采用微生物转化J法合成5-羟基普萘洛尔

采用短刺小克银汉霉菌(Cunninghamella blakes1eana AS 3.153)对普萘洛尔进行了代谢转化研究.液相色谱-多级质谱和核磁分析结果证明,转化液中主要含有5-羟基普萘洛尔转化产物;考察了单羟化物形成的影响因素,发现在pH 6.5、底物浓度0.25%和转化反应持续48 h等条件下,5-羟基普萘洛尔的产率可达76%,为活性药物代谢产物的合成开辟了一条新途径.     

利用微生物转化模型研究苯丙哌林的代谢产物

选用短刺小克银汉霉菌AS 3.15 3对苯丙哌林进行微生物转化研究 .根据液相色谱和质谱数据推测 ,转化产物分别为苯丙哌林单羟基化物 (约6 5 % ) ,苯丙哌林双羟基化物和苯丙哌林单羟基化物的硫酸酯结合物 .发现苯丙哌林的微生物转化与其在人体内的药物代谢有很多相似之处 ,转化菌株能产生人体Ⅰ相代谢产物和部分Ⅱ相代谢产物 .考察了影响单羟基转化产物形成的因素 ,发现以pH 6 .5 ,底物浓度 0 .0 5 % ,转化反应持续 72h等条件较为适宜 .通过半制备高效液相色谱法分离出两种主要转化产物 ,经核磁共振光谱分析确证其结构分别为 4 羟基苯丙哌林和 4′ 羟基苯丙哌林 .结果表明 ,微生物转化模型是研究苯丙哌林代谢适宜的体外模型     

人尿中苯丙哌林羟基化代谢产物的研究

目的　研究苯丙哌林在人体内的羟基化代谢过程。方法　选择10名健康男性受试者单剂量口服60 mg苯丙哌林,收集0～24 h尿样,经固相萃取后用LC/MSⁿ法检测羟基化代谢产物。利用微生物转化法和半制备HPLC获得其中两种代谢产物的对照品,并经NMR鉴定结构。根据质谱断裂规律进一步推测结合型代谢物的结构。结果 在人尿中发现苯丙哌林的5种羟基化代谢产物和它们与内源性葡糖醛酸和硫酸的结合物,与代谢物对照品的液相色谱和质谱信息比较,确证了其中两种代谢产物的结构分别为4″-羟基苯丙哌林和4″-羟基苯丙哌林。结论　苯丙哌林的羟基化代谢优先发生在芳环烷氧基对位,5种羟基化代谢产物在尿中主要以葡糖苷酸或硫酸酯结合物形式存在。     

左旋一叶碱的代谢转化

目的研究一叶碱［securinine,(-)SE］在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法对(-)SE的代谢转化进行了研究,优化了代谢体系,建立了反相HPLC法同时分离检测(-)SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上,建立了生物体液中(-)SE及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经β-葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果代谢物分别鉴定为6-位羟基,6-位羰基及5-位α及β羟基取代的(-)SE,还证实了体内6-位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论基本阐明(-)SE在大鼠体内外代谢转化的途径。     

左旋一叶萩碱的代谢转化

目的　研究一叶碱 [securinine ,( - )SE]在大鼠体内外的代谢转化。方法　采用大鼠肝微粒体体外温孵法对 ( - )SE的代谢转化进行了研究 ,优化了代谢体系 ,建立了反相HPLC法同时分离检测 ( - )SE及其体外代谢产物的分析方法。用液液萃取 ,制备TLC及半制备HPLC分离纯化了 4个代谢产物并进行了光谱鉴定。在此基础上 ,建立了生物体液中 ( - )SE及其代谢物的反相HPLC分析方法 ,并用该法检测了ip给药后大鼠的胆汁、尿样及其经 β 葡糖醛酸苷酶水解后的样品。结果　代谢物分别鉴定为 6 位羟基 ,6 位羰基及 5 位α及 β羟基取代的 ( - )SE ,还证实了体内 6 位羟基代谢物进一步形成了二相结合型产物。结论　基本阐明 ( - )SE在大鼠体内外代谢转化的途径     

蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化

目的研究蓝萼甲素在大鼠体内外的代谢转化。方法采用大鼠肝微粒体体外温孵法,研究对蓝萼甲素的代谢转化。采用RP-HPLC法同时分离检测蓝萼甲素及其体外代谢产物。结果用液-液萃取、制备HPLC法,从大鼠胆汁中分离了一个代谢产物,经质谱分析推测结构为羟基化蓝萼甲素,并采用HPLC-MS连用,分析了肝微粒体体外温孵样品中的代谢产物,推测了蓝萼甲素的可能代谢转化途径。结论蓝萼甲素在大鼠肝微粒体和胆汁中可被代谢转化,主要代谢产物为羟基化蓝萼甲素。     

HPLC-ESI/MS分析5-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物

目的研究5-羟基黄酮在大鼠体内的代谢产物。方法应用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI/MS)检测大鼠灌胃5-羟基黄酮后血浆、尿液、胆汁和粪便中的代谢产物。实验采用Zorbax C18色谱柱,0.05%甲酸乙腈-0.05%甲酸水二元线性梯度洗脱进行色谱分离,并与电喷雾质谱联用,根据正离子模式的分子离子峰获得化合物分子量信息,推测化合物的可能结构。结果仅在大鼠粪便中检测到原形成分,在大鼠尿液、粪便、血浆、胆汁中检测到5-羟基黄酮葡糖醛酸结合物。结论 5-羟基黄酮吸收差,在大鼠体内主要以II相代谢产物葡萄糖醛酸结合物的形式存在。     

6-甲氧基正丁苯酞在大鼠肝微粒体中的代谢研究

报道了用GC/MS方法及衍生化技术研究6-甲氧基正丁苯酞(MBP)在大鼠肝微粒体中的代谢转化结果。6-甲氧基正丁苯酞在苯巴比妥(PB)诱导的大鼠肝微粒体中主要转化为3-羟基、γ-羟基取代物,6-羟基正丁苯酞与一个环氧化代谢产物。     

左旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化研究

用大鼠肝微粒体体外温孵法进行了左旋黄皮酰胺[(-)-clausenamide]代谢转化研究,优化了温孵体系,建立了反相HPLC-DAD同时分离检测左旋黄皮酰胺及其体外代谢产物的分析方法。用硅胶低压柱色谱、制备TLC及制备HPLC分离纯化了两个代谢产物并进行了光谱鉴定。结果表明,两个代谢物分别确定为6-和5-位羟基取代的黄皮酰胺。     

右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化

目的：研究黄皮酰胺的主要代谢途径,为进一步研究黄皮酰胺代谢的立体选择性打下基础。方法：用大鼠肝微粒体体外温孵法对右旋黄皮酰胺((+)-clausenamide)进行温孵,用硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化代谢产物并通过光谱分析鉴定其结构。结果：分离得到5个代谢产物CM1,CM3,CM4,CM5及CM6,其结构分别鉴定为6-羟基,4-羟基,4,6-二羟基,4-苯环邻位羟基,4,7-苯环间位-二羟基黄皮酰胺。结论：黄皮酰胺的代谢主要发生羟化或双羟化,CM3是其主要代谢产物,量较少的CM4,CM6为其进一步代谢产生的双羟基代谢产物;另2个代谢产物CM1,CM5产生的量也较少;CM2未分离得到,但通过HPLC分析知其为右旋黄皮酰胺的微量代谢产物。     

短刺小克银汉霉AS 3.910的CYP2C9同工酶抑制作用

目的探索具有药物代谢酶CYP2C9活性的微生物模型对CYP2C9抑制剂的响应。方法选用短刺小克银汉霉AS 3.910为模型菌株， 检测CYP2C9抑制剂对CYP2C9底物特定转化产物产率的影响， 并通过底物间相互影响的程度探索该转化体系中的药物代谢相互作用。 采用液相色谱-多级质谱联用技术检测转化产物。 结果 CYP2C9抑制剂苯溴马隆抑制4′-羟基甲苯磺丁脲的生成，使其产率由100%下降到14.5%；磺胺苯吡唑抑制O-去甲基吲哚美辛的生成，使其产率由75.2%降低到9.9%；丙戊酸抑制4′-羟基双氯芬酸的生成，使其产率由98.6%降低到2.7%。底物药物甲苯磺丁脲、双氯芬酸和吲哚美辛之间存在代谢相互作用，导致生成相应代谢物的产率降低。结论3种CYP2C9抑制剂不同程度地抑制了短刺小克银汉霉的CYP2C9同工酶，而且CYP2C9底物间存在药物代谢相互作用。     

高效液相色谱法分离测定大鼠肝微粒体中普萘洛尔葡醛酸化代谢产物

目的　建立分离测定外消旋普萘洛尔两种对映体的葡醛酸化代谢产物的反相高效液相色谱法。方法用生物合成法合成R-(+)-普萘洛尔葡醛酸苷,并经C₁₈固液萃取柱纯化、浓集,得到标准液储备液,以此标准液进行普萘洛尔葡醛酸化代谢物的分析测定。结果　R-(+)-普萘洛尔葡醛酸苷在0.24-73.17μmol·L^-1 浓度范围内线性良好,方法专属性高,平均回收率为99.4%±1.0% ,日内精密度RSD小于3.3% ,日间精密度小于4.5%。结论　此法可用于外消旋普萘洛尔两种对映体体外葡醛酸化代谢研究     

普罗帕酮在中国健康受试者体内的羟基化代谢产物研究

目的:阐明普罗帕酮羟基化代谢过程的种属及种族差异。方法:选择10 名中国健康受试者单剂量po300 mg 盐酸普罗帕酮片,收集0 ～12 h 的尿样,经液 液萃取后,采用LC/ MSⁿ 技术,对羟基化代谢产物进行选择性离子监测(m/z 358) 和多级全扫描质谱分析。结果:在服药后的尿样中检测到两种羟基化代谢产物,根据质谱数据,推测这两种代谢产物分别为4′-羟基普罗帕酮和5-羟基普罗帕酮。采用微生物转化法结合半制备HPLC制备并分离了4′-羟基普罗帕酮的对照品,通过NMR 证实了其结构。结论:在10 名受试者服药后的尿样中均能检测到代谢物4′ 羟基普罗帕酮和5 羟基普罗帕酮,与文献报道的白人受试者代谢结果相比,中国受试者有较宽的羟基化代谢谱。     

五味子醇甲的代谢转化

采用动物肝微粒体体外代谢法对五味子醇甲的代谢转化进行了研究。从体外代谢产物中鉴定其主要的三个代谢物为:7,8-顺二羟基五味子酸甲;7,7-顺二羟基-2-去甲基五味子醇甲及7,8-顺二羟基-3-去甲基五味子醇甲。在此基础上,建立了生物体液中五味子醇甲及其代谢物的反相HPLC分析方法,并用此法检测了服药后大鼠的胆汁及尿样,比较了体外代谢与体内代谢的异同。     

短刺小克银汉霉AS 3.153菌株对安非他酮的代谢转化

目的寻找适用体外转化安非他酮的微生物菌株及采用此菌株制备吗啉环羟基化安非他酮纯品的可能性。方法首先采用液相色谱-质谱测定4种小克银汉霉对安非他酮的转化能力,确定菌株,再利用最佳菌株,采用高效液相色谱-多级质谱联用法检测转化液中安非他酮的代谢产物,并针对代谢产物2(M2)的转化进行了培养基初始pH值6水平(分别为6.0,6.5,7.0,7.5,8.0和8.5),底物浓度4水平(分别为0.025,0.05,0.1和0.2g·L-1),转化时间5水平(分别为72,96,120,144和168h)等转化条件的单因素考察,以及采用四因素三水平的正交试验设计对安非他酮进一步优化转化条件。结果根据液相色谱和质谱数据,经短刺小克银汉霉AS3.153转化,安非他酮主要形成单羟基化安非他酮和单羟基化安非他酮的硫酸结合物等3种转化产物,对M2进行分离纯化,根据质谱和核磁共振数据,确证代谢产物M2为吗啉环羟基化安非他酮。M2的最优转化条件为采用短刺小克银汉霉AS3.153培养基、初始pH8.0、底物浓度0.1g·L-1和转化时间168h时转化产率最高。结论短刺小克银汉霉AS3.153对安非他酮的转化与人体代谢结果相同,说明此菌株适宜作为研究人体药物代谢的体外模型,采用此模型及相应的优化转化条件可以制备M2纯品。     

植物内生真菌HCCB00189代谢产物研究

目的：研究植物内生真菌HCCB00189的代谢产物。方法：采用溶剂萃取、硅胶柱层析及制备HPLC等方法，对活性菌株的发酵物进行分离，并根据理化性质和光谱分析对化学结构进行鉴定。结果：从其代谢产物中分离到5个化合物，鉴定为4-甲基苯甲酸羧甲基酯（1）；4-甲氧甲酰基苯甲酸（2）；4-羟甲基苯甲酸（3）；4’，7-二羟基异黄酮（4）和4’，5，7-三羟基异黄酮（5）。抗肿瘤活性测试表明化合物4，5对肿瘤细胞有较明显的抑制作用。结论：从植物内生真菌HCCB00189代谢产物中分离到抗肿瘤活性成分。     

机械通气患儿血浆中咪达唑仑及其代谢产物的测定

目的 建立测定人血浆中咪达唑仑及其代谢产物浓度的固相萃取和HPLC方法.方法 采用HPLC法分别测定29例ICU机械通气患儿给药24 h后血浆中咪达唑仑及其代谢产物浓度.色谱条件为：ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6×250 mm,5 μm）;流动相为7.56 mmol/L硫酸铵溶液-乙腈,梯度洗脱,柱温25 ℃,流速1.0 ml/mmin,紫外检测波长254 nm.结果 4-羟基咪达唑仑、1＇-羟基咪达唑仑和咪达唑仑的保留时间分别为8.14、9.09和11.18 min.咪达唑仑及其羟基代谢产物的相对回收率98.88%～100.01%,RSD＜4%.29例患者血浆中咪达唑仑、1＇-羟基咪达唑仑和4-羟基咪达唑仑的平均浓度为0.68,0.28和0.08mg/L.结论 该方法适用于咪达唑仑及其代谢产物血药浓度的常规监测.     

基于超高效液相色谱-Q Exactive质谱的合成大麻素5F-ADB、5F-MDMB-PICA和ADB-FUBINACA体外代谢研究

目的:探究合成大麻素3,3-二甲基-2-[1-(5-氟戊基)-1H-吲唑-3-甲酰氨基]丁酸甲酯(5F-ADB)、3-二甲基-2-[1-(5-氟戊基)-1H-吲哚-3-甲酰氨基]丁酸甲酯(5F-MDMB-PICA)、N-[1-(氨基羰基)-2,2-二甲基丙基]-1-[(4-氟苯基)甲基]-1H-吲唑-3-甲酰胺(ADB-FUBINACA)的体外代谢产物及其代谢途径。方法:建立大鼠肝微粒体孵育模型，在37℃金属浴孵育60 min后离心，处理后样本采用超高效液相色谱-Q Exactive质谱ESI⁺模式检测，使用0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈混合溶液作为流动相，Waters UPLC HSS T3作为色谱柱，运用Full MS/dd-MS²扫描模式对合成大麻素母药及其代谢产物进行检测。结果:经鼠肝微粒体体外孵育实验，检测到5F-ADB脱氟加羟基化、脱氟氧化为戊酸、羟基化、酯水解、酯水解加脱氟羟基化、酯水解加脱氟氧化成羧酸等代谢途径产生的6种代谢产物，其分子式分别为C₂₀H₂₉N₃     

右旋和左旋黄皮酰胺在大鼠体内代谢转化的研究

目的　研究黄皮酰胺在大鼠体内的代谢转化途径。方法　收集ip给药后大鼠的尿液、粪便及血液进行分析,寻找已知的代谢产物并通过HPLC-DAD和HPLC-MS分析寻找未知的代谢产物,确定大鼠体内的主要代谢途径。并通过比较(+),(-)-黄皮酰胺代谢的差异,初步研究其代谢转化的立体选择性。结果　HPLC分析发现,大鼠肝微粒体中所分离得到的6个主要代谢产物均在体内存在,(+),(-)-黄皮酰胺的代谢有明显的差异,根据MS碎片信息确定了一个新的代谢产物的结构,即N-去甲黄皮酰胺。结论　手性黄皮酰胺主要在肝脏中发生羟基化代谢反应,并有明显的立体选择性。     

HPLC-Q-TOF-MS/MS分析丹参-红花药对在离体肠道菌群中的代谢产物

基于高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱鉴别丹参-红花药对在离体大鼠肠道菌群中的代谢产物。通过在离体大鼠的肠菌孵育液以及灭活的肠菌孵育液中,分别加入丹参-红花药对提取液,厌氧条件下共孵育。动物实验和方案经陕西中医药大学实验动物伦理委员会批准(批准文号:TCM-2020-030-E05)。结果发现在离体大鼠肠道孵育液中共检测鉴定出14种化合物,其中包括了5种原形成分以及9种代谢产物。而在灭活的肠菌液中除了原形成分外并未检测出代谢产物。结果表明丹参-红花药对中的主要成分丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸、羟基红花黄色素A均可被肠道菌群代谢,且这些有效成分在大鼠离体肠道菌群中主要发生羟基化反应、脱羧反应、去氧、脱羧以及脱水反应等Ⅰ相代谢、硫酸酯化反应和甲基化反应Ⅱ相代谢。从而证明丹参-红花药对能够在大鼠肠道菌群作用下转化为多种代谢产物,进一步明确肠道菌群在中药有效成分代谢转化过程中的作用,为完善该药对药效物质奠定了基础。