银杏叶提取物、卡托普利、缬沙坦单用及合用对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖肥大的影响

目的研究卡托普利、缬沙坦及中药银杏叶提取物（GBE）对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖肥大的影响,探讨三者单用及合用时的异同。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞（MC）,分为正常（NS）组、甘露醇（MA）组、高糖（HG）组、溶媒（DMSO）组、GBE组、卡托普利（Cap）组、缬沙坦（Val）组以及GBE和卡托普利联合用药（GC）组、GBE和缬沙坦联合用药（GV）组。流式细胞仪测定细胞周期,MTT法检测细胞增殖变化情况。结果对高糖引起的细胞肥大,GBE单用、GBE联合Cap、GBE联合Val均可有效逆转,而Cap和Val单用时无此作用;对高糖诱导的细胞增殖,Cap、Val单用以及GBE联合Cap、GBE联合Val均可使其逆转,但GBE对其无明显影响。结论银杏叶提取物和卡托普利、缬沙坦联合应用时对大鼠MC的细胞保护作用更优。     

银杏叶提取物、卡托普利、缬沙坦单独用药及联合用药对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞的保护作用

目的研究卡托普利、缬沙坦及中药银杏叶提取物（Ginkgo bilobaextract,GBE）对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MC）的影响,探讨三者单独应用及中西药联合应用时的异同,从而为GBE与卡托普利或缬沙坦联合应用提供理论基础。方法体外培养HBZY-1大鼠MC,分为9组（每组n=3）：①正常对照（NC）组;②甘露醇（MA）组;③高糖（HG）组;④溶媒（DMSO）组;⑤GBE组;⑥卡托普利（Cap）组;⑦缬沙坦（Val）组;⑧GBE和卡托普利联合用药（GC）组;⑨GBE和缬沙坦联合用药（GV）组。可见光分光光度法测定胞质超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）抗氧化指标的水平,RT-PCR法测定细胞转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的相对含量。结果GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可提高高糖环境中MC的抗氧化能力,且联合用药组的作用更强;GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可抑制高糖诱导的TGF-β1mRNA水平上调,联合用药组作用较强。结论中西药联合应用时对大鼠MC的细胞保护作用优于单独用药。     

银杏叶提取物、卡托普利、缬沙坦单独用药及联合用药对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞的保护作用

目的研究卡托普利、缬沙坦及中药银杏叶提取物（Ginkgo bilobaextract,GBE）对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MC）的影响,探讨三者单独应用及中西药联合应用时的异同,从而为GBE与卡托普利或缬沙坦联合应用提供理论基础。方法体外培养HBZY-1大鼠MC,分为9组（每组n=3）：①正常对照（NC）组;②甘露醇（MA）组;③高糖（HG）组;④溶媒（DMSO）组;⑤GBE组;⑥卡托普利（Cap）组;⑦缬沙坦（Val）组;⑧GBE和卡托普利联合用药（GC）组;⑨GBE和缬沙坦联合用药（GV）组。可见光分光光度法测定胞质超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）抗氧化指标的水平,RT-PCR法测定细胞转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA的相对含量。结果GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可提高高糖环境中MC的抗氧化能力,且联合用药组的作用更强;GBE、卡托普利、缬沙坦以及联合用药均可抑制高糖诱导的TGF-β1mRNA水平上调,联合用药组作用较强。结论中西药联合应用时对大鼠MC的细胞保护作用优于单独用药。     

银杏叶提取物、卡托普利和缬沙坦抑制糖尿病肾病大鼠肾纤维化的机制及其比较

目的 研究银杏叶提取物(GBE)、卡托普利和缬沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化的防治作用及其机制.并比较它们对DN作用的异同,从而为联合用药提供理论基础.方法 SD大鼠一次性ip链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg诱导DN肾病模型.造模成功的DN大鼠随机分为4组:DN组、GBE治疗组(100 mg/kg)、卡托普利治疗组(10 mg/kg)和缬沙坦治疗组(15 mg/kg).对照组及DN组ig给予1%羧甲基纤维素治疗.治疗12周后收集标本.电镜观察肾小球基底膜(GBM)厚度;放射免疫法测定肾皮质层黏蛋白和Ⅳ型胶原的量;免疫组化法测定基质金属蛋白酶2(MMP2)、结缔组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)和结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达;RT-PCR法测定肾皮质转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达.结果 GBE、卡托普利和缬沙坦均能显著改善DN大鼠GBM增厚现象,降低肾皮质中层黏蛋白和Ⅳ型胶原的量.3种药物一方面通过抑制直接促进细胞外基质(ECM)合成的TGF-β1和CTGF的表达而抑制ECM的积聚.另一方面通过其分解平衡系统MMP2/TIMP2而使ECM表达减少.并且发现GBE改善GBM的作用较卡托普利和缬沙坦弱,而抑制肾皮质层黏蛋白和Ⅳ型胶原的作用较强.结论 GBE、卡托普利和缬沙坦均可抑制ECM的大量表达,并且GBE抑制GBM增厚的作用较其他两药弱,而抑制肾皮质ECM的表达较其他两药强.这对于临床联合用药具有非常重要的意义.     

缬沙坦和低分子量肝素对高糖刺激大鼠系膜细胞增殖的影响

目的：探讨缬沙坦和低分子量肝素对高糖刺激大鼠系膜细胞增殖的影响。方法：采用MTT比色法,观察缬沙坦和低分子量肝素不同作用时间和不同作用浓度以及二者合用时对高糖刺激系膜细胞增殖的影响。结果：缬沙坦和低分子量肝素均可不同程度地抑制高糖刺激系膜细胞增殖,二者合用时作用增强。结论：联合应用缬沙坦和低分子量肝素对高糖刺激系膜细胞增殖有更强的抑制作用。     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和促基质蛋白分泌的影响

目的：观察他汀类药物辛伐他汀和血管紧张素转换酶抑制剂西拉普利对体外培养系膜细胞增殖和基质蛋白分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，给予高糖，辛伐他汀，西拉普利干预，观察不同刺激时间，不同刺激浓度及单用和联合用药对系膜细胞增殖以及细胞上清液中转化生长因子－β1（TGF－β1）、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原浓度的影响。结果：高糖环境能够促进体外培养系膜细胞的增殖，增加细胞上清液中TGF－β1，纤维连接蛋白，层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量，单用或联用辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖的上述作用，而且联合用药作用更强，结论：辛伐他汀和西拉普利均可抑制高糖刺激对系膜细胞促增殖和促基质蛋白分泌的作用，二者联用的作用更强。     

缬沙坦与苯那普利拉对SHR肾小球系膜细胞的保护作用

目的：观察ARB－valsartan及ACEI－benazeprilat能否抑制由AngⅡ、PDGF引起的SHR肾小球系膜细胞的增殖与肥大。且比较单用时作用孰强孰弱，联合应用后有无协同效应。方法；采用经典SHR系膜细胞培养技术，细胞中加入各种因子和（或）药物，以^3H-leucine或^3H-thymidine掺入后的cpm值反映蛋白或DNA合成。采用t test检验差异的显著性。结果：1、系膜细胞在AngⅡ、PDGF刺激后引起的增殖与肥大，均可被valsartan及benazeprilat抑制。2、比较发现单一用药在同一浓度下，valsartan较benazeprilat能更有效地抑制细胞的增殖与肥大。3、联合用药在同一浓度valsartan benazeprilat均比单用valsartan或benazeprilat效果明显。结论：1、valsartan与benazeprilat均能抑制SHR系膜细胞的增殖与肥大。2、valsartan在抗系膜细胞增殖与肥大作用稍强于benazeprilat。3、在一定浓度条件下联合用药对抗系膜细胞的增殖与肥大作用，较单一用药效果明显。     

银杏叶提取物含药血清在大鼠体内药动学与药效学相关性研究

目的以银杏叶提取物对肾小球系膜细胞氧化损伤的保护作用为药效指标,研究银杏叶提取物中5种黄酮类成分（芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚及异鼠李素）的体内药动学及药效学过程的相关性。方法大鼠静脉给药后,测定不同取血时点血清样本中5种黄酮类成分的含量,运用血清药理学方法,观察不同时间点血清样本及银杏叶提取物对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞氧化损伤的保护作用,对浓度-时间、效应-时间曲线进行相关分析,建立药动-药效结合模型。结果银杏叶提取物含药血清对大鼠肾小球系膜细胞氧化损伤有明显保护作用,且血清中芦丁、槲皮苷、山奈酚及异鼠李素的药理效应的达峰时间（peak time,Tpeak）与药动学曲线下面积（area或under the curve,AUC）的Tpeak一致。结论银杏叶提取物体内、外均具有抗氧化作用,且效应的时效关系与血清中芦丁、槲皮苷、山奈酚及异鼠李素的时量关系呈正相关。     

普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和分泌MCP-1的影响

目的 研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖和表达MCP-1的影响.方法 以大鼠MC为研究对象,高糖组浓度为30 mmol/L,分别以不同浓度rHuEPO(1,10,50,100 IU/ml)分别干预24,48,72 h,CCK-8比色法检测细胞增殖情况.用ELISA法和reahime PCR法测定干预24,48,72h时细胞MCP-1表达水平.结果 rHuEPO能促进高糖诱导的MCs增生,呈剂量和时间依赖性.正常培养的系膜细胞MCP-1蛋白和mRNA有低水平的表达,高糖组刺激24,48,72h均有高水平的表达,rHuEPO在1,10,50,100 IU/ml时,作用于高糖培养的MCs,细胞MCP-1的表达均显著降低.结论 rHuEPO能刺激高糖培养的系膜细胞增殖,抑制高糖培养的系膜细胞表达MCP-1.     

银杏叶提取物对人牙周膜细胞增殖影响的研究

目的研究银杏叶提取物（GBE）对人牙周膜细胞（PDLCs）增殖的影响。方法采用改良组织块培养法培养人PDLCs,取第4代人PDLCs随机分为5组;①空白对照组（无GBE）;②含1mg/mlGBE;③含0.1mg/mlGBE;④含0.01mg/mlGBE;⑤含0.01mg/mlGBE。以MTT法测定GBE对PDLCs增殖的影响。结果与对照组比较1mg/mlGBE组抑制细胞增殖,0.1mg/mlGBE组在12、24、48h时均能促进细胞增殖,0.01mg/mlGBE组在48、72h时能促进细胞增殖,差异具有统计学意义（〈0.05）,0.001mg/mlGBE组与对照组比较差异无统计学意义（〉0.05）。结论不同浓度GBE对人PDLCs增殖影响不同。     

实验性应力骨折模型兔的生化指标变化

目的　探讨兔应力性骨折发生过程中 ,某些生化指标的变化与应力性骨折发生机制的关系 .方法　选纯种新西兰雄性大白兔 14只 ,体质量 2 .2～ 2 .6 kg,随机分为实验组 (8只 ) ,对照组 (6只 ) .实验组用电刺激器使兔产生跑跳运动 ,每天 30 0次 ,1wk训练 6 d,共 35 d.之后观察各指标血乳酸、磷脂酶 A2、磷酯酰胆碱、磷酯酰丝氨酸等 .结果　以下指标实验组显著高于对照组 (P<0 .0 5 ) :1血清脂质过氧化产物(MDA)实验组与对照组分别为 (0 .9± 0 .2 )和 (0 .6± 0 .1)mmol· L- 1 ;2腓肠肌匀浆磷脂酶 A2 活性 (3.9± 0 .6 )和(2 .6± 1.0 )μkat;3腓肠肌细胞膜磷脂酰丝氨酸 (PS) (139±5 8)和 (142± 1) mg· g- 1 ;4血清 Zn含量 (17.6± 4.9)和(11.9± 2 .4)μmol· L- 1 ;5肌肉组织 Ca2 + 和 Zn含量实验组分别为 (30 .9± 4.7) ,(2 4.9± 3.8)μmol· L- 1 ,对照组分别为(2 5 .2± 2 .2 )和 (2 0 .3± 1.8) μmol· L- 1 ;6腓肠肌线粒体膜Na+ ,K+ - ATP酶活性和线粒体内 Ca2 + 实验组分别为 (1.11±0 .47) μkat· g- 1 ,(3.6± 0 .5 ) μmol· g- 1 ,对照组分别为(0 .6 1± 0 .2 2 ) μkat· g- 1和 (2 .5± 0 .7) μmol· g- 1 .结论　本结果支持应力性骨折的发生是由于肌肉疲劳和 (或 )受损时 ,缓冲运动     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高糖培养的系膜细胞糖原合成酶激酶-3β和细胞外基质合成的影响

目的观察高糖对大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）及细胞外基质成分（ECM）的影响及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）的干预效果。方法以大鼠GMCs为实验对象,培养48h后,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）测定GMCs增殖情况,Western blot法测定GSK-3β蛋白表达,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测高糖条件下细胞培养液中细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果高糖明显诱导GMCs增殖并抑制GSK-3β磷酸化,EGCG和GSK-3β特异性的抑制剂TDZD-8均能抑制高糖诱导的细胞增生,并增加GSK-3β磷酸化水平。高糖环境下系膜细胞分泌的FN、ColⅣ及LN明显增加（P〈0.05）,EGCG能抑制上述作用。结论EGCG通过GSK-3β信号通路抑制高糖诱导的GMCs增殖,并能抑制GMCs细胞外基质的合成,从而延缓糖尿病肾小球肥大和肾小球硬化。     

二甲亚砜对细胞色素P450酶3A4和2C9的影响

目的 研究0.01%、0.05%、0.1%二甲亚砜（DMSO）对细胞色素P450（CYP450）酶系中3A4、2C9两个亚型基因及蛋白表达水平的影响。方法 Chang肝脏细胞经处理后,分为空白对照组（仅含培养液）、DMSO组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO处理）、睾酮组（分别采用1、10、100μmol/L睾酮处理）、利福平组（分别采用1、10、100μmol/L利福平处理）、DMSO＋睾酮组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L睾酮处理）、DMSO＋利福平组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平处理）。利用逆转录定量PCR的方法,测定CYP3A4、CYP2C9基因水平的表达。利用蛋白免疫印迹法,测定CYP3A4、CYP2C9蛋白水平的表达。结果 0.1%DMSO组CYP3A4 m RNA高于空白对照组（P〈0.01）,且0.1%DMSO组CYP3A4蛋白的表达也高于空白对照组。0.01%、0.05%DMSO组CYP3A4 m RNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%DMSO组CYP3A4蛋白的表达高于空白对照组。0.01%、0.05%、0.1%DMSO组CYP2C9 m RNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,0.01%、0.05%、0.1%DMSO组CYP2C9蛋白表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。0.01%、0.05%DMSO＋10μmol/L睾酮组CYP3A4 m RNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%DMSO＋10μmol/L睾酮组CYP3A4蛋白的表达高于睾酮组。0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平组CYP2C9 m RNA的表达与利福平组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平组CYP2C9蛋白的表达高于利福平组。结论0.01%、0.05%、0.1%三个浓度的DMSO在体外肝细胞实验中对CYP3A4的表达有一定的影响,而对CYP2C9的表达影响不明显,当DMSO作为药物溶剂的时候,可能会影响药物单用时的实验结果。     

非诺贝特对高糖培养肾小球系膜细胞胞外基质产生及降解影响

目的：探讨非诺贝特对糖尿病肾病的保护机制。方法：大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常糖浓度（5.5 mmol.L-1,对照组）、高糖浓度（25 mmol.L-1,高糖组）及25 mmol.L-1葡萄糖＋非诺贝特100μmol.L-1（非诺贝特组）。CCK-8测定系膜细胞增殖;ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）、纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）;明胶酶谱法检测培养上清基质金属蛋白酶-2,9（MMP-2,9）的活性。结果：高糖组系膜细胞较对照组出现增殖增加,合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多,MMP-2及MMP-9活性下降,TIMP-1含量增加,TGF-β1分泌增加。与高糖组比较非诺贝特干预后能完全或部分逆转上述变化。结论：非诺贝特能抑制高糖培养的系膜细胞增殖,减少胞外基质合成,增加胞外基质的降解。     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.