影响神经干细胞增殖、分化的外部因素

1细胞因子对神经干细胞增殖、分化的影响在体外，NSCs的增殖需要多种因子的维持，如表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bF—GF），去除这些因子后，NSCs会中止有丝分裂，影响神经干细胞增殖。研究人员分析了过量表达白血病抑制因子（LIF）对正常大脑神经形成的作用，     

缺氧对离体培养神经干细胞增殖、分化及凋亡的影响

为探讨缺氧对体外培养的神经干细胞生长、分化及凋亡的影响,本研究采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养神经干细胞,用巢蛋白(nestin)免疫荧光染色对其进行鉴定。三气培养箱予以缺氧干预,分为5%缺氧组、10%缺氧组和正常对照组,每组又依缺氧干预时间的不同,分为6、12、24、48、72、96和120h组。通地绘制细胞生长曲线(MTT法)和计数克降形成率检测缺氧对神经干细胞增殖的影响。缺氧培养后,再用含10%胎牛血清的培养基进行分化培养,用免疫荧光技术检测缺氧对神经干细胞分化、凋亡及形态变化的影响。结果显示:缺氧干预后神经干细胞的增殖率明显下降,细包凋亡数增加,分化的神经元和胶质细胞的突起变短变粗,数量减少,但神经元和胶质细胞的分化比例未见明显变化。结果提示:缺氧可严重影响神经干细胞的存活和正常分化、且影响程序与缺氧剂量有量效关系。     

EPO对体外培养的神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响

为探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对大鼠神经干细胞增殖、分化和凋亡的影响,本研究采用显微解剖、机械吹打和无血清悬浮培养方法分离培养大鼠神经干细胞,向培养基中添加不同剂量的EPO,通过计数干细胞克隆形成率、四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法检测神经干细胞的增殖情况,用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞凋亡率;向有血清分化培养基中加入不同剂量的EPO,以神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibril-lary acidic protein,GFAP)免疫荧光染色检测神经干细胞的分化情况。结果显示:与对照组相比,加入>5U/mlEPO后神经干细胞克隆形成率和MTT检测OD值明显增高,而凋亡率显著下降,分化培养后NSE阳性细胞较对照组明显增多。结果提示:EPO可促进大鼠神经干细胞的增殖,抑制其凋亡,促进其向神经元方向分化。     

大鼠脑的神经干细胞的体外培养、增殖和分化

采用无血清培养基分离和培养大鼠脑的神经干细胞,并通过免疫荧光细胞化学技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定。鉴定结果表明,所分离培养的细胞为大鼠神经干细胞,具有神经干细胞的特征,并可在体外大量增殖和较长期培养,可经诱导分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,是进行诱导分化的良好细胞模型。本文讨论了神经干细胞传代培养中应予以注意的问题和对策。     

缺氧对体外培养的鼠胚皮质神经干细胞增殖、分化及凋亡的影响

探讨缺氧对体外培养的鼠胚大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖、分化及凋亡的影响,为NSCs移植治疗缺血缺氧性脑损伤病变提供实验依据。本研究对孕14d(E14)大鼠取鼠胚脑皮质悬浮培养、贴壁诱导分化。取悬浮培养的第三代NSCs分为实验组(10%O2、5%O2)和正常对照组(20%O2),实验组又以缺氧干预的时间不同分为24、72、120h3个组。通过MTT法和BrdU标记法检测缺氧对NSCs增殖的影响,采用caspase-3检测细胞凋亡情况。缺氧培养后再用10%胎牛血清培养基进行诱导分化,用MAP2免疫荧光染色检测缺氧对NSCs向神经元方向分化的影响。结果显示:(1)10%O272h组和5%O272h组均可诱导NSCs增殖,尤以前者最为明显;(2)10%O2120h组和5%O2120h组均可致NSCs凋亡;(3)5%O2组尤以72h组可诱导NSCs向神经元方向分化。本研究结果提示缺氧可影响NSCs的增殖、分化和存活,适度缺氧可诱导离体培养的大鼠脑皮质NSCs增殖,并可向神经元方向分化,而缺氧时间延长可致NSCs凋亡。     

胚胎干细胞的增殖分化及应用

胚胎干细胞是从早期胚胎中发现的一种能在体外培养的高度未分化细胞,具有自我增殖能力和多向分化潜能。按组织来源分为由早期胚胎内细胞团（inner cell mass,ICM）分离的胚胎干细胞和胚胎生殖细胞（embryonic germ cell,EGC）。通常所说胚胎干细胞即ESC,     

Notch信号通路与神经干细胞的增殖分化

Notch信号通路是调节细胞增殖分化的一条古老的途径，传统观点认为它是通过“旁侧抑制”发挥作用的，近来许多研究表明，Notch系统也有激活和指导细胞分化的作用。神经干细胞是一种有自新能力的多能干细胞，是神经元和神经胶质细胞的共同前体细胞，对于它的研究是一个全新的领域。这一老一新的结合可使我们从一个不同以往的角度看待一些神经系统疾病，如Alzheimer′s病等疾病的发病机制和治疗方案。     

大鼠胚胎神经干细胞黑质内移植后的存活及分化

目的：观察胚胎神经于细胞脑内移植后的存活及生长分化状况。方法：从孕11d(E11d)大鼠胚胎神经管获取神经上皮细胞，经神经巢蛋白(nestin)染色鉴定干细胞；同时植入同种大鼠黑质内。于移植后7d、14d取脑，用神经元特异烯醇化酶(NSE)、酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化方法检测移植细胞的存活及分化状况。结果：E11d神经管上皮细胞多数呈nestin染色阳性，黑质内移植后增殖形成细胞团并随时间延长而增大。免疫组化染色显示移植细胞团内有NSE及TH免疫阳性细胞。结论：胚胎神经上皮细胞多数为神经干细胞，黑质内移植后可以存活并分化为多巴胺能神经元。     

神经干细胞的增殖分化及当归对其影响

20世纪90年代初期提出神经干细胞的概念,从此彻底改变了以往认为中枢神经不能再生的认识。神经干细胞（neural stem cells,NSCs）研究是当前国际神经科学和脑科学研究的热点,因为它的多向潜能性决定了它将成为脑脊髓损伤和老年性疾病如帕金森氏病等神经系统疾病移植治疗最为理想的原材料,     

Notch信号通路与神经干细胞的增殖分化

Notch信号通路是调节细胞增殖分化的一条古老的途径,传统观点认为它是通过“旁侧抑制”发挥作用的,近来许多研究表明,Notch系统也有激活和指导细胞分化的作用。神经干细胞是一种有自新能力的多能干细胞,是神经元和神经胶质细胞的共同前体细胞,对于它的研究是一个全新的领域。这一老一新的结合可使我们从一个不同以往的角度看待一些神经系统疾病,如Alzheimer's病等疾病的发病机制和治疗方案。     

Ndrg2对培养大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:检测Ndrg2在培养大鼠神经干细胞(NSCs)中的表达情况,探索改变Ndrg2表达对NSCs增殖和分化的影响。方法:用免疫细胞化学染色和Western Blot法检测Ndrg2在培养NSCs中的表达;利用AAV-Ndrg2过表达病毒及LV-Ndrg2-RNAi干扰病毒感染大鼠NSCs后,通过BrdU掺入实验观察干预Ndrg2表达后NSCs增殖的变化,利用神经元标记物Tuj1和星型胶质细胞标记物GFAP的免疫细胞化学染色分析NSCs的分化情况。结果:Ndrg2高表达于大鼠NSCs中;与对照组(感染病毒空载体)相比,上调Ndrg2表达可显著增加BrdU~+和Tuj1~+细胞数(P0.05),但GFAP~+细胞数目无明显变化(P0.05);相反,下调Ndrg2表达可减少BrdU~+细胞数(P0.05),但不影响Tuj1~+和GFAP~+细胞数(P0.05)。结论:Ndrg2表达于大鼠NSCs,它可正性调控NSCs的增殖并促进NSCs向神经元分化。     

海人酸对神经干细胞增殖及分化的影响

背景：神经干细胞对脑组织的修复作用非常有限,约80%新增殖的内源性神经干细胞在6周内死亡,仅0.2%的细胞继续增殖、分化,参与修复。 目的：分析不同剂量海人酸在对神经干细胞增殖及分化的影响。 方法：体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,将神经干细胞分为空白对照组和加入不同浓度梯度的海人酸组,通过免疫组化法和免疫荧光法进行鉴定,MTT比色法测定海人酸对神经干细胞分化的影响,计算分化后神经元和星形胶质细胞比例。 结果与结论：海人酸组贴壁的神经球分化速度较空白对照组快,在同一时间点进行观察,神经细胞的迁移距离较未处理组远。分化5 d后,海人酸组所分化的细胞中,星状细胞较空白对照组多,而神经元样细胞相对较少,培养的细胞具有自我更新和向神经元﹑少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能。兴奋性氨基酸海人酸可使部分神经干细胞死亡,但可促进幸存的神经干细胞增殖及分化,并诱导其向星形胶质细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Lithium enhanced cell proliferation and differentiation of mesenchymal stem cells to neural cells in rat spinal cord

Lithium has been shown to inhibit apoptosis of neural progenitor cells (NPCs) and promote differentiation of NPCs. However, there was rare data to discuss the effects of lithium on neural differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs). Here, we investigated the potential promotion of lithium to MSC proliferation and neural differentiation in vitro and after transplanted into the ventral horn of rat spinal cord in vivo. We found that lithium possesses the ability to promote proliferation of GFP-MSCs in a dose dependent manner as verified by growth curve and bromodeoxyuridine (BrdU) incorporation assays; While in neural induction medium, lithium (0.1 mM) promotes neural differentiation of GFP-MSCs as verified by immunostaining and quantitative analysis. After transplantation of GFP-MSCs into the rat spinal cord, lithium treatment enhanced cell survival and neural differentiation after transplantation as verified by immunohistochemistry. These data suggested that lithium could be a potential drug to augment the therapeutic efficiency of MSCs transplantation therapy in central nervous system (CNS) disorders.     

细胞因子对神经干细胞增殖和分化的影响

目的　建立人胎大脑神经干细胞 (NSCs)分离培养的体外培养系统 ,鉴定其干细胞原始特征 ,观察上皮细胞生长因子(EGF)、碱性纤维母细胞生长因子 (FGF2 )和脑源神经生长因子 (BDNF)对NSCs分裂和分化的影响。方法　在含EGF和 (或 )FGF2的培养体系中分离培养NSCs。用定量RT PCR法检测干细胞巢蛋白表达丰度 ,用PCR ELISA法检测端粒酶活性 ,PC NA用免疫细胞化学染色检测干细胞增殖特征以及不同代数分裂的干细胞的比率。免疫细胞化学法证实NSCs分化后神经元和星形胶质细胞的比例趋势 (NF 2 0 0、MAP 2、synaptophysin、NeuN和GFAP染色 )。 结果　NSCs大量增殖呈球体状 ,PCNA阳性率高达 (71 6± 4 9) %、干细胞巢蛋白阳性、端粒酶活性为 6 3%。不同诱导因子对NSCs球体内细胞增殖数差异有显著性(P <0 0 5 )。证实EGF和 (或 )FGF2在培养基质存在下均能诱导NSCs分化 ,脑源神经生长因子 (BDNF)能维持神经元的存活和生长。分化后的神经元比例可达 (18 6± 2 5 ) %。结论　EGF和 (或 )FGF2可诱导NSCs分裂增殖并保持原始特性 ,在培养基质存在条件下 ,这些细胞因子可诱导NSCs分化。     

体外直接诱导人胚胎干细胞向神经细胞分化的研究

目的探讨体外直接诱导HSF6人胚胎干细胞（humanem bryonic stem cells,hESCs）分化为神经细胞的方法。方法采用直接的方法,在1%血清培养条件下,顺序添加bFGF、RA和Forskolin,诱导HSF6人ESCs分化为神经细胞。结果细胞发生神经样形态学改变,免疫荧光细胞化学分析结果显示,分化细胞表达神经干细胞特异性标志分子——巢蛋白（nestin）,以及神经元标志分子——β微管蛋白Ⅲ（neuron-specific class Ⅲ beta-tubulin,TuJ1）。实验组nestin阳性细胞数占（95.2±3.03）%,明显高于未添加诱导因子组的（31.6±4.93）%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论本研究直接诱导hESCs分化为神经细胞,减少了常规经胚胎体（embryoid body,EB）的诱导方法而产生其它胚层细胞的机会,为进一步探索hESCs源性神经细胞的功能,以及为细胞替代治疗提供高纯度的hESCs源性神经细胞奠定了基础。     

Silicon nanowires enhanced proliferation and neuronal differentiation of neural stem cell with vertically surface microenvironment

Owing to its biocompatibility, noncytotoxicity, biodegradability and three-dimensional structure, vertically silicon nanowires (SiNWs) arrays are a promising scaffold material for tissue engineering, regenerative medicine and relevant medical applications. Recently, its osteogenic differentiation effects, reorganization of cytoskeleton and regulation of the fate on stem cells have been demonstrated. However, it still remains unknown whether SiNWs arrays could affect the proliferation and neuronal differentiation of neural stem cells (NSCs) or not. In the present study, we have employed vertically aligned SiNWs arrays as culture systems for NSCs and proved that the scaffold material could promote the proliferation and neuronal differentiation of NSCs while maintaining excellent cell viability and stemness. Immunofluorescence imaging analysis, Western blot and RT-PCR results reveal that NSCs proliferation and neuronal differentiation efficiency on SiNWs arrays are significant greater than that on silicon wafers. These results implicate SiNWs arrays could offer a powerful platform for NSCs research and NSCs-based therapy in the field of neural tissue engineering.     

小鼠胚胎干细胞来源的神经干细胞的稳定传代体系探索

目的探讨体外诱导、获取均一的神经干细胞群(NSCs)的有效方法,并建立神经干细胞体外稳定传代扩增体系。方法首先采用无血清的诱导培养基贴壁诱导mESCs形成神经上皮祖细胞(NPCs)。然后将经添加表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子-2(FGF2)的无血清培养基短暂悬浮培养后的NPCs再贴壁培养,诱导形成NSCs。通过细胞系46C监测NPCs的形成,同时对分化细胞进行定量PCR和免疫荧光染色,在不同水平检测细胞分化效果。结果 mESCs神经诱导5 d出现大量Sox1+的NPCs;NPCs悬浮培养后,进一步诱导可得到形态均一的NSCs。第2代和第6代NSCs的神经干细胞标志定量PCR检测结果为:Pax6、Nestin、Mash1、BLBP高表达。第8代NSCs免疫荧光染色显示90%以上的细胞均为Nestin、RC2和Pax6阳性。结论成功诱导mESC生成神经干细胞群,并且可以在体外连续稳定的传代。     

神经调节蛋白-1与碱性成纤维细胞生长因子对大鼠神经干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响.方法:从新生大鼠大脑组织分离NSCs,进行体外培养,分别用bFGF、 NRG-1和NRG-1加bFGF处理,观察各组神经球的形成情况;应用免疫细胞化学法鉴定NSCs及检测分化后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、 2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)的表达.结果:NRG+bFGF组和bFGF组形成的神经球数量和直径的差别不明显,但都明显多于和大于NRG组和对照组.免疫细胞化学显色结果显示,NRG+bFGF组、bFGF组中的神经球分化出的NSE、 GFAP、 CNP阳性细胞数量明显多于NRG组和对照组,尤其是NRG+bFGF组分化的NSE、CNP阳性细胞的突起较bFGF组更长和增多.结论:NRG-1与bFGF合用能促进NSCs的增殖和分化,促进分化的神经元、少突胶质细胞突起的生长.     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。 目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。 方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。 结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。