PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响.方法选择O157∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物,分别或共同进行PCR扩增,检测40株O157∶H7和非O157∶H7菌株,将细菌按10+1～10+6稀释后比较PCR的检测灵敏度.结果所有O157∶H7菌株均在497 bp和625 bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物,其产毒株在484 bp和(或)210 bp处出现SLT2和(或)SLT1基因产物,非O157∶H7菌株PCR结果均为阴性;单一PCR检测灵敏度为150 CFU/PCR反应,多重PCR为＞1 500 CFU/PCR反应.结论在经过增菌后,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便,为产毒和非产毒O157∶H7的诊断提供了新的手段.     

应用免疫磁珠法分离大肠杆菌O157H7

目的：进一步探讨免疫磁珠法（IMS）分离大肠杆菌O157H7（E.O157H7) 的敏感性。方法：应用IMS检测该菌的主要贮存宿主动物（家禽,家畜）E.O157H7感染情况,同时用传统分离法作对照。结果：家禽（畜）粪便中E.O157H7分离率分别为鸡2．38％（2／84）,牛9．52％（4／42）,猪2．41％（2／83）,鸭,鹅、狗、驴和羊的粪便中分离到E.O157H7,传统法均未从上述家畜（畜）粪便中分离到E．O157H7,结论：据本次检测结果,表明IMS分离O157能提高检测的灵敏度（检测水平为2cfu/g,传统法为200cfu/g）,并缩短检测时间1天,是开展E．O157H7病原学分离（包括人间和宿主动物的流行病学监测）值得推荐的方法。     

大肠杆菌O157∶H7的基因分析及检测方法

本文介绍了大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７特异性质粒、噬菌体与染色体上与其致病性有关的基因分析及检测各种方法，包括培养法、各种血清学检测与分子生物学检测方法。     

厦门市水产品中首次检出O157∶H7大肠杆菌

目的 :调查我市水产品中 O15 7大肠杆菌的污染情况 ,为防治工作提供依据。方法 :用 VIDAS (E.coliO15 7)试条及 E.coli O15 7检测卡对样品进行初筛 ,初筛阳性的样品再进行分离培养鉴定。结果 :2 6份水产品中检出 2株 O15 7∶ H7大肠杆菌 ,检出率 7.6 9%。结论 :我市部分水产品中存在 O15 7∶ H7大肠杆菌的污染 ,防治工作中应引起足够的重视     

漳州市首次检出O157∶H7大肠杆菌

[目的] 建立食品污染微生物监测点,调查O157∶H7大肠杆菌在生肉类食品中污染状况. [方法]采用 E.Coli O157∶H7检测卡对样品初筛,对阳性样品再进行分离培养鉴定. [结果] 从生猪肉和生羊肉中分离出2株O157∶H7 大肠杆菌,生肉类食品检出率3.7%. [结论] 首次证实了漳州市有O157∶H7大肠杆菌的存在,动物性食品是该菌感染人类的主要来源,应引起有关部门高度重视.     

应用斑点免疫层析、免疫磁珠法快速分离大肠杆菌O157:H7

目的：探讨斑点免疫层析法（DICA）和免疫磁株法（IMS）在分离大肠杆菌O157：H7（E.ColiO157:H7)上的快速性和敏感性。方法：先用DICA法对腹泻病人，家禽（畜）便增菌液进行快速筛检，再用IMS法对所有标本做进一步检测，并和直接分离法作对照。结果：DICA法阳性率为10．34％（43／416），IMS法检出率1．92％（8／416），DICA法假阳性率为8．41％（35／416），无一例DICA法假阴性，而直接法检出率为0．24％（1／416），IMS法比直接法检出率有显著性提高（P＜0．05）。结论：两法结合应用于检测E.ColiO157:H7具有快速，省时，灵敏度高等特点，是开展E.ColiO157:H7病原学检索值得推广应用的方法。     

上海市闵行区家禽畜大肠杆菌O157∶H7带菌状况监测

[目的 ]　了解闵行区家禽畜中大肠杆菌O15 7∶H7的带菌情况。　 [方法 ]　对采集的禽畜粪便应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O15 7∶H7分离和鉴定。　 [结果 ]　 3 5 4份样品中检出 2 2份大肠杆菌O15 7∶H7,检出率为6.2 1% ,经鉴定均非产毒株。　 [结论 ]　闵行区家禽畜粪便中大肠杆菌O15 7∶H 7检出率较高 ,应引起重视     

PCR检测肠出血性大肠杆菌O157：H7

目的：研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，并比较第一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响。方法：选择O157：H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的4对引物，分别或共同进行PCR扩增，检测40株O157：H7和非O157：H7菌株，将细菌按10^1-10^6稀释后比较PCR的检测灵敏度。结果：所有O157：H7菌株均在497bp和625bp处出现O157抗原基因和H7抗原基因产物，其产毒株在484bp和（或）210bp处出现SLT2和（或）SLT1基因产物，非O157：H7菌株PCR结果均为阴性；单一PCR检测灵敏度为150CFU／PCR反应，多重PCR为＞1500CFU／PCR反应。结论：在经过增菌后，多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便，为产毒和非产毒O157：H7的诊断提供了新的手段。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7多重PCR快速检测研究

[目的]建立能快速、特异检测肠出血性大肠杆菌O157︰H7的多重PCR技术。[方法]选用针对大肠杆菌O157志贺样毒素1、2(slt1/slt2)基因、溶血素(hlyA)基因、和O157特异性基因(rfbE)的4对引物,在同一扩增体系中进行PCR,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行了猪肉模拟样品检测。[结果]该方法扩增目的基因片段分别为348,584,250bp和497bp,特异性和灵敏度均高。细菌纯培养物的检测灵敏度为103cfu/ml,猪肉模拟样品37℃预增菌4h后检测灵敏度能达到100cfu/ml。[结论]初步建立了快速、灵敏、特异地测定肠出血性大肠杆菌EHECO157︰H7的多重PCR检测技术。     

福建省食品污染物监测O157∶H7大肠杆菌的调查与分析

目的:对福建省食品中O157∶H7大肠杆菌进行分离调查,并对分离菌株的O157抗原编码基因(rfbO157)和H7抗原编码基因(flicH7)以及毒力基因(志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA)进行检测。方法:按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的要求,用EC肉汤增菌,快诊金卡筛选,接种CHROM agar O157显色平板,血清和生化系列证实。结果:1 380件食品中分离到O157∶H7大肠杆菌4株,分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株,检出率0.29%。结论:福建省食品中存在O157∶H7大肠杆菌的污染,虽检出率较低,这可能与福建不是O157∶H7大肠杆菌的流行地区有关,但监测是一项长期的工作,防患于未然,同时福建省也将O157∶H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。     

河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布及毒力研究

目的:掌握河北省食品中大肠杆菌O157∶H7分布状况及菌株的毒力研究.方法:运用免疫磁珠富集进行分离培养,并用PCR进行毒力基因分析.结果:共采集食品530份,检出O157∶H7大肠杆菌5株,总检出率为0.9%.其中,以生牛、羊肉检出率较高,分别为6.7%和4.4%.5株O157∶H7菌株中,4株带有SLT2、eae和Hly 3种毒力基因,1株带有SLT1、SLT2、eae和Hly 4种毒力基因.结论:掌握食品中O157∶H7分布及生物学特性对预防食源性疾病暴发有重要意义.     

应用斑点免疫层析、免疫磁珠法快速分离大肠杆菌O_(157)∶H_7

目的 :探讨斑点免疫层析法 (DICA)和免疫磁珠法 (IMS)在分离大肠杆菌 O1 57∶ H7(E.Coli O1 57∶ H7)上的快速性和敏感性。方法 :先用 DICA法对腹泻病人、家禽 (畜 )粪便增菌液进行快速筛检 ,再用 IMS法对所有标本做进一步检测 ,并和直接分离法作对照。结果 :DICA法阳性率为 10 .34% (43/ 4 16 ) ,IMS法检出率 1.92 % (8/ 4 16 ) ,DICA法假阳性率为 8.4 1% (35 / 4 16 ) ,无一例 DICA法假阴性 ,而直接法检出率为 0 .2 4 % (1/ 4 16 ) ,IMS法比直接法检出率有显著性提高 (P<0 .0 5 )。结论 :两法结合应用于检测 E.Coli O1 57∶ H7具有快速、省时、灵敏度高等特点 ,是开展 E.Coli O1 57∶ H7病原学检索值得推广应用的方法。     

鉴定大肠杆菌O157:H7特异基因的PCR方法

目的建立一种特异、灵敏鉴定大肠杆菌O157:H7的PCR检测方法。方法针对大肠杆菌O157:H7表面抗原O和鞭毛抗原H的特异性基因rfbO157、fliCH7设计引物,分别扩增出目的产物。结果利用建立的方法对4株大肠杆菌O157:H7菌及12株非大肠杆菌O157进行检测,rfbO157、fliCH7基因的特异性均为100%;rfbO157基因的灵敏度约为6×104cfu/ml;fliCH7基因的灵敏度可达6cfu/ml。结论本方法特异性好,为实验室鉴定大肠杆菌O157:H7提供了一种简单、容易操作的手段。     

食品中大肠杆菌O157∶H7快速分离培养方法的研究

为检测食品中大肠杆菌O15 7∶H7,本研究通过优化培养基成份和筛选选择性抑菌物质设计了一种选择性分离鉴别培养基 ,CTV MUG RSMAC琼脂。使用该培养基不仅可有效抑制杂菌的生长 ,还能同时鉴定大肠杆菌O15 7∶H7的三种主要生化特征———不发酵山梨醇、不发醇鼠李糖、不分解MUG ,可避免漏检发酵山梨醇的大肠杆菌O15 7∶H7变异株。样品用选择性增菌肉汤 42℃培养过夜后 ,在CTV MUG RSMAC平板上划线接种 ,37℃培养 2 4小时 ,挑选特征菌落做O15 7、H7抗血清凝集试验和肠杆菌科主要生化试验 ,整个程序可在 3天内完成。检测了 12 6份食品样品 ,结果检出 3份阳性 ,与用FDA方法的检测结果一致。     

大肠杆菌O157∶H7在8种水质中存活力观察

目的　探讨EHECO15 7∶H7在各种水质中存活力。方法　采集 8种不同水质的水样 ,将适当浓度的第 5代EHCEO15 7∶H7933株菌悬液加入水样中 ,使染菌浓度为 10 6CFU/ml,染菌后每隔 5天采样 1次 ,进行细菌的生化鉴定和血清学鉴定确认后予以计数。结果　EHECO15 7∶H7污染水样后存活时间最短的为 15天 ,最长的达 40天以上 ;EHECO15 7∶H7在 4℃游泳池新水、矿泉水中存活量呈急剧衰减 ,在 4℃井水中存活量则在 15天内剧降 2个数量级后略呈平稳接近 10 4 CFU/ml之后又快速衰减 ,在其他水样 4℃条件下存活数量变化均呈逐渐衰减 ,降至 10 3CFU/ml～ 10 4 CFU/ml数量级 (池塘水位于10 5CFU/ml数量级 )后存活菌量急剧减少 ;EHECO15 7∶H7在2 5℃井水中存活量 5天内急剧衰减 3个数量级后在 10 3CFU/ml呈平稳持续至第 15天后衰减再次加速 ,在 2 5℃纯净水逐渐衰减 ,在其余 2 5℃水样中则均呈急剧衰减。除在 2 5℃游泳池旧水中第 10天时其存活量高于 4℃游泳池旧水外 ,在其余水样 2 5℃条件下EHECO15 7∶H7存活量均比同期 4℃条件下水样少 ,而且在 2 5℃水样中存活菌量衰减速度明显较快。结论　EHECO15 7∶H7在水中存活情况与水质种类、水温以及水中有机物、抑菌物质含量密切相关 ;在EHECO15 7∶H7水型暴发疫情控制中 ,     

大肠杆菌O_(157)∶H_7的分离鉴定及应用复合PCR法同时检测其三个毒力因子

〔目的〕对驻滇部队感染性腹泻患者、猪和污水进行大肠杆菌O157∶H7(EO157∶H7)的分离鉴定。〔方法〕用O157免疫磁珠富集后 ,接种S -MAC琼脂平板培养 ,用MUG试验初筛 ,VIATEK3 2 全自动微生物鉴定仪鉴定 ,应用复合PCR法同时检测其三个毒力因子。〔结果〕从腹泻患者和猪中检出EcoliO157∶H7,该菌具有三个毒办因子。〔结论〕云南战区部队存在EcoliO157∶H7感染。复合PCR法的建立 ,为腹泻研究领域的病原学监测和流行病学调查提供了新手段     

宁夏地区O157∶H7大肠杆菌分布调查

为了解O157:H7大肠杆菌在宁夏自治区人群发病情况和动物带菌状况,我们于1998～2000年在银川市、石嘴山市、银南地区、固原地区开展了O157:H7大肠杆菌感染情况检测调查,现将结果报道如下.     

动物性食品中大肠杆菌O157:H7多重PCR检测方法的建立

目的:大肠杆菌O157:H7是近年来引发食物中毒事件的重要病原菌,对其建立灵敏、特异的多重PCR检测方法,是确保饮食安全,预防和控制大肠杆菌O157:H7传播的重要手段。方法:根据大肠杆菌O157:H7rfbE和fliC抗原基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为678 bp(rfbE)和560 bp(fliC)。结果:建立的多重PCR方法可以快速特异地检测出猪肉、牛肉等动物性食品中的大肠杆菌O157:H7污染,人工污染猪肉检测限达到2.2×102cfu/ml。结论:选择两对特异引物的多重PCR方法可简便、快速、特异地实现对动物性食品中大肠杆菌O157:H7的检测。     

交叉引物等温扩增技术在肠出血性大肠杆菌O157:H7快速检测中的应用

目的建立一种快速、敏感、特异的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的交叉引物等温扩增(Cross Priming Amplification,CPA)检测方法。方法根据EHEC O157:H7 stx1基因特征性保守序列(Gen Bank83460),设计交叉引物、剥离引物和检测探针,建立了EHEC O157:H7的CPA检测技术。用该方法检测19株细菌常见的食源性细菌,以验证其特异性;并用菌液浓度梯度稀释的方法对该方法的检测灵敏度进行评价。并通过60份食品模拟样品验证其在实际应用中的可性行,该检测结果与经典的细菌分离培养鉴定方法及常用的荧光定量PCR法进行比较。结果在检测的19株细菌中,只有EHEC O157:H7菌株的检测结果为阳性。其它菌株检测结果均为阴性,证明其特异性良好;通过浓度梯度稀释证明该方法检测的灵敏度可达l02cfu/m L;与分离培养鉴定法及荧光定量PCR法比较,其检测的灵敏度均为96.77%和96.67%、特异度分别为93.10%和90%、准确性分别为95%和93.33%。结论用于EHEC O157:H7的CPA检测体系具有简便、快速、灵敏、特异的优点,可用于进出境口岸现场及食品EHEC O157:H7的快速检测。     

应用免疫磁珠法首次在宝山区检出大肠杆菌O_(157):H_7

[目的 ]　了解宝山区是否存在大肠杆菌O157∶H7以及动物带菌和食品、水源的污染情况。　 [方法 ]　对采集的肉、乳制品、家禽、家畜粪便 ,快餐原料、各类水源等标本应用免疫磁珠法集菌进行E .coliO157∶H7分离和鉴定。　 [结果 ]　共采集家禽、家畜、肉乳制品、快餐原料、各类水源等标本 610份 ,检出E .coliO157∶H73株 ,总检出率为 0 .49%。其中以肉类制品检出率最高 ,为 1.3 7% ;其次为其它标本 ,检出率为 1.0 2 % ,家禽、家畜粪便 ,检出率为 0 .3 8%。　 [结论 ]　宝山区存在O157∶H7大肠杆菌感染爆发或流行的隐患