糖尿病兔心肌梗死后钾离子通道蛋白基因表达的变化

目的: 探讨糖尿病合并心肌梗死后兔心室肌钾离子通道蛋白基因表达的变化。方法: 选择新西兰兔作为研究对象,通过高脂高糖喂养2个月后由耳缘静脉注射四氧嘧啶(80 mg/kg)制作糖尿病模型, 成模后改为普通饲料继续单笼喂养4个月,并随机分为糖尿病+心肌梗死组、糖尿病假手术组和非糖尿病假手术组,通过结扎冠状动脉前降支制作心肌梗死模型。手术后所有入选成活兔均常规喂养2个月后处死,取左心室梗死周围区心室肌采用实时荧光定量PCR方法观察心肌钾离子通道蛋白Kv4.2、Kv4.3和Kv1.4 mRNA表达变化。结果: 糖尿病+心肌梗死组和糖尿病假手术组兔心室肌Kv4.2和Kv4.3 mRNA表达均显著低于非糖尿病假手术组(P<0.05);而Kv1.4显著高于非糖尿病假手术组(P<0.05)。糖尿病+心肌梗死组兔心室肌Kv4.2和Kv4.3 mRNA表达显著低于糖尿病假手术组(P<0.05);而Kv1.4并无显著升高(P>0.05)。结论: 糖尿病兔心肌梗死后瞬时外向钾离子通道蛋白基因表达发生了改变即电重构,这可能是心肌梗死后室性心律失常易感性增加的机制之一。     

Kv在正常与被动致敏人气道平滑肌张力调控中的作用

目的：探讨电压依赖性延迟整流钾通道（Kv）对正常与体外致敏人气道平滑肌（HASM）的张力调控作用及其机制。 方法： 采用肌张力试验、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫细胞化学等技术，观察钾通道阻断剂对正常与哮喘患者血清致敏HASM张力、细胞Kv的mRNA和蛋白质表达。 结果： Kv 阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）可引起正常HASM肌环产生浓度依赖性收缩反应，达到最大效应一半所需浓度的负对数值（pD2）为2.09±0.09，人哮喘血清致敏组为2.44±0.16，差异显著（P＜0.01）；但最大反应强度（Emax）分别为正常组（24.0±6.4）g/g，人哮喘血清致敏组（31.8±7.3）g/g，差异无显著（P＞0.05）。在培养的HASM细胞上，Kv1.2、Kv1.3和 Kv1.5基因mRNA均有表达；人哮喘血清致敏的HASM细胞Kv1.5基因mRNA（P＜0.01）和蛋白质（P＜0.01）的表达均下降。 结论： 体外被动致敏HASM细胞Kv功能较正常下调，致平滑肌兴奋性增高，该变化可能主要与Kv1.5基因相关。     

慢性心衰大鼠下丘脑室旁核瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3低表达促进肾交感神经兴奋性

 目的: 观察慢性心衰大鼠下丘脑室旁核内瞬时外向钾通道蛋白Kv4.2和Kv4.3的变化及其对交感神经活性的影响。方法: 采用冠状动脉左前降支结扎术建立大鼠心衰模型或假手术模型,造模4周后超声心动图测定心功能;酶联免疫吸附法测定血浆去甲肾上腺素(NE)及血清N端前脑钠肽(NT-proBNP)含量;Western blot和real-time PCR法测定室旁核内Kv4.2和Kv4.3的表达情况;室旁核部位注射钾通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP),电生理记录仪记录血压、心率和肾交感神经放电的变化。结果: 与假手术组比,心衰组大鼠心功能明显降低,血浆NE及血清NT-proBNP明显升高,室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达明显下调;注射4-AP后导致血压、心率和交感神经放电升高,但心衰组的升高幅度小于假手术组。结论: 心力衰竭时室旁核内Kv4.2和Kv4.3表达下调并伴有交感神经放电增加,促进心衰进展。     

心脏收缩力调节对慢性心力衰竭兔心室肌电重构的影响

目的:观察心脏收缩力调节(cardiac contractility modulation, CCM)对慢性心力衰竭兔心室肌电重构的影响并探讨其可能的机制。方法:30只新西兰大白兔随机分为3组:假手术组、心衰组(采用升主动脉根部套扎法建立兔慢性心力衰竭模型)和心衰+CCM刺激组(模型制作成功后给予4周的CCM治疗)。电生理记录仪测定QTc和心室有效不应期(ventricular effective refrective period, VERP);采用RT-qPCR和Western blot检测心室肌Kv1.4、Kv4.3和缝隙连接蛋白43 (connexin 43, Cx43)的mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)实验第12周末,心衰兔QTc显著延长(P<0.05);实验第16周末,与心衰组相比,心衰+CCM组经4周CCM刺激后QTc显著缩短(P<0.05)。实验第16周末,与假手术组相比,心衰组、心衰+CCM组VERP显著延长(P<0.05);与心衰组相比,CCM可缩短心衰模型兔的VERP(P<0.05)。(2)与假手术组相比,心衰组心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA水平显著下降(P<0.05)。与心衰组相比,CCM显著上调心衰兔心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA水平(P<0.05)。(3)与假手术组相比,心衰组心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的蛋白表达显著下降(P<0.05)。与心衰组相比,CCM可上调心衰兔心肌组织中Kv1.4、Kv4.3和Cx43的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:心脏收缩力调节可改善慢性心力衰竭兔心室肌电重构,其潜在机制可能与Kv1.4、Kv4.3和Cx43的mRNA和蛋白表达上调有关。     

Nrf2-ARE通路在缺氧/吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

 目的：探讨核因子E2相关因子2（Nrf2）-抗氧化反应元件（ARE）通路在缺氧后处理和吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法：建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型,分离、培养心肌细胞,随机分为6组（n=8）：正常组（N组）、模型组（M组）、缺氧后处理组（IPO组）和不同浓度吡那地尔后处理组（P25组、P50组和P100组）。分离后的心肌细胞培养20 h后,除N组继续培养外,其余各组均缺氧45 min,复氧60 min。IPO组缺氧45 min后复氧、缺氧循环3次,每次各5 min,在继续复氧60 min;P25组、P50组和P100组缺氧45 min后分别以25、50和100 μmol/L吡那地尔处理5 min,复氧60 min。采用real-time PCR及Western blotting技术检测复氧末心肌细胞中Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）、NAD(P)H:醌氧化还原酶1（NQO1）和超氧化物歧化酶1（SOD1） mRNA及蛋白表达水平。结果：与N组比较,其它各组与Nrf2、NQO1、SOD1及HO-1的mRNA及蛋白质表达均降低（P＜0.05）;与M组比较,其它各组mRNA及蛋白质表达均显著增高（P＜0.05）;其中IPO组和P50组mRNA转录量显著高于P25组和P100组（P＜0.05）;P25组SOD1 mRNA显著高于P100组（P＜0.05）。IPO组和P50组Nrf2、SOD1和NQO1蛋白质表达显著高于P25和P100组（P＜0.05）;P50组HO-1蛋白质表达量显著高于IPO组、P25组和P100组（P＜0.05）;P25组HO-1和NQO1蛋白质表达显著高于P100组（P＜0.05）。结论：缺氧后处理和吡那地尔后处理可能通过激活Nrf2-ARE通路减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤。     

造影剂肾病发病机制中炎症反应的探讨*

  目的：通过观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）与核因子κB（NF-κB）在造影剂肾病(CIN)模型大鼠肾组织中的表达,初步探讨CIN发病中是否存在炎症反应机制。方法：将96只雄性SD大鼠随机分成2组：模型组（n=48）和对照组（n=48）,分别从尾静脉注射碘造影剂和生理盐水10 mL/kg。在注射后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、10 d和15 d各处死6只大鼠,留取血液和肾组织,采用HE染色法观察肾脏病理变化,免疫组化和RT-PCR法分别检测肾损伤分子1（KIM-1）、NF-κB、TNF-α蛋白和mRNA表达情况,并进行相关性分析。结果：（1）对照组血清肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）各时点变化不大（P＞0.05）,模型组各时点（除15 d外）SCr和BUN水平明显高于对照组（P＜0.05）;（2）对照组各时点肾小管无明显损伤,病理评分无显著差异（P＞0.05）。模型组的肾小管损伤评分显著高于同一时点的对照组（P＜0.05）;（3）各因子在造膜后6 h后开始大量表达,KIM-1蛋白及mRNA在24 h达高峰,NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA在48 h达高峰,且与对照组对应时点（除15 d外）比较均有显著差异（P＜0.05）;（4）模型组肾小管损伤评分与NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.843、0.758、0.743和0.707,P＜0.05）;模型组肾组织的NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达与KIM-1蛋白及mRNA表达呈正相关（r=0.863、0.807、0.839和0.855,均P＜0.05）。结论：NF-κB和TNF-α在CIN大鼠肾脏中的表达上调,其表达水平与肾小管损伤程度相关。CIN的发生发展中存在炎症反应机制。     

急性心肌梗死大鼠左心室心肌组织脑利钠肽表达变化

目的研究Sprague-Dawlay大鼠急性心肌梗死（AMI）后左心室心肌组织脑利钠肽（BNP）表达的动态变化。方法结扎冠状动脉左前降支,建立大鼠AMI模型。随机分为AMI组（1、3、7、14、28d组）和假手术组,半定量RT-PCR和Western blot分别检测左心室心肌组织中BNP mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,左心室心肌组织BNP mRNA和蛋白表达于梗死后1d开始升高,BNP mRNA表达为0.913±0.036比0.757±0.034（P〈0.05）,BNP蛋白表达为0.882±0.027比0.565±0.086（P〈0.05）;3d达高峰,BNP mRNA和蛋白表达分别为0.971±0.027,0.976±0.016;然后逐渐降低,但至28d仍高于假手术组,BNP mRNA表达为0.902±0.072比0.757±0.034（P〈0.05）,BNP蛋白表达为0.873±0.033比0.565±0.086（P〈0.05）。结论大鼠AMI后左心室心肌组织脑利钠肽表达增高,并且呈一定的动态变化规律。     

P38、MAPK-1和AQP-4在糖皮质激素调节大鼠创伤性脑水肿中的作用

目的 探讨糖皮质激素对P38、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK-1）的调节作用及其对大鼠创伤后脑组织水通道蛋白 4（AQP-4）表达的影响。方法 选择SPF级雄性SD大鼠140只,随机分为假手术组、模型组、低剂量治疗和高剂量治疗组,各35只。假手术组单纯实施开颅手术,模型组、低剂量治疗组和高剂量治疗组用Feeney's自由落体法制备大鼠脑创伤模型,高剂量治疗组和低剂量治疗组分别予高、低甲泼尼龙尾静脉注射。分别于伤后0、6、24、72 h、7 d处死动物,取脑组织标本,透射电镜观察各组大鼠神经细胞结构变化,免疫组化法测定各组大鼠AQP-4、P38、MAPK-1的表达水平,用荧光探针原位杂交法测定AQP-4mRNA的表达。结果 ①假手术组大鼠脑神经结构基本正常,细胞质、细胞膜及细胞核完整清晰。模型组神经细胞体积缩小,细胞膜结构破坏,胞浆疏松,细胞核固缩,凋亡小体形成。与模型组相比,低剂量治疗组、高剂量治疗组大鼠神经细胞坏死程度均较轻。②低剂量治疗组及高剂量治疗组大鼠伤后24、72 h及7 d的AQP-4阳性表达率均低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量与高剂量治疗组间表达比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。低剂量治疗组及高剂量治疗组大鼠在伤后24、72 h及7 d的P38、MAPK-1阳性表达率均低于模型组,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量与高剂量治疗组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。③低剂量治疗组和高剂量治疗组的AQP-4mRNA阳性表达率在伤后24、72 h及7 d均低于模型组,高于假手术组,差异有统计学意义（P＜0.05）;低剂量与高剂量治疗组间比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 糖皮质激素可以降低大鼠创伤后脑组织AQP-4 的表达及脑损伤,其作用机制可能与抑制P38、MAKP-1激活、降低下游 AQP-4 的表达有关。     

CEPO调控新生大鼠缺氧缺血性脑损伤Bcl-2、Bax基因表达的研究

目的 观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）脑组织Bcl-2、Bax基因表达变化及氨基甲酰化促红细胞生成素（CEPO）干预对其表达的影响,探讨CEPO发挥脑保护作用的可能机制.方法 将新生7日龄SD大鼠建立HIBD模型,利用RT-PCR检测缺氧缺血和CEPO干预后2h、12h、24 h、48 h、72 h凋亡基因Bcl-2、Bax的mRNA表达的改变.结果 与假手术组相比,缺氧缺组在2h、12h、24 h、48 h、72 h脑组织中Bcl-2、Bax的表达均增加（P＜0.05）,与缺氧缺血组相比,CEPO干预组在不同时间点Bcl-2表达增加（P＜0.05）,Bax表达下降（P＜0.05）.结论 在新生大鼠HIBD中Bcl-2、Bax mRNA的表达发生改变,调控二者的表达水平可能是CEPO发挥脑保护的作用机制之一.     

Ghrelin对脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞及肺组织iNOS表达的影响

 目的： 观察ghrelin对脓毒症肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞及肺组织诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）表达的影响。方法： SD雄性大鼠分为假手术组、脓毒症组及ghrelin治疗组,前2组各设术后6 h、12 h和20 h亚组。通过盲肠结扎穿孔术（cecal ligation and puncture, CLP）建立脓毒症模型,ghrelin治疗组于术后3 h及15 h腹腔注射ghrelin,术后20 h取材。各组按术后既定时间行支气管肺泡灌洗收集肺泡巨噬细胞,RT-PCR检测肺泡巨噬细胞中iNOS mRNA的表达水平。另一部分大鼠则在术后20 h采集右肺,行肺病理学检查及Western blotting检测肺组织iNOS蛋白表达。结果： 脓毒症组在CLP术后6 h、12 h和20 h肺泡巨噬细胞iNOS mRNA的表达水平分别为1.33±0.05、1.44±0.08和1.57±0.11,均高于假手术组（P＜0.05）,并不随时间延长而升高;但在术后20 h却低于ghrelin治疗组（2.27±0.37;P＜0.05）。Ghrelin治疗组CLP术后20 h肺组织iNOS蛋白表达水平（0.87± 0.03）低于脓毒症组（P＜0.05）。Ghrelin治疗组肺组织病理学评分（5.83±0.477）较脓毒症组（7.83±0.75）低,2组均高于假手术组（P＜0.05）。结论： CLP术后6～20 h,大鼠肺泡巨噬细胞iNOS mRNA的表达水平升高,但无时间依赖性。Ghrelin对脓毒症大鼠肺泡巨噬细胞iNOS mRNA表达起上调作用,而对肺组织iNOS蛋白表达起抑制作用,减轻肺损伤程度。     

超顺磁氧化铁标记对干细胞转铁蛋白受体和铁蛋白轻链基因及蛋白表达的影响

目的研究超顺磁氧化铁（SPIO）标记对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）转铁蛋白受体（TfR）和铁蛋白轻链（Fn-L）基因及蛋白表达的影响。方法实验通过医院伦理委员会的批准。标记组（实验组）采用多聚赖氨酸（PLL,终质量浓度为1.5μg/mL）介导SPIO（终质量浓度为50μg/mL）标记ADSCs。在2、4、8、16、24、96、168、336、504、672 h,分别用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）和WesternBlot实验定量检测实验组和未标记组（对照组）TfR和Fn-L基因及蛋白表达水平。结果 PLL-SPIO标记ADSCs后,实验组Fn-L mRNA（2、4、8、16、24、96、168、336 h）及蛋白（16、72、96、168 h）（P均〈0.05）表达水平会暂时性升高,至标记后一定时间,Fn-L mRNA（504、672h）及蛋白（336、504、672h）表达水平两组间差异无统计学意义（P均〉0.05）;实验组TfR mRNA（2、4、8、16、72、96、168、336 h）及蛋白（24、96 h）（P均〈0.05）表达水平会暂时性减低,至标记后一定时间,TfRmRNA（504、672 h）及蛋白（168、336、504、672 h）表达水平两组间差异无统计学意义（P均〉0.05）。结论在一定浓度内,PLL-SPIO标记ADSCs,对Fn-L和TfR基因及蛋白表达仅产生暂时性影响;从而为细胞内标记过程的安全性提供了实验依据。     

Kv4钾通道及其相互作用蛋白KChIP2与心律失常

心肌细胞动作电位复极化异常与心律失常的发生有密切关系。Ito电流是参与心肌细胞动作电位复极化的重要离子流。Kv4.2 或Kv4.3是形成Ito通道孔洞的亚基，而Kv4钾通道相互作用蛋白KChIP2则协助在胞质合成的Kv4.2 或Kv4.3向细胞膜转运。Kv4钾通道及KChIP2在心肌细胞的表达、分布和功能的变化对心肌细胞Ito电流有重要影响。     

血清胱抑素C、超敏C反应蛋白表达水平对急性冠脉综合征的临床诊断价值

目的 探讨血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）、胱抑素（Cys-C）表达水平对急性冠脉综合征（ACS）的临床诊断价值.方法 选取入住我院心内科134例ACS患者,其中稳定型心绞痛患者（SA）60例,不稳定型心绞痛患者（UAP）52例,急性心肌梗死（AMI）患者22例,同时健康体检者62例,测定各组hs-CRP、Cys-C l以及相关性因子的水平,并进行统计学分析.结果 ①ACS患者hs-CRP（mg/L）（SA组：4.87 ±0.65、UAP组：9.81 ±1.13、AMI组：20.27±2.36、对照组1.24±0.52）、Cys-C （mg/L）（SA组：0.76±0.13、UAP组：1.03±0.17、AMI组：1.39±0.36、对照组0.46±0.07、基质金属蛋白酶（MMP）-9（μg/mL）（SA组：308.43±35.52、UAP组：379.86±27.90、AMI组：420.13±50.16、对照组112.07±10.18）以及IL-6 （pg/L）（SA组：62.37±5.18、UAP组：69.05±7.18、AMI组：72.53±6.95、对照组27.19±3.96）表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）（μmol/L）（SA组：22.84±2.65、UAP组：19.43±1.79、AMI组：7.93±1.17、对照组30.19±3.53）水平相对于对照组降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;②ACS血清hs-CRP表达与Cys-C,MMP-9,eNOS相关（P＜0.05）,Cys-C与MMP-9、eNOS、IL-6表达具有相关性（P＜0.05）;③SA组、UAP组以及AMI组血清hs-CRP、Cys-C表达水平依次升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 血清hs-CRP、Cys-C表达对于诊断ACS可能具有临床意义.     

大鼠脑出血后V1αR和AQP4表达升高与脑水肿的形成相关

 目的 研究精氨酸加压素1α受体（V1αR）和水通道蛋白4（AQP4）在SD大鼠脑出血（ICH）脑组织中的表达变化及两者在脑水肿形成中的作用。方法 将自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,分别于术后6、12、24和48h运用干湿重法、免疫荧光和Western blot检测脑含水量(BWC)、V1αR和AQP4蛋白的表达。结果 脑出血后6h,V1αR和AQP4的表达开始增加,至48h达到高峰分别为（21.88±0.44和23.16±0.67）,显著高于假手术组（14.32±0.55和13.90±0.40）。与脑含水量呈正相关（P＜0.05）。结论 V1aR介导的AQP4表达升高是脑出血后脑水肿形成的主要原因。     

肾缺血预处理后急性心肌梗死大鼠炎症反应的变化及机制

目的观察肾缺血预处理后急性心肌梗死大鼠心肌梗死面积和早期炎症反应变化,探究其在心肌保护中的作用机制。方法将72只健康雄性成年sD大鼠随机分为三大组,①对照组（NC,n=8）;②急性心肌梗死组（AMI,n=32）;③肾缺血预处理组（RIP,n=32）;各组大鼠分别在急性心肌梗死后2．4、6、12h四个时间点处死取材。术中以MS-4000生物信号采集处理系统监测并记录大鼠Ⅱ导联心电图,确定心肌梗死模型成功。Even’s蓝-Trc染色推测心肌梗死面积;HE染色观察心肌病理变化。双抗体夹心（ELISA）法测定血清白介素8（IL-8）和白介素10（IL-10）的含量;RT-PCR测定缺血区心肌组织IL-10mRNA和IL-8 mRNA表达情况。结果RIP组12h梗死部位重量（Is）和缺血危险区（AAR）重量比值（IS／AAR）（46．18±6．15）％较AMI组（66．44±19．24）％明显减小（P〈0．05）。RIP组与AMI组比较,心梗后2、4、6h浸润白细胞数目无明显差异（P〉0．05）,仅在12h时减少（P〈0．05）,外周血白细胞计数在12h有明显差异（P〈0．05）,血清IL．8浓度各时间点无明显差异（P〉0．05）。血清IL-10含量仅见4h升高差异明显（P〈0．05）。缺血心肌IL．8mRNA表达普遍降低,其中在6h和12h IL-8 mRNA明显降低（P〈0．05）。缺血心肌IL-10 mRNA表达普遍降低,但同时间点间无明显差异（P〉0．05）。结论经肾缺血预处理后12h急性缺血心肌中浸润的白细胞减少,急性心肌梗死面积缩小,全身炎症反应减轻,提示肾缺血预处理对急性心肌缺血有保护作用。