人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。     

骨髓间充质干细胞源性外泌体促进小胶质细胞/巨噬细胞M2极化抑制急性期脑缺血大鼠炎症反应

为探究骨髓间充质干细胞（bone marrow meaenchymal stem cells, BMSCs）源性外泌体（exosomes, Exos）对急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化的影响,采用超高速离心法分离提取外泌体并鉴定;采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion, MCAO）模型;采用Longa评分和角实验评价大鼠神经功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyltetrazole chloride, TTC）染色检测大鼠脑梗死体积;采用CD16/32/Iba1、CD206/Iba1免疫荧光双标法检测小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2表型;采用RT-qPCR检测大鼠脑缺血周边区CD86、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitricoxide synthase, iNOS）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor, TNF-α）、精氨酸酶1（arginase-1, Arg-1）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）和转化生长因子β（transforming growth factor beta, TGF-β）的mRNA表达。实验结果表明,BMSC-Exos减少缺血周边区CD16/32⁺/Iba1⁺阳性细胞数量（P < 0.01）,增加CD206⁺/Iba1⁺阳性细胞数量（P < 0.01）,减少iNOS、CD86和TNF-α的mRNA表达,增加Arg-1、TGF-β和IL-10的mRNA表达（P < 0.05或P < 0.01）。本研究提示BMSC-Exos调控急性期脑缺血大鼠小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化,减轻神经炎症,改善脑缺血损伤。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体保护脓毒症相关急性肾损伤的体外研究

目的研究骨髓间充质干细胞来源外泌体（exosomes derived from bone mesenchymal stem cells, BMSCs-Exo）对脓毒症相关急性肾损伤体外模型的作用。方法利用超速离心法提取骨髓间充质干细胞分泌的外泌体,通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析及Western印迹法鉴定外泌体。用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）处理人肾小管上皮细胞（HK-2）建立脓毒症相关急性肾损伤（sepsis-induced acute kidney injury, SAKI）细胞模型,将细胞分为对照组（CON组）、脂多糖组（LPS组）和脂多糖+外泌体组（LPS+EXO组）。CCK-8法检测各组细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用Western印迹法检测细胞凋亡相关蛋白cleaved-Caspase3、Bax和bcl2水平,采用qRT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA水平。结果应用LPS处理HK-2细胞成功构建了SAKI细胞模型。LPS组中,HK-2细胞经LPS（100 μg/mL）处理后细胞活性和抗凋亡蛋白bcl2表达明显下降（P<0.05）,而细胞凋亡率和凋亡蛋白cleaved-Caspase3、Bax表达水平显著上升（P<0.01）,同时炎性指标TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达上调（P<0.01）。LPS+EXO组中,BMSCs-Exo逆转了LPS对HK-2细胞的作用,细胞活性升高、凋亡蛋白cleaved-Caspase3以及Bax下降和抗凋亡蛋白bcl2升高（P<0.05）,同时还下调了炎性因子（TNF-α、IL-6和IL-1β）mRNA表达水平（P<0.05）。结论BMSCs-Exo在LPS诱导的SAKI体外模型中发挥抗炎和抗凋亡的保护作用,为未来临床利用BMSCs-Exo治疗SAKI提供理论基础。     

脂肪间充质干细胞来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响

目的 探讨脂肪间充质干细胞（ADMSC）来源外泌体对脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化及胶质瘢痕形成的影响。方法 提取ADMSC来源外泌体并鉴定。选取36只大鼠,分为假手术组（仅切除T9椎板+注射等量生理盐水）、脊髓损伤组（建模+注射等量生理盐水）、外泌体组（建模+注射100μg/kg外泌体）,每组各12只,采用钳夹脊髓法建立脊髓损伤大鼠模型。使用BBB评分评估大鼠后肢运动功能,酶联免疫（ELISA）法检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-10水平,对脊髓组织行尼氏染色,Western Blot法检测脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1(Arg-1)、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、波形蛋白（vimentin）蛋白表达。结果 经透射电镜观察及CD63、Alix蛋白检测鉴定,成功提取到ADMSC来源外泌体。与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠BBB评分显著降低（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10水平及脊髓组织中iNOS、Arg-1、GFAP、vimentin蛋白水平均显著升高（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞严重损伤,可见大量胶质瘢痕组织堆积;与脊髓损伤组相比,外泌体组大鼠BBB评分、血清IL-4、IL-10水平及脊髓组织中Arg-1蛋白水平显著升高（P <0.05）,血清IL-1β、IL-6水平及脊髓组织中iNOS、GFAP、vimentin蛋白水平显著降低（P <0.05）,脊髓组织中神经细胞损伤及胶质瘢痕组织堆积减轻。结论 ADMSC来源外泌体可改变脊髓损伤大鼠巨噬细胞极化方向,并抑制胶质瘢痕形成。     

血管内皮祖细胞外泌体调控骨髓间充质干细胞基因表达谱芯片

目的探讨兔外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells derived from peripheral blood, EPCs)外泌体(Exosomes)调控骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells, MSCs)差异基因表达情况。方法将EPC-Exos和MSCs共培养作为实验组,单独MSCs作为对照组,各培养14d后进行基因芯片送检,筛选出分子网络模块和关键基因。结果从高通量芯片数据中共筛选到差异基因表达共1772个,其中表达上调基因664个,下调基因1 108个。基因表达差异主要与染色体、着丝粒等细胞器定位、细胞增殖、细胞周期等密切相关;EPC-exos调控MSCs显著富集的通路中P53通路、MARK通路及酮体合成和降解途径差异明显。结论利用基因芯片方法筛选的相关基因可能在EPC-Exos调控MSCs生物学功能中发挥重要作用,并可作为外泌体修复糖尿病创面的的理论依据。     

人脐带间充质干细胞外泌体的分离鉴定及其溶血性能研究

目的：分离并鉴定人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSC）分泌的外泌体,研究其对人血的溶血性能。方法：通过超速离心法从脐带干细胞培养上清中分离外泌体,采用蛋白免疫印迹法、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定;制备人红细胞悬液,加入不同浓度外泌体,进行溶血试验,用试管法观察并用紫外分光光度法测定计算溶血度。结果：分离获得的外泌体特异富集蛋白CD9、CD81、Alix,不含有高尔基体蛋白Gm130;透射电镜下可见其呈杯盘状结构,粒径直径为40~120 nm;脐带干细胞外泌体对人血的溶血率小于5%。结论：HUCMSC分泌的外泌体具有外泌体的经典结构及典型特征,不引起人血溶血反应,为未来脐带干细胞外泌体作为载体进行药物递送提供了实验依据。     

间充质干细胞来源外泌体治疗心肌梗死的研究进展

大量研究表明间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）主要通过旁分泌作用抑制细胞凋亡、抑制心肌纤维化、促进血管生成、抑制免疫反应来修复心肌损伤,外泌体在其中起主要作用。外泌体是细胞分泌的天然的纳米载体,内含细胞特异性蛋白、核酸和脂质。与脂质体载体相比,还具有低免疫原性、无细胞毒性及能够穿透生物屏障等优点。目前已有多种靶向心脏的工程外泌体在动物心肌梗死模型中取得很好的疗效。本文就MSC及MSC来源外泌体促进心肌梗死后受损心肌修复的机制及研究进展作一综述。     

间充质干细胞外泌体作用机制的研究进展

间充质干细胞（MSC）来源于中胚层,具有修复组织损伤的作用。外泌体是细胞分泌的囊泡样物质,与来源细胞功能相似。近年来,间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）受到广泛关注,其生物学特性及作用机制成为研究热点。本文就外泌体特性及间充质干细胞来源外泌体在治疗疾病中作用机制作一综述。     

M2巨噬细胞外泌体对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨M2巨噬细胞外泌体(M2 macrophage exosomes,M2-exo)对高糖高胰岛素条件下小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchyml stem cells,BMSCs)成骨分化及Hedgehog信号通路的影响。方法诱导小鼠巨噬细胞系RAW 264.7向M2极化后,提取并鉴定M2-exo,检测BMSCs对外泌体的摄取内吞。将BMSCs分为正常对照组(Control组,使用不含胰岛素、不含M2-exo,且葡萄糖浓度为5.5 mmol/L成骨诱导培养基)、高糖高胰岛素组(HGI组,使用含25 mmol/L葡萄糖及174 nmol/L胰岛素的成骨诱导培养基)及高糖高胰岛素M2-exo干预组(HGI+M2-exo组,使用与HGI组相同的培养基,并分别添加6、30、60μg/mL的M2-exo),成骨诱导7 d后行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色,成骨诱导14 d后行茜素红染色,评估各组BMSCs成骨分化能力。另取Control组、HGI组、HGI+30μg/mL M2-exo组BMSCs细胞,成骨诱导培养14 d后(qP...     

骨髓间充质干细胞外泌体介导miR-124-1对小胶质细胞M2型极化调控的影响

目的·探讨过表达miR-124-1基因的骨髓间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs外泌体（exosomes,Exo）对小胶质细胞（microglia,MG） M2型极化调控的影响。方法·分离、培养鼠BMMSCs,提取其Exo (BMMSCs-Exo),并分别对BMMSCs及BMMSCs-Exo行流式细胞术、透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）与蛋白质印迹（Western blotting）检测及鉴定。合成miR-124-1基因,构建其慢病毒载体,观测过表达miR-124-1基因的BMMSCs及其Exo的miR-124-1基因的表达变化。将过表达miR-124-1基因的BMMSCs-Exo (BMMSCsExo+miR-124-1,Exo/124-1)与经脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）活化的HAPI小胶质细胞株（HAPI细胞）共培养。分别收集Exo组与Exo/124-1组细胞。用仅含LPS培养基培养的HAPI细胞（LPS组）与未处理的HA...     

间充质干细胞外泌体治疗脊髓损伤研究进展

由于中枢神经系统受损的轴突不能再生,脊髓损伤常常导致患者永久性瘫痪。轴突再生的主要障碍是神经元内在的不利机制和胶质瘢痕的形成。外泌体治疗脊髓损伤是一种新策略,较干细胞更能穿过血脑屏障,发挥抗炎、促进血管生成的作用。     

骨髓间充质干细胞外泌体促进大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移

  目的  探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchyml stem cells, BMSCs）外泌体正常状态下对大鼠脑微血管内皮细胞的增殖和迁移的影响。  方法  提取大鼠BMSCs并进行鉴定,将其与脑微血管内皮细胞（bEnd.3细胞）通过Transwell小室共培养24 h（BMSCs共培养组）;提取BMSCs外泌体进行鉴定,荧光显微镜下定性观察细胞吞噬外泌体的行为,CCK8 法检测细胞活力选定最佳BMSCs外泌体工作浓度,将其与bEnd.3细胞共培养24 h（BMSCs外泌体共培养组）。另设bEnd.3细胞单独培养组。培养24 h后通过EDU和细胞划痕实验,分别检测以上3组bEnd.3细胞的增殖和迁移能力。  结果  第3代BMSCs表面CD90、CD29为阳性,CD45显示为阴性,可成骨、成脂,表明所提取的BMSCs纯度较高。透射电镜下BMSCs外泌体形态为类圆形,直径在100 nm左右;NTA分析发现BMSCs外泌体的直径分布范围为50～600 nm,其中粒径峰值为150 nm;免疫荧光显示内皮细胞能够吞噬BMSCs外泌体;CCK8显示20 μg/mL外泌体加入对细胞增殖影响达到最佳。EDU检测显示,相较于对照组,BMSCs共培养组、BMSCs外泌体共培养组均可促进bEnd.3细胞的增殖（P<0.05）,且促进增殖的能力相当（P>0.05）。细胞划痕实验示,BMSCs外泌体共培养组细胞的迁移率高于对照组（P<0.05）,但与BMSCs共培养组差异不明显（P>0.05）。  结论  BMSCs外泌体可代替BMSCs,有效促进脑微血管内皮细胞的增殖和迁移,并为卒中后的血管新生提供新的潜在治疗手段。     

不同间充质干细胞来源的外泌体治疗骨关节炎的研究进展

间充质干细胞治疗骨关节炎的有效性已在动物实验和临床研究中得到验证,越来越多的证据表明间充质干细胞主要通过旁分泌机制发挥作用,外泌体在其中扮演着重要角色。外泌体是含有多种活性物质的细胞外囊泡,在细胞间和细胞内的通讯中发挥关键作用。文章就不同间充质干细胞来源的外泌体治疗骨关节炎的研究进展进行综述,讨论间充质干细胞来源的外泌体治疗骨关节炎的未来方向,为骨关节炎的治疗提供新思路。     

间充质干细胞来源外泌体在缺血性脑卒中的研究进展

缺血性脑卒中是严重威胁人类健康的高发病,大量动物研究数据揭示了间充质干细胞移植对缺血性脑卒中的神经修复作用。最新研究发现,间充质干细胞衍生的外泌体具有相似修复作用,通过参与细胞间信号传导及细胞或组织新陈代谢,影响脑组织对缺血的应激和促发修复反应。本文对间充质干细胞衍生的外泌体特性和生物学功能及其潜在临床价值做以下综述。     

间充质干细胞来源的外泌体治疗器官纤维化的研究进展

器官纤维化是组织损伤后过度修复的结果,与器官衰竭和高死亡率有关,因而寻找有效的治疗纤维化的方法具有重要价值。近年来研究发现间充质干细胞来源的外泌体具有体积小、免疫原性低、无致瘤作用等优势,在抗纤维化方面显示出良好的应用前景。该文综述了间充质干细胞来源的外泌体治疗各种器官纤维化的机制及相关研究进展。     

间充质干细胞来源外泌体在组织修复中的研究进展

<正>组织修复是临床治疗中极为重要的环节,伴随着组织细胞的再生、增殖、分化和迁移,炎症水平调节,活性氧（ROS）含量的回归稳态,伤面消肿愈合等过程。目前有关组织修复方面的临床治疗方法很多,但效果不尽人意。通过对外泌体的研究,我们发现其在促进组织修复方面有着重要的作用。本文拟对间充质干细胞（MSC）来源外泌体促进组织修复方面的研究进展进行综述,现报道如下。1 MSC的旁分泌机制MSC是一种来源于中胚层,具有自我更新和多方向分化能力的多能干细胞,     

间充质干细胞外泌体在口腔组织再生中的研究进展

基于间充质干细胞的细胞治疗是组织再生与修复的重要策略之一。近年的研究表明外泌体作为间充质干细胞分泌的重要产物可以起到类似于亲本间充质干细胞的作用。作为细胞间传递信息的重要途径，外泌体（Exosomes）参与多种生理病理过程，在促进组织修复与再生中发挥重要作用，为组织工程提供了新思路。