化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进

目的改进小鼠局部淋巴结实验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法。方法选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SLS)。按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2-氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性。三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同。己基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2-氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。     

BALB/c小鼠LLNA:DA改良法在15种化学物皮肤致敏性评价中的应用

目的探讨BALB/c小鼠LLNA:DA改良法在化学物皮肤致敏性评价中的应用。方法采用BALB/c小鼠LLNA:DA改良法,对13种已知和2种未知致敏性化学物进行评价,并进行方法真实性分析。结果 25%香叶醇、25%丁子香酚、25%异丁香酚、20%反式肉桂醛、25%α-己基肉桂醛、5%水杨酸己酯、5%对苯二酚、0.3%2,4-二硝基氯苯、100%苯、100%氯仿、25%水杨酸为致敏阳性,其余4种均为致敏阴性;方法真实性分析显示,该法阳性预测率为82%、阴性预测率为100%、假阳性率为33%、假阴性率为0、灵敏度为100%、特异度为67%、准确度为87%。结论 BALB/c小鼠LLNA:DA改良法可较好地评估化学物的致敏性,并完善了香叶醇、水杨酸己酯致敏性的相关毒理数据。     

流式细胞术在小鼠局部淋巴结试验中的应用研究

摘要：目的　将流式细胞术应用到小鼠局部淋巴结实验（ｌｏｃａｌｌｙｍｐｈｎｏｄｅａｓｓａｙ,ＬＬＮＡ）中,期望建立既
可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的方法。方法　受试物分为溶剂对照［ＡＯＯ （丙酮∶ 橄榄油＝
４∶１）］、阴性对照（ＮａＣｌ）、致敏阳性物［己基肉桂醛（ＨＣＡ）、２,４ 二硝基氯苯（ＤＮＣＢ）、２ 氨基酚（２
ＡＰＣ）］、刺激阳性物［ＫＯＨ、十二烷基硫酸钠（ＳＬＳ）］。采用８～１０周龄１６～２２ｇ的雌性Ｂａｌｂ／ｃ小鼠７６
只,随机分为１９个受试物剂量组,每剂量组４只小鼠。每种受试物分别设低、中、高３个剂量组,检测浓
度分别为ＮａＣｌ （１００ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ、３００ｇ／Ｌ）、ＨＣＡ （犞／犞：３．３％、１０．０％、３０．０％）、ＤＮＣＢ（２．５ｇ／Ｌ、
５．０ｇ／Ｌ、１０．０ｇ／Ｌ）、２ ＡＰＣ （１２．５ｇ／Ｌ、２５．０ｇ／Ｌ、５０．０ｇ／Ｌ）、ＫＯＨ （２５ｇ／Ｌ、５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ）、ＳＬＳ
（５０ｇ／Ｌ、１００ｇ／Ｌ、２００ｇ／Ｌ）。于试验第１、２、３ 天将配制后不同浓度受试物稀释液以每耳２５μｌ／ｄ均匀涂
布于小鼠双侧耳后。检测小鼠耳缘厚度、耳引流淋巴结重量、Ｂ２２０＋ （ＣＤ４５Ｒ） 亚群淋巴细胞百分数等指
标。采用ＳＰＳＳ１１．５分析软件,对数据型指标进行方差分析,并对有差异的个体再行ＬＳＤ 两两比较,并根
据刺激指数对受试物致敏性大小进行分级。结果　与溶剂对照比较中高剂量的ＳＬＳ和ＫＯＨ 均可引起小鼠
耳缘厚度增加（犘＜０．０１）。可判定ＳＬＳ、ＫＯＨ 对皮肤有刺激性。ＤＮＣＢ、ＨＣＡ 各剂量组和２ ＡＰＣ 高剂量
组刺激指数均大于３,可以判断该３种化学物为皮肤致敏物。根据ＳＩ计算ＥＣ３的值,对致敏物进行分类：
ＤＮＣＢ （０．１９６）为强致敏物,ＨＣＡ （１．５５６） 和２ ＡＰＣ （３．１５６） 为中等致敏物。结论　应用流式细胞术
（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ）检测Ｂ２２０＋ （ＣＤ４５Ｒ）亚群淋巴细胞百分数作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴
结实验,结合耳缘厚度检测可实现同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。
关键词：局部淋巴结试验;小鼠;致敏性;刺激性;流式细胞术
中图分类号：Ｒ１１４;Ｒ９９４．６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０５ ０４７７ ０５     

化妆品致敏性的LLNA:BrdU-ELISA和h-CLAT检测法

目的比较小鼠局部淋巴结试验(local lymph node assay:BrdU-ELISA,LLNA:BrdU-ELISA)和人细胞系活化实验(human cell line activation test,h-CLAT)检测化妆品皮肤致敏性的能力。方法购买市售7种防晒类和祛斑类化妆品,分别按照OECD442(B):LLNA:BrdU-ELISA和OECD442(E):h-CLAT标准方法对样品进行致敏性检测。结果 7种受试物中,LLNA:BrdU-ELISA方法判定4种为致敏阳性物,h-CLAT方法判定6种为致敏阳性物。结论在化妆品致敏性检测中,可以使用h-CLAT方法作为初筛手段,替代部分动物实验。     

用皮肤变态反应试验检测化妆品致敏的可能性

目的评价化妆品送检样品的致敏可能性,为化妆品终产品的安全性评价提供依据。方法根据《化妆品卫生规范》(2007年版)中规定的皮肤变态反应试验方法,对461种送检的化妆品终产品的致敏性进行了检测。结果在检测的461件特殊用途化妆品中,仅1件烫发产品引起中度致敏反应,460件产品未引起致敏反应,总计阳性反应发生率为0.22%。结论 2007年-2014年变态反应试验结果表明绝大部分特殊用途类化妆品的致敏性符合我国现行的化妆品卫生规范要求。     

BALB/c小鼠LLNA:BrdU-ELISA改良法在15种化学物皮肤致敏性评价中的应用

目的探讨BALB/c小鼠Brd U-ELISA改良法在化学物皮肤致敏性评价中的应用。方法采用BALB/c小鼠LLNA:Brd U-ELISA改良法,对13种已知和2种未知致敏性化学物进行评价,并进行方法真实性分析。结果香叶醇(25%)、丁子香酚(25%)、异丁香酚(25%)、反式肉桂醛(20%)、α-己基肉桂醛(25%)、水杨酸己酯(5%)、对苯二酚(5%)、2,4-二硝基氯苯(0.3%)、苯(100%)、氯仿(100%)为致敏阳性,其余5种均为致敏阴性;方法真实性分析显示,该法阳性预测率为90%、阴性预测率为100%、假阳性率为17%、假阴性率为0、灵敏度为100%、特异度为83%、准确度为93%。结论 BALB/c小鼠LLNA:Brd U-ELISA改良法可较好地评估化学物的致敏性,并完善了香叶醇、水杨酸己酯致敏性的相关毒理数据。     

应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2，4-二硝基氯苯（DNCB）、三氯乙烯（TCE）、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹，25μl／耳，连续染毒3d，第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液（0．3ml／只）。第5天取小鼠耳部淋巴结称重，然后制成单细胞悬液，应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异均存在统计学意义（P〈0．01），而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较，其中抗菌凝胶组、1％、5％三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义，10％三氯乙酸差异则存在统计学意义（P〈0．05）。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力，但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差，需要进一步优化实验方法。     

进口化妆品的皮肤刺激性试验结果分析

对 90 2份进口化妆品皮肤刺激性试验的分析结果表明 ,进行急性皮肤刺激性试验的 175份化妆品中 114份 (6 5 1% )未呈现刺激性 ,6 1份 (34 9% )呈现轻度刺激性 ,进行多次皮肤刺激性试验的 72 7份化妆品中 2 34份 (32 2 % )未呈现刺激性 ,呈现轻度刺激反应的 493份 (6 7 8% ) ,以唇膏、眼影、粉底液和粉饼类化妆品为主     

人源THP - 1细胞系活化试验在化妆品皮肤致敏性评价中的应用研究

目的 建立基于人源THP - 1细胞系的皮肤致敏性体外替代测试方法（h - CLAT）,探讨其应用于化妆品体外皮肤致敏性评价的可行性。方法 参考OECD 442E测试指南,通过对10种标准化学品的致敏性预测建立h - CLAT试验方法,验证其准确性及灵敏度,再对10种特殊类化妆品产品进行皮肤致敏性评价,并与体内皮肤变态反应判定结果进行比较分析。结果 使用h - CLAT方法准确判定了10种标准化学品的皮肤致敏性,10种化妆品产品中,9种产品的预测结果与体内皮肤变态反应的判定结果具有一致性,均为无致敏性,1种产品被判定为具有潜在致敏性,与动物试验结果不一致。结论 基于有害结局路径（AOP）AOP理论,体外人源细胞系活化试验可作为化妆品皮肤致敏性评价的一种筛查方法,但针对体外替代试验的局限性,仍需整合其他测试方法进行皮肤致敏性预测。     

鸡胚绒毛尿囊膜血管试验在化妆品安全性评价中的应用研究

目的 将鸡胚绒毛尿囊膜血管试验（CAMVA）与家兔眼刺激试验进行比较,探讨在化妆品安全性评价中的应用。方法 将11种化妆品原料和8种化妆产品分别进行鸡胚绒毛尿囊膜血管试验和家兔眼刺激试验,结果进行分析比较。结果 CAMVA试验分级标准和动物试验评级标准具有较高的等级相关性和一致性。结论 CAMVA是一种较好的体外眼刺激替代方法,但需和其他体外试验组合评价更加可靠。     

BALB／c和ICR小鼠用于局部淋巴结试验的研究

目的：探讨BALB／c和ICR小鼠是否可以替代CBA小鼠用于局部淋巴结试验。方法：采用中等强度的致敏物己基肉桂醛（HcA）和强致敏剂2,4-二硝基氯苯（DNCB）作为受试物,用3H—TdR法对BALB／c和ICR小鼠进行比较。结果：两种品系小鼠对溶剂AOO反应均较低,给予HCA和DNCB后BALB／c小鼠反应与CBA小鼠接近,ICR小鼠对DNCB的反应与BALB／c相似,但对HCA的反应低于BALB／c小鼠。EC3值分别为15．36％和7．41％。结论：两种小鼠均可以用于上述两种致敏物的LLNA试验,而以BALB／c小鼠为优。     

2004年化妆品多次皮肤刺激性试验结果分析

目的分析化妆品多次皮肤刺激试验结果,了解化妆品对动物皮肤的刺激作用,并进行安全性的评价。方法按《化妆品卫生规范》中的“皮肤刺激性/腐蚀性试验”方法进行检测。结果2004年共对797份化妆品进行了多次皮肤刺激性试验,总合格率为98.62%。其中防晒类、祛斑类和健美与美乳类化妆品的合格率均为100%。国产化妆品合格率为99.40%,进口化妆品的合格率为98.04%。所有受检样品中,无刺激性的占61.10%,轻刺激性的占37.52%,中刺激性的占1.38%。结论部分化妆品对动物皮肤具有不同程度的刺激性,即具有潜在危害性。     

Early immune responses in skin and lymph node after skin delivery of Toll-like receptor agonists in neonatal and adult pigs

The skin is potentially an important vaccine delivery route facilitated by a high number of resident antigen presenting cells (APCs), which are known to be stimulated by different Toll-like receptor agonists (TLRa). In this study, neonatal and adult pigs were vaccinated in the skin using dissolving microneedle patches to investigate the immuno-stimulatory potential of different TLRa and possible age-dependent differences early after vaccination. These patches contained TLR1/2a (Pam3Cys), TLR7/8a (R848) or TLR9a (CpG ODN) combined with inactivated porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) or with an oil-in-water stable emulsion. Vaccinated skin and draining lymph nodes were analysed for immune response genes using microfluidic high-throughput qPCR to evaluate the early immune response and activation of APCs. Skin pathology and immunohistochemistry were used to evaluate the local immune responses and APCs in the vaccinated skin, respectively.In both neonatal and adult pigs, skin vaccination with TLR7/8a induced the most prominent early inflammatory and immune cell responses, particularly in the skin. Skin histopathology and immunohistochemistry of APCs showed comparable results for neonatal and adult pigs after vaccination with the different TLRa vaccines. However, in vaccinated neonatal pigs in the skin and draining lymph node more immune response related genes were upregulated compared to adult pigs. We showed that both neonatal and adult skin could be stimulated to develop an immune response, particularly after TLR7/8a vaccination, with age-dependent differences in regulation of immune genes. Therefore, age-dependent differences in local early immune responses should be considered when developing skin vaccines.     

胃窦癌前哨淋巴结及淋巴结转移规律的临床研究

目的研究胃窦癌前哨淋巴结分布规律并探讨其在早期胃窦癌手术治疗中的临床应用价值。方法在对病人行胃癌手术前先进行前哨淋巴结活检(即开腹后在原发灶周围注射亚甲蓝,切除在5min之内被染色的所有淋巴结),然后行胃切除手术和扩大淋巴结切除术。结果本组病人30例有29例均找到SLN(成功率为99%),均为幽门下淋巴结(第六组淋巴结),并对淋巴结转移规律进行研究,为胃窦癌手术淋巴结清扫范围提供参考依据。结论对于SLN阴性及早期胃窦癌施行D1或D1+切除可获得A级根治度,并通过亚甲蓝术中间接淋巴染色,可提高胃癌根治术中淋巴结和阳性淋巴结清除的绝对数,避免不必要的标准手术,减少并发症。     

胃窦癌前哨淋巴结及淋巴结转移规律的临床研究

目的研究胃窦癌前哨淋巴结分布规律并探讨其在早期胃窦癌手术治疗中的临床应用价值。方法在对病人行胃癌手术前先进行前哨淋巴结活检（即开腹后在原发灶周围注射亚甲蓝，切除在5min之内被染色的所有淋巴结），然后行胃切除手术和扩大淋巴结切除术。结果本组病人30例有29例均找到SLN（成功率为99％），均为幽门下淋巴结（第六组淋巴结），并对淋巴结转移规律进行研究，为胃窦癌手术淋巴结清扫范围提供参考依据。结论对于SLN阴性及早期胃窦癌施行D1或D1＊切除可获得A级根治度，并通过亚甲蓝术中间接淋巴染色，可提高胃癌根治术中淋巴结和阳性淋巴结清除的绝对数，避免不必要的标准手术，减少并发症。     

Preliminary evaluation of plasticizer and BPA in Tunisian cosmetics and investigation of hazards on human skin cells

In this study, 18 plasticizer (phthalates, adipates, sebacates, and others) and BPA residues in some cosmetic samples collected from Tunisian market are evaluated by micro-matrix solid-phase dispersion combined with GC-MS. In parallel, the impact of these molecules and the cosmetics in the human epithelial cell lines is investigated. The cytotoxic activity of cosmetic extracts is evaluated in vitro against B16 and Hep-2 human skin cell lines using the 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide assay.

This study shows that the tested cosmetic products could constitute a hazard to the consumer health and wellness and that strict safety analysis on cosmetic products needs to be carried out before they are marketed.