矽肺肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达的体外研究

目的探讨矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)是否通过影响肺成纤维细胞(FB)胶原的表达,参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺患者AM,经SiO_2体外刺激18 h收集培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48、72 h,用~3H-脯氨酸掺入检测48 h胶原的合成与分泌,免疫细胞化学方法、Western blot方法检测各时间点Ⅰ型胶原表达。结果经SiO_2刺激矽肺患者AM培养上清,可使FB中Ⅰ型胶原的表达增高,实验组48 h细胞内、外3H-脯氨酸掺入值分别为1259.500±73.879、790.500±70.315,免疫细胞化学染色的积分光密度值为0.341±0.011,Western blot条带扫描灰度值为14.218±0.342,均明显高于空白对照组及AM对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论SiO_2可通过AM介导影响FB中Ⅰ型胶原表达,参与肺纤维化的形成。     

肺成纤维细胞胶原表达的体外研究

目的 探讨SiO2刺激矽肺患者的肺泡巨噬细胞(AM)是否通过影响人胚肺成纤维细胞(FB)Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成,参与矽肺纤维化的发生发展.方法 收集矽肺患者AM,体外经SiO2刺激18 h收集培养上清,与人胚肺FB共同孵育6、12、18、24、36、48、72 h,western blot方法分别检测FB培养上清中Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达.结果 经SiO2刺激矽肺患者AM条件上清,可促进FB培养液中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,各时间点Ⅰ和Ⅲ型胶原的比值无变化.结论 SiO2通过AM影响了FB中Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达,可参与肺纤维化的形成.     

转化生长因子β_1抗体对小鼠肺成纤维细胞增殖及Ⅲ型胶原表达影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)抗体对小鼠肺成纤维细胞增殖及Ⅲ型胶原的作用。方法用正交设计方法,选取不同水平二氧化硅(SiO2)、TGF-β1抗体及其作用的先后顺序和两者作用的时间间隔4个因素,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测对小鼠肺成纤维细胞增殖的影响;用免疫组化法检测SiO2、TGF-β1抗体对小鼠肺成纤维细胞Ⅲ型胶原表达的影响。结果不同水平SiO2、TGF-β1抗体及其作用的先后顺序对细胞增殖有显著影响(P<0.05),两因素作用的时间间隔对结果影响差异未见有统计学意义;TGF-β1抗体处理组Ⅲ型胶原表达显著低于SiO2处理组(P<0.05)。结论 TGF-β1抗体能降低小鼠肺成纤维细胞增殖及Ⅲ型胶原表达。     

久效磷对大鼠皮肤成纤维细胞胶原Ⅰ和ⅢmRNA表达的影响

目的 研究久效磷对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原Ⅰ和Ⅲ合成的影响.方法取4只出生3d清洁级SD大鼠背部皮肤,以组织块法培养大鼠皮肤成纤维细胞,正常传代.取第4代成纤维细胞,按1.0×10(6)个/瓶接种于25 c㎡培养瓶中,当细胞至亚融合状态,分别加入0(对照)、0.01、0.1、1 μg/L的久效磷溶液,培养...     

RGD短肽对二氧化硅致肺成纤维细胞激活的抑制效应

[目的]探讨RGD短肽对二氧化硅(SiO2)刺激引起的肺成纤维细胞激活效应的抑制作用。[方法]用无血清的SiO2培养基刺激巨噬细胞(AM)24h,离心收集培养液上清。加入RGD使其终浓度为50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml,分别刺激LF;阳性对照未加RGD;阴性对照用不含SiO2的AM上清培养肺成纤维细胞(LF)。RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)及Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COLⅢ)的mRNA水平;ELISA法测定COLⅠ和PCⅢ(procollagenⅢ,PCⅢ)。[结果]RGD浓度为100μg/ml时α-SMA、COLⅠ、COLⅢ的转录水平为(2.79±0.23、3.76±0.31、2.01±0.41),低于阳性对照组(4.47±0.84,5.03±0.15,3.07±0.41),差异有统计学意义(P﹤0.01);浓度为150μg/ml时,培养上清中COLⅠ、COLⅢ和总蛋白的表达为(1.82±0.45)μg/L、(1.91±0.41)μg/L、(0.09±0.06)μg/ml低于阳性对照组(3.00±0.69)μg/L,(3.47±0.96)μg/L,(0.28±0.06)μg/ml,差异有统计学意义(P﹤0.05)。[结论]RGD抑制COLⅠ、COLⅢ和总蛋白的表达,说明其对矽尘诱导大鼠肺成纤维细胞的激活效应有抑制作用。     

干扰素对二氧化硅致肺成纤维细胞激活的抑制效应

目的探讨干扰素对二氧化硅(SiO2)刺激引起的肺成纤维细胞激活效应的抑制作用。方法用无血清的SiO2培养基刺激巨噬细胞(AM)24h,离心收集培养液上清。加入干扰素使其终浓度为10U/ml、100U/ml、1000U/ml,分别刺激LF;阳性对照未加干扰素;阴性对照用不含SiO2的AM上清培养肺成纤维细胞(LF)。RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)及Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COLⅢ)的mR-NA水平;ELISA法测定COLⅠ和COLⅢ。结果干扰素浓度为1000U/ml时,α-SMA、COLⅠ和COLⅢ的转录水平为1.17±0.42、1.56±0.13和1.67±0.45,低于阳性对照组的2.97±0.68、4.10±1.42和3.30±0.46,差异有统计学意义(P﹤0.01);浓度为1000U/ml时,COLⅠ、COLⅢ和总蛋白分泌为1.55±0.23、2.27±0.24和2.27±0.24,低于阳性对照组3.79±0.22、3.58±0.55和4.45±0.11,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论干扰素抑制COLⅠ、COLⅢ的表达,说明其对矽尘诱导大鼠肺成纤维细胞的激活效应有抑制作用。     

补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原及转化生长因子p1的影响

目的 观察补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)表达和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及转化生长因子(TGF)-β1的影响.方法 将人工合成的17肽片断C3f加入培养基中刺激MRC-5细胞,通过细胞免疫组化和ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1细胞内、外表达情况.结果 随着C3f浓度的增加,MRC-5细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达量逐渐降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).MRC-5胞质中TGF-β1的表达量随C3f浓度增加降低趋势,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 C3f能够抑制MRC-5细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的形成,减轻肺组织的纤维化程度.     

二氧化硅刺激矽肺肺泡巨噬细胞上清介导的人胚肺成纤维细胞Ⅲ型胶原和Ⅲ型前胶原的表达

目的 探讨经SiO2刺激的肺泡巨噬细胞(AM)通过人胚肺成纤维细胞(HELF)对Ⅲ型胶原(CⅢ)和Ⅲ型前胶原(pCⅢ)表达的影响及抗TGF-β1抗体的干预作用.方法 收集矽肺患者AM,将其分为加入SiO2粉尘悬液的处理组和仅加入无血清培养液的对照组.培养18 h后获取培养上清.将原代培养的HELF分为:(1)处理组:加入经SiO2刺激的AM上清;(2)对照组:加入未经SiO2刺激的AM上清;(3)空白对照组:仅加入含体积分数为3%胎牛血清的DMEM;(4)处理组+抗转化生长因子β1(TGF-β1)抗体干预组:在处理组的基础上加上抗TGF-β1抗体(10 μg/ml);(5)对照组+抗TGF-β1抗体干预组:在对照组的基础上加上抗TGF-β1抗体(10 μg/ml).前3组分别培养6、12、18、24、36、48 h,后2组分别培养18、24、36 h,用免疫细胞化学法检测HELF中pCⅢ的表达,用免疫印迹(Western blot)法检测HELF条件培养上清中CⅢ的表达.结果 与对照组(0.1212±0.0079、0.1414±0.0058、0.1620±0.0081、0.1965±0.0103、0.1715±0.0116)相比,处理组12、18、24、36和48 h pCⅢ表达(0.1423±0.0107,0.1624±0.0011,0.1925±0.0056,0.2421±0.0097,0.2102±0.0103)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与对照组(0.2296±0.0121、0.2778±0.0116、0.3367±0.0269、0.3722±0.0214)相比,处理组12、18、24、36、48 hCⅢ含量(0.2559±0.0061、0.3249±0.0110、0.4171±0.0193、0.5441±0.0452、0.4751±0.0252)明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与同期相对应的非干预组相比,18、24、36 h抗TGF-β1抗体干预组CⅢ和pCⅢ均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 SiO2经AM的介导,诱导HELF高表达CⅢ和pCⅢ,部分效应是通过TGF-β1起作用.

Abstract：

Objective To study the effects of supernatant of alveolar macrophages (AM) exposed to SiO2 on the expression of type Ⅲ collagen and type Ⅲ procollagen in human lung fibroblasts (HELF) and the intervention effects of anti-TGF-β1 antibody Methods AMs collected from a silicotic by bronchoalveolar lavage were divided into 2 parts, one part was exposed to SiO2 and other part served as control. The supernatant was obtained from AMs cultured for 18 h. HELF were divided into (1) exposure group, which was added with supernatant from AMs exposed to SiO2; (2) control group, which was added with the supernatant from AMs not exposed to SiO2; (3) blank control group, which was added with DMEM; (4) exposure group plus anti-TGF-β1antibody (10μg/ml); (5) control group plus anti-TGF-β1 antibody (10 μg/ml). (1)-(3) groups were cultured for 6, 12, 18, 24, 36, 48h, respectively. (4)-(5) groups were cultured for 18, 24, 36, respectively.Immunocytochemical test and Western blot assay were used to detect pC Ⅲ expression levels in HELF and C Ⅲ expression levels in the supernatant of HELF culture, respectively. Results The pC Ⅲ expression levels of exposure group were 0.1423 ±0.0107,0.1624±0.0011,0.1925 ±0.0050,0.2421 ±0.0097 and 0.2103 ±0.0103,respectively, which were significantly higher than those (0.1212±0.0079、0.1414±0.0058、0.1620±0.0081、0.1965±0.0103 、0.1715±0.0116) of control group (P＜0.05 or P＜0.01). The C Ⅲ levels of exposure group were (0.2559±0.0061、0.3249±0.0110、0.4171±0.0193、0.5441 ±0.0452、0.4751±0.0252), respectively, which were significantly higher than control group (0.2296±0.0121、0.2778±0.0116、0.3367±0.0269、0.3722±0.0214). The pC Ⅲ and C Ⅲ expression levels of exposure plus anti-TGF-β1 antibody group were significantly lower than those of control plus anti-TGF-β1 antibody group (P＜0.05 or P＜0.01).Conclusion AMs exposed to SiO2 can induce the elevated pC Ⅲ and C Ⅲ expression levels in HELF by TGF-β 1 to some extent.     

p38/ERK激酶调控TGF-β1诱导的HLF-02细胞Ⅰ型胶原表达及MMP-2活力

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在调控人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原表达、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活力中的作用.方法 以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象,给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间;阻断实验以P38激酶特异性抑制剂(SB203580)、ERK激酶特异性抑制剂(PD98059)分别阻断p38通路和细胞外调控激酶(ERK)通路;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内Ⅰ型胶原mRNA的表达;运用Western印迹检测细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白表达;酶谱分析细胞上清液中MMP-2、MMP-9的活力.结果 (1)TGF-β1刺激HLF-02细胞,24、48、72 h组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平分别为1.33±0.07、2.46±0.09、2.39±0.08;Ⅰ型胶原蛋白表达水平分别为114.89±8.95、208.16±6.75、211.46±8.05;MMP-2的活力分别为190.33±5.86、214.33±8.39、212.67±11.59.(2)SB203580对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平及MMP-2活力的抑制率分别为51%、24%、20%.(3)PD98059对TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原mRNA水平、蛋白水平以及MMP-2活力的抑制率分别为42%、13%、16%.结论 TGF-β1可促进HLF-02细胞Ⅰ型胶原的转录和蛋白表达,上调MMP-2活力;p38、ERK激酶通路在此过程中具有重要的调控作用.     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

二氧化硅对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨二氧化硅(SiO2)是否通过影响肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)中转化生长因子β(TGF-β1)的表达而参与矽肺纤维化的发生发展。方法以支气管肺泡灌洗法收集大鼠AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养2,6,12,18,24,36 h,然后收集培养18 h的AM上清液。用胰酶消化法分离培养大鼠FB,与AM上清液共同孵育6,12,18,24,36和48 h,用免疫细胞化学的方法检测AM及FB中TGF-β1的表达。结果经SiO2刺激的大鼠AM中TGF-β1的表达与空白对照组比较增加,在6,12,18 h 3个时间点差异有统计学意义(P<0.05,平均吸光度A值分别为0.118±0.008 vs 0.107±0.008,6 h;0.135±0.010 vs 0.119±0.015,12 h;0.143±0.012 vs0.125±0.015,18 h);AM上清液也可使FB中TGF-β1的表达上调,经体外再次染尘的AM上清液作用更为明显,与空白对照组比较,在各个时间点差异均有统计学意义(P<0.01)。结论在本试验条件下,经体外细胞培养,显示SiO2可通过上调AM和FB中TGF-β1的表达,增加胶原合成而参与矽肺纤维化的发展。     

染料木黄酮对成骨细胞Ⅰ型胶原表达及转化生长因子β1的影响

目的染料木黄酮（genistein，GEN）与新生SD大鼠颅骨成骨细胞（osteoblast，OB）共同孵育，研究GEN对OBI型胶原表达及转化生长因子β1（transforming growth factor—β1，TGF—β1）的影响。方法采用第二继代OB进行实验，实验分为对照组，GEN各浓度组（10^-8，10^-7，10^-6，10^-5mol／L），雌激素组（17-β estradiol，E2，10^-10mol／L）。测定指标包括四甲基偶氮唑盐（methythiazolyl tetrazolium bromide，MTT）、胞浆内蛋白、碱性磷酸酶活性（activity of alkaline phosphatase，ALP）、以及Ⅰ型胶原与TGFβ1表达。结果体外培养48h及72h，GEN各剂量组和E2组的MTT（OD）值均有显著性增高。与培养48h相比，对照组、10^-8、10^-7、10^-6mol／LGEN剂量组72h后细胞增殖有所增加，差异有显著性。10^-6、10^-5mol／LGEN剂量组和E2组可增高OB内蛋白含量，差别有显著性。GEN各组和E2组均可增高OB内ALP活性，差别有显著性。上述指标与GEN剂量呈显著相关。10^-7、10^-6、10^-5mol／LGEN组和E，组OB内Ⅰ型胶原的表达及TGFβ—1的合成高于对照组。Ⅰ型胶原表达和GEN剂量呈显著相关。结论GEN可刺激OB增殖、分化，增加OB内Ⅰ型胶原的表达及TGFβ—1的分泌，在10^-8M～10^-5M范围内与剂量相关；高浓度GEN与E2相比作用相似。     

17β-雌二醇对卵巢颗粒细胞增殖转移的影响及作用机制

目的探究17β-雌二醇(17β-E_2)对卵巢颗粒细胞增殖、转移的影响及其作用机制。方法体外培养卵巢颗粒细胞系—KGN细胞,采用MTT法检测17β-E_2对KGN细胞增殖的影响;划痕实验检测17β-E_2单独或和G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)特异性拮抗剂—G15共同处理对KGN细胞转移的影响;分别于17β-E_2单独或和G15共同处理KGN细胞0 min、10 min、30 min及60 min后收集细胞,采用Western Blot法检测细胞ERK1/2的磷酸化水平。结果 MTT结果显示,17β-E_2对KGN细胞增殖无显著影响;划痕实验结果表明,17β-E_2单独处理能够显著抑制KGN细胞的转移,而联合G15处理对细胞转移则无显著影响;Western Blot结果显示,17β-E_2单独处理细胞10 min、30 min及60 min后,细胞ERK1/2磷酸化水平均显著降低;而17β-E_2和G15共同处理细胞不同时间后,细胞ERK1/2磷酸化水平相比于处理前无显著性变化。结论 17β-E_2能够显著抑制KGN细胞的转移,其机制与GPER1介导的雌激素非基因组效应有关。     

17-β雌二醇对受力后盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞的生物学影响

目的研究雌激素对体外培养的盆底功能障碍性疾病（pelvicfloordysfunction,PFD）患者阴道壁成纤维细胞受力后胶原蛋白I（ColI）、类赖氨酰氧化酶1（LOXLl）和纤维粘连蛋白（FN）表达的影响,探讨其在PFD发病中的作用。方法选取2009年10月至2010年9月河北医科大学第二医院接受手术治疗的女性PFD患者的阴道壁组织12例。采用组织块法和酶消化法进行阴道壁成纤维细胞的原代培养,传代后进行细胞受力,加药,提取细胞mRNA,测定ColI、LOXLl及FN的表达水平。结果受力前、后ColI（1．1872±0．0733VS1．5035±0．0733,t=-4．815,P〈0．01）、LOXLl（0．7724±0．1873VS1．0855-I-0．0805,t=-5．111,P〈0．01）表达上升,其2,!异有统计学意义。FN（0．4290±0．1168VS0．4215±0．0830）的表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）。高浓度的17-β雌二醇作用下,ColI（3．0809±0．1862）、LOXL1（1．5863±0．3241）、FN（1．1418±1．0030）的表达均上升,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论17-B雌二醇使受力后的PFD患者阴道壁成纤维细胞合成细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）成分增加。力和雌激素在PFD的发病机制中可能起了比较重要的作用。     

活性氧在转化生长因子-β1促肺成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的 探讨转化生长因子(TGF-β1)是否可通过活性氧(ROS)激活c-Jun末端激酶(JNK)通路,刺激肺成纤维细胞增殖和Ⅰ/Ⅲ型胶原合成增加,促进矽肺纤维化形成.方法 在检测TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,肺成纤维细胞分为对照组(0.4％血清)和TGF-β1组(5μg/L).在检测抗氧化剂NAC(N-乙酰-L-半胱氨酸)是否抑制了TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,肺成纤维细胞分为对照组(0.4％血清)、H2O2组(0.1mmol/L,阳性对照)、H2O2+NAC组(10 mmol/L)、TGF-β1组(5μg/L)、TGF-β1+NAC组.利用MTT法测定细胞增殖,蛋白免疫印迹法(western blot)测定Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNK表达,免疫荧光法检测8-羟化脱氧鸟苷(8-OHdG,一种DNA氧化产物)水平.结果 在检测TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,与对照组比较,TGF-β1组肺成纤维细胞增殖增强、Ⅰ/Ⅲ型胶原、JNK磷酸化及8-OHdG水平增高,差异有统计学意义(P＜0.05).在检测NAC是否抑制了TGF-β1对肺成纤维细胞作用的实验中,与对照组比较,H2O2组和TGF-β1组细胞增殖的吸光度值,Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNR磷酸化、8-OHdG水平均增高,但与H2O2组和TGF-β1组比较,H2O2+NAC组和TGF-β1+NAC组的吸光度值,Ⅰ/Ⅲ型胶原及JNR磷酸化、8-OHdG水平均表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1可诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进JNK磷酸化,最终引起肺成纤维细胞增殖和Ⅰ/Ⅲ型胶原合成的增多,减少ROS,可有效抑制TGF-β1的作用.     

不同矿尘对大鼠肺中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量的影响

采用酶联免疫法研究肺中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量,以比较不同矿尘所致肺纤维化程度。用此方法测定胶原含量比传统方法有快速、特异性强的优越性。矿尘是采自瑶岗仙钨矿现场和化学品金属氧化物如三氧化钨及二氧化锰。所得结果表明,矿尘中的金属如钨、锰、砷等本身均无明显促使肺胶原增生的作用;锡与铁有轻微的促进作用,矿浆与矿壁沉降尘的作用不明显。矿脉石英尘有较强的促进胶原增生作用,说明该矿粉尘的主要危害与矿尘中石英含量有关。     

骨钙素与β-Ⅰ型胶原羧基前肽测定在佝偻病诊断中的应用

目的探讨血清中的骨钙素、β-Ⅰ型胶原羧基前肽测定在佝偻病诊断中的应用。方法检测50例佝偻病患儿(观察组)及30例正常健康儿(对照组)血清骨钙素、β-Ⅰ型胶原羧基前肽及(GBP)、血清钙、磷、碱性磷酸酶。结果观察组骨钙及β-Ⅰ型胶原羧基前肽异常检出率分别为80%及98%,而对照组的异常检出率分别为6%,10%;两组比较差异有显著性(P<0.01)。观察组检测血清碱性磷酸酶、钙、磷异常率高于对照组(P<0.01)。观察组检测血清碱性磷酸酶、钙、磷异常率分别为50%、12%、10%,均明显低于血清骨钙素、β-I型胶原羧基前肽的异常检出率(P<0.01)。10例佝偻病患儿经用罗钙全及十维锌铁钙治疗8～12周后复查骨钙素、β-Ⅰ型胶原羧基前肽有8例(80%)降至正常范围。结论血清中的骨钙素、β-Ⅰ型胶原羧基前肽的测定是佝偻病患儿的早期诊断及观察疗效的一个较灵敏的生化指标。     

百草枯致体外培养人胚肺成纤维细胞凋亡及氧化损伤

[目的]观察百草枯（PQ）对体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）的毒性作用,并探讨可能的损伤机制。[方法]不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20、2.40、4.80、9.60mmol／L）PQ处理MRC-5细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTF法）测定MRC-5细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况;同时用分光光度比色法测不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20mmol／L）PQ处理3、12、24h后,MRC-5细胞超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量和细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。[结果]与对照组相比,PQ≥0.30mmol／L时开始明显抑制细胞生长,并随着染毒浓度的增加细胞存活率明显下降（P〈0.05）。与对照组相比,短时间、低剂量（3、12h,0.15mmol／L）作用下,SOD活性下降不明显,其他组别明显下降（P〈0.05）;与对照组相比,染毒后不同时点MDA含量均较自身对照上升,LDH含量较对照上升（除染毒3h,1.20mmol／L组）,且差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;0.60、1.20mmol／L组PQ染毒后MRC-5细胞凋亡率明显上升（P〈0.05）。[结论]PQ对MRC-5细胞活性的影响存在剂量依赖性,并可影响MRC-5细胞的抗氧化酶活性和细胞凋亡。     

烟酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原形成的影响

目的 阐明饲料中添加烟酸对染矽尘大鼠早期Ⅰ型、Ⅲ型胶原形成的影响。方法 采用气管暴露法建立矽肺动物模型,高效液相色谱法测定血浆烟酸含量,天狼红染色法结合偏振光显微镜观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,图像分析系统对胶原定量分析。结果 烟酸组不同时点血浆中烟酸含量明显升高,与对照组和矽尘组相比,差异均有显著性。染矽尘后第7天、第28天,与对照组比较,矽尘组大鼠肺组织Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比显著增加,而烟酸组Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比则明显低于矽尘组。染矽尘后第28天,Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比显著高于对照组,而烟酸组Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比则显著低于矽尘组。结论烟酸通过抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,而有效地阻断矽尘诱导的大鼠肺纤维化。     

牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ和Ⅲ型胶原合成及比例的影响

目的 探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺组织不同时相Ⅰ、Ⅲ型胶原合成及比例的影响.方法 将Wistar大鼠144只随机分为对照组（生理盐水,普饲）、矽肺组（普饲）和牛磺酸组（牛磺酸饲料）给予气管内注入1 ml矽尘混悬液（50 mg/ml）,每组48只.分别在第1、3、7、14、21、28天时,用高效液相色谱法测定其血浆中牛磺酸含量;取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察各组动物肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成及比例的变化,图像分析系统对其进行定量分析.结果 第7、14、21和28天,矽尘组Ⅰ型胶原含量分别比对照组增加3.84%、3.77%、3.73%、9.83%,差异有统计学意义（P＜0.01）.第7、21和28天时,牛磺酸组Ⅰ型胶原含量分别比矽尘组降低2.39%、1.62%和7.13%;与对照组比较,第14、21和28天Ⅰ型胶原含量分别增加2.12%、2.11%和2.70%,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.第28天时,牛磺酸组Ⅲ型胶原含量比矽尘组减少2.62%,差异有统计学意义（P＜0.05）.矽尘组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例第7天开始增加,第28天时达到最大比值1.87,牛磺酸组Ⅰ/Ⅲ型胶原比例从第7天开始增加,且增加幅度高于矽尘组,第28天时增加幅度低于矽尘组.结论 牛磺酸对矽尘诱导大鼠肺组织不同时相的Ⅰ、Ⅲ型胶原合成抑制作用不同.