定位及钾离子通道基因测序研究

目的：对一良性家族性婴儿惊厥家系进行基因定位，并对候选基因钾离子通道基因KCNQ2进行测序分析。方法：共抽取14例血样，包括全部9例患者。同时对家系全部成员行脑电图、全身及神经系统检查。在19qD19S245至D19S250间选择6对微卫星标记进行连锁分析。KCNQ2基因外显子测序引物序列采用Biervert等所报道的序列。结果：该家系两点间连锁结果排除了与19q及8q24连锁的可能。在20q13.3(D20S480)最大LOD值为0.60（外显率90%）。染色体单体型分析提示可能与20q13.3连锁。KCNQ2基因测序发现外显子6有一C/T杂合突变多态性，外显子17有1个A/C错义多态性，内含子14人一4个碱基插入多态性。结论：该家系的连锁结果排除了与19q的连锁可能，提示BFIC的遗传多态性。该家系所发现的多态性变化对其他癫痫家系的连锁分析及其他癫综合征分子遗传学机制的研究，均有重要意义。     

全面性癫伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的收集2个全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点。并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点。方法对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集。另取20名健康体检儿童作为对照。对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序。将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析。结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性。结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异。     

全面性癫(痫)伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的 收集2个全面性癫(痫)伴热性惊厥附加症( GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点.并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点.方法 对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集.另取20名健康体检儿童作为对照.对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序.将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析.结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+ 2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性.结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异.     

全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症6家系SCN1B基因突变筛查

目的探讨全面性癫伴热性惊厥附加症家系SCN1B基因突变情况。方法共收集GEFS 家系6个,采集40份外周血,并取健康对照组外周血50份。提取基因组DNA,设计7对引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增,琼脂糖凝胶电泳,选取符合条件的PCR产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行单链构象多态性分析,对个别PCR产物进行双向测序。结果6个先证者和50名健康对照进行SCN1B的5对外显子筛选时,均未发现异常带出现。6个先证者的PCR产物测序结果与基因组序列相比对,也未发现碱基改变。结论全面性癫伴热性惊厥附加症是一种复杂综合征,本组家系中未发现SCN1B基因突变,GEFS 具有遗传异质性。     

全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症的临床表型和SCN1A基因筛查研究

目的 分析全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症(generalized epilepsies with febrile seizures plus,GEFS+)的临床特点,并对部分患者进行SCNIA基因筛查,寻找基因突变.方法 收集两个GEFS+家系的临床资料,并进行分析;留取先证者和部分家系成员的血液标本,通过变性高效液相色谱法(denaturing hish performance liquid chromatography,DHPLC)等方法进行SCNIA基因筛查、测序及序列分析.结果 (1)两个家系共101名成员,其中受累者28例(男、女各14例).发作表型有热性惊厥(FS)7例、热性惊厥附加症(FS+)6例、FS+伴失神发作1例、FS+伴肌阵挛发作1例.未发现严重发作表型.另外,有肯定的临床发作,但由于不能获得详细的临床资料而不能进行发作分类者13例;两个家系都符合常染色体显性遗传,其中一个家系存在双系遗传现象.(2)GEFS+家系B的先证者和家系正常对照均发现SCN1A第9外显子存在A>G突变(c.1212A>G),系一多态性位点;SCN1A其余外显子未发现突变.结论 本研究在GEFS+家系B仅发现G/A多态现象,未发现SCN1A致病性突变,支持其遗传异质性;病因学有待进一步研究.     

全面性癫癎伴热性惊厥附加症家系γ-氨基丁酸A型受体γ2亚单位基因研究

目的研究全面性癫癎伴热性惊厥附加症(GEFS )患者的γ-氨基丁酸A型受体γ2亚单位(GABRG2)基因分布。方法对10个家系先证者的GABRG2基因进行体外扩增及测序分析。结果发现一核苷酸多态位点,未发现已报道的突变。结论GABRG2基因突变在我国北方汉族人分布并不普遍。     

黏多糖贮积症Ⅱ型一家系IDS基因分析及产前诊断

目的 确定黏多糖贮积症Ⅱ型(Mucopolysaccharidosis type Ⅱ,MPS Ⅱ)一家系的致病基因突变,并对高危胎儿进行产前诊断.方法 应用聚合酶链反应和直接测序的方法,对先证者、胎儿及部分家系成员艾杜糖-2-硫酸酯酶(iduronate-2-sulfatase,IDS)基因的所有外显子及其与内含子交界处序列进行检测;对测序发现的性质未知的碱基改变采用高效液相色谱技术(denatruring high-performance liquid chromatography,DHPLC)在正常人群中进行筛查.结果 检测到先证者IDS基因3个碱基改变:5号外显子c.684A>G,6号外显子c.851C>T,7号外显子c.892C>T;先证者母亲和外祖母的IDS基因存在c.684A>G杂合改变,c.851C>T杂合改变及c.892C>T杂合改变;100例家系外正常男性未发现IDS基因5号外显子c.684A>G和6号外显子c.851C>T的碱基改变;胎儿基因型与先证者相同.结论 IDS基因c.892C>T突变是该MPS Ⅱ患者的主要致病原因;产前诊断证明胎儿为男性患病胎儿.     

Kartagener综合征DNAI1、DNAH5基因研究

目的寻找Kartagener综合征患儿DNAI1、DNAH5基因突变位点,初步探讨Kartagener综合征的遗传机制。方法2006年12月至2007年3月在首都医科大学附属北京儿童医院临床确诊的4例Kartagener综合征患儿和其中2个家族成员的外周血中提取DNA,并对DNAI1基因的所有20个外显子、DNAH5基因的外显子34、50、63、76、77进行PCR扩增,对扩增产物进行直接测序,测序结果与正常序列比对。结果未发现DNAI1基因外显子、DNAH5基因外显子34、50、63、76、77及相邻内含子剪接位点的突变。结论在研究的4例Kartagener综合征患儿和2个家族中未发现DNAI1基因外显子、DNAH5基因外显子34、50、63、76、77及相邻内含子剪接位点的突变。     

全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症家系SCN1A及GABRG2基因突变筛查

目的 探讨全面性癫(癎)伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系SCN1A及GABRG2基因突变情况.方法 收集8个GEFS+家系中包括先证者在内符合GEFS+临床表型的生存患者共31例,健康对照组100例,均为汉族.采集外周血提取DNA,设计合适引物特异性扩增SCN1A及GABRG2基因组全部外显子序列,应用PCR产物直接测序方法进行突变筛查.结果 全部GEFS+患者在SCN1A及GABRG2基因均未发现迄今已报道的所有已知突变.然而,在家系E先证者的SCN1A基因第1外显子发现了新核苷酸多态性(SNP) c.69G>A,呈杂合子变异,密码子由GCG序列突变为GCA,属同义突变;随后在2/100例健康对照人群中也证实存在.另外,在GABRG2基因的翻译起始密码前发现1个新SNP c.-14delA,表现为cDNA序列的第-14号核苷酸A缺失变异,未参与氨基酸的表达;该变异存在于所有GEFS+患者及92/100例健康对照者中.结论 SCN1A基因发现的1个新SNP(c.69G>A)虽未引起氨基酸改变,但可能通过影响mRNA的稳定性,从而改变受体蛋白的功能.GABRG2基因发现的新SNP(c.-14delA)是我国人群高频SNP,并非GEFS+致病的潜在因素.该新发现的2个碱基多态性丰富了SNP数据库,为癫(癎)易感多态位点的研究提供了候选位点.SCN1A及GABRG2基因很可能不是我国南方汉族GEFS+家系的主要致病基因,证实GEFS+具有明显的遗传异质性.     

GABRA1基因变异相关癫痫的临床表型特点

目的探讨GABRA1基因变异相关癫痫患儿的临床表型特点.方法收集2016年3月至2019年7月在北京大学第一医院儿科就诊的癫痫患儿,并通过靶向捕获二代测序发现GABRA1基因变异的11例患儿(男4例、女7例),回顾性总结其临床表现、脑电图及头颅影像学特点.结果11例患儿中,10例为新生变异,1例为遗传性变异.2例患儿携带相同的变异,6例患儿携带国际未报道的新变异.癫痫起病年龄8(3~14)月龄,其中1岁内起病10例,1岁后起病1例.癫痫发作类型多样,其中局灶性发作10例,全面性强直-阵挛发作3例,肌阵挛发作3例,痉挛发作2例.有5例患儿具有多种发作类型.9例发作有热敏感特点,其中6例因发热诱发癫痫持续状态.2例具有光敏感特点.11例患儿脑电图显示背景异常5例,发作间期有异常放电6例.所有患儿的头颅磁共振成像均未见明显异常.9例患儿有不同程度的发育落后.临床诊断为Dravet综合征5例,婴儿痉挛症2例,不能分类的早发癫痫性脑病1例,其余3例为局灶性癫痫.11例患儿末次随访年龄为8月龄~12岁,8例癫痫发作已缓解6个月~8年,其中1例已停用抗癫痫药物.结论GABRA1基因变异中新生变异较遗传变异常见,其导致的癫痫多数在婴儿期起病,癫痫发作类型多样,局灶性发作最为常见.多数患儿发作预后好,但普遍发育落后.     

Infantile seizures and other epileptic phenotypes in a Chinese family with a missense mutation of KCNQ2

Introduction Benign familial infantile seizures (BFIS) is a form of idiopathic epilepsy characterized by clusters of afebrile seizures occurring around the sixth month of life and a favorable outcome. Linkage analysis has revealed that three chromosomal segments, 19q12-q13.1, 16p12-q12, and 2q23-31, are linked to this disorder.Subjects and methods We report here a large Chinese family in which all 17 affected members had had infantile seizures with onset at age 2–4 months, with two of these also manifesting seizures later in life accompanied with either choreoathetosis or myokymia. Linkage analysis in this family confirmed a previous report of genetic heterogeneity in BFIS – since linkage was excluded at the above-mentioned known BFIS loci – and suggested a possible linkage to the KCNQ2 gene, which is believed to be a voltage gated potassium channel gene responsible for benign familial neonatal seizures (BFNS).Results and discussion Sequencing of the KCNQ2 gene revealed that all 17 affected family members carried a heterozygous Gly-to-Val (G271V) mutation in the conserved pore region that resulted from a guanine-to-thymine transition in exon 5 of KCNQ2. The same mutation with a comparable localization in the KCNQ3 (G310V) gene has been found in BFNS patients. The same conserved amino acid was also found to be mutated in the KCNQ1 gene in a family with Long QT Syndrome.     

Mutation analysis of TSC2 gene in 33 Turkish familial cases with tuberous sclerosis

Tuberous sclerosis is an autosomal dominant multisystem disorder characterized by hamartomatous growths in different organs. Disease determining genes are localized to 9q34 (TSC1) and 16p13.3 (TSC2). Two-thirds of the cases are sporadic and result from new mutations. The aim of this study was to determine TSC2 gene mutations by Single Stranded Conformation Polymorphism (SSCP) analysis and direct sequencing in 33 familial cases with tuberous sclerosis who were followed up in the Pediatric Neurology Departments of Hacettepe University Ihsan Do?ramaci and Ankara Social Security Children's Hospitals. Forty-one exons of TSC2 gene were amplified and subjected to SSCP, and sequence analysis was performed when an abnormal SSCP pattern was observed. As a result, six new mutations and nine gene polymorphisms were detected. The new mutations are G-->T mutation in exon 20, 16bp deletion in exon 29, 18bp deletion in exon 40, 538 G-->A mutation in exon 29, T-->C mutation in exon 21 and G-->A splice site mutation in exon 5. Although further studies on larger groups are needed, these results do not indicate a common region or type of mutation in the Turkish population.     

Linkage analysis and identification of deletion in Alagille syndrome gene

Alagille syndrome (AGS) is a genetic disease and the responsible gene has already been mapped at 20p12. To more accurately detect the region of the AGS gene on the linkage map of chromosome 20p, 14 yeast artificial chromosome (YAC) clones were screened to construct a YAC contig in the candidate region and 13 locus markers and 2 sequence-tagged sites (STS) were ordered. Combining all of the analyses, a 1.3 Mb critical region from D20S507 to D20S61 for the AGS gene was identified. As the human Jagged 1 gene (JAGI) lies just in this region and is responsible for the AGS disease, the genomic DNA in an AGS family without a visible deletion were analyzed by single-strand conformational polymorphism (SSCP) and direct DNA sequencing, and a 2-bp (CT) deletion mutation at exon 26 of the JAGI was identified.     

Wilson病ATP7B基因Arg778Leu突变与临床表型之相关性探讨

目的了解Ｗｉｌｓｏｎ病ＡＴＰ７Ｂ基因的突变与临床表现型的相关性。方法采用ＰＣＲ、ＭｓｐＩ酶消化和ＤＮＡ测序等技术对来自５１个家庭的５４例Ｗｉｌｓｏｎ病患者进行ＡＴＰ７Ｂ基因外显子８Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ的检测。结果５４例Ｗｉｌｓｏｎ病患者中３６例存在Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ（ＣＧＧ→ＣＴＧ）基因突变，１５例为纯合型，２１例为杂合型，Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ等位基因突变频率为４７２％；４６例伴肝损害的患者中３３例存在ＡＴＰ７Ｂ基因外显子８的Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变；３６例Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变者中３４例同时伴有Ｌｅｕ７７０Ｌｅｕ多态性。结论Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变类型是中国人Ｗｉｌｓｏｎ病的高频率突变点（４７２％）；Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变基因型多数与肝损害临床型相关。     

良性家族性婴儿惊厥家系KCNQ2基因新突变

目的 分析电压门控钾离子通道基因KCNQ2与1个良性家族性婴儿惊厥（benign familial infantile convulsions,BFIC）家系的关系,探讨BFIC的分子遗传机制。方法 1个中国陕西地区4代BFIC家系,采集41名家系成员及家系外75名健康对照的血样,采用PCR扩增、DNA直接测序技术进行KCNQ2基因突变分析,采用多聚酶链反应-单链构象多态性进行基因型和表型共分离研究。结果 PCR—DNA直接测序在先证者第5号外显子发现KCNQ2基因杂合突变G812T,导致KCNQ2蛋白孔区一个甘氨酸被缬氨酸替代（G271V）,这个位置的甘氨酸在KCNQ家族进化上高度保守。此突变与以前发现的良性家族性新生儿惊厥（benign familial neonatal convulsion,BFNC）家系KCNQ3突变（G3IOV）是同一位置相同的氨基酸改变。家系中其他患儿均检出与先证者相同的突变,而家系内参加本研究的健康人和家系外75名健康对照未出现这种突变。结论 KCNQ2基因突变可能是部分BFIC的分子发病机制,KCNQ2基因G812T突变是国内外未曾报道过的新突变,进一步开展G812T突变的功能研究有助于理解BnC及其他原发件癫痫的分子发病机理．     

中国人哮喘易感性与染色体5q31～33区连锁关系的初步研究

目的获得中国人相关位点的资料，确定中国人哮喘易感性与染色体５ｑ３１～３３区域的连锁关系。方法采集３２个哮喘家系共１９２份样品，并取３９个正常无关个体为对照；用同位素掺入的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增多态性遗传标记Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３，通过受累同胞配对法进行Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与哮喘和高血清总ＩｇＥ的连锁分析。结果正常对照分析：Ｄ５Ｓ４３６共获得９个等位片段，多态性信息含量（ＰＩＣ）为０．８０３，杂合度（ＨＥＴ）为０．８２３，Ｄ５Ｓ３９３共有１１个等位片段，ＰＩＣ为０．８９２，ＨＥＴ为０．８９８，表明两个位点均属于高度多态性的遗传标记。连锁分析：Ｄ５Ｓ４３６与哮喘呈连锁状态（Ｐ＜０．０５），Ｄ５Ｓ３９３与哮喘没有连锁关系；Ｄ５Ｓ４３６和Ｄ５Ｓ３９３与高血清总ＩｇＥ都没有显示连锁关系。结论染色体５ｑ３１～３３区可能存在与中国人哮喘易感基因相关的１个或多个位点，是进行中国人哮喘易感基因研究的重要候选区域之一。