硒代蛋氨酸对小鼠巨噬细胞增殖及硒蛋白K的影响

目的探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(Selenopro-tein K,Sel K)的影响,并观察Sel K在小鼠巨噬细胞中的定位。方法加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测Se-Met对小鼠巨噬细胞中Sel K m RNA和Sel K蛋白表达的影响;用细胞免疫荧光法观察Sel K在巨噬细胞中的位置。结果 Se-Met能促进巨噬细胞的增殖,其中浓度为1μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(P0.01);1μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中Sel K的m RNA含量显著增加(24 h处理组,P0.05;48 h处理组,P0.01),另外,Sel K蛋白的含量也有所增加(48 h处理组,P0.05)。浓度为100μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(P0.01)。结果还显示Sel K蛋白与内质网标志物KDEL都存在于巨噬细胞内的相同位置上。结论 Se-Met在促进巨噬细胞增殖的同时,使存在于内质网上的Sel K增加。     

肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤血管生成和转移的研究进展

巨噬细胞起源于血液单核细胞,在不同的刺激因素作用下,巨噬细胞可分化为经典激活的巨噬细胞(M1型)和选择性激活的巨噬细胞(M2型).现在认为,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)具有M2型巨噬细胞表型.TAM在肿瘤中大量浸润被认为是肿瘤患者预后不良的重要标志.TAM通过多种...     

ISCOM型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞作用的研究

目的 探讨免疫刺激复合物(ISCOM)型白血病瘤苗对小鼠巨噬细胞的作用.方法 将C57BL/6小鼠30只分为模型组、灭活的红白血病细胞(FBL-3)瘤苗组(灭活瘤苗组)和灭活的FBL-3细胞+ISCOM瘤苗组(ISCOM瘤苗组),小鼠注射FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,治疗4周后,分离小鼠腹腔巨噬细胞,观察不同组别的巨噬细胞吞噬功能、一氧化氮(NO)、白细胞介素(IL)-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、巨噬细胞杀伤活性和抗原呈递动能.结果 ISCOM瘤苗组小鼠腹腔巨噬细胞数量、巨噬细胞吞噬功能、IL-1、TNF-α、IL-2、T细胞增殖能力和NO高于模型组和灭活瘤苗组(P＜0.05),ISCOM瘤苗组巨噬细胞细胞杀伤活性显著高于模型组(P＜0.01).结论 ISCOM型瘤苗可以增加巨噬细胞的数量,增强巨噬细胞的吞噬作用及抗原呈递能力.     

黄芪桂枝五物汤调节M1/M2巨噬细胞改善炎症反应的分子机制研究

目的 探讨黄芪桂枝五物汤调节M1/M2巨噬细胞极化的机制。方法 U937细胞经脂多糖诱导为M1巨噬细胞,建立α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)沉默和激动模型,实验分为对照组、10%含药血清组、siRNA阴性对照(NC)10%含药血清组、siRNA α7nAchR10%含药血清组和α7nAchR激动剂GTS-21组。免疫荧光检测M1、M2型巨噬细胞数量,定量反转录PCR检测M1、M2型巨噬细胞标志基因mRNA表达水平,酶联免疫吸附测定检测M1型巨噬细胞产生的促炎因子和M2型巨噬细胞产生的抗炎因子水平,蛋白质印迹法检测巨噬细胞α7nAchR表达。结果 与对照组相比,10%含药血清组M1型巨噬细胞数量减少(P<0.01),M2型巨噬细胞数量增加(P<0.01);M1型巨噬细胞基因黏附蛋白白细胞整合素(Cd11c)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达均降低(P<0.01),M2型巨噬细胞基因精氨酸酶1(Arg1)、甘露糖受体1(CD206)表达均升高(P<0.01);M1型巨噬细胞产生的促炎因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量减少(P<0.01),M2...     

哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征分析

目的:观察哮喘小鼠肺间质巨噬细胞的表型特征。方法:12只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常组,每组6只。哮喘组和正常组分别采用卵清白蛋白和PBS致敏和激发。流式细胞仪检测肺间质巨噬细胞和M2型肺间质巨噬细胞的数量;RT-PCR检测肺间质巨噬细胞精氨酸酶1(Arg1)、转谷氨酰胺酶2(TG2)、白细胞介素(IL)-10和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达水平;ELISA法检测肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL-10和IL-12水平。结果:哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞占肺单个核细胞的百分数和M2型肺间质巨噬细胞占肺间质巨噬细胞的百分数明显高于正常组(均P<0.01)。哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞Arg1和TG2mRNA表达水平明显高于正常组(均P<0.01),IL-10mRNA表达水平明显低于正常组(P<0.01),iNOS mRNA表达水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘组小鼠肺间质巨噬细胞体外培养上清液IL-10水平明显低于正常组(P<0.01),IL-12水平与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘肺间质巨噬细胞表现为替代活化巨噬细胞的表型特征,并高表达TG2。     

昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响

目的 研究昆布多糖对大鼠骨髓巨噬细胞生物活性的影响.方法 制备并体外培养大鼠骨髓造血干/祖细胞、巨噬细胞;制备昆布多糖作用后的骨髓巨噬细胞条件培养液,测定培养液中造血生长因子促红细胞生成素(EPO)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)表达及活性;测定昆布多糖条件培养液作用后造血祖细胞的集落产率.结果 经昆布多糖诱导的骨髓巨噬细胞培养上清液可显著提高骨髓造血祖细胞的集落产率;经昆布多糖诱导后,骨髓巨噬细胞的EPO、GM-CSF和IL-3的表达增高.结论 昆布多糖可刺激骨髓巨噬细胞造血因子表达增高,从而促进髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)、红系祖细胞(CFU-E)、粒一单系造血祖细胞(CFU-GM)的增殖分化.     

PF4通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9表达

目的观察血小板因子4(PF4)是否通过核因子κB(NF-κB)上调THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞分别在NF-κB抑制剂(PDTC)缺乏或存在情况下与溶媒或PF4(100μg/L)孵育一定时间,RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平;同时,巨噬细胞与PF4(25~200μg/L)单独或结合Toll样受体4(TLR4)阻断剂(抗体HTA125,anti-TLR4)孵育,ELISA法检测NF-κB含量。结果 PF4较对照组上调巨噬细胞MMP-9 mRNA水平。而NF-κB抑制剂抑制PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调。PF4呈浓度依赖性增加巨噬细胞的NF-κB含量,最大效应浓度为100μg/L。TLR4阻断剂逆转PF4诱导的巨噬细胞NF-κB含量增加。结论 PF4可能通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9的表达。TLR4可能是PF4-NF-κB通路中NF-κB的上游信号分子。     

卡介苗对鼠源性巨噬细胞株释放一氧化氮和IFN-γ的影响

目的:观察卡介苗(BCG)对鼠源性巨噬细胞株RAW264释放的诱导型一氧化氮(NO)合成酶(iNOS)及γ干扰素(IFN-γ)表达的影响.方法:在鼠源性巨噬细胞株RAW264培养液中加入BCG,Griess检测法测定NO释放量,半定量RT-PCR法检测iNOS及IFN-γ的表达.结果:BCG添加后使巨噬细胞NO产生量增加,IFN-γ、iNOS的mRNA表达增强.结论:在巨噬细胞吞噬、杀灭结核分枝杆菌时IFN-γ具有活化巨噬细胞的作用.     

全反式维甲酸对M1型巨噬细胞极化的影响

目的 利用M1型巨噬细胞极化模型,探讨全反式维甲酸(ATRA)对M1型巨噬细胞极化的影响.方法 选用8周龄C57BL/6雌性小鼠,提取并纯化腹腔巨噬细胞,随机分为M组、M1组、DMSO组和ATRA组.脂多糖(LPS,100 ng/mL)联合干扰素-γ(IFN-γ,20 ng/mL)诱导巨噬细胞构建M1型巨噬细胞极化模型...     

结核分枝杆菌异柠檬酸裂合酶对耻垢分枝杆菌胞内存活的影响及相关机制

目的 明确结核分枝杆菌(MTB)异柠檬酸裂合酶(ICL)对耻垢分枝杆菌(MS)在巨噬细胞内存活的影响,并初步探讨其可能的机制.方法 构建MTB-icl基因的穿梭表达质粒pUV15-icl,电转化法导入MS中后检测MTB-ICL在MS中的表达.分别用rMS-pUV15-icl和rMS-pUV15感染鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,于感染一定时间后测定细胞内存活的细菌数,评价MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活的影响.分别留取上述两组巨噬细胞的培养上清液,检测干扰素γ(IFN-γ)和一氧化氮(NO)的水平,同时采用原位TUNEL技术检测两组巨噬细胞的凋亡水平,探讨MTB-ICL对MS在巨噬细胞内存活影响的可能机制.结果 RT-PCR、Western印迹和荧光显微镜检测结果证实MTB-ICL可在MS中有效表达.与rMS-pUV15比较,rMS-pUV15-icl在巨噬细胞内的存活率明显高(P＜0.01),感染后24 h和48 h,其菌落数分别为(32.78±2.90)×103和(23.33 ±2.34)×103,而rMS-pUV15菌落数分别为(14.67±2.45)×103和(2.28 ±0.25)×103.MTB-ICL对巨噬细胞产生IFN-γ和NO没有明显影响.原位凋亡检测结果显示,与rMS-pUV15感染组比较,rMS-pUV15-icl感染组巨噬细胞的凋亡水平明显下降.结论 MTB-ICL可促进MS在巨噬细胞内的存活,其机制之一可能是抑制宿主巨噬细胞的凋亡.     

糖原合成酶激酶3β基因高表达对巨噬细胞功能的影响

目的:了解高表达糖原合成酶激酶3β(GSK3β)对巨噬细胞功能的影响.方法:构建pcDNA3.1-GSK3β真核表达载体,脂质体转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,G418筛选获得GSK3β高表达细胞系;采用中性红染色法、Griess法和结晶紫染色法分别测定巨噬细胞吞噬功能、细胞上清中一氧化氮(NO)含量和肿瘤坏死因子(TNF)活性.结果:小鼠巨噬细胞系RAW264.7高表达GSK3β,经酶切鉴定和测序证明一致,能抑制巨噬细胞吞噬功能(抑制率20.4%,P＜0.05)和脂多糖(LPS, 1 μg/ml)诱导的巨噬细胞NO的产生(抑制率25.6%,P＜0.01),促进TNF的产生(增加率28.8%,P＜0.01).结论:GSK3β具有调节巨噬细胞参与炎症免疫反应的功能.     

降钙素基因相关肽对脂多糖诱导的巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1的影响

目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1(TREM-1)的影响及其信号转导途径.方法:采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)观察巨噬细胞TREM-1 mRNA表达量的变化,应用流式细胞术检测巨噬细胞膜表面TREM-1蛋白的表达.(结果):CGRP对未受刺激的巨噬细胞表达TREM-1无明显影响,LPS可诱导巨噬细胞表达TREM-1;CGRP预处理呈剂量和时间依赖性上调LPS所致的巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达;同时,CGRP上调LPS所致的巨噬细胞膜表面TREM-1蛋白的表达;上述作用均可被PKC阻断剂H-7和PKA阻断剂H-89部分逆转(P<0.05).结论:CGRP上调LPS诱导的巨噬细胞表达TREM-1,其胞内信号转导途径与PKA和PKC有关.     

枸杞多糖对人外周血巨噬细胞活性的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对正常人外周血巨噬细胞功能的影响.方法 无菌分离人外周血单核细胞,加入植物血凝素(PHA)和不同质量浓度的LBP,用MTT法检测巨噬细胞对肝癌细胞株Bel-7402生长的影响,ELISA法检测LBP作用后巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 用LBP处理后的巨噬细胞对肿瘤细胞的杀伤功能增强,80、100 μg/mL LBP刺激后巨噬细胞吞噬作用明显增强(P<0.01).80、100 μg/mL LBP组肿瘤细胞与巨噬细胞培养上清液中TNF-α水平明显增高(P<0.01),证实该作用可能与LBP促进巨噬细胞分泌TNF-α增多有关.结论 LBP能增强人外周血巨噬细胞免疫功能,发挥抗肿瘤作用.     

黄连素对巨噬细胞清道夫受体表达的影响

目的:探讨黄连素(berberine)对巨噬细胞清道夫受体CD36、LOX-1、CD68等表达的影响.方法:以佛波醇酯(PMA)诱导分化的单核源巨噬细胞为细胞模型,黄连素(50 μmol/L)预处理1h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激,采用流式细胞仪检测巨噬细胞表面清道夫受体的表达.结果:单核细胞分化成巨噬细胞后,CD36表达明显升高,而黄连素预处理显著抑制CD36的表达.oxLDL刺激巨噬细胞24 h后,巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1和CD68表达明显升高(P＜0.01),黄连素预处理后巨噬细胞表面CD36、LOX-1的表达受到抑制,但CD68的表达未受影响(P＞o.05).结论:黄连素抑制巨噬细胞表面清道夫受体CD36、LOX-1的表达,一定程度上可减少巨噬细胞通过清道夫受体途径对脂质oxLDL的吞噬.     

海洋真菌多糖YCP结合的免疫细胞类型的体外筛选

目的:体外筛选海洋真菌多糖(YCP)结合的免疫细胞类型.方法:采用化学偶联的方法将荧光胺(FLA)和YCP结合,制备荧光探针YCP-FLA.分离不同的免疫细胞(巨噬细胞、单核细胞、Kupffer细胞等)与YCP-FLA共孵育,荧光显微镜观察以及流式细胞仪检测YCP-FLA和不同免疫细胞结合特性.结果和结论:YCP-FLA可以直接与单核巨噬细胞(腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、肝Kupffer细胞和人外周血单核细胞)结合,推测YCP可能是通过单核/巨噬细胞表面的受体.调节免疫活性.     

泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其IL-1β表达的影响

目的:观察泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及IL-1β表达的影响。方法:采用Ox-LDL(50 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24 h,采用20%泽泻汤血清干预后,油红O染色观察细胞内脂质沉积情况;酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组细IL-1β表达情况。结果:成功建立巨噬细胞泡沫化模型;相比于空白组的巨噬细胞,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加明显,实验组巨噬细胞内脂质沉积显著减少,IL-1β呈低水平表达,与模型组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:Ox-LDL(50 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型。泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,其作用机制可能是通过下调IL-1β的表达来实现的。     

小鼠腹腔巨噬细胞对红系祖细胞增殖的影响

应用造血祖细胞体外培养技术,观察了小鼠腹腔巨噬细胞对早期红系祖细胞(BFU-E)及晚期红系祖细胞(CFU-E)增殖的影响。结果表明,小鼠腹腔贴壁巨噬细胞对CFU-E表现为刺激作用;对BFU-E增殖依培养体系条件不同而表现为刺激和抑制双重作用。巨噬细胞培养上清液也表现相似的作用。提示巨噬细胞具有促红细胞生成素(EPO)和爆式集落促进活性(BPA)样活性。     

温肾通络止痛方抑制巨噬细胞衰老改善BMSC成骨分化和老年性骨质疏松模型小鼠骨丢失的研究

目的 探讨温肾通络止痛方调控巨噬细胞衰老对老年性骨质疏松症(Senile osteoporosis, SOP)的干预作用。方法 利用过氧化氢制备衰老巨噬细胞模型并随机分为对照组、模型组、含药血清低剂量组、含药血清高剂量组。β-半乳糖苷酶染色以及qPCR、Western blot检测衰老指标p21和p53的mRNA及蛋白表达水平,探讨含药血清对巨噬细胞衰老的影响。使用活性氧(Reactive oxygen species, ROS)染色和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测巨噬细胞线粒体功能。qPCR检测巨噬细胞极化相关分子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、CD206、一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS)的mRNA水平,免疫荧光检测巨噬细胞极化相关分子精氨酸酶(Arginase, ARG1)和iNOS的蛋白表达,评估含药血清对巨噬细胞极化的影响。qPCR检测成骨相关指标骨钙蛋白(Osteocalcin, OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen ty...     

巨噬细胞促进创面修复中作用的研究进展

目的:巨噬细胞是一群表型和功能均具有高度异质性的免疫细胞,其贯穿整个组织修复过程。巨噬细胞分布在机体的各个脏器和组织中,是一种具有可塑性以及在功能状态下呈现高异质性的细胞群体。在各种催化条件下,可转化成M1型巨噬细胞(经典激活的巨噬细胞)和M2型巨噬细胞(选择性激活的巨噬细胞)。同时研究发现巨噬细胞的表型极化受到多种条件的调控。本综述将总结巨噬细胞各亚型对创面修复作用及调控巨噬细胞表型极化机制的现有研究,为其日后的深入研究提供理论依据。     

硝基精氨酸-赖氨酸三肽的合成及对巨噬细胞一氧化氮合酶的影响

目的合成硝基精氨酸-赖氨酸三肽,并研究其对巨噬细胞一氧化氮(NO)产生及一氧化氮合酶(NOS)的影响。方法液相合成法合成硝基精氨酸-赖氨酸三肽。脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞表达诱导性一氧化氮合酶(iNOS),检测不同浓度的硝基精氨酸-赖氨酸三肽对巨噬细胞NO产生的抑制效果、以及对NOS活性及蛋白表达的影响。结果①硝基精氨酸-赖氨酸三肽可显著抑制LPS刺激的巨噬细胞产生NO并呈浓度依赖性。在同一浓度下,硝基精氨酸-赖氨酸三肽较NG-硝基-L-精氨酸(L-NNA)作用增强。②硝基精氨酸-赖氨酸三肽可显著降低巨噬细胞iNOS的活性,对于巨噬细胞的结构型一氧化氮合酶(cNOS)活性无明显影响。③硝基精氨酸-赖氨酸三肽对于巨噬细胞内iNOS的蛋白表达无明显影响。结论硝基精氨酸-赖氨酸三肽通过抑制巨噬细胞iNOS活性而抑制NO产生,并呈剂量依赖性。