骨组织工程的研究进展

本文涉及骨组织工程的四个方面：（1）种子细胞的来源、性质；（2）细胞外基质替代物的开发；（3）适宜的培养环境；（4）组织工程化骨组织的应用。在此笔者对骨组织工程的进展作一综述，并探讨其存在的问题和发展前景。     

人类新基因flj20174的克隆、亚细胞定位、表达谱及功能初探

目的：研究人类系统性RNAi相关基因flj20174的克隆表达、亚细胞定位和表达谱，以及功能的初步探索。方法：利用生物信息学方法分析、预测flj20174基因的表达谱和功能；采用RT-PCR技术，从健康人外周血单个核细胞cDNA中，扩增获得flj20174可能的全长编码区，并将其亚克隆于pEGFP-N1载体；利用Northern杂交鉴定其转录本；利用半定量PCR确定flj20174在免疫组织和免疫细胞中的表达谱；通过脂质体转染入HeLa细胞，观察融合蛋白的亚细胞定位和过表达对细胞状态的影响。结果与结论：获得了2484bp的全长编码区。测序后发现与NCBI公布的Ak00018的序列完全一致；Northern杂交证实其转录本约为4669bp；证实该基因属于低丰度基因，在免疫细胞中有相对较高的表达，并在B细胞和T细胞激活后表达量下降；与EGFP融合表达后可见该蛋白主要分布于内膜系统，而且过表达该融合蛋白可以引起细胞的死亡，推测此过程可能与机体的免疫防御相关。     

p53在调节细胞周期阻滞和细胞凋亡中的作用及其机制

p53作为抑癌基因，在各种应激情况下（包括电离辐射所致DNA损伤、核苷酸缺失、低氧或癌基因激活）调控细胞周期进程和细胞凋亡过程。本综述了p53及其下游分子在细胞周期和细胞凋亡中的作用，在此基础上探讨p53在选择细胞周期阻滞和细胞凋亡中的影响因素。     

AL杂交细胞在放射生物学研究中的应用

AL杂交细胞是近年来研究负荷粒子致突变效应较理想的一种分析体系，可用于直接检测低剂量突变因子的效应。用此体系研究某些人类基因之间的连锁非常方便，体系灵敏度高，具有其他体系细胞所不具备的优势，在放射生物学中可作为研究致突变效应的一种很好的工具。     

X射线诱导survivin在EL-4细胞中的表达及与P53表达的相互关系

目的观察电离辐射对EL-4细胞survivin蛋白表达的影响及与P53表达的关系。方法采用流式细胞术（FCM）观察EL-4细胞接受4GyX射线照射后，survivin蛋白的表达、P53表达及细胞凋亡的变化。结果4Gy X射线照射EL-4细胞，Survivin蛋白表达受抑制，在4h明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．001）；照射组P53蛋白表达水平均高于对照组，在此时间点上与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。照射后4h细胞凋亡率显著升高，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．001）。结论survivin与P53在细胞凋亡调控中发挥重要作用，survivin表达与P53表达水平相关。     

星形胶质细胞分泌血小板反应蛋白(TSP)促进神经突触形成

近年来陆续有研究指出，星形胶质细胞（AST）在神经系统中的作用已经远远超出以前认识的作为神经支持细胞的概念，并将导致出现神经科学研究中的胶质细胞新时代。最新研究发现，AST可分泌血小板反应蛋白（TSP1／2）促进神经突触形成，其机制可能是TSP1／2通过与一种或多种突触特异蛋白结合，激活突触前膜和（或）突触后膜信号蛋白，从而诱导神经突触形成。此发现对于理解胶质细胞的新功能以及研究癫痫等神经性疾病的发病机制及治疗具有重要意义。     

肿瘤乏氧与放射基因治疗

氧效应决定了乏氧细胞的辐射抗性，人的实体肿瘤都有不同程度的乏氧现象，从而成为影响放疗效果的重要因素之一。为改善肿瘤放疗效果，放射增敏剂成为放射生物学的重要研究课题之一。但半个世纪以来，所研发的有效制剂，多止步于或处于临床试验阶段，尚无一药物应用于临床。在此历程中，放射增敏研究在哲学思考和研究策略上也发生变     

神经组织工程细胞外基质材料研究进展

组织工程学是一门以细胞生物学、分子生物学、生物材料学和临床医学等学科为基础的多学科交叉学科，目的是要运用工程学和生命科学的原理和方法，研究和开发、修复、维持或改善病损组织功能的生物替代物的一门学科。方法是体外分离、培养细胞，将一定量的细胞种植到具有一定结构的三维支架上，然后将此细胞一支架复合物植入体内或体外继续培养，通过细胞间的相互粘附，增殖和分化，     

不同浓度葡萄糖对大鼠间皮细胞增殖及细胞外基质产生的影响

观察了不同浓度葡萄糖对膜腹间皮细胞增殖和产生细胞外基质的作用，发现：①不同浓度的高渗葡萄糖可以抑制大鼠腹膜间皮细胞的增殖，引起间皮细胞的死亡，增强层粘连蛋白和Ⅳ型胶原的产生；②葡萄糖浓度与在此环境下培养的活细胞百分比呈负相关，但与层粘连蛋白的产生呈正相关，且活细胞百分比与层粘连蛋白的产生呈负相关。提示：培养液中葡萄糖的浓度在大鼠腹膜间皮细胞的增殖和细胞外基质的产生中起重要作用。     

不典型Ewing肉瘤

患者女性，12岁。因在小腿中下1／3前内侧肿疼1年就诊，体检除病变局部肿胀，有压痛，表面温度较高外，无其他阳性体征，追问其病史，无外伤史，但有发热史，家族史中无此种病患者，实验室检查：（一人X线表现：左胶胖骨正位（近切线位）片示左胶骨中下段外侧骨皮质呈4XIcm之浅状骨质破坏，破坏区与正常骨质间界限清楚，但可见细而短的放射状骨针，临近软组织可见较大肿块，侧位片示破坏区边缘粗糙，4X3cm大小，胖骨未见异常。读片时有三种不同意见：l、Ewing肉瘤，持此意见者认为：病变发生于骨干；年龄较小仅12岁；圆盘状骨皮质破坏虽然…     

类胰蛋白酶对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察类胰蛋白酶对肝星状细胞（HSC）增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响，探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用。方法用Percoll密度梯度离心法分离、培养大鼠HSC，经系列浓度类胰蛋白酶作用后，分组进行如下实验：用噻唑兰比色法（MTT）检测HSC的增殖；用RT—PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果肥大细胞（MC）类胰蛋白酶（1-100ng／m1）能够促进HSC增殖及Ⅰ型胶原mRNA的表达，此作用呈剂量依赖性（各实验组与对照组比较，P〈0．05）。结论肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于HSC，参与肝纤维化过程。     

严重烧伤大鼠CD4+ CD25++/Foxp3调节性T细胞与内毒素的变化

严重烧伤导致内毒素血症，与此同时，机体存在免疫调节功能的紊乱。目前对烧伤后内毒素引起的机体免疫功能失衡的研究大多集中在细胞因子和炎症介质上，对细胞免疫功能在此过程中的作用阐述较少。范骏等证明小鼠烧伤后肠Peyer’s结淋巴细胞数量减少，功能低下，而这种免疫抑制的机制尚不清楚。     

注重咽异感症的诊察3例报告

咽部不适、异物感为耳鼻喉科临床常见症状，其病因比较复杂，且很多因素交织在一起，既有功能性(包括神经、精神性的)，又可能为实质性病变，甚至是咽喉部肿瘤的早期病变的表现，又可能为实质性病变，甚至是咽喉部肿瘤的早期病变的表现，此症状临床较常见，常为患者甚至医生所忽视，造成病情的延误，甚至危及病人的生命。现就3例病情进行讨论：     

自制细胞分离器提取表皮细胞治疗白癜风36例

白癜风为皮肤科常见病，病因不明，治疗棘手。目前，国内外医学界普遍认为表皮细胞移植术治疗白癜风疗效较好，尤其对局限性、稳定期的病变，疗效更显著。1999开始，我们应用自制表皮细胞分离器提取含有黑素细胞的表皮移植，在门诊治疗白癜风36例，疗效良好。     

HeLa细胞去核条件的优化

细胞去核技术〔１〕的原理是：细胞在细胞松弛素Ｂ（ｃｙ－ｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ，ＣＢ）作用下，微丝聚集受到抑制，细胞核与细胞质间连接变得松散。在离心力的作用下，细胞核从细胞中脱出，从而得到去核细胞。这一技术主要应用于细胞重组，研究核、质间信息传递、ｍＲ...     

乳鼠雪旺细胞的培养和纯化

为探究获得大量高纯度雪旺细胞的方法，取生后1－3天SD乳鼠的坐骨神经，采用改进后的植块反复移植法进行细胞培养。同时通过低浓度胰酶快速消化法、差速贴壁法和加用细胞毒药物等去除成纤维细胞，纯化雪旺细胞，最后用抗S－100蛋白酶联免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定，结果发现，经植块反复移植和多种方法结合纯化后，雪旺细胞的纯度可达95％以上，并具有良好的活性，故认为，此方法简便易行，可获和纯度大量的乳鼠雪旺细胞。     

LACA小鼠骨髓辐射损伤后干细胞因子受体表达的免疫组化研究

目的至今，尚未见到采用免疫组化技术研究骨髓辐射损伤后干细胞因子受体（Ｃ－ｋｉｔ）表达及其在造血重建中的意义。方法经６０Ｃｏγ射线全身照射ＬＡＣＡ小鼠，于照射后４周内分批活杀动物，采用光镜、电镜及ＬＳＡＢ免疫组化方法，研究了辐射诱导的造血细胞凋亡及Ｃ－ｋｉｔ的表达及意义。结果全身照射ＬＡＣＡ小鼠时，５．５Ｇｙ为其亚致死剂量，此剂量照射小鼠可导致外周血白细胞及骨髓有核细胞数减少；骨髓明显损伤及损伤后重建现象；在照后１天内可使骨髓造血细胞发生凋亡；５．５Ｇｙ照射后６小时，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞浆内明显增多，呈强阳性；照后１０天，骨髓造血细胞增生、恢复，Ｃ－ｋｉｔ蛋白于造血细胞膜表达明显增多，呈强阳性。结论Ｃ－ｋｉｔ表达与造血功能重建有关，在早期造血功能重建中起重要调节作用。     

肌卫星细胞体外培养及其对胰岛素样生长因子Ⅰ刺激的反应

目的原代分离、纯化、培养大鼠肌卫星细胞，观察体外培养肌卫星细胞的增殖与分化特性及对类胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）刺激的反应。方法选用Wistar大鼠，切取双下肢及背部肌肉，两步酶消化法分离卫星细胞，不连续密度梯度离心法纯化后体外培养，观察其生长与分化特性，绘制生长曲线及融合率曲线，MTT法测定卫星细胞对不同浓度IGF-Ⅰ刺激的反应，并对其生长分数及融合率给予观察。结果此方法可以获得足量、纯度较高的肌卫星细胞。结论适宜浓度（100ng／ml）的IGF-Ⅰ对肌卫星细胞有较强的促增殖及促分化作用。     

一种简易冷冻保存细胞方法

本实验介绍一种简易分段冷冻保存细胞的方法,即将0.5～1×10~7细胞悬浮于4℃细胞冷冻液(10%DMSO,30%小牛血清,60%RPMI-1640)1ml,并置于冷冻管中。将此管置于-8℃～-12℃甲醇冰浴(甲醇:冰块=1∶1v/v),5～10min后用2～3cm厚棉垫将此管包裹,置于国产生物液氮容器颈部-70℃处4h,最后投入液氮中。细胞复苏时,将此冷冻管置于37℃水浴中,一俟细胞悬液溶化,立即加入RPMI-1640培养液中并离心沉淀,将沉淀细胞悬浮含10%小牛血清RPMI-1640培养液中待用。用此冷冻人骨髓细胞,CFU-C回收率常高于60%。     

电离地T淋巴细胞IL—2分泌和细胞毒活性的影响

背阔肌骨皮瓣乳房重建术为乳腺癌术后乳房重建的常用方法之一。在确认确背动脉存在之后可选用此术式。当肌皮瓣较小时可同时植物乳房假体。本术式具有操作简单和皮瓣转移容晚等优点。