RNA干扰诱导肝癌HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响

目的:探讨载体介导的RNA干扰技术诱导HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响.方法:应用靶向细胞周期E(cyclin E)基因的siRNA真核表达载体转染HepG2细胞诱导凋亡,再以丹参酮ⅡA处理48h(cyclinE siRNA+丹参酮ⅡA组),同时设立cyclin EsiRNA组、无义siRNA组、丹参酮ⅡA组以及空白对照组,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,吖啶橙荧光染色检测细胞凋亡形态,Western blot法观察细胞Caspase-3蛋白表达.结果:单用cyclinE siRNA质粒转染或丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞,细胞凋亡率显著高于空白对照组(P＜0.01),2μg/ml剂量凋亡率分别达到21.6%、23.6%.cyclinE siRNA质粒转染预诱导再经丹参酮ⅡA处理,HepG2细胞G0～G1期比例显著增高,S期、G2～M期细胞所占有比例明显下降;与单用cyclinE siRNA质粒转染、丹参酮ⅡA两组比较,细胞凋亡率分别增高了1.81和1.61倍,比两组合计增高0.35倍,Caspase-3蛋白表达水平分别增高了0.91倍和0.66倍.结论:通过cyclinE siRNA质粒转染诱导的HepG2细胞凋亡可提高丹参酮ⅡA药物敏感性,其机制与增强凋亡控制相关基因表达有关.     

膜联蛋白A2在脑胶质瘤组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性

发生于脑组织的胶质瘤恶性程度高,临床进展快,预后差,目前尚无有效的根治方法〔1〕。虽然手术治疗目前仍是一种比较有效的治疗手段,但因为不能根治,所以临床治疗的效果并不十分理想。因此找寻脑胶质瘤的靶点治疗方法十分重要。膜联蛋白A2(ANXA2)是一种钙离子介导的具有磷脂结合性质     

三氧化二砷诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显向镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱发凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小,染色质固综合成斑块状,呈半月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等,AO/EB荧光染色法显示。细胞凋亡率为4.3%-9.1%.As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2umol/L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2/M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,存在治疗肝癌的潜在价值。     

黄芪多糖对人肝癌细胞HepG2凋亡相关基因表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)联合斑蝥酸钠(SCA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响。方法实验分为对照组、SCA处理组、APS处理组、APS联合SCA处理组,采用免疫组化染色法(IH)观察APS联合斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,采用Western印迹法检测各组细胞Bcl-2基因表达的变化。结果与对照组相比,各处理组HepG2细胞中Bcl-2基因表达均明显减少,APS联合SCA处理组减少最为明显。结论 APS联合SCA可明显抑制HepG2细胞Bcl-2基因的表达。     

B7-H1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨B7-H1在人肝癌组织中的表达情况及其对肝癌Hep G2细胞增殖能力和凋亡水平的影响。方法采用组织化学染色方法观察肝癌组织和癌旁正常组织中B7-H1的表达情况。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞,并通过RTPCR和Weatern印迹方法检测肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达情况。敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1的表达后,采用MTT方法检测肝癌Hep G2细胞的增殖情况,并采用Annexin V/7-AAD双染的方法检测肝癌Hep G2细胞的凋亡水平。结果与癌旁正常组织相比,肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高。采用Lonza电转染的方法转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2进入肝癌Hep G2细胞后,肝癌Hep G2细胞中-B7-H1的表达水平均显著降低。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的增殖能力均显著降低,与对照组相比差异显著(P0.01)。转染si-B7-H1-1和si-B7-H1-2敲低肝癌Hep G2细胞中B7-H1表达后,肝癌Hep G2细胞的凋亡均显著升高,与对照组相比差异显著(P0.01)。结论肝癌组织中B7-H1的表达水平显著升高,且B7-H1可促进肝癌Hep G2细胞的增殖能力,并抑制肝癌Hep G2细胞的凋亡水平,提示肝癌组织中高表达的B7-H1与肝癌的发生和发展密切相关。     

Bcl-2家族对细胞凋亡的作用及其在胰腺癌中的表达

Bcl-2基因是最早被发现与细胞凋亡有关的调控基因之一。Bcl-2家族中促进凋亡和抑制凋亡成员形成的二聚体结构对凋亡前的信号传导起重要作用。Bcl-2家族在胰腺癌组织中表达失调，且此现象与细胞凋亡和胰腺癌转移等表现相关。     

丹参酮ⅡA诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制

目的探讨中药活性单体丹参酮ⅡA对人肝癌Hep G2细胞株增殖抑制和诱导凋亡的可能机制。方法用5、10、20、30、40、50μmol/L丹参酮ⅡA处理Hep G2细胞,应用MTT法分析细胞活力,MUSE细胞分析仪、PI染色等检测细胞增殖抑制、细胞周期以及凋亡情况。免疫蛋白印迹技术检测p53、Bax及Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达。结果 5~50μmol/L丹参酮ⅡA显著降低细胞存活率(P0.01),形态学观察可见细胞凋亡改变,细胞发生G2/M期周期阻滞。免疫印迹结果显示丹参酮ⅡA上调p53、Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论丹参酮ⅡA对Hep G2细胞的增殖抑制作用可能部分通过诱导细胞G2/M周期阻滞和线粒体途径凋亡实现。     

Bcl-2家族对细胞凋亡的作用及其在胰腺癌中的表达

Bcl-2基因是最早被发现与细胞凋亡有关的调控基因之一。Bcl-2家族中促进凋亡和抑制凋亡成员形成的二聚体结构对凋亡前的信号传导起重要作用。Bcl-2家族在胰腺癌组织中表达失调,且此现象与细胞凋亡和胰腺癌转移等表现相关。     

丹参酮ⅡA介导p38MAPK信号转导诱导人肝癌细胞凋亡

目的: 研究丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的p38MAPK信号转导通路, 揭示其抗肝癌的部分机制.方法: 4、8、16 mg/L丹参酮ⅡA分别作用人肝癌SMMC-7721细胞48 h后, 免疫荧光染色观察细胞凋亡情况; 琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带; 流式细胞仪法(Flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡和细胞周期; 荧光定量PCR检测Fas和Caspase-3基因mRNA的表达水平; 并比较阻断p38MAPK信号通路后丹参酮ⅡA对肝癌细胞凋亡和Fas和Caspase-3基因mRNA的表达.结果: 丹参酮ⅡA作用48 h后, 荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞. 琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞DNA呈规律性的梯状条带. 4、8、16 mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞后的细胞凋亡率分别为12.83%±1.51%, 17.86%±2.70%和29.24%±7.58%, 与对照组6.30%±2.08%比较均有显著性差异( P<0.01); 阻断p38MAPK信号通路后, 凋亡率和G0/G1期细胞比例明显降低( P<0.01). 8 mg/L丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞48 h后Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显上升; 阻断p38MAPK信号通路后, 丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞的Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显下降.结论: 丹参酮Ⅱ A 能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡, 阻滞肝癌细胞于G0/G1期. 通过p38MAPK信号转导通路上调Fas、Caspase-3 mRNA的表达可能是其诱导肝癌细胞凋亡的重要机制.     

热疗诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡

目的 观察热疗诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的效果,并初步探讨其可能的机制.方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,试 验分对照组、43℃热疗组(分别加热0.5,1,1.5h),流式细胞术检测凋亡率;RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 流式细胞仪凋亡检测显示热疗组凋亡率显著高于对照组(P ＜0.01)RT-PCR检测显示各热疗处理组较之对照组都有上调Bax、下调Bcl-2 mRNA表达的作用,以加热1.5h组最为显著(P＜0.01).结论 热疗能显著增加HepG2细胞的凋亡率,这可能与上调Bax、下调Bcl-2 mRNA的表达促进凋亡有关.     

Bax基因过表达诱导肝癌细胞凋亡

ｂｃｌ 2及其同源类似物是凋亡调节因子中最重要的家族之一。ｂｃｌ 2家族蛋白能通过多种方式调节细胞死亡途径 :(1)与其他ｂｃｌ 2家族成员二聚化形成同源或异源二聚体 ,且可能通过相互作用改变细胞生与死平衡 ;(2 )与非同源性蛋白结合 ;(3)形成离子通道或孔洞[1] 。Ｂａｘ基因是ｂｃｌ 2家族中的一员 ,与ｂｃｌ 2家族其他成员的氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。人Ｂａｘ基因位于第 19号染色体 ,ｑ13 .3～ｑ13 .4内[2 ] 。Ｂａｘ过表达能对抗ｂｃｌ 2抑制细胞死亡的活性 ,在促凋亡因素刺激下 ,ｂｃｌ 2 /Ｂａｘ比值…     

介入治疗对兔VX2肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究介入治疗对肿瘤细胞凋亡和增殖的影响.方法建立兔VX2肝癌的动物模型,将实验动物分为介入组和对照组,用TUNEL法观察肿瘤细胞凋亡情况,采用原位杂交和免疫组化法检测凋亡和增殖相关基因bcl-2、bax及PCNA的表达情况.结果(1)介入组凋亡指数明显高于对照组,两组的细胞凋亡率分别为62.6 ±32.21%和21.4±10.43%(P＜0.05);介入组PCNA为38.80±15.73%,对照组为68.54±24.43%,前者显著低于后者(P＜0.05);(2)介入组bcl-2表达率为10.34±6.66%,显著低于对照组的24.5±11.53%(P＜0.05),而介入组bax的表达率为58.27±38.33%,显著高于对照组的32.13±23.76%(P＜0.05).bcl-2和bax基因mRNA表达与蛋白的表达相一致.结论抑制肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡是介入治疗肝癌的重要机制之一.     

亚砷酸对肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响

目的探讨亚砷酸（AA）对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及其Bcl-2表达的影响。方法采用MTT比色法检测从作用后的BEL-7402细胞增殖抑制率,流式细胞术检测BEL-7402细胞周期及凋亡细胞,HE染色法观察凋亡细胞的形态,RT-PCR检测BEL．7402细胞的Bcl-2 mRNA,免疫组化法检测细胞的Bcl-2蛋白。结果1．0—8．0μmol／L的AA可使BEL-7402细胞增殖抑制率上升,能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2／M期,呈剂量依赖性;8．0μmol／L的AA作用BEL-7402细胞48h后,细胞呈现明显的凋亡形态改变,其Bcl-2 mRNA及蛋白表达明显减弱。结论AA体外有抑制BEL-7402细胞增殖及诱导凋亡的作用,且呈时间、剂量依赖性,其作用机制可能与降低其Bcl-2表达有关。     

莪术油对小鼠肝癌细胞原位凋亡的影响

目的:揭示莪术油对小鼠肝癌细胞凋亡的影响。方法:用莪术油进行2次小鼠肝癌体内抑制实验。以细胞原位凋亡TUNEL染色方法,评估莪术油对小鼠肝癌细胞凋亡的影响。结果:莪术油对小鼠肝癌细胞的抑癌率分别为51.85％和51.16％,与对照组相比有显著性差异(P<0.01);经莪术油作用过的小鼠HepA肝癌细胞的原位凋亡指数(AI)为6.64±1.26,与对照组2.32±0.82比较差异有显著性(P<0.01)。结论:莪术油抑制小鼠肝癌生长的机理可能与其诱导肝癌细胞凋亡有关。     

RNA干扰对肝癌细胞增殖及其Bcl-2表达的影响

目的观察靶向Bcl-2基因的shRNA对肝癌HepG-2细胞增殖及其Bcl-2表达的影响。方法构建靶向Bcl-2基因的shRNA,转染对数生长期HepG-2细胞,设空白组、空载体组、pGenesil—B1组、pGenesil-B2组、pGenesil-B3组、pGenesil-S组;MTT法检测HepG-2细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测HepG-2细胞凋亡率,RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA,免疫细胞化学SP法检测Bcl-2蛋白。结果空白组、空载体组、pGenesil—B1组、pGenesil-B2组、pGenesil-B3组、pGenesil—S组细胞抑制率分别为0、4．6％、3．8％、46．4％、8．3％、0．13％,细胞凋亡率分别为33．95％、48．80％、69．14％、90．50％、58．14％、50．96％,Bcl-2 mRNA的表达抑制率分别为0、3％、8．3％、49．1％、4．8％、1．8％,Bel-2蛋白阳性率分别为38．15％±3．46％、35．25％±2．67％、15．21％±2．32％、9．51％±2．51％、14．15％±2．67％、36．83％±3．35％,pGenesil-B2组与其他各组相比,P均〈0．01。结论shRNA可致HepG-2细胞凋亡,并抑制Bcl-2的表达。     

环状RNA在急性心肌梗死细胞凋亡中的研究进展

<正>目前,我国心血管疾病患病人数约达3.3亿,病死率居首位,占居民疾病死亡构成的40%以上,远高于肿瘤及其他疾病,且处于持续上升阶段^[1]。急性心肌梗死(AMI)是心血管疾病最严重的并发症及常见死因。AMI发病急骤、病情危急、病死率高,因此早期识别并积极治疗对延缓疾病进展、挽救濒死心肌、改善预后至关重要。近年来研究发现,环状RNA(circRNA)可能在AMI中发挥重要作用。circRNA是一种天然形成的内源性非编码RNA。     

短发夹状RNA抑制survivin基因在肝癌细胞中的表达

目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA)，观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计，合成两对survivin编码基因的反向重复序列，中间分别间隔4和8个nt，分别定向克隆至载体pTZU6 1的U6转录启动子下，构建pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2重组质粒，与表达survivin基因的质粒pEGFP—Cl—survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721，荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2构建成功；两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用，抑制率达80％以上；两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异；反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA，对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中的表达。     

环孢素A对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的:探讨免疫抑制剂环孢素A(cyclosporine A,CsA)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导的肝癌细胞(hepatocelluar carcinoma cells,HCC)凋亡的影响及可能机制.方法:采用SMMC7721肝癌细胞进行培养,3 d传一代.分成A组(空白对照)、B组(f加入10 mg/L的CsA)、C组(加入40 mz/L的CsA)、D组(加入20 mg/L的CDDP)、E组(加入10mg/L的CsA 20 mg/L的CDDP)、F组(加入40 mg/L的CsA 20 mg/L的CDDP),在荧光显微镜下观察各组细胞的形态学变化,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法测定细胞24 h及48 h存活率,并用流式细胞仪检测各组细胞在24 h的凋亡率.结果:E,F组在倒置光学显微镜下呈现多量细胞坏死,凋亡小体较D组明显减少.D组凋亡率最高,为32.7%±2.8%;而E,F组凋亡率分别为22.7%±2.4%及22.8%±2.8%:A,B,C组凋亡率最低且组间差异不明显.E,F组与D组相比差异显著(P=0.008).结论:CsA可以抑制CDDP诱导的肝癌细胞凋亡.     

细胞凋亡调控机制及其与肝癌的关系

肝癌的发生一方面与控制细胞增殖的癌基因过度表达有关,另一方面与抑制细胞凋亡的基因高度表达及诱导细胞凋亡的抗癌基因等变异失活有关。 1 肝癌细胞凋亡 肝癌(HCC)存在高速的细胞增殖率和自然的细胞死亡率,两者共同决定肿瘤细胞的生长速度。Grask等通过非基因毒致癌剂NAF,观察由正常肝→突变增生→结节→肝腺瘤→肝癌突变过程,发现凋亡活性呈逐渐增强,但每一阶段中细胞的复制率均高于凋亡率,因此癌前肝细胞可获得优先净增长。从启动阶段到癌变前阶段,促发阶段到肿瘤形成,抑制细胞凋亡与加速肿瘤细胞增长的各期比例虽有不同,但总体上形成复制大于凋亡趋势。但在TGF及免疫细胞因子调节F,可诱导HCC     

肝Zhen口服液对大鼠肝癌细胞凋亡的细胞

目的 观察肝Zhen口服液对二乙基亚硝胺诱导的大鼠肝癌细胞凋亡的影响,并且与乙氧三甲基喹啉和全反式维甲酸进行比较。方法 将大鼠随机分成5组,A组为肝Zhen口服液大剂量预防组、B组为肝Zhen口服液成人等剂量预防组、C组为全反式维甲酸预防组、D组为乙氧三甲基喹啉预防组、E组为病理对照组。第14周末处死大鼠取肝脏,细胞调亡采用透射电镜、末端转移酶标记技术（TUNEL）检测。结果 A组、B组和D组可见凋亡小体。TUNEL染色分级：凋亡细胞数A组、B组、D组与E组相比显著增多（P＜0．05）,C组与E组相比无显著性差异（P＞0．05）。结论 肝Zhen口服液可诱导大鼠肝癌细胞的调亡。